全 文 ：使 Foxp3 蛋白表达和调节性 T 细胞比率基本降至
正常水平。这充分提示大蒜新素可能通过作用于
Treg 环节逆转 CMV 感染所致的抗病毒免疫功能
低下,尤其可能在 CMV 慢性持续性感染中发挥促
进抗病毒免疫的效应。依据前期的研究结果 [ 15] , 选
取 Treg 抑制效应较强的细胞模型,即添加 T reg 比
率为 20% 的共培养体系进行体外大蒜新素干预实
验。结果显示, 大蒜新素可显著抑制 Treg 特异性
转录因子 Foxp3基因表达,正如前文分析的, Foxp3
是 Treg 增殖活化的关键因子, Foxp3 表达减少意
味着 MCMV 感染诱导的 Treg 扩增受到抑制。由
此, 在体内外水平证实大蒜新素可显著纠正
MCMV 感染导致的 Tr eg 异常扩增。这可能是大
蒜新素诱导抗 CMV 免疫的另一重要机制。
参考文献:
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大豆异黄酮对前列腺增生大鼠生长因子及受体的影响
任国峰, 汤
凌,杨爱青,姜伟伟, 黄忆明*
(中南大学公共卫生学院 营养与食品卫生学系, 湖南 长沙
410078)
摘
要:目的
研究大豆异黄酮对前列腺增生大鼠模型的抑制作用及生长因子调控机制。方法
采用 sc 睾酮法
诱导大鼠前列腺增生。大鼠随机分为对照、模型组、大豆异黄酮 ( 60、120、240 mg/ kg ) 组; ig 给药 4 周后处死大鼠,
测定大鼠前列腺湿质量、前列腺指数, 酶联免疫法测定血清胰岛素样生长因子-1 ( IGF-1)、表皮生长因子 ( EGF )、
血管内皮生长因子 ( VEGF )、碱性成纤维细胞生长因子 ( bFGF)、转化生长因子-
( TGF-
) 水平, 免疫组化法检测
表皮生长因子受体 ( EGF-R) 表达的变化情况。结果
模型组大鼠前列腺湿质量明显增加,前列腺指数明显增加。
与模型组相比,大豆异黄酮各组前列腺湿质量和前列腺指数明显下降,血清 IGF-1、EGF、VEGF 和 bFGF 水平均显
著降低,血清 TGF-
水平显著提高,前列腺上皮组织 EGF-R 表达显著下降, 以 120 mg / kg 大豆异黄酮组效果最为
明显。结论
大豆异黄酮具有较好的抑制前列腺增生的作用, 可能与其降低 IGF-1、EGF、VEGF 和 bFGF 水平, 提
高 TGF-
水平,下调 EGF-R 表达有关。
关键词:大豆异黄酮; 前列腺增生; 胰岛素样生长因子-1 ( IGF-1) ; 表皮生长因子 ( EGF ) ; 血管内皮生长因子
( VEGF) ; 碱性成纤维细胞生长因子 ( bFGF) ; 转化生长因子 ( TGF-
) ; 表皮生长因子受体 ( EGF-R)
中图分类号: R281
5


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1497-05

1497
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2009- 10-13





















基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30500407)作者简介:任国峰( 1973
) ,男,山西省忻州市人,副教授,硕士生导师,研究方向为植物提取物及其功效活性。
T el : ( 0731) 84805464
Fax: ( 0731) 84805452
E- mail : rgf3824@ 163. com
Effects of soybean isoflavone on growth factors and its receptor on prostatic hyperplasia in rats
REN Guo-feng, TA NG Ling, YANG A-i qing , JIANG We-i w ei, HUANG Y-i ming
( Department of Nutr itio n and Food H yg iene, School of Public Health, Centr al South Univ ersity , Chang sha 410078, China)
Abstract: Objective
To investig ate the inhibitive ef fect of soybean isof lavone ( SI) on benign pro static
hyperplasia ( BPH ) in rats and to study its regulat ion mechanism of grow th facto rs. Methods
Rats w ere
induced to pro state hyperplasia by sc inject ion of testosterone and w ere random ly divided into no rmal con-
tro l g roup, BPH model g roup, and three SI g roups ( 60, 120, and 240 mg/ kg ) . Treated by ig administ ra-
t ion four w eeks later, the pro state w et weight and pr ostat ic index ( PI) w ere measur ed. T he levels o f IGF-
1, EGF, VEGF, bFGF, and TGF-
in serum were determ ined by ELISA, and the change of EGF-R was
detected by immunohistochemist ry . Results
T he prostate w et w eight and PI increased in BPH model
group; T he pr ostate w et w eight and PI decreased in all SI dose g roups, and the lev els of IGF-1, EGF,
VEGF, and bFGF in serum and the expression o f EGF-R in pr ostat ic epithelial t issue also decreased, com-
pared to the model gr oup. How ever, the level o f T GF-
increased significant ly. T he effect o f 120 mg/ kg
SI group w as the most po tent. Conclusion
SI has good inhibit ion on prostate hyperplasia and its mecha-
nism may be related to reducing the lev els of IGF-1, EGF, VEGF, and bFGF, raising the lev el of TGF-
,
and down-regulat ing the expression of EGF-R.
Key words: soybean iso flavone ( SI ) ; prostat ic hyper plasia; IGF-1; EGF; VEGF; bFGF; TGF-
;
EGF-R


良性前列腺增生 ( benign prostat ic hyperplasia,
BPH) 是影响老年男性健康的常见病、多发病, 近年
来国内 BPH 发病率大幅度增长。其发病机制比较
复杂, 目前研究多集中在间质-上皮细胞相互作用
中,生长因子与其特异性受体结合后,在前列腺细胞
生长、分化、增殖以及死亡中所起的关键性作用。最
近研究发现组织及血清中血管内皮生长因子
( VEGF) 等生长因子水平与 BPH 的发生密切相
关[ 1]。由于天然产物作用比较温和, 不良反应较小,
适合长期服用, 在治疗 BPH 中发挥重要作用 [ 2]。
流行病学资料表明, 以往西方国家前列腺癌与 BPH
的发病率明显高于某些亚洲国家,其中一个重要原
因就在于东方国家的膳食结构中大豆及其制品占有
较大的比重 [ 3]。大豆异黄酮 ( soybean isoflavone,
SI) 是存在于大豆及其制品中的一类多酚类化合
物,由染料木黄酮等 12 种单体组成,具有雌激素样
等多种生物学活性, 在预防和治疗心血管疾病[ 4]、骨
质疏松、肿瘤和老年性痴呆等方面的作用受到广泛
重视[ 5] 。本实验旨在研究大豆异黄酮对睾酮诱导前
列腺增生大鼠模型的抑制作用, 并探讨其生长因子
调控的可能机制。
1
材料与方法
1
1
实验动物: SPF 级健康成年 SD 雄性大鼠 80
只 (体质量 200~ 220 g) ,购于中国科学院上海实验
动物中心, 实验动物生产许可证号: SCXK ( 沪)
2007-0005;屏障环境饲养, 实验动物屏障环境使用
许可证号: SYXK (湘) 2005-0005。实验期间大鼠
喂食无大豆饲料。
1
2
药品: 大豆异黄酮 (质量分数 40% ,含染料木
苷 32%、染料木黄酮 0
6% ) , 由山东三维长润生物
有限公司提供。丙酸睾酮注射液, 上海通用药业股
份有限公司提供。
1
3
试剂: 胰岛素样生长因子-1 ( IGF-1)、VEGF、
表皮生长因子 ( EGF)、碱性成纤维细胞生长因子
( bFGF)、转化生长因子 ( TGF-
) 酶联免疫试剂盒,
美国赛默飞世尔公司。兔抗鼠 EGF-R 一抗, 北京博
奥森公司;二抗为生物素化山羊抗兔 IgG, SP 试剂盒
及 AP-BCIP/ NBT 显色剂,北京中杉金桥公司。
1
4
仪器: M K3 型酶标仪, 美国赛默飞世尔公司;
E02140 型电子天平, 瑞士 Ohaus 公司; TDL
5

A 型台式离心机, 上海安亭科学仪器厂; M C
80
DX 型显微摄影仪,德国 Zeiss 公司。
1
5
模型制备与药物处理: SD 大鼠按体质量随机
分为 5组, 对照组、模型组和大豆异黄酮 ( 60、120、
240 mg/ kg) 组。对照组注射麻油,其余 4组大鼠腹
部 sc 丙酸睾酮 3 mg / ( kg
d)。连续注射 1周。1
周后大豆异黄酮各组分别 ig 给药, 对照组和模型组
ig 0
5% 羧甲基纤维素钠 ( CMC-Na) , 连续 28 d。
末次给药后 24 h,大鼠称体质量, 颈椎脱臼处死大
鼠,取出前列腺, 用电子天平称取前列腺湿质量后,
计算前列腺指数[前列腺湿质量( mg) /体质量( g ) ]。
右侧前列腺腹叶用中性福尔马林固定 24 h, 石蜡包
埋连续切片, 用于免疫组化检测, 北航 CMIAS 多功
能真彩色病理图像分析管理系统进行图像采集。

1498
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
1
6
细胞生长因子测定: 实验期满大鼠禁食 12 h
后, 腹主动脉插管取空腹血 3 mL, 静置 3 ~ 4 h,
4
、3 000 r/ min 离心 10 min,分离血清, - 20
保
存待测。严格按照 ELISA 试剂盒说明书方法,分别
测定血清 IGF-1、EGF、VEGF、bFGF 和 TGF-
水平。
1
7
免疫组化法检测 EGF-R 阳性表达:切片常规
脱蜡入水, 0
1 mol/ L PBS 洗涤。滴加 3% H 2O 2 ,
室温封闭 5~ 10 min, 蒸馏水洗涤。微波修复抗原,
PBS 洗涤。正常山羊血清室温封闭 20 m in, 滴加
1
500稀释的兔抗鼠 EGF-R一抗, 4
孵育过夜。
PBS 洗涤后滴加生物素化二抗, 室温孵育 15 m in,
洗涤。滴加 HRP 标记的链霉卵白素工作液, 室温
孵育 20 min。PBS 洗涤。AP-BCIP/ NBT 显色液
镜下显色,蒸馏水冲洗终止。核固红复染 2 m in, 盐
酸乙醇分化, 常规脱水、透明、封片。光学显微镜下
观察、摄片。PBS 代替一抗作为阴性对照,用 EGF-
R阳性片 (乳腺癌) 作为 EGF-R 阳性对照。结果
判定: EGF-R 蛋白表达以阳性细胞数< 10% 为阴
性 ( - ) ; 阳性细胞数 10% ~ 30% 为阳性 ( + ) ; 阳
性细胞数 30% ~ 70% 为阳性 ( + + ) , 阳性细胞
数> 70% 为阳性 ( + + + )。
1
8
统计分析: 采用 SPSS 11
5 统计软件包建立
数据库,定量指标以 x
s 表示, 多个样本均数的比
较采用 ANOVA 检验, 两两比较均采用 LSD 检验
及卡方检验 Fisher 精确概率法。
2
结果
2
1
对 BPH 大鼠前列腺湿质量及前列腺指数的
影响:由表 1可见, 与对照组相比,模型组大鼠前列
腺湿质量、前列腺指数均显著增加 ( P< 0
001) ; 大
豆异黄酮低、中、高剂量组大鼠前列腺湿质量、前列
腺指数均显著低于模型组 ( P< 0
01、0
001) ; 大豆
异黄酮中剂量组前列腺湿质量、前列腺指数显著低
于大豆异黄酮低剂量组 ( P< 0
01) ,与对照组无显
著差异 ( P> 0
05)。
表 1
大豆异黄酮对前列腺增生大鼠前列腺指数的影响
( x
s, n= 16)
Table 1
Effects of SI on PI of BPH rats ( x
s, n= 16)
组
别 剂量/ ( mg
kg- 1) 前列腺湿质量/ mg 前列腺指数/ ( mg
g- 1)
对照 - 6 33
4
76
6 1
44
0
16
模型 - 8 82
0
44
7* * * 2
12
0
11* * *
大豆异黄酮 60 7 91
8
53
7* * *

1
80
0
08* * *



120 6 55
4
40
9


1
54
0
06



240 7 62
5
75
7* * *


1
75
0
13* * *





与对照组比较: * * * P< 0
001


与模型组比较:

P< 0
01



P< 0
001


* * * P< 0
001 v s cont rol group




P < 0
01



P < 0
001 vs model gr ou p
2
2
对 BPH 大鼠血清 IGF-1、EGF、VEGF、bFGF
和 T GF-
水平的影响: 由表 2可见,模型组大鼠血
清 IGF-1、EGF、VEGF 和 bFGF 水平显著高于对照
组 ( P< 0
001) , T GF-
水平显著低于对照组 ( P<
0
001) ; 大豆异黄酮低、中、高剂量组血清 IGF-1、
EGF、VEGF 和 bFGF 水平显著低于模型组 ( P<
0
001) , TGF-
水平显著高于模型组 ( P< 0
001) ;
大豆异黄酮中剂量组血清 IGF-1、EGF、VEGF 和
bFGF 水平最低,而 T GF-
水平最高 ( P< 0
001)。
2
3
对 BPH 大鼠前列腺上皮组织 EGF-R 表达的
影响:经免疫组化染色后, EGF-R 在前列腺上皮组
织中染色呈蓝紫色或蓝黑色 (图 1)。由表 3可见,
模型组 EGF-R 阳性表达显著高于对照组 ( P <
0
05) ; 大豆异黄酮中、高剂量组 EGF-R 表达较模
型组显著降低 ( P< 0
05)。
3
讨论


本实验中大豆异黄酮可以使睾酮诱导大鼠前列
腺增生的程度减轻,且存在剂量-效应关系。研究显
示, BPH 患者血清中大豆异黄酮的浓度要低于正常
对照,轻度 BPH 患者血清中大豆异黄酮的浓度高
于重度 BPH 患者[ 6] 。在本实验所采用的大豆异黄
酮剂量范围内, 120 mg/ kg 大豆异黄酮组大鼠前列
腺湿质量及前列腺指数已接近对照组水平, 抑制大
表 2
大豆异黄酮对前列腺增生大鼠血清 IGF-1、EGF、VEGF、bFGF 和 TGF-
水平的影响 (x
s, n= 16)
Table 2
Effects of SI on levels of IGF-1, EGF, VEGF, bFGF, and TGF-
in serum of BPH rats ( x
s, n= 16)
组
别 剂量/ ( mg
kg - 1) IGF- 1/ ( pg
mL- 1 ) EGF/ ( pg
mL - 1 ) V EGF/ ( pg
mL- 1 ) bFGF / ( pg
mL - 1) TGF-
/ ( pg
mL- 1)
对照 - 192
1
16
5 278
7
43
1 211
2
35
7 56
0
9
8 273
8
29
9
模型 - 489
9
47
9* * * 433
0
42
3* * * 359
2
37
8* * * 125
6
13
4* * * 144
3
23
1* * *
大豆异黄酮 60 356
3
18
3* * *


359
0
27
6* * *


290
1
29
8* * *


86
0
12
4* * *


189
9
23
1* * *



120 244
4
14
4* * *


281
5
31
2


230
8
30
8


59
1
5
9


269
9
27
1



240 297
0
23
4* * *


319
0
25
4*


231
8
38
9


72
2
8
1* *


226
1
17
4* * *





与对照组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01
* * * P< 0
001; 与模型组比较:


P< 0
001


* P< 0
05
* * P < 0
01
* * * P < 0
001 v s cont rol group;



P < 0
001 v s model gr ou p

1499
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
图 1
各组前列腺上皮组织 EGF-R 免疫组化染色结果
Fig. 1
Immunohistochemistry micrographs of EGF-R in prostatic epithelial tissue of rats in every group
表 3
大豆异黄酮对前列腺增生大鼠前列腺上皮组织
EGF-R 阳性表达的影响
Table 3
Effects of SI on positive expression of EGF-R
in prostatic epithelial tissue of BPH rats
组
别 剂量/
( mg
kg- 1)
动物/
只
EGFR 表达
- + + + + + +
对照 - 16 9 6 1 0
模型 - 16 0 5 5 6
大豆异黄酮 60 16 0 9 3 4
120 16 2 12 2 0
240 16 1 8 5 2
鼠前列腺增生作用最为显著。
雄激素是调节前列腺生长的最重要激素, 也是
一个重要致病因素。而雌激素在 BPH 的发生中也
起重要作用,既可增加前列腺对雄激素的敏感性来
调控雄激素的活性,也可通过刺激垂体释放催乳素
直接作用于前列腺使其增殖。研究证实, 生长因子
与前列腺的细胞生长、生长阻滞及细胞死亡有直接
关系,与雄激素的作用机制、间质-上皮的相互作用
机制亦有关系。研究发现 IGF-1 对于老年男性前
列腺细胞的增生具有促进作用[ 7] , 而 EGF 可促进
大鼠前列腺中雌激素受体的表达 [ 8]。在本研究中,
模型组大鼠血清 IGF-1、EGF 及 bFGF 水平显著高
于各剂量组,这表明大豆异黄酮可能通过其雌激素
样作用,减少 IGF-1、EGF 及 bFGF 的分泌,从而抑
制前列腺细胞的增殖。同时, 研究发现大豆异黄酮
可抑制人体卵巢黄素化颗粒细胞芳香酶的活性 [ 9] ,
而一定剂量的 IGF-1 可抑制黄素化颗粒细胞的凋
亡[ 10] , 这表明大豆异黄酮也可通过其芳香酶抑制剂
的作用来减少雌二醇 ( E2 ) 的合成。另外, 大豆异
黄酮还可下调人雌激素依赖型乳腺癌 MCF-7 细胞
EGFR 的表达 [ 11]。
VEGF 是血管内皮细胞增殖过程中一个主要
的正性调节因子[ 12] 。VEGF 与其受体相结合后可
产生多种生物学功能,如促进内皮细胞增殖、增强血
管通透性等, 从而促进血管增生。新近研究发现
VEGF 能通过促进人端粒酶逆转录酶 ( hT ERT) 的
表达从而促进前列腺细胞的增殖[ 13] 。在本实验中,
大豆异黄酮组大鼠血清 VEGF 水平显著低于模型
组,其机制可能是大豆异黄酮通过减少 VEGF 的生
成量从而降低 hT ERT 的表达。此外, Jagadeesh
等[ 1 4]研究发现大豆异黄酮具有雌激素样作用,能够
活化雌激素受体作用通路 ( PI3K/ Akt 通路) ,从而
降低 hTERT 的活性, 因此大豆异黄酮还可能具有
hTERT 拮抗剂的作用。
已有实验证明 T GF-
能够抑制上皮细胞和内
皮细胞的生长, 诱导细胞凋亡, 并且能促进 bFGF
的酶解,加速从血液循环中排出。Xu 等[ 15] 发现大
豆异黄酮可以调节上皮细胞中 TGF-
的量,而本实
验也发现大豆异黄酮能够使大鼠血清中 T GF-
的
量升高,从而减轻前列腺增生的程度。
综上所述,大豆异黄酮可能是发挥其雌激素样
作用来调节细胞因子的分泌, 降低血清 IGF-1、
EGF、VEGF 和 bFGF 水平, 提高血清 T GF-
水
平,下调 EGF-R 表达,从而达到抑制前列腺增生的
作用, 但其他生长因子如角化细胞生长因子
( KGF)、神经生长因子 ( NGF)、血小板源生长因子
( PDGF) 等的作用如何及其受体表达的调控方面,
尚待进一步研究。
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枸杞多糖对人肝癌细胞 HepG2 生长的影响及其分子机制
黄
霞,肖丙秀* ,赵军伟,毛
芳,姚
吉,郭俊明
(宁波大学医学院, 浙江 宁波
315211)
摘
要:目的
探讨枸杞多糖 ( L y cium barbarum po ly saccharides, LBP) 对人肝癌细胞 HepG2 生长的影响及可能
机制。方法
人肝癌 HepG2 细胞用 100~ 1 000 mg / L LBP 处理 1~ 5 d, 分别用 MTT 方法、流式细胞术检测细胞
增殖、细胞周期和细胞凋亡。用 West ern blo tting 分析周期蛋白 ( cy clin) 和周期蛋白依赖性激酶 ( cy clin-dependent
kinase, CDK ) 表达的变化。结果
LBP 以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在 G0 / G1期,并诱导
细胞凋亡;其分子机制为引起 cyclin D、cyclin E 和 CDK2 蛋白表达下降。结论
LBP 抑制人肝癌细胞 H epG2 增
殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。
关键词:枸杞多糖; 肝癌细胞; 细胞增殖; 细胞周期; 细胞凋亡
中图分类号: R286
91


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1501-03


枸杞 L y cium bar bar um L. 是我国传统的滋补
中药,它含有多种营养成分和微量元素,具有滋补肝
肾、益精明目、促进造血、调血脂等功效。枸杞多糖
( L y cium barbar um po lysaccharides, LBP) 是枸杞
中主要的生物活性成分, 具有广泛的药理作用,如增
强机体免疫力、延缓衰老等 [ 1]。近几年研究表明,
LBP 可抑制人肺癌[ 2] 、宫颈癌[ 3] 、前列腺癌[ 4] 和白
血病[ 5] 等多种肿瘤细胞的生长。肝癌是我国常见的
肿瘤,但 LBP 能否抑制肝癌细胞生长及其可能机
制,尚未完全阐明。本研究主要探讨 LBP 对人肝癌
细胞 HepG2 生长的影响及其机制,为 LBP 临床应
用提供依据。
1
材料与方法
1
1
材料: LBP 购自上海融禾医药科技发展有限
公司[ 6] , M TT 购自美国 Sigma 公司, RPM I 1640 培
养液购自美国生命技术公司, 人肝癌 HepG2 细胞
购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库,细胞
周期和细胞凋亡检测试剂盒购自美国 BD 公司。
1
2
细胞培养: HepG2 细胞在 37
、含 5% CO2
的培养箱中培养, RPM I 1640 培养液含有 10% 小
牛血清、50 U/ mL 青霉素和 50
g / mL 链霉素。选
择对数生长期细胞用于实验,细胞分别用 100、200、
400、800、1 000 mg/ L LBP 处理[ 6] , 对照组为不含
LBP 的培养液。
1
3
MT T 法测定细胞生长情况:以每孔 1
5
104
个将细胞接种入 96 孔板, 24 h 后分别加入不同质
量浓度的 LBP 处理 1~ 5 d,每个质量浓度设 8个平
行孔。待处理时间达到要求时, 将 15
L MTT ( 5
mg/ mL) 加入到培养孔中继续培养 4 h, 再小心加
入 150
L 二甲基亚砜 ( DM SO )。水平摇床震荡

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2009- 11-15





















基金项目:宁波大学大学生科研创新计划 ( SRIP-2009) ; 宁波大学创新性开放实验建设项目 ( Cxxkf2008-066)作者简介:黄
霞( 1987
) ,女,四川人,本科生,主要从事抗癌药物研究。T el: ( 0574) 87600759
E-mail: xiaob ingxiu@ nbu . edu. cn
* 通讯作者
肖丙秀