全 文 ：H PL C 法测定银杏叶提取物中总银杏酸量的文献报
道较多 ,而测定银杏叶中总银杏酸量不多见。本研
究参考《中国药典》2005 年版银杏叶提取物中总银
杏酸的检测方法 ,以供试品溶液中与 5 种银杏酸对
照品相应色谱峰的峰面积之和 ,对白果新酸对照品
峰面积 ,用外标法计算总银杏酸量 ,方法学研究结果
表明 ,本法操作简便、重现性好、精密度高 ,可用于银
杏叶中总银杏酸量限度的检测。
313 　供试品制备方法的确定 :根据银杏酸的理化性
质 ,在供试品制备过程中 ,比较了甲醇回流、甲醇超
声、石油醚回流 3 种提取方法 ,根据所拟色谱条件 ,
测得总银杏酸峰面积 ,表明甲醇提取量明显高于石
油醚提取 ,而甲醇超声和回流没有明显差异 ,为了操
作方便 ,选择甲醇超声作为最适宜的提取方法。另
比较了不同提取时间对总银杏酸量的影响 ,结果以
甲醇超声提取 30、45、60、90、120 min 银杏叶中总银
杏 酸 的 量 分 别 为 01173 %、01180 %、01177 %、
01179 %、01177 % ,表明超声提取 45 min 即可把银
杏酸提取完全 ,故选择超声提取时间为 45 min。
参考文献 :
[ 1 ] 　Jaggy H , Koch E1 Chemist ry and biology of alkylphenols f rom
Gink go biloba L1 [J ]1 Pharmaze , 1997 , 52 (10) : 73527381
[ 2 ] 　仰榴青 ,吴向阳 ,杨克迪 ,等1 银杏酸分析方法研究进展[J ]1药
物分析杂志 ,2003 ,23 (3) :24122441
[ 3 ] 　中国药典[ S]1一部1 20051
[ 4 ] 　杨小明 ,夏　磊 ,张秀丽 ,等1 RP2HPL C 测定微乳剂中银杏酸
同系物含量[J ]1中国中药杂志 ,2008 ,33 (2) :20722081
[ 5 ] 　鞠建明 ,钱士辉 ,钱大玮 ,等1 银杏半同胞家系种质资源质量的
分析与评价[J ]1林业科技开发 ,2007 ,21 (6) :312331
RP2HPLC法测定菊花中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷和绿原酸
沈 　智1 ,张文婷2 ,黄琴伟2 ,陈丽珏1 ,赵维良2 3
(浙江中医药大学药学院 ,浙江 杭州 　310053 ; 21 浙江省食品药品检验所 ,浙江 杭州 　310004)
摘 　要 :目的 　建立菊花中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸 3 种成分定量测定的方法 ,并对 4 种菊花 3
种成分的量进行比较。方法 　采用高效液相色谱法在同一色谱条件 (色谱柱为 Shimadzu V P2ODS 250 mm ×416
mm ,5μm ;流动相 :乙腈2011 %磷酸梯度洗脱 ;体积流量 :110 mL/ min ;柱温 :30 ℃) 下对菊花中 3 种成分同时进行
定量测定。结果 　3 , 52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸分别在 01039 1～ 01781 0 μg ( r = 11000 0) ,
01013 2～01396 0μg ( r = 11000 0) ,01017 0～01510 0μg ( r = 01999 3) 线性关系良好。3 者的平均回收率分别为
9717 %(RSD = 217 %) ,10117 %(RSD = 115 %) ,9810 %(RSD = 112 %) 。结论 　所建立的方法可在同一色谱条件下
检测出 3 个成分 ,4 种菊花的 3 种成分量有不同程度的差别。
关键词 :菊花 ;3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸 ;木犀草苷 ;绿原酸 ; HPLC
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0307 04
　　菊花 Chrysant hem um mori f ol i um Ramat1 为
常用中药 ,具有散风清热 ,平肝明目之功效。用于治
疗风热感冒 ,头痛眩晕 ,目赤肿痛 ,眼目昏花。《中国
药典》2005 年版菊花项下收载了亳菊、滁菊、杭菊和
贡菊 4 个品种 ,并设定了绿原酸定量测定项目[1 ] 。
目前国内对菊花定量测定的报道有 :用 RP2HPL C
对木犀草苷以及芹菜苷和金合欢苷进行测定[2 ,3 ] ;
用 GC 对菊花中的挥发油进行测定[4 ] ;用薄层扫描
法对菊花中的木犀草素进行测定[5 ] 。菊花中黄酮类
成分量较高 ,其中木犀草苷临床和药理作用明显[6 ] ,
另外 ,菊花中的 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸具有抗呼
吸道病毒活性[7 ,8 ] ,因此两者均可作为菊花质量控
制的指标。本实验用 RP2HPL C 对《中国药典》收载
的 4 种菊花中的 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草
苷和绿原酸 3 个指标成分同时进行了测定 ,目前未
见同时测定这 3 种成分的相关报道。该研究为全面
控制菊花的质量提供了依据。
1 　仪器与试药
111 　仪器 : 岛津高效液相色谱仪 L C —20A T
(D GU —20AS 在线脱气机 , SIL —10A T 自动进样
器 ,SPD —M20A 二极管阵列检测器 , CTO —20A T
柱温箱) ,色谱工作站 L C Solution。KQ —300VDB
型双频数控超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公
司) 。
·703·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009204220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :沈　智 (1983 —) ,男 ,浙江桐乡人 ,硕士研究生 ,研究方向为中药有效成分及质量标准研究和药物分析。　
Tel :15868486360 　E2mail :sz831104 @1261com3 通讯作者　赵维良　Tel : (0571) 86452373 　E2mail :zwl @zjyj1org1cn
112 　材料 :菊花 28 批 (编号 001 —028) ,购于各地
中药饮片厂或药店 ,由浙江省食品药品检验所郭增
喜鉴定。3 , 52O2双咖啡酰基奎宁酸对照品 (购于
Delta 公司 ,质量分数 > 98 %) 。木犀草苷对照品 (批
号为 1117202200501 ,定量测定用) 、绿原酸对照品
(批号为 1107532200413 ,定量测定用) 由中国药品
生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯 ,水为重蒸水 ,
其余为分析纯。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :色谱柱为 ( Shimadzu V P2ODS 250
mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 A 为乙腈 ,流动相 B
为 011 %磷酸溶液 ,梯度洗脱 : 0 ～ 11 min , A 为
10 % →18 % ;11～30 min ,A 为 18 % →20 % ;30～40
min ,A 为 20 % ;体积流量 : 110 mL/ min ;柱温 : 30
℃;检测波长 348 nm ;进样量 :5μL 。
212 　供试品溶液制备 :取菊花粉末 (过 1 号筛) 约
0125 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 70 %
甲醇 25 mL ,密塞 ,称定质量 ,超声 (45 k Hz ,300 W)
处理 40 min ,放冷 ,再称定质量 ,用 70 %甲醇补足减
失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
213 　对照品溶液制备 :精密称取 3 ,52O2双咖啡酰
基奎宁酸对照品 ,木犀草苷对照品以及绿原酸对照
品适量 ,置棕色量瓶中 ,加 70 %甲醇制成含 3 ,52O2
双咖啡酰基奎宁酸 80μg/ mL 、木犀草苷 25μg/ mL 、
绿原酸 35 μg/ mL 的混合溶液 ,即得 ( 10 ℃以下
保存) 。
214 　系统适应性试验 :在上述色谱条件下测定 ,结
果表明理论塔板数以 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸计
大于 7 000 ,以木犀草苷计大于 9 000 ,以绿原酸计大
于 8 000 ,分离度均大于 115 ,色谱图见图 1。
215 　线性关系考察 :精密吸取混合对照品 (3 ,52O2
双咖啡酰基奎宁酸 7811 μg/ mL ,木犀草苷 2614
μg/ mL ,绿原酸 3410μg/ mL 的混合溶液)溶液 015、
112、3、5、10、15μL 注入高效液相色谱仪 ,按上述色
谱条件测定峰面积 ,以峰面积积分值为纵坐标 ,分别
以 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸质
量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得到回归方程 :
Y = 2 3811612 2 X - 41107 6 ( r = 11000 0) ; ( Y =
3 1921904 5 X - 21 966 1 ( r = 11000 0) , Y =
1 7341700 0 X - 61479 9 ( r = 01999 3) 。结果表明 :
3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸在01039 1～11171 5 μg
线性关系良好 ,木犀草苷在01013 2～01396 0μg 线
性关系良好 ;绿原酸在01017 0～01510 0μg 线性关
系良好。
t/ min
Ⅰ2对照品 (12绿原酸 　22木犀草苷 　323 ,52O2双咖啡酰基奎宁
酸) 　Ⅱ2杭菊　Ⅲ2贡菊　Ⅳ2亳菊　Ⅴ2滁菊
Ⅰ2reference substance ( 12chlorogenic acid 　22lutelin272O2β2D2
glucoside 　323 ,52O2discaffeoylquinc acid) 　Ⅱ2Hangju
Ⅲ2Gongju 　Ⅳ2Boju 　Ⅴ2Chuju
图 1 　菊花中成分测定色谱图
Fig11 　HPLC Chromatogram of constituents
in Flos Chrysant hemi
216 　精密度试验 :精密吸取同一混合对照品溶液 ,
按上述色谱条件 ,重复进样 6 次 ,测定 3 者的面积 ,
结果 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸 RSD 为 015 %、木犀
草苷 RSD 为 017 %、绿原酸 RSD 为 013 %。
217 　重现性试验 :取同一批样品 (编号 :024 ,贡菊) 6
份 ,分别精密称定 ,按上述方法测定峰面积。结果
3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸的质量分数为 0183 %
(RSD 为 115 %) ,木犀草苷的质量分数为 0127 %
( RSD 为 116 %) , 绿原酸的质量分数为 0132 %
(RSD 为 111 %) ,表明样品的重现性良好。
218 　稳定性试验 :精密吸取供试品溶液 ,按上述色
谱条件 ,分别于 0、2、6、12、24、48 h 进样 ,测定 3 ,52
O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸的量 , RSD
值分别为 016 %、217 %、010 %。表明样品溶液在 48
h 内稳定。
219 　回收率试验 :精密称取同一批样品 (编号 :024 ,
·803· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
贡菊) 01125 g ,分别精密加入一定量的 3 ,52O2双咖
啡酰基奎宁酸对照品、木犀草苷对照品、绿原酸对照
品 ,按供试品溶液制备项下的方法操作 ,平行操作 9
份 ,按上述色谱条件测定 ,计算回收率。3 ,52O2双咖
啡酰基奎宁酸、木犀草苷和绿原酸的平均回收率分
别为 9717 % ( RSD 为 217 %) 、10117 % ( RSD 为
115 %)和 9810 %( RSD 为 112 %) 。
2110 　样品测定 :按上述测定方法对 28 批菊花样品
进行测定 ,并以外标一点法分别计算 3 成分的量 (以
干燥品计) ,结果见表 1。
　　对 28 批菊花样品依法测定其 3 ,52O2双咖啡酰
基奎宁酸、木犀草苷和绿原酸的量。从测定结果看 ,
杭菊中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷和绿原 酸的量范围分别为 0177 % ～ 1113 %、0121 ～0156 %、0123 %～ 0158 % , 3 者的平均量分别为0192 %、0137 %、0139 % ;滁菊中 3 者的量范围分别为 0185 %～ 1151 %、0106 %～ 0112 %、0117 %～0140 % , 3 者的平均量分别为 1115 %、0108 %、0129 % ;亳菊中 3 者的量分别为 1156 %～2143 %、0110 %～0115 %、0138 %～0158 % ,3 者的平均量分别为 1196 %、0113 %、0145 % ;贡菊中 3 者的量分别为 0178 %～ 1110 %、0120 %～ 0134 %、0127 %～0139 % ,平均量分别为 0193 %、0127 %、0133 %。杭菊和贡菊各成分量相近 ,而亳菊和滁菊中木犀草苷量较低 ,其中亳菊中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸量较高 ,各品种中 3 者的量差别比较大。
表 1 　样品测定结果 ( n = 2)
Table 1 　Determination of constituents in sample ( n = 2)
品　种 产　地 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸/ % RSD/ % 木犀草苷/ % RSD/ % 绿原酸/ % RSD/ %
杭菊 001 浙江桐乡 0184 01 1 01 38 013 01 40 01 2
杭菊 002 浙江桐乡 0185 01 8 01 56 111 01 35 21 2
杭菊 003 浙江桐乡 0181 01 0 01 40 015 01 44 01 3
杭菊 004 浙江桐乡 0180 01 3 01 50 110 01 37 01 1
杭菊 005 浙江桐乡 1113 01 0 01 46 010 01 56 01 1
杭菊 006 浙江桐乡 1111 01 5 01 49 012 01 53 01 2
杭菊 007 浙江桐乡 0195 01 9 01 43 011 01 37 01 6
杭菊 008 浙江桐乡 0192 01 3 01 21 011 01 35 01 0
杭菊 009 浙江桐乡 0177 01 2 01 23 016 01 23 01 2
杭菊 010 浙江桐乡 0192 01 0 01 24 111 01 23 01 1
杭菊 011 浙江桐乡 1107 01 3 01 39 016 01 58 01 2
杭菊 012 浙江桐乡 0185 01 5 01 21 012 01 27 01 2
杭菊 013 浙江桐乡 1101 01 4 01 29 012 01 38 01 4
滁菊 014 安徽滁州 0185 11 6 01 07 010 01 17 11 6
滁菊 015 安徽滁州 1108 01 1 01 12 014 01 29 01 3
滁菊 016 安徽滁州 1151 21 5 01 06 014 01 40 11 4
亳菊 017 安徽亳州 1198 01 8 01 12 119 01 45 01 2
亳菊 018 安徽亳州 2124 11 4 01 15 115 01 38 01 1
亳菊 019 安徽亳州 1156 01 3 01 12 016 01 40 01 2
亳菊 020 安徽亳州 1172 21 0 01 10 114 01 41 11 1
亳菊 021 安徽亳州 1193 11 1 01 14 017 01 49 11 0
亳菊 022 安徽亳州 2134 11 1 01 13 011 01 58 01 6
贡菊 023 安徽　　 0178 11 0 01 29 114 01 27 11 3
贡菊 024 安徽　　 0195 01 3 01 30 013 01 36 01 3
贡菊 025 安徽黄山 0196 01 2 01 34 013 01 34 01 5
贡菊 026 安徽黄山 0188 01 8 01 20 010 01 33 01 5
贡菊 027 安徽黄山 1110 11 3 01 22 114 01 39 11 3
贡菊 028 安徽黄山 0190 01 1 01 26 017 01 31 01 3
3 　讨论
311 　本实验考察了回流、超声等提取方法 ,回流中
曾分别比较了 1、2、3、4、5、6 h 6 个水平 ,用 70 %甲
醇回流提取 3 个指标成分的量 ,结果表明样品中绿
原酸量保持稳定 ,但木犀草苷的量随回流时间呈上
升的趋势 ,同时 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸的量在不
断下降 ,可能样品在加热回流过程中内部发生了物
质转化 ,故不宜用回流作为提取方法 ,而采用超声作
为提取方法。此外 ,通过对溶媒种类 (甲醇 ,50 %甲
醇 ,70 %甲醇 ,乙醇 ,50 %乙醇) 、超声时间、溶液量等
因素进行考察 ,最后确定样品的制备选择取 0125 g
样品加 25 mL 70 %甲醇超声提取 40 min 为宜 ,该
方法操作简便易行。
312 　本实验中 ,结合 3 种成分的化学性质 ,比较甲
·903·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
醇2磷酸溶液和乙腈2磷酸溶液两种流动相 ,通过实
验发现乙腈2磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱分
离度较好 ,同时又比较了 0105 %磷酸、011 %磷酸、
012 %磷酸 3 种缓冲液 ,不同酸度对 3 者的量影响未
见显著差异 ;比较 Shimadzu V P2ODS (250 mm ×
416 mm , 5 μm ) 、Agilent Zorbax SB2C18 柱
(250 mm ×416 mm ,5μm) ,UltimateTM XB2C18 (250
mm ×416 mm ,5μm) 3 个牌子的色谱柱 ,调整流动
相比例后均能良好分离 3 个成分 ,且对 3 成分的量
影响未见显著差异 ;还分别比较了 25、30、40 ℃3 个
温度 ,结果表明柱温变化对 3 者量影响未见显著差
异 ;又分别比较了 H P1100 和岛津 L C —20A T 2 种
液相色谱仪 ,结果表明这 2 个牌子的仪器对 3 者量
的影响也未见显著差异。
313 　检测波长选定 :为了选择合适的检测波长 ,本实
验采用 DAD 检测器。综合考虑了各对照品的吸收系
数 ,检测灵敏度 ,样品中对照品量的高低差异以及本
品中杂质的干扰情况 ,为使 3 个对照品均有吸收 ,且
杂质干扰较少 ,故最终选择 348 nm 为检测波长。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S]1一部1 20051
[ 2 ] 　刘金旗 ,吴德林1 菊花中木犀草素272O2β2D2葡萄糖苷的含量测
定[J ]1中成药 ,2001 ,21 (3) :522531
[ 3 ] 　刘金旗 ,吴德林 ,王　兰 ,等1 菊花中黄酮苷的含量分析[J ]1中
草药 ,2001 ,32 (4) :30823101
[ 4 ] 　刘吉金 ,王晓炜 ,黄服喜 ,等1 气相色谱法测定菊花挥发油中桉
油精、樟脑、龙脑、醋酸龙脑酯[J ]1中草药 ,2006 (9) :762771
[ 5 ] 　谷彦杰 ,彭广芳 ,钟方晓 ,等1 我国 8 种主流菊花商品药材中木
犀草素含量测定[J ]1山东中医药大学学报 ,2000 (1) :661
[ 6 ] 　国家医药管理局中草药情报中心站 1 植物药有效成分手册
[ M]1北京 :人民卫生出版社 ,19861
[ 7 ] 　胡立宏 ,陈仲良1 杭白菊的化学成分研究 :两个新三萜酯的结
构测定[J ]1植物学报 ,1997 ,39 (1) :18121841
[ 8 ] 　马双成 ,毕培曦 ,黄荣春 ,等1 金银花药材中抗呼吸道病毒感染
的咖啡酰奎宁酸类成分的定量研究 [J ]1药物分析杂志 ,2005 ,
25 (7) :75127551
液体硬胶囊技术研讨会在广东省潮州市举办
由潮州市强基制药厂、天津药物研究院共同发起 ,潮州市强基制药厂组织的“液体硬胶囊技术研讨会”于
2010 年 1 月 8 - 10 日在广东省潮州市举办。会议对液体硬胶囊技术现状、应用范围、存在的优缺点、需要完
善的内容进行了研讨。出席本次研讨会的专家有中国工程院院士、天津药物研究院名誉院长刘昌孝研究员
北京 ,大学药学院张强教授 ,四川大学华西药学院张志荣教授 ,沈阳药科大学药学院潘卫三教授 ,中国药科大
学药学院周建平教授 ,中国药科大学中药学院孔令义教授 ,广州中医药大学中药学院李卫民教授 ,广东省药
品检验所李泳雪主任药师 ,天津药物研究院王春龙研究员、李桂龙助理研究员 ,中国医药报社经营管理中心
华南办事处陈海荣博士。出席本次会议的领导有潮州市政府雷健民副市长和李加海董事长、李煜龙厂长等
企业领导。会议在潮州市政府的大力支持下和与会专家的共同努力下达到预期的目的。
与会专家听取了潮州市强基制药厂和天津药物研究院代表所作的液体硬胶囊技术研究和应用的报告 ,
并参观了研究开发生产现场 ,就该技术研究、专利设备和应用范围等进行了研讨。与会专家一致认为 ,液体
硬胶囊有别于普通胶囊剂、软胶囊剂。液体硬胶囊在药品研发、生产、临床应用等方面均具有独特的优势 ,与
软胶囊不同。软胶囊目前主要为胃溶明胶软胶囊 ,由于使用上存在缺陷 ,如物质迁移较严重、稳定性较差、对
明胶有影响的药物不适合、生产周期长等。而目前液体硬胶囊选用的空心胶囊囊材可以是明胶 ,也可以是植
物材料 ,物质迁移较少 ,稳定性高 ;既可以制成胃溶制剂 ,也可以制成普通肠溶或结肠溶的靶向给药制剂 ,可
以解决明胶软胶囊难以解决的问题 ,液体硬胶囊的这些优势应多加宣传、推广、介绍 ,让更多的专业人员及药
品监督管理部门有关人员有进一步的认识了解 ,有利于液体硬胶囊作为胶囊剂的亚剂型进入国家标准 ,有利
于液体硬胶囊新品种的创新开发。
与会专家认真地对液体硬胶囊生产技术涉及的有关问题进行研讨 ,认为潮州市强基制药厂液体硬胶囊
生产技术成熟 ,生产周期较短 ,生产设备配套及产能可适应产业化生产 ,成品质量指标能符合现有标准的要
求。随着液体硬胶囊技术的广泛应用 ,将促进液体硬胶囊新剂型的发展和相关新药品种的开发 ,让更多有特
色、更安全、更有效的液体硬胶囊新药品种能够尽快上市 ,满足老百姓的用药需求。同时对其技术现状、应用
范围以及推广应用需要完善的技术问题提出了建设性的意见。
刘昌孝院士总结发言指出 :11 定位 :液体胶囊技术产品应定位明确 ,以明确该技术的应用范围 ,提出现
有胶囊技术不能解决的制剂问题的独到之处 ;21 质量 :制定质量控制指标 ,通过对比研究提出质量控制的指
标 ;31 数据 :积累实验数据 ,选择几个产品 ,通过应用现有胶囊技术和液体硬胶囊技术生产的对比试验提出
科学数据 ,证明该技术的优势和特点 ;41 认可 :进行技术鉴定 ,在产品定位、质量研究、科学数据比较的基础
上 ,对液体硬胶囊生产技术和生产设备进行技术鉴定 ,进而申报省市和国家科技进步奖励 ,为推广应用和列
入国家药典标准奠定了基础。 [本刊讯 ]
·013· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月