全 文 ：碎米花杜鹃的化学成分及其对小鼠免疫细胞影响的研究
汪伟光1 ,曹永国2 ,付立卓1 ,李海舟1 ,邓旭明2 ,李蓉涛1
①
(11 昆明理工大学生命科学与技术学院 ,云南 昆明 　650224 ; 21 吉林大学畜牧兽医学院 ,吉林 长春 　130062)
摘 　要 :目的 　研究碎米花杜鹃 R hododend ron s pici f erum 叶的化学成分及其免疫活性。方法 　利用多种色谱技
术进行化合物的分离纯化 ,通过各种波谱方法鉴定其化学结构 ,并用 M TT 法测定化合物对小鼠脾淋巴细胞增殖的
影响。结果 　分离鉴定了 12 个已知的黄酮类化合物 ,分别为槲皮素232O2α2L2阿拉伯呋喃糖苷 (1) 、槲皮素232O2α2
L2鼠李吡喃糖苷 (2) 、二氢槲皮素232O2α2阿拉伯吡喃糖苷 (3) 、落新妇苷 (4) 、5 ,7 ,4′2三羟基2二氢黄酮醇232O2α2L2鼠
李吡喃糖苷 (5) 、柚皮素 (6) 、(2 S)25 ,7 ,4′2三羟基282甲基黄烷酮 (7) 、epicatechin2(2β→O →7 ,4β→8)2ent2epicatechin
(8) 、花青素 A21 (9) 、bis28 ,8′2catechinylmethane (10) 、儿茶素 (11) 、表儿茶素 (12) 。化合物 8、9、11 在一定浓度范围
内单独或者协同非特异性丝裂原 (ConA 或 L PS) 作用均能显著增强小鼠脾淋巴细胞增殖能力 ( P < 0105 ,0101 或
01001) 。结论 　碎米花杜鹃的化学成分为首次报道。相关免疫活性实验表明 ,化合物 8、9、11 具有一定的免疫增
强作用。
关键词 :碎米花杜鹃 ;黄酮 ;小鼠脾淋巴细胞
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0019 - 05
Chemical constituents from Rhododendron s pici f erum and their effects on immunocyte of mice
WAN G Wei2guang1 , CAO Yong2guo2 , FU Li2zhuo1 , L I Hai2zhou1 , DEN G Xu2ming2 , L I Rong2tao1
(11 College of Life Science and Technology , Kunming University of Science and Technology , Kunming 650224 , China ;
21 College of Animal Science and Veterinary Medicine , Jilin University , Changchun 130062 , China)
Abstract : Objective 　To st udy t he chemical constit uent s f rom t he leaves of R hododend ron s pici f erum
and their immunomodulatory activities1 Methods 　The chemical constit uent s were isolated by various chro2
matograp hy techniques and t heir st ructures were elucidated on t he basis of spect roscopic data1 The immu2
nomodulatory activity of some compounds was examined by Balb/ c mouse spleen lymp hocyte p roliferation
through M T T1 Results 　Twelve known flavonoids were isolated and identified as : quercetin232O2α2L2ara2
binf uranside (1) , quercetin232O2α2L2rhamnopyranoside ( 2) , t rans2taxifolin232O2α2arabinopyranoside (3 ) ,
astilbin (4) , 32O2rhamnoside engeletin (5) , naringenin (6) , (2 S)25 , 7 , 4′2t rihydroxy282met hylflavanone
(7) , epicatechin2(2β→O →7 ,4β→8)2ent2epicatechin (8) , p roanthocyanidin A21 (9) , bis28 , 8′2catechiny2
lmethane (10) , catechin (11) , and epicatechin (12) 1 The result s showed t hat compounds 8 , 9 , and 11
alone or combined wit h ConA or L PS could significantly enhance t he proliferation of spleen lymp hocytes in
a certain dose range1 Conclusion 　This is t he first report on t he chemical constit uent s f rom R1 s pici f erum1
Compounds 8 , 9 , and 11 are found to be effect on increasing immunomodulatory activity1
Key words : R hododen d ron s pici f erum Franch1 ; flavonoids ; Balb/ c mouse spleen lymp hocyte
　 　碎 米 花 杜 鹃 R hododend ron s pici f erum
Franch1 是杜鹃花科杜鹃花属植物[1 ] 。杜鹃花科植
物中 ,分有毒性的和非毒性的。有毒性植物中 ,公认
的毒性成分是木藜芦烷型二萜。非毒性植物占绝大
多数 ,其主要活性成分是黄酮、挥发油类化合物 ,在
民间被广泛应用于止咳、化痰 ,感冒、吐血及妇科病
等[2 ,3 ] ,具有很高的开发利用价值。照山白、兴安杜
鹃、烈香杜鹃等现已开发成药[4 ] 。鉴于杜鹃花科植
物的良好药用活性以及碎米花杜鹃化学成分研究从
未见文献报道 ,笔者对该种的化学成分进行了深入
·91·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203212
　　基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (20862011) ;藿英东青年教师基金资助项目 (111040) ;教育部“新世纪优秀人才支持计划”
(N ECT20620824)
　　作者简介 :汪伟光 (1984 —) ,男 ,湖北省黄冈市人 ,昆明理工大学生命科学与技术学院在读硕士研究生 ,从事天然产物的分离纯化和结构
鉴定工作两年。　Tel :13769198965 　Fax : (0871) 3801191 　E2mail :wwg1984 @yahoo1com1cn
　　3 通讯作者　李蓉涛　Tel : (0871) 38010182201 　E2mail :rongtaolikm @yahoo1cn
细致的研究。从中分离鉴定了 12 个已知黄酮类化
合物 ,分别为槲皮素232O2α2L2阿拉伯呋喃糖苷 (1) 、
槲皮素232O2α2L2鼠李吡喃糖苷 (2) 、二氢槲皮素232
O2α2阿拉伯吡喃糖苷 (3) 、落新妇苷 (4) 、5 ,7 ,4′2三羟
基2二氢黄酮醇232O2α2L2鼠李吡喃糖苷 (5) 、柚皮素
(6) 、(2 S)25 ,7 ,4′2三羟基282甲基黄烷酮 (7) 、epicat2
echin2(2β→O →7 ,4β→8)2ent2epicatechin (8) 、花青
素 A21 (9) 、bis28 ,8′2catechiny2lmet hane (10) 、儿茶
素 (11) 、表儿茶素 (12) 。
1 　仪器与材料
核磁共振谱在 Bruker AM —400 及 DRX —500
型超导核磁共振仪上测定 ( TMS 为内标) ;高效液相
色谱采用 Agilent 1200 型高效液相色谱仪测定 ;反
相填充材料 ODS (40～60μm) , Merck 公司生产 ;
Sep hadex L H220 为英国安玛西亚公司生产 ;柱色谱
硅胶 (80～100、100～200、200～300 目) 、GF254 型和
G型硅胶薄层板均为青岛海洋化工厂生产。
碎米花杜鹃于 2007 年 10 月采于昆明市金殿后
山 ,由中国科学院昆明植物研究所马永朋博士鉴定 ,
标本保存于昆明理工大学生命科学与技术研究中
心 ,标本号 20071002。
2 　提取与分离
干燥的碎米花杜鹃叶 913 kg ,粉碎后用 70 %丙
酮水溶液室温浸泡 3 次 ,每次 48 h ,合并提取液 ,减
压蒸馏除去丙酮 ,静置过夜后水部分依次用石油醚、
氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取 ,其中得醋酸乙酯部分
843 g。对醋酸乙酯部分用硅胶柱色谱、RP218、
Sep hadex L H220、HPL C 等手段反复分离纯化得到
化合物 1 ( 72 mg) 、2 ( 230 mg) 、3 ( 42 mg) 、4 ( 62
mg) 、5 (15 mg) 、6 (30 mg) 、7 (16 mg) 、8 (20 mg) 、9
(37 mg) 、10 (5 mg) 、11 (16 mg) 、12 (7 mg) 。
3 　结构鉴定
化合物 1 :黄色粉末。1 H2NMR ( CD3 OD , 400
M Hz)δ:6120 (1 H ,s , H26) ,6139 (1 H ,s , H28) ,7152
(1 H , brs , H22′) , 7148 ( 1 H , d , J = 811 Hz , H25′) ,
6190 (1 H , d , J = 813 Hz , H26′) , 4123 ( 1 H , d , J =
211 Hz , Ara H21″) , 3129 ～ 3191 ( 5 H , m , Ara
H22″～5″) ; 13 C2NMR ( CD3 OD , 100 M Hz)δ: 15914
(s ,C22) ,13419 (s ,C23) ,18010 ( s ,C24) ,16311 ( s ,C2
5) , 9919 ( d , C26) , 1661 0 ( s , C27) , 9418 ( d , C28) ,
15816 ( s , C29) , 10516 ( s , C210) , 12310 ( s , C21′) ,
11614 ( d , C22′) , 14614 ( s , C23′) , 14919 ( s , C24′) ,
11619 ( d , C25′) , 12311 ( d , C26′) , 10915 ( d , C21″) ,
8313 ( d , C22″) ,7817 ( d , C23″) , 8810 ( d , C24″) , 6216
(t ,C25″) 。以上1 H2NMR和13 C2NMR数据与文献报
道一致[5 ] ,鉴定为槲皮素232O2α2L2阿拉伯呋喃糖苷。
化合物 2 :黄色粉末。1 H2NMR ( CD3 COCD3 ,
400 M Hz)δ: 6130 (1 H , d , J = 119 Hz , H26) , 6152
(1 H ,d ,J = 119 Hz , H28) ,7146 (1 H ,d , J = 211 Hz ,
H22′) ,6191 ( 1 H , d , J = 811 Hz , H25′) , 7128 (1 H ,
dd , J = 812 , 211 Hz , H26′) , 5152 ( 1 H , d , J =
210 Hz , Rha H21″) , 3132 ～ 3163 ( 4 H , m , Rha
H22″～ 5″) , 0191 ( 3 H , d , J = 612 Hz , Rha26″) 。
13 C2NMR (CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:15719 ( s ,C22) ,
13517 (s ,C23) ,17912 ( s , C24) ,16310 ( s , C25) ,9915
(d ,C26) ,16510 ( s ,C27) ,9415 (d ,C28) ,15813 ( s ,C2
9) ,10516 (s ,C210) ,1221 7 (s ,C21′) ,11611 (d ,C22′) ,
14518 ( s , C23′) , 14910 ( s , C24′) , 11516 ( d , C25′) ,
12215 (d ,C26′) ,10217 (d ,C21″) ,7114 (d ,C22″) ,7210
(d ,C23″) ,7310 (d ,C24″) ,7113 ( d ,C25″) ,1713 (q ,C2
6″) 。上述光谱数据与文献报道一致[ 6 ] ,鉴定为槲皮
素232O2α2L2鼠李吡喃糖苷。
化合物 3 :白色粉末。1 H2NMR ( CD3 COCD3 ,
500 M Hz)δ: 5116 (1 H , d , J = 1012 Hz , H22) ,4186
(1 H ,d ,J = 1017 Hz , H23) ,5193 (1 H ,s , H26) ,5196
(1 H , s , H28) , 7107 ( 1 H , brs , H22′) , 6189 ( 1 H , d ,
J = 719 Hz , H25′) ,6184 (1 H ,d , J = 811 Hz , H26′) ,
4101 ( 1 H , d , J = 412 Hz , Ara H21″) , 3138～ 4112
(5 H , m , Ara H22″～ 5″) 。13 C2NMR ( CD3 COCD3 ,
125 M Hz)δ:8311 ( d ,C22) ,7510 ( d ,C23) ,19610 ( s ,
C24) ,16510 (s , C25) ,9711 ( d , C26) ,16811 ( s , C27) ,
9611 (d ,C28) ,16318 ( s ,C29) ,10014 ( s ,C210) ,12816
(s ,C21′) ,11515 (d ,C22′) ,14519 ( s ,C23′) ,14619 ( s ,
C24′) ,11610 (d ,C25′) ,12016 ( d ,C26′) ,10211 ( d ,C2
1″) ,7214 ( d , C22″) , 6516 ( d , C23″) , 7014 ( d , C24″) ,
6212 (t ,C25″) 。上述光谱数据与文献报道一致[7 ] ,
鉴定为二氢槲皮素232O2α2阿拉伯吡喃糖苷。
化合物 4 :白色粉末。1 H2NMR ( CD3 COCD3 ,
400 M Hz)δ: 5119 (1 H , d , J = 1016 Hz , H22) ,4169
( 1 H , d , J = 1016 Hz , H23) , 5197 ( 1 H , d , J =
119 Hz , H26) ,5199 (1 H ,d , J = 119 Hz , H28) ,7110
(1 H , d , J = 115 Hz , H22′) , 6188 ( 1 H , d , J =
811 Hz , H25′) , 6192 ( 1 H , dd , J = 812 , 115 Hz ,
H26′) ,4113 (1 H ,brs ,Rha H21″) ,3132～3190 (4 H ,
m ,Rha H22″～ 5″) , 1116 ( 3 H , d , J = 612 Hz , Rha
H26″) 。13 C2NMR (CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:8313 (d ,
C22) ,7712 (d , C23) ,19610 ( s , C24) ,16512 ( s , C25) ,
9710 (d ,C26) , 16717 ( s , C27) , 9519 ( d , C28) ,16316
·02· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
( s ,C29) ,1021 3 ( s ,C210) ,12819 ( s ,C21′) ,11610 (d ,
C22′) ,14610 ( s , C23′) ,14618 ( s , C24′) ,11513 ( d , C2
5′) ,12013 (d ,C26′) ,10113 (d ,C21″) ,7113 (d ,C22″) ,
7211 ( d , C23″) ,7314 ( d , C24″) , 6918 ( d , C25″) , 1719
(q ,C26″) 。上述光谱数据与文献报道一致[8 ] ,鉴定
为落新妇苷。
化合物 5 :白色粉末。1 H2NMR ( CD3 COCD3 ,
400 M Hz)δ: 4161 (1 H , d , J = 1019 Hz , H22) ,5111
(1 H ,d ,J = 1019 Hz , H23) ,5189 (1 H ,s , H26) ,5191
(1 H , s , H28) , 7136 ( 2 H , d , J = 811 Hz , H22′,6′) ,
6183 (2 H , d , J = 811 Hz , H23′,5′) , 4118 (1 H , brs ,
Rha H21″) , 3130～4102 ( 4 H , m , Rha H22″～ 5″) ,
1117 ( 3 H , d , J = 612 Hz , Rha H26″) 。13 C2NMR
(CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:8318 (d ,C22) ,7817 (d ,C2
3) , 19610 ( s , C24) , 16515 ( s , C25) , 9714 ( d , C26) ,
16817 (s ,C27) ,9613 ( d , C28) ,16411 ( s ,C29) ,10215
(s ,C210) ,12816 (s ,C21′) ,13010 (d ,C22′,6′) ,11614
(d ,C23′,5′) ,15914 ( s , C24′) ,10212 ( d , C21″) ,7113
(d ,C22″) ,7211 ( d ,C23″) ,7314 ( d ,C24″) ,7015 ( d ,C2
5″) ,1719 ( q , C26″) 。上述光谱数据与文献报道一
致[ 9 ] ,鉴定为 5 ,7 ,4′2三羟基2二氢黄酮醇232O2α2L2
鼠李吡喃糖苷。
化合物 6 :黄色粉末。1 H2NMR ( CD3 OD , 500
M Hz)δ:5141 (1 H ,dd ,J = 1310 ,218 Hz , H22) ,3114
(1 H , dd , J = 1710 ,1310 Hz , H23a) ,2171 (1 H , dd ,
J = 1710 , 219 Hz , H23b) , 6100 ( 1 H , s , H26) , 6100
(1 H , s , H28) , 7136 ( 1 H , d , J = 812 Hz , H22′,6′) ,
6188 ( 1 H , d , J = 812 Hz , H23′,5′) 。13 C2NMR
(CD3 OD ,125 M Hz)δ:7918 ( d ,C22) ,4313 ( t ,C23) ,
19711 (s ,C24) ,16511 ( s , C25) ,9617 ( d ,C26) ,16712
(s ,C27) ,9518 ( d , C28) ,16412 ( s , C29) ,10311 ( s , C2
10) ,13016 (s ,C21′) ,12819 (d ,C22′,6′) ,11611 (d ,C2
3′,5′) ,15815 ( s ,C24′) 。上述光谱数据与文献报道
完全一致[10 ] ,鉴定为柚皮素。
化合物 7 :黄色粉末。1 H2NMR ( CD3 OD , 500
M Hz)δ:5140 (1 H ,dd ,J = 1310 ,219 Hz , H22) ,3114
(1 H , dd , J = 1710 ,1310 Hz , H23a) ,2170 (1 H , dd ,
J = 1710 , 310 Hz , H23b) , 6103 ( 1 H , s , H26) , 7137
(1 H , d , J = 814 Hz , H22′,6′) , 6188 ( 1 H , d , J =
814 Hz , H23′,5′) , 1196 ( 3 H , s , Me ) 。13 C2NMR
(CD3 OD ,125 M Hz)δ:7917 ( d ,C22) ,4315 ( t ,C23) ,
19711 (s ,C24) ,16117 ( s , C25) ,9510 ( d ,C26) ,16511
(s ,C27) ,10218 (s ,C28) ,16213 ( s ,C29) ,10415 ( s ,C2
10) ,13018 (s ,C21′) ,12818 (d ,C22′,6′) ,11610 (d ,C2
3′,5′) ,15815 (s ,C24′) ,619 (q ,Me) 。上述光谱数据
与文献报道一致[11 ] ,鉴定为 (2 S)25 ,7 ,4′2三羟基282
甲基黄烷酮。
化合物 8 :浅黄色粉末。1 H2NMR(CD3 COCD3 ,400
M Hz)δ: 4117 (1 H , d , J = 417 Hz , H23) ,4140 (1 H ,
d , J = 417 Hz , H24) , 6100 ( 1 H , d , J = 213 Hz ,
H26) ,6109 (1 H , d , J = 213 Hz , H28) ,7130 (1 H , d ,
J = 118 Hz , H210) , 6186 ( 1 H , d , J = 811 Hz ,
H213) ,7107 (1 H ,dd , J = 811 ,213 Hz , H214) ,4198
(1 H ,brs , H22′) ,4127 (1 H ,m , H23′) ,2196 (1 H ,dd ,
J = 1713 ,416 Hz , H24′α) ,2182 (1 H , dd , J = 1713 ,
813 Hz , H24′β) , 6116 ( 1 H , s , H26′) , 7121 ( 1 H , d ,
J = 210 Hz , H210′) , 6185 ( 1 H , d , J = 813 Hz ,
H213′) , 7106 ( 1 H , dd , J = 813 , 213 Hz , H214′) 。
13 C2NMR (CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ: 9917 ( s , C22) ,
6713 (d ,C23) ,2816 ( d ,C24) ,10319 ( s ,C24a) ,15616
(s ,C25) ,9810 ( d , C26) ,15716 ( s , C27) ,9613 ( d , C2
8) ,15317 (s ,C28a) ,13211 ( s ,C29) ,11512 (d ,C210) ,
14518 ( s , C211) ,14419 ( s , C212) , 11610 ( d , C213) ,
12015 (d ,C214) ,8114 ( d ,C22′) ,6518 (d ,C23′) ,2914
(t ,C24′) ,10212 (s ,C24′a) ,15519 ( s ,C25′) ,9611 ( d ,
C26′) ,15116 ( s , C27′) ,10616 ( s , C28′) ,15115 ( s , C2
8′a) ,13016 ( s , C29′) ,11514 ( d ,C210′) ,14610 ( s ,C2
11′) ,14514 (s ,C212′) ,11516 (d ,C213′) ,11916 (d ,C2
14′) 。上述光谱数据与文献报道一致[6 ] ,鉴定为
epicatechin2(2β→O →7 ,4β→8)2ent2epicatechin。
化合物 9 :浅黄色粉末。1 H2NMR (CD3 COCD3 ,
400 M Hz)δ: 4115 (1 H , d , J = 417 Hz , H23) , 4125
(1 H ,d , J = 417 Hz , H24) ,51 8 (1 H , d , J = 213 Hz ,
H26) ,6109 (1 H , d , J = 213 Hz , H28) ,7128 (1 H , d ,
J = 118 Hz , H210) , 6173 ( 1 H , d , J = 811 Hz ,
H213) ,7102 (1 H ,dd , J = 811 ,213 Hz , H214) ,4169
(1 H ,brs , H22′) ,4113 (1 H ,m , H23′) ,2160 (1 H ,dd ,
J = 1616 ,811 Hz , H24′α) ,2182 (1 H , dd , J = 1616 ,
511 Hz , H24′β) , 6116 ( 1 H , s , H26′) , 7111 ( 1 H , d ,
J = 210 Hz , H210′) , 6180 ( 1 H , d , J = 719 Hz ,
H213′) , 6183 ( 1 H , dd , J = 719 , 213 Hz , H214′) 。
13 C2NMR (CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:10013 ( s ,C22) ,
6811 (d ,C23) ,2910 ( d ,C24) ,10410 ( s ,C24a) ,15618
(s ,C25) ,9811 ( d , C26) ,15811 ( s , C27) ,9615 ( d , C2
8) ,15412 (s ,C28a) ,13216 ( s ,C29) ,11516 (d ,C210) ,
14618 ( s , C211) ,14516 ( s , C212) , 11613 ( d , C213) ,
12017 (d ,C214) ,8415 ( d ,C22′) ,6218 (d ,C23′) ,2912
(t ,C24′) ,10311 (s ,C24′a) ,15611 ( s ,C25′) ,9615 ( d ,
·12·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
C26′) ,15212 ( s , C27′) ,10618 ( s , C28′) ,15114 ( s , C2
8′a) ,13015 ( s , C29′) ,1151 7 ( d , C210′) ,14618 ( s , C2
11′) ,14613 (s ,C212′) ,11517 (d ,C213′) ,11918 (d ,C2
14′) 。上述光谱数据与文献报道一致[12 ] ,鉴定该化
合物为花青素 A21。
化合物 10 :浅黄色粉末。1 H2NMR (CD3 COCD3 ,
400 M Hz)δ:5102 (1 H , brs , H22) ,4124 (1 H , m , H2
3) , 2178 ( 1 H , dd , J = 1617 , 310 Hz , H24′α) , 2188
(1 H ,dd , J = 1617 ,413 Hz , H24′β) ,518 (1 H ,d , J =
213 Hz , H26) ,5195 (1 H , s , H28) ,7118 (1 H , d , J =
119 Hz , H210) , 6181 ( 1 H , d , J = 811 Hz , H213) ,
6192 (1 H ,dd , J = 811 ,119 Hz , H214) ,2198 (2 H , s ,
H2CH2 ) 。13 C2NMR (CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:8016
(d , C22 , 2′) , 6615 ( d , C23 , 3′) , 2911 ( t , C24 , 4′) ,
10010 (s ,C24a ,4′a) ,15515 (s ,C25 ,5′) ,9710 (d ,C26 ,
6′) ,1518 (s ,C27 ,7′) ,10515 ( s ,C28 ,8′) ,15619 ( s ,C2
8a , 8′a) , 13113 ( s , C29 , 9′) , 11513 ( d , C210 , 10′) ,
14517 (s ,C211 ,11′) ,14515 ( s ,C212 ,12′) ,11517 ( d ,
C213 ,13′) ,11915 ( d ,C214 ,14′) ,1614 ( t ,CH2 ) 。上
述数据与文献报道一致[13 ] ,鉴定该化合物为 bis28 ,
8′2catechinylmet hane。
化合 物 11 : 无 色 针 体 ( 丙 酮 ) 。1 H2NMR
(CD3 COCD3 ,500 M Hz)δ: 4154 (1 H , d , J = 717 Hz ,
H22) ,4102 (1 H , m , H23) ,2190 (1 H , dd , J = 1611 ,
514 Hz , H24a) , 2153 ( 1 H , dd , J = 1611 , 810 Hz ,
H24b) ,5186 (1 H ,d , J = 213 Hz , H26) ,610 (1 H ,d ,
J = 213 Hz , H28) ,6188 (1 H ,d , J = 11 9 Hz , H22′) ,
6178 (1 H , d , J = 810 Hz , H25′) ,6173 (1 H , dd , J =
811 , 119 Hz , H26′) 。13 C2NMR ( CD3 COCD3 , 125
M Hz)δ:8218 (d ,C22) ,681 8 (d ,C23) ,2815 ( t ,C24) ,
15716 ( s , C25) ,9613 ( d , C26) , 15619 ( s , C27) , 9515
(d ,C28) ,15718 ( s ,C29) ,10018 ( s ,C210) ,13212 ( s ,
C21′) ,11512 ( d , C22′) ,14612 ( s , C23′) ,14612 ( s , C2
4′) ,11611 (d ,C25′) ,12010 (d ,C26′) 。上述光谱数据
与儿茶素完全一致[14 ] ,鉴定为儿茶素。
化合物 12 : 无色针状晶体 (丙酮) 。1 H2NMR
(CD3 COCD3 ,400 M Hz)δ: 4120 (1 H , d , J = 416 Hz ,
H22) ,3175 (1 H ,d ,J = 515 Hz , H23) ,2185 (1 H ,dd ,
J = 1616 , 416 Hz , H24a) , 2172 ( 1 H , dd , J = 1610 ,
312 Hz , H24b) , 5191 ( 1 H , d , J = 218 Hz , H26) ,
6101 ( 1 H , d , J = 218 Hz , H28) , 7104 ( 1 H , d , J =
118 Hz , H22′) , 6180 ( 1 H , d , J = 810 Hz , H25′) ,
6180 ( 1 H , dd , J = 811 , 118 Hz , H26′) 。13 C2NMR
(CD3 COCD3 ,100 M Hz)δ:7913 (d ,C22) ,6616 (d ,C2
3) , 2819 ( t , C24) , 15717 ( s , C25) , 9612 ( d , C26 ) ,
15619 ( s , C27) ,9513 ( d , C28) , 15716 ( s , C29) , 9914
(s ,C210) ,13118 (s ,C21′) ,11514 (d ,C22′) ,14514 ( s ,
C23′) ,14515 ( s ,C24′) ,11515 ( d , C25′) ,11819 ( d ,C2
6′) 。上述光谱数据与表儿茶素完全一致[15 ] ,鉴定
为表儿茶素。
4 　小鼠脾淋巴细胞增殖研究
化合物 8～12 均为黄烷类及其二聚体 ,为了考
察这类化合物的相关免疫活性 ,故选取了量大的化
合物 8、9、11 用 M T T 法检测其对小鼠脾淋巴细胞
转化率的影响。
411 　制备小鼠脾淋巴细胞悬液 :颈椎脱臼法处死
Balb/ c 小鼠 ,用 75 %乙醇浸泡约 3 min 消毒 ;无菌取
脾并置于无血清的 RPMI21640 培养液中 ,冲洗 2 次 ,
取约 5 mL 无血清 RPMI21640 培养液 ,轻轻插入脾内
吹出细胞 ,重复操作数次至脾外膜透明 ;收集全部细
胞悬液1 000 ×g 离心 5 min 弃上清 ,加入 Tris2N H4 Cl
约 3 mL ,轻轻吹匀 ,去除红细胞 ,1 000 ×g 离心 5 min
弃上清 ,重复操作 2 次 ;细胞沉淀用无血清 RPMI2
1640 培养液重悬 ,轻轻吹匀 ,1 000 ×g 离心 5 min 弃
上清 ;细胞沉淀用 RPMI21640 完全培养液重悬 ,
Trypan Blue 染色计数活细胞 95 %以上。调整细胞密
度为 5 ×109 个/ L ,制成脾细胞悬液。
412 　小鼠脾淋巴细胞给药 :将制备的脾淋巴细胞悬
液加入 96 孔细胞培养板 ,每孔 100μL 。然后每孔
分别加入 100μL 含不同浓度化合物 8、9、11 的 RP2
MI21640 完全培养液 ,使化合物 11 终质量浓度分别
为 1、5、25、50 mg/ L (单药组) ,或每孔分别加入 100
μL 不同质量浓度化合物 11 (1、5、25、50 mg/ L ) 和
ConA (5 mg/ L)或 L PS(20 mg/ L)的混合液 (组合化
合物 11 组) ,同时设定阳性、阴性和空白对照组 ,每
组均设 4 复孔。将 96 孔细胞培养板置 37 ℃、5 %
CO2 培养箱中连续培养 44 h ;取出培养板 ,每孔加
入 20μL M T T 液 ,继续培养 4 h ;于1 800 ×g 离心
10 min 弃上清 ,每孔加入 150μL DMSO ;用酶标仪
于 570 nm 处测定吸光度 ( A ) 值 ,结果以刺激指数
(SI)值反映小鼠脾淋巴细胞增殖率的高低 : SI = 药
物刺激孔 A / 阴性对照孔 A 。(化合物 8 ,9 的质量浓
度分别为 5、25、50、100 mg/ L)
413 　化合物 8、9、11 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影
响 :数据用 x ±s 表示 ,应用 SPSS1310 软件进行方
差分析 ,各剂量药物组与对照组比较差异显著用3 P < 0105 , 3 3 P < 0101 或 3 3 3 P < 01001 进行标识 ,
所有试验结果均重复操作 3 次。结果见图 1。
·22· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
图 1 　化合物 8、9、11 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响( n = 3)
Fig11 　Effects of compounds 8 , 9 , and 11 on Balb/ c
mouse spleen lymphocyte proliferation ( n = 3)
5 　讨论
从碎米花杜鹃叶的醋酸乙酯部分分离情况来
看 ,没有分离得到杜鹃花科公认的有毒成分 ———木
藜芦烷型二萜 ,进一步证实了该种为非毒性的。虽
然分离所得均为黄酮类化合物 ,但是黄酮种类涉及
典型黄酮及其苷、二氢黄酮苷、黄烷、花青素等 ,黄酮
结构多样性突出。免疫活性试验表明 ,小鼠脾淋巴
细胞受到化合物 8、9、11 或/ 和 ConA 以及 L PS 协
同作用后 ,均在一定的浓度范围内对于小鼠脾淋巴
细胞的增殖率有显著增强作用 ( 3 P < 0105 , 3 3 P <
0101 , 3 3 3 P < 01001) ,具有明显的量效关系。故初
步表明化合物 8、9、11 有免疫增强的作用。以上实
验对于该科植物的化学成分及其活性研究有一定的
指导意义。
　　致谢 :衷心感谢中国科学院昆明植物研究所马
永朋博士在样品采集和鉴定方面做出的辛苦劳动。
非常感谢昆明理工大学生命科学与技术学院微生物
专业李奎同学在活性数据处理与表图制作方面给予
的无私帮助。
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·32·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月