全 文 ：·药材与资源·
浙江主产区栽培浙贝母种质遗传多样性的 AFLP 分析
徐金中 ,张红叶 ,马喜彦 ,蔡进章 ,董建勇
①
(温州医学院药学院 ,浙江 温州 　325035)
摘 　要 :目的 　研究中国浙江省道地药材浙贝母的遗传多样性。方法 　应用扩增片段长度多态性技术 (A FL P) 对
具有代表性的 6 个浙贝母居群 ,共 32 份个体进行分析。结果 　在浙贝母的物种水平上 ,Nei′s 基因多样性指数
( He)为 0. 169 0 ±0. 175 7 ,Shannon′s 信息指数 ( I)为 0. 269 8 ±0. 245 3 ,多态位点百分率 ( PPB) 76. 85 % ;总遗传多
样性 ( Ht) 0. 169 0 ±0. 030 9 ,其居群水平上遗传多样性 ( Hs) 0. 150 8 ±0. 024 0 ,Shannon′s 信息指数 ( I) 0. 233 3 ±
0. 261 9 ,多态位点百分率 ( PPB) 50. 38 % ,Nei′s 遗传分化指数 ( Gst)为 0. 107 6 ,基因流 ( N m) 为 4. 147 0。东阳和永
康种群之间的遗传距离最小 (0. 015 0) ,而象山与缙云最远 (0. 032 4) 。结论 　浙江省主产区栽培浙贝母物种的遗
传多样性水平丰富 ,高的遗传多样性能够维持浙贝母的长期生存 ,居群间的多样性水平明显低于居群内的多样性
水平 ,居群间遗传分化不明显 ,种植资源相对比较稳定 ,这些居群适宜作为浙贝母优良品种的选育基地。
关键词 :浙贝母 ;种质资源 ;基因多样性 ;A FL P
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0109 - 05
AFLP Analysis on genetic diversity for germplasm resources of F ritil l a ria t hunber gii
cultivated in Zhejiang Province
XU Jin2zhong , ZHAN G Hong2ye , MA Xi2yan , CA I Jin2zhang , DON G Jian2yong
(College of Pharmacy , Wenzhou Medical College , Wenzhou 325035 , China)
Abstract : Objective 　To study t he genetic diversity of Fri t i l l ari a t hunbergii , a t raditional Chinese
herb in Zhejiang Province in China1 Methods 　The genetic diversity of six rep resentational pop ulations of
F1 t hunbergi i including 32 individuals was investigated by amplified f ragment length polymorp hism
(A FL P) maker technique1 Results 　The genetic diversity was revealed as follow : t he Nei′s genetic diversi2
ty index ( He) 0. 169 0 ±0. 175 7 , Shannon′s information index ( I) 0. 269 8 ±0. 245 3 , percentage of poly2
morp hic loci ( PPB) was 76. 85 % at t he species level ; H t 0. 169 0 ±0. 030 9 , and Hs 0. 150 8 ±0. 024 0 ,
I 0. 233 3 ±0. 261 9 , PPB was 50. 38 % at pop ulation level1 The genetic differentiation index ( Gst ) was
0. 107 6 , N m 4. 147 01 The result of dendrogram of six pop ulations indicated t hat Dongyang and Yongkang
pop ulations shared t he minimum genetic distance ( 0. 015 0 ) , t hey were classified into a group , and
Xiangshan and Jinyun pop ulations shared the maximum genetic distance (0. 032 4)1 Conclusion 　The ge2
netic diversity of F1 t hunbergi i cultivated in Zhejiang Province is very rich , which could ensure t he long2
term survival of F1 t hunbergi i1 But t he genetic diversity of F1 t hunbergi i is relatively higher in pop ulation
levels while lower at t he species levels and the degree of genetic differentiation occured among t he pop ula2
tions is not significant1 The germplasm resources are relatively stable among t hese six pop ulations1 These
pop ulations could be used to breed the fine st rains of F1 t hunbergi i as t he bases1
Key words : Fri ti l l ari a t hunbergi i Miq1 ; germplasm resources ; genetic diversity ; amplified f ragment
lengt h polymorp hism (A FL P)
　　浙贝母 Frit i l l ari a t hunbergi i Miq1 为大宗常
用药材。原产于浙江宁波象山 ,是著名的“浙八味”
之一[ 1 ] 。目前 ,浙江省商品药材栽培基地主要分布
于鄞州、磐安、永康、象山、东阳、缙云等地区。年栽
·901·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009204212
　　基金项目 :温州市科技局资助项目 ( Y2004A121)
　　作者简介 :徐金中 (1982 —) ,男 ,浙江温州人 ,温州医学院硕士研究生 ,研究方向为新药研究与开发。
Tel : (0577) 86689369 　E2mail :fengzhongjin @163. com
　　3 通讯作者　董建勇　Tel : (0577) 86689369 　E2mail :jianyd163 @163. com
培面积达 3. 97 ×105 hm2 。其中鄞州种植约 1. 2 ×
105 hm2 ,磐安种植约 7. 5 ×104 hm2 ,年产量 600 多
t 。但各地栽培的浙贝母种质资源关系不明确 ,地理
环境对长期栽培品种生物遗传性状的影响也未见系
统报道。为了分析浙江省道地种植区浙贝母种质资
源遗传性状 ,建立特异、分辨率高的 DNA 分子标记
生物学鉴定方法及选育优良品种提供实验依据 ,采
用 A FL P 分子标记法对省内商品栽培基地 6 个居
群的浙贝母遗传多样性进行了分析 ,现报道如下。
1 　材料与方法
1. 1 　试验材料 :植物标本收集于浙江鄞州、磐安、东
阳、象山、永康、缙云等种植区 ,均为人工栽培。根据
均匀分布 ,随即取样原则进行采样 ,尽量覆盖该地区
栽培范围。每种植区收集 4～6 个种植乡镇 ,样品共
32 份 (表 1) 。经温州医学院药学院蔡进章副主任药
师鉴定为浙贝母 Fri t i l l ari a t hunbergi i Miq1 。每
份样品收集种子 10～50 g ,快速干燥后带回实验室 ,
存放在 - 78 ℃冰箱中备用。
表 1 　浙贝母主要种植区 6 个不同居群采样表
Table 1 　Characteristic descriptions of six sampled populations
of F1 t hunbergii from main cultivated areas
编号 品种 采集地区 样本数
1 浙贝母 鄞州 6
2 浙贝母 象山 4
3 浙贝母 东阳 6
4 浙贝母 磐安 6
5 浙贝母 永康 5
6 浙贝母 缙云 5
1. 2 　仪器、试剂 :D GL —16 台式离心机、D G—Ⅱ暗
箱式紫外透箱、D G—3D 大型水平电泳槽、D G—Ⅲ
双稳数显电泳仪 (北京鼎国) , 9600 PCR 扩增仪、
ABI Prism 377 DNA Sequencer (美国 Perkin Elmer
公司) ,Sigma 3 K18 型低温冷冻离心机 (美国 Sigma
公司) 。采用北京鼎国生物技术有限公司 FISH2
A FL P 试剂盒。
1. 3 　方法
1. 3. 1 　种子总 DNA 的提取 :每份样品称取 50 mg ,
采用鼎国生物技术有限公司植物基因组DNA 提取试
剂盒 ,用 CTAB 法提取 ;0. 8 %琼脂糖凝胶电泳检测
DNA 纯度、完整性及产量。置于 - 20 ℃贮存备用。
1. 3. 2 　模板 DNA 的限制性酶切与连接 :在 0. 5 mL
离心管中加入 (20μL 体系) :4μL DNA 模板 ,1μL
Adapter , 2 μL EcoRⅠ/ MseⅠ, 2. 5 μL 10 ×Reaction
buffer , 2. 5μL 10 mmol/ L ATP ,1μL T4 酶 ,7μL
AFL P2H2 O。混匀离心数秒 ,37 ℃保温 5 h ,8 ℃保温
4 h ,4 ℃过夜。接头和 AFL P 引物序列见表 2。
1. 3. 3 　A FL P 预扩增 :按试剂盒说明 ,0. 2 mL 离心
管中加入 (25μL 体系) :2μL 模板 DNA ,1μL Pre2
amp mix , 2. 5 μL 10 ×PCR buffer , 0. 5 μL T aq
DNA 酶 ;18μL A FL P2H2 O。按下列参数进行 PCR
扩增 :预变性 94 ℃、2 min ;按 94 ℃、30 s ,56 ℃、30
s ,72 ℃、80 s 参数扩增 30 轮 ; 72 ℃下延伸处理 5
min。引物序列见表 2。
表 2 　接头和引物序列
Table 2 　Adapters and primers sequences
接头和引物 碱基序列
EcoR Ⅰ接头 接头 1 5′> CTCGTA GACTGCGTACC < 3′
接头 2 5′> AA TTGGTACGCA GTCTAC < 3′
MesⅠ接头 接头 1 5′> GACGA TGA GTCCTGA G< 3′
接头 2 5′> TACTCA GGACTCA T < 3′
EcoR Ⅰ引物预扩增引物 5′> GACTGCGTACCAA TTCA < 3′ 预扩增 　　
EcoR Ⅰ21 5′> GACTGCGTACCAA TTAACC < 3′ 选择性扩增
EcoR Ⅰ22 5′> GACTGCGTACCAA TTAA GG< 3′
EcoR Ⅰ23 5′> GACTGCGTACCAA TTACAA < 3′
EcoR Ⅰ24 5′> GACTGCGTACCAA TTACTT < 3′
EcoR Ⅰ25 5′< GACTGCGTACCAA TTACCC < 3′
EcoR Ⅰ26 5′> GACTGCGTACCAA TTACGG< 3′
EcoR Ⅰ27 5′> GACTGCGTACCAA TTA GCC < 3′
EcoR Ⅰ28 5′> GACTGCGTACCAA TTA GGG< 3′
MseⅠ引物选择性扩增 5′> GA TGA GTCCTGA GTAAC < 3′ 预扩增 　　
FAM2标记 MseⅠ21 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAAA < 3′ 选择性扩增
FAM2标记 MseⅠ22 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAAC < 3′
FAM2标记 MseⅠ23 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAA G< 3′
FAM2标记 MseⅠ24 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAA T < 3′
FAM2标记 MseⅠ25 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAAA < 3′
FAM2标记 MseⅠ26 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAAC < 3′
FAM2标记 MseⅠ27 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAA G< 3′
FAM2标记 MseⅠ28 5′> GA TGA GTCCTGA GTACAA T < 3′
1. 3. 4 　选择性扩增 :用 A FL P2TE 将预扩增产物按
1 ∶20 稀释 ,作为选扩模板。使用 3 + 3 引物组合 ,
引物序列见表 2。0. 2 mL 离心管中加入 (25μL 体
系) :2μL 预扩增稀释样品 ,2. 5μL 10 ×PCR 缓冲
液 ,0. 5 μL dN TP , 1 μL EcoR Ⅰ/ Mse Ⅰ引物 , 0. 5
μL T aq DNA 酶 ,17. 5μL A FL P2H2 O。按下列参
数 PCR 循环 :预变性 94 ℃ 2 min。第一轮扩增参
数 :94 ℃、30 s ,65 ℃、30 s ,72 ℃、80 s。以后每轮循
环退火温度递降 0. 7 ℃,扩增 12 轮。接着按 94 ℃、
30 s ,55 ℃、30 s ,72 ℃、80 s 参数扩增 23 轮。延伸
·011· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
加时 72 ℃5 min。将 1μL PCR 产物、1μL 内标、1
μL 变性液混合 ,95 ℃、2 min ,冰浴 ,上样。
1. 3. 5 　扩增产物的凝胶电泳 :用 ABI377 测序仪进
行 A FL P 分析。注射器吹打加样孔加样 ,预电泳 3
min 后点击 Pause 键暂停测序仪 ,设置相关参数后
开始电泳 4 h。得到清晰的 A FL P 胶图。
1. 3. 6 　数据处理与分析 :胶图用 GEN ESCAN3. 1
软件进行数据提取及 EXCEL 转换 ,生成由“1”和
“0”组成的原始矩阵。用 N TSYSpc22. 11F 软件进
行数据分析 ,将原始矩阵用 SimQual 程序求 DICE
相似系数矩阵。遗传相似系数 ( Gs) 按公式 Gs =
2N ij ( N i + N j )计算 ,式中 N ij 表示在 i 和 j 材料中共
有的带 , N i 、N j 分别是材料 i 、j 的带的数量 ,选用
DICE 相似系数。用 PO P GEN E1. 32 软件计算居群
总遗传多样性 ( H t) 、居群内遗传多样性 ( Hs) 、遗传
分化系数 ( Gst) 、基因流 ( N m) 、Nei 遗传多样性指标
( h) 、Shannon 信息指数 ( I) 、遗传距离。
2 　结果与分析
2. 1 　模板 DNA 提取 :用 CTAB 法提取植物基因组
DNA ,速度快 ,条带清晰 ,无污染 ,无 RNA 污染 ,纯
度较高 ,能满足 A FL P 分析的要求 ,结果见图 1。
图 1 　浙贝母基因组 DNA
Fig. 1 　Genome DNA of F1 t hunbergii
2. 2 　引物筛选 :取浙贝母基因组 DNA ,利用 EcoR
Ⅰ/ Mse Ⅰ双酶切筛选引物。在 64 对 E + 3/ M + 3的
选择性扩增引物中筛选出 7 对 A FL P 选择性扩增
引物。结果多态性好 ,清晰易辨 ,片段大小在 71～
500 bp ,符合 A FL P 分析对酶切片段大小的要求 ,数
量合适 ,分布均匀 ,证明该组引物适于浙贝母基因的
A FL P 分析。
2. 3 　A FL P 多态性 :采用 7 对筛选的 A FL P 引物组
合扩增 ,共得到 10 665 条扩增带 ,其中多态性条带
7 185条 ,平均每对引物得到 205 条多态性条带 ,多
态性比率 67. 37 %。多态率最高的组合为 E2ACA/
M2CAA ( 72. 81 %) , 最 低 的 为 E2A GC/ M2CAA
(56. 55 %) ,相似系数范围 0. 548 0～0. 778 1。结果
表明 A FL P 能检测到很丰富的多态性 (图 2) 。所用
引物组合及统计结果见表 3。
图 2 　7 对引物对鄞州居群 6 个个体选择性 PCR产物电泳图
Fig. 2 　Electrophoretogram of selecting PCR products generated by seven primer pairs
of six individuals in Yinzhou population
表 3 　7 对引物选择性扩增结果分析表
Table 3 　Analysis of selectively amplif ied by seven prime pairs
复合引物 碎片多态数 碎片总数 多态性百分率/ %
E2AAC/ M2CAA 1 000 1 450 68. 96
E2AA G/ M2CAA 1 100 1 520 72. 36
E2ACA/ M2CAA 1 125 1 545 72. 81
E2ACT/ M2CAA 1 030 1 510 68. 21
E2ACG/ M2CAA 940 1 510 62. 25
E2A GC/ M2CAA 1 170 1 680 69. 64
E2A GG/ M2CAA 820 1 450 56. 55
合计 7 185 10 665 67. 37
2. 4 　浙贝母的遗传多样性 :对 6 个居群浙贝母内部
的遗传多样性进行分析 (表 4) 。浙贝母居群间的
Nei′s基因多样性指数 ( He) 为 0. 169 0 ±0. 175 7 ,
Shannon′s 信息指数 ( I) 为 0. 269 8 ±0. 245 3 ,多态
位点百分率 ( PPB) 76. 85 %。各居群内部 : He 介于
0. 133 0 ～ 0. 165 2 , 平 均 值 为 0. 151 4 ; I 在
0. 204 6～0. 254 9 ,平均值为 0. 233 2 ; PPB 分布区
间为43. 06 %～54. 68 % ,平均值为50. 38 % ,数据分
·111·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
表 4 　不同居群浙贝母的多样性水平
Table 4 　Diversity of different populations of F1 t hunbergii
居群 样本数 N a N e He I PPB/ %
鄞州　 6 1. 430 6 ±0. 496 3 1. 219 9 ±0. 327 7 0. 133 0 ±0. 179 0 0. 204 6 ±0. 260 2 43. 06
象山　 4 1. 486 1 ±0. 501 0 1. 226 7 ±0. 317 8 0. 140 7 ±0. 173 9 0. 219 9 ±0. 254 0 48. 61
东阳　 5 1. 504 6 ±0. 501 1 1. 257 3 ±0. 346 5 0. 154 3 ±0. 185 7 0. 237 3 ±0. 266 8 50. 46
磐安　 6 1. 513 9 ±0. 501 0 1. 251 2 ±0. 340 7 0. 152 0 ±0. 182 3 0. 235 4 ±0. 262 2 51. 39
永康　 5 1. 541 7 ±0. 499 4 1. 262 8 ±0. 341 0 0. 159 7 ±0. 182 8 0. 247 5 ±0. 262 5 54. 17
缙云　 5 1. 546 3 ±0. 499 0 1. 273 3 ±0. 345 4 0. 165 2 ±0. 185 3 0. 254 9 ±0. 265 9 54. 63
平均值 — 1. 503 8 ±0. 499 6 1. 248 5 ±0. 366 5 0. 151 4 ±0. 181 5 0. 233 2 ±0. 261 9 50. 38
居群间 32 　 1. 768 5 ±0. 422 8 1. 272 5 ±0. 332 8 0. 169 0 ±0. 175 7 0. 269 8 ±0. 245 3 76. 85
　　N a2等位基因数　N e2有效等位基因数　He2基因多样性指数　I2Shannon 信息指数　PPB2多态性位点百分率
　　N a2observed number of alleles 　N e2effective number of alleles 　He2Nei′s gene diversity index 　I2Shannon′s information index
PPB2percentage of polymorphic loci
析结果显示鄞州和象山的遗传多样性水平低于平均
水平。居群总遗传多样性 ( Ht) 0. 169 0 ±0. 030 9 ,居
群内遗传多样性 ( Hs) 0. 150 8 ±0. 024 0 ,Nei′s 遗传分
化指数 ( Gst)为0. 107 6 ,表明浙贝母约 10 %遗传多样
性分布在居群间 ,居群内占 90 %左右 ;同时居群间存
在较为明显的基因交流 ,基因流 ( N m)为 4. 147 0。
2. 5 　浙贝母各居群之间的遗传关系 :从浙贝母居群
间遗传距离 (表 5) 中可以看出 ,东阳和永康种群之
间的遗传距离最小 (0. 015 0) ,而象山与缙云居群的
遗传距离最远 (0. 032 4) 。居群间的遗传一致度和
遗传距离范围分别是 0. 968 1 ～ 0. 985 1 和
0. 015 0～0. 032 4。经 U P GMA ( unweighted pair
group method wit h arit hmetic mean)方法聚类得到
聚类图 (图 3) ,结果表明 :地理位置距离相对较近的
东阳、永康种群表现出较近的亲缘关系首先聚为一
类 ,再与缙云、鄞州、磐安种群分别聚类 ,象山种群遗
传距离较远 ,单独聚为一大类。
表 5 　各居群间的遗传一致度(对角线上方)和遗传距离
(对角线下方)
Table 5 　Nei′s genetic identity ( above diagonal) and genetic
distance ( below diagonal) within six populations
种群 鄞州 象山 东阳 磐安 永康 缙云
鄞州 0. 970 5 0. 977 6 0. 971 1 0. 974 1 0. 969 5
象山 0. 030 0 0. 969 3 0. 969 3 0. 973 1 0. 968 1
东阳 0. 022 7 0. 031 2 0. 973 5 0. 985 1 0. 978 8
磐安 0. 029 3 0. 031 2 0. 026 9 0. 978 7 0. 978 3
永康 0. 026 2 0. 027 3 0. 015 0 0. 021 5 0. 978 7
缙云 0. 031 0 0. 032 4 0. 021 5 0. 021 9 0. 021 5
3 　讨论
3. 1 　浙贝母的遗传多样性和遗传结构分析 :遗传多
样性和遗传结构是一个物种的重要生物学特征 ,反
映物种适应环境的能力和对环境变迁持续进化的潜
力 ,遗传结构的特征与物种的繁育机制密切相关 ,同
时反映生态适应进化、环境变迁与自然选择的效
应[ 2 ] ,通过对浙江主要种植区浙贝母遗传多样性的
图 3 　6 个居群样品的聚类图
Fig. 3 　Dendrogram among six populations
分析 ,发现人工栽培浙贝母具有丰富的遗传多样性
( He 为 0. 169 0 ±0. 175 7 , PPB 为 76. 85 %) ,居群
水平的遗传多样性也较高 ( He 为 0. 150 8 ±
0. 024 0 ,PPB 为 50. 38 %) 。浙贝母的居群间 Nei′s
遗传分化指数 ( Gst) 为 0. 107 6 ,说明浙贝母居群间
有一定的遗传分化 ,但大部分仍存在于居群内部 ,约
占 90 % ,其居群内部个体间的遗传差异可能是遗传
多样性丰富的主要因素之一。观察浙贝母生物学的
特性发现浙贝母自交结实率为零 ,具严格自交不亲
和性[ 3 ] 。虽然其用种子繁殖比鳞茎繁殖的系数约大
10 倍 ,但从贝母种子长至供药用的商品鳞茎大小约
需 4～5 年[4 ] ,其生长周期长 ,成苗率低。为缩短生
长周期 ,商品栽培浙贝母不采用种子繁育而是采用
鳞茎繁育。商品栽培浙贝母的这种繁育特性可能对
居群的遗传分化有影响。另外 ,浙贝母主要产区分
布于浙江东南部 ,各种植区之间相距不远 ,气候、土
壤条件相似[5 ] ,地理环境因素对居群间的影响较小 ,
地理因素对基因交流的阻隔影响也不明显 ,基因交
流比较广泛 ,基因流 ( N m) 为 4. 147 0。Slat kin 认为
基因间的相互交流会引起种内遗传变异量的增加 ,
维持种的均一性 ,阻止种内的分化 ,产生与遗传漂变
·211· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
相互拮抗的作用[6 ] ,高水平、稳定的基因流可以防止
居群间的遗传分化 ,使居群趋向于一致[7 ] ,浙贝母的
N m 为 4. 147 0 ,表明浙贝母各居群间基因流较大 ,
从而维持种内遗传变异的多样性。在地理位置上 ,
东阳、磐安、永康、缙云几个居群相距比较近 ,象山和
鄞州与其他居群距离比较远 ,但只有象山居群与其
他居群相对独立 ,这表明浙贝母象山居群遗传基因
相对于其他居群比较原始保守 ,进一步说明浙贝母
最初在浙江象山种植 ,其他居群是后期才迁徙种
植的[8 ] 。
3. 2 　A FL P 分子标记技术用于浙贝母基因图谱构
建 :运用 A FL P 分子标记技术分析了栽培浙贝母遗
传性状的变化 ,从实验结果可知该方法特异分辨率
高 ,可获得较高的位点多态性。各个体、居群间聚类
关系明确 ,层次分明。表明 A FL P 分子标记技术能
很好地检测到浙贝母种内的遗传变异 ,为浙贝母遗
传连锁图谱的构建奠定了方法学基础。
3. 3 　浙贝母种质资源保护与合理开发 :以前对分布
于江苏、浙江、安徽、湖北等不同产地浙贝母的 5S
rDNA 基因间区域基序列分析表明 ,不同产区的基
因间区具有相同的碱基序列 ,均为 588 bp [9 ] 。分析
发现栽培浙贝母居群存在丰富的遗传多样性 ,约
90 %在居群内。居群间遗传分化不是很明显 ,表明
在浙江省内各种植区之间的种质差别不大 ,而且广
泛的基因交流保证了药材品质的均一性和质量的稳
定性 ,也为优良品种的选育提供了良好的基地。但
是鄞州和象山居群必须开始引起重视 ,鄞州是目前
浙贝母种植和产量较大的地区 ,象山是浙贝母最初
的种植区 ,两个居群的多样性水平都比平均水平低。
建议在采取措施有效保护种植区资源的同时 ,尽快
建立良好繁育基地 ,对广大种植户宣传优良品种的
选购 ,尽可能地减少自交、近交等影响其遗传结构的
繁育因素 ,从根本上解决当前浙贝母资源保护与利
用的矛盾。
参考文献 :
[1 ] 　中国科学院中国植物志编辑委员会1 中国植物志 [ M]1 北
京 :科学出版社 , 20011
[2 ] 　Sokal R R , Jacquez G M , Wooten M C1 Spatial auto correla2
tionanalysis of migration and selection [J ]1 Genetic , 1989 ,
121 : 84528551
[3 ] 　江建铭 , 陈惠芬 1 浙贝母生物学特性观察 [J ]1 中草药 ,
1993 , 24 (2) : 951
[4 ] 　赵永华1 现代中药植物资源生产技术 [ M ]1 北京 :化学工业
出版社 , 20041
[5 ] 　王　瑀 , 魏建和 , 陈士林 1 道地药材浙贝母产地适宜性的
GIS 分析 [J ]1 中国现代中药 , 2006 , 8 (6) : 4261
[6 ] 　Slat kin M1 Gene flow in natural populations [J ]1 A nn Rev
Ecol S yst , 1985 , 16 : 3931
[7 ] 　张　娟 , 尹林克 , 张道远1 刚毛柽柳天然居群遗传多样性初
探 [J ]1 云南植物研究 , 2003 , 25 : 55725621
[8 ] 　李华珍1 浙贝母药材道地性迁移的原因调查 [J ]1 中国中医
药信息杂志 , 2006 , 13 (8) : 371
[9 ] 　蔡朝晖 , 李　萍 , 李松林 , 等1 不同产地浙贝母的基因序列
及生物碱含量比较 [J ]1 中药材 , 2001 , 24 (3) : 15721591
柴胡栽培种的 RAPD 和 AFLP 遗传关系研究
赵艮贵1 ,南晓洁2 ,郝媛媛1 ,刘小刚1 ,秦雪梅1
①
(11 山西大学 化学生物学与分子工程教育部重点实验室 ,山西 太原 　030006 ;
21 山西师范大学生命科学学院 ,山西 临汾 　041004)
摘 　要 :目的 　应用不同的分子标记进行柴胡药材干根遗传多样性分析 ,为柴胡栽培种鉴别和药材鉴别奠定基础。
方法 　以柴胡栽培种干根为材料 ,采用 RA PD 和 A FL P 两种分析方法。结果 　以筛选到的 3 条随机引物对 9 个柴
胡栽培种进行 RA PD 分析 ,共扩增出 28 条 DNA 带 ,平均每条引物组合扩增 9. 33 条带 ,其中多态性带为 6. 67 条 ,
多态性比率为 71. 43 % ;而在 A FL P 分析中 ,筛选出 4 对特异性引物 ,共获得 107 条 DNA 带 ,平均每对引物扩增
26. 75 条带 ,其中多态性带为 23. 25 条 ,多态性比率为 86. 92 %。经统计分析 ,9 个柴胡栽培种 RAPD 和 A FL P 分析
的 Jaccard 遗传相似系数分别介于 0. 61～0. 93 和 0. 39～0. 86。U P GMA 聚类分析 ,两种标记方法均可将 9 个柴胡
栽培种聚为 3 大类群 ,聚类结果相似但不完全相同。结论 　以柴胡药材干根为材料 ,RA PD 和 A FL P 两种分子标
记均可用于植物种间及种下遗传关系分析 ,且 A FL P 条带较多 ,多样性丰富 ,更有利于柴胡属植物多样性的分析。
关键词 :柴胡属 ;RA PD ;A FL P ;聚类分析 ;遗传多样性
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0113 - 05
·311·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009204211
　　基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30570174)
　　作者简介 :赵艮贵 (1964 —) ,曾用名 :赵春贵 ,男 ,河北新乐县人 ,副教授 ,博士 ,从事药用植物及其有效成分的研究。
Tel : (0351) 7011499 　Fax : (0351) 7011499 　E2mail :chungui @sxu. edu. cn
　　3 通讯作者　秦雪梅　qinxm @sxu. edu. cn