全 文 ：4 SPSS 13 0 相关分析
将以上数据输入 SPSS 13 0 进行相关分析, 得
到 Pear son Co rrelat ion 值见表 2。体现牛蒡种质质
量的指标中千粒质量、粒数百分比、质量百分比、发
芽势与发芽率与体现牛蒡子药材质量的指标牛蒡苷
量、牛蒡苷元量有显著或极显著的相关性,成正相关
或负相关。
表 2 各指标间的相关系数 P值
Table 2 Correlation coefficient P value
during various statistical targets
指标名称
千粒
质量
粒数百
分比
质量百
分比
发芽势 发芽率 牛蒡苷
牛蒡
苷元
千粒质量 1 602* * 592* * 396* 428* 696* * - 350* *
粒数百分比 602* * 1 907* * 335 362* 455* * - 367*
质量百分比 592* * 907* * 1 398* 407* 519* * - 405*
发芽势 396* 335 398* 1 958* * 511* * - 578* *
发芽率 428* 362* 407* 958* * 1 547* * - 647* *
牛蒡苷 696* * 455* * 519* * 511* * 547* * 1 - 461* *
牛蒡苷元 - 350* - 367* - 450* * - 578* * - 647* * - 461* * 1
* 显著相关
* Correlat ion is signif icant at 0. 05 level ( 2-tailed)
* * 极显著相关
* * Correlat ion is very signif icant at 0. 01 level ( 2- tailed)
5 结论与讨论
测定了 34 个不同采集地的 7 个指标, 千粒质
量平均值为 8 86 g ,牛蒡苷量平均值为 6 33% , 其
中体现种质质量的指标千粒质量、粒数百分比、质量
百分比、发芽势、发芽率与牛蒡子药材的评价指标牛
蒡苷的量成正相关。千粒质量、粒数百分比和质量
百分比 3者之间成极显著正相关, 这 3 者指标越高
说明牛蒡种子越成熟饱满、粒大,牛蒡苷是牛蒡子药
材的检测评价指标, 中国药典2005年版规定不低
于 5% ,这 3者指标越高牛蒡苷量越高,说明了牛蒡
子药材的质量、成熟饱满的种子所占的数量比、质量
比越高牛蒡苷的量也越高。这与传统牛蒡子药材质
量评价以粒大、饱满者为佳相一致。发芽势和发芽
率是评价种质质量、种子成熟饱满度、生长力的指
标,与牛蒡苷量成极显著正相关。牛蒡子药材中的
牛蒡苷量和苷元量成极显著负相关, 说明药材中牛
蒡苷的量越高牛蒡苷元的量越低, 这也为牛蒡子药
材的质量评价提供参考。
参考文献:
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HPLC法测定市售胡黄连中胡黄连苷和胡黄连苷
周 菲1 ,倪 健2
( 1 中国医药研究开发中心有限公司, 北京 102206; 2 北京中医药大学, 北京 100029)
摘 要:目的 建立胡黄连药材中胡黄连苷和胡黄连苷 的 HPLC 定量测定方法。方法 采用 Dikma Diamon-
sil C18柱 ( 250 mm 4. 6 mm, 5m) , 乙腈-水-冰醋酸 ( 20 80 0 5) 为流动相, 体积流量: 1 0 mL/ min,检测波长:
275 nm, 柱温: 25 。结果 胡黄连苷 对照品在 0 09~ 1 88 g 进样量与峰面积间呈良好的线性关系, r =
0 999 8, 平均加样回收率为 99 2% , RSD 为 1 50% ( n= 6) ; 胡黄连苷对照品在 0 16~ 3 2 g 进样量与峰面积
间呈良好的线性关系, r= 0 999 9,平均加样回收率为 98 9% , RSD 为 1 81% ( n= 6)。结论 该方法操作简便, 结
果准确,重现性好, 可用于胡黄连药材的定量测定。
关键词:胡黄连; 胡黄连苷 ; 胡黄连苷 ; 高效液相色谱
中图分类号: R282 6 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2010) 04-0658-03
胡黄连味苦, 性寒。归肝、胃、大肠经。有清湿
热,除骨蒸, 消疳热之功效, 用于治疗湿热泻痢, 黄
疸,痔疾,骨蒸潮热,小儿疳热。现代药理表明, 胡黄
连具有保肝利胆, 拮抗平滑肌痉挛等作用[ 1]。目前
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收稿日期: 2009-07-22 基金项目:北京市科技计划项目 (课题编号: D07080201330705,项目编号: D0206001000091)作者简介:周 菲( 1981 ) ,女,江苏徐州人,工程师,从事中药新药研究开发工作。T el: ( 010) 80717086 E-mail: nipzf@ 126. com
对胡黄连质量评价有报道[ 2] , 2005年版中国药典
中规定, 胡黄连是玄参科植物胡黄连 P icr orhi z a
scrop hular ii f lor a Pennell的干燥根茎, 在 定量测
定项下明确了胡黄连中含胡黄连苷 ( C24H 28O 11 )
和胡黄连苷 ( C23 H 28 O13 ) 的总量不得少于
9 0% [ 3]。而在工作中发现, 从不同的药店, 不同的
饮片厂购买的胡黄连,质量分数差别较大。
1 仪器与试药
1 1 仪器: A gilent 1100 液相色谱仪 (美国惠普公
司) ; Met t ler To ledo XS105 DualRange 电子天平;
KQ 250 DE 型数控超声波清洗器 (昆山超声仪器
有限公司)。
1 2 试药: 胡黄连苷 对照品 ( 批号: 111727-
200501)、胡黄 连苷 对 照品 ( 批 号: 111596-
200301) , 均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为
色谱纯,水为纯净水, 其余试剂均为分析纯。13 批
市售胡黄连药材中 2批购自不同的医院药房、4 批
购自不同的药店、2批购自安国饮片厂, 5批购自云
南药材公司。
2 方法与结果
2 1 色 谱 条 件: Dikma Diamonsil C18 柱
( 250 mm 4. 6 mm, 5 m) , 流动相: 乙腈-水-冰醋
酸 ( 20 80 0 5) , 体积流量: 1 0 mL/ min, 柱温:
25 , 检测波长: 275 nm。理论板数按胡黄连苷
峰计算应不低于 3 000。见图 1。
1-胡黄连苷 2-胡黄连苷
1-picr os ide- 2-picroside-
图 1 胡黄连苷和胡黄连苷的混合对照品( A)、
胡黄连药材(B)的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of picroside- and
picroside- mixed reference substance ( A)
and Rhizoma Picrorhizae ( B)
2 2 对照品溶液的制备:取胡黄连苷和胡黄连苷
对照品适量, 精密称定,加流动相制成含胡黄连苷
0 05 mg/ mL 和胡黄连苷 0 1 mg/ mL 的溶
液,即得。
2 3 供试品溶液的制备: 取胡黄连粉末 (过三号
筛) 约 0 1 g ,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入
甲醇 50 mL, 密塞, 称定质量, 放置 24 h, 超声处理
(功率 250 W, 频率 33 kHz) 30 min, 放冷, 再称定
质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀, 滤过,精密量取
续滤液 1 mL,置 5 mL 量瓶中, 加流动相至刻度,摇
匀,用 0 45 m 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2 4 线性关系考察: 精密称取胡黄连苷 对照品
23 44 mg 和胡黄连苷 对照品 40 72 mg, 置于同
一 100 mL 量瓶中, 加流动相至刻度, 摇匀, 分别精
密量取 2、5、10、15、20、40 mL,置 100 mL 量瓶中,
加流动相至刻度,摇匀。分别精密吸取上述混合对
照品溶液 20 L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件
测定,记录峰面积。以进样量 ( X ) 与对应的峰面积
( Y ) 作回归处理, 得到 2条标准曲线。胡黄连苷
的回归方程为: Y = 2 242. 1 X - 38. 334 ( r =
0. 999 8, n= 6) ; 胡黄连苷 的回归方程为: Y =
996. 57 X+ 2. 137 5 ( r= 0. 999 9, n= 6)。结果表
明,胡黄连苷 在 0 09~ 1 88 g , 胡黄连苷 在
0 16~ 3 26 g,进样量与峰面积间均呈良好的线性
关系。
2 5 精密度试验: 精密吸取同一混合对照品溶液
20 L,注入液相色谱仪, 测定峰面积值, 重复进样 6
次。结果胡黄连苷 的 RSD 为 0 40% ( n= 6) ,胡
黄连苷 的 RSD 为 0 21% ( n= 6)。表明本法精
密度良好。
2 6 稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液,分别
于 0、2、4、6、8、10 h 分别精密吸取 20 L,测定峰面
积值,结果胡黄连苷 的 RSD 为 0 98% ( n= 6) ,
胡黄连苷的 RSD 为 1 04% ( n= 6)。可见供试
品溶液在 10 h 内稳定性良好。
2 7 重现性试验: 取同一批胡黄连粉末 6 份, 按
2 3项下方法, 制备供试液, 分别精密吸取 20 L,
注入液相色谱仪, 进行定量测定,结果胡黄连苷 质
量分数 RSD 为 1 81% ( n= 6) ;胡黄连苷 质量分
数 RSD 为 1 43% ( n= 6)。表明本法重现性良好。
2 8 加样回收率试验: 取已测定 (胡黄连苷
2 98% ,胡黄连苷 8 14%) 的同一批号胡黄连粉
末 (过三号筛) 6 份,每份约 0 05 g, 均精密称定,置
具塞锥形瓶中, 分别精密加入混合对照品溶液 (胡
黄连苷 0 211 7 mg / mL, 胡黄连苷 0 523 4
mg/ mL) 7 mL, 按 2 3 项下方法, 制备加样回收供
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试品。分别精密吸取 20 L,注入液相色谱仪,进行
定量测定,计算加样回收率。结果胡黄连苷 的平
均加样回收率为 99 23%, RSD 为 1 50% ( n= 6) ;
胡黄连苷 的平均加样回收率为 98 94%, RSD 为
1 81% ( n= 6)。
2 9 样品测定:分别取上述市售胡黄连药材样品,
按 2 3 项下方法, 制备供试液, 分别精密吸取 20
L, 注入液相色谱仪,按上述色谱条件, 分别测定各
样品中胡黄连苷 和胡黄连苷 的量, 测定结果见
表 1。
表 1 市售胡黄连药材的量测定结果 (n= 3)
Table 1 Determination of picroside- and picroside-
in Rhizoma Picrorhizae of market (n= 3)
编号 胡黄连苷 / % 胡黄连苷/ % 胡黄连苷和胡黄连苷总量/ %
1 0 26 1 19 1 45
2 2 61 6 63 9 24
3 1 62 5 94 7 56
4 0 32 1 27 1 59
5 1 35 5 41 6 76
6 0 88 4 64 5 52
7 2 68 8 21 10 89
8 2 49 5 48 7 97
9 0 39 11 52 11 91
10 0 86 11 73 12 59
11 0 62 10 72 11 34
12 0 58 9 32 9 90
13 0 51 9 18 9 69
1, 2号样品分别购自不同的医院药房; 3~ 6号样品分别购自不
同的药店; 7, 8号样品购自安国饮片厂,其中, 7 号产地为西藏、8号
产地为青海; 9~ 13号样品购自云南药材公司, 其中, 9 ~ 12号产地
为云南, 13号产地为缅甸
Samples 1 and 2 w ere bought f rom different hospital pharmacies;
samples 3 6 were bought from different pharmacies; samples 7, 8 f rom
the Anguo Pieces Factory, and sample 7 from Tibet, sample 8 f rom
Qinghai; samples 9 13 from Yunnan Corporat ion Medical Herbs, and
samples 9 12 f rom Yunnan, sample 13 from Myanmar
3 讨论
3 1 流动相系统的改进:曾按照 2005年版中国药
典中胡黄连含量测定项下方法采用甲醇-水-磷
酸 ( 35 65 0 1) 为流动相试验,胡黄连苷在 50
min 左右出峰,胡黄连苷 在 25 m in 左右出峰, 考
虑到出峰时间较晚。参考了文献 [ 4] 方法,并经过实
际摸索,改用本研究所述流动相,出峰时间胡黄连苷
在 25 min 左右,胡黄连苷 在 11 min 左右, 节约
了试验成本。
3 2 供试品溶液制备方法的改进:在 2005年版中
国药典中胡黄连含量测定项下供试品溶液制备
方法的基础上稍做改进, 在超声提取 30 min前,
增加了放置 24 h,试验结果表明,同一批号样品,
经放置 24 h的试验步骤后, 测得的胡黄连苷和
胡黄连苷 总量为 11 2% ,按中国药典方法测得
总量为 9 4%, 提高了近 20%, 因此建议应在胡黄
连定量测定的供试品溶液制备中增加放置 24 h
的试验操作。
3 3 对市售胡黄连药材测定结果的分析: 从对 13
批市售胡黄连药材的测定结果可以看出, ( 1)质量参
差不齐,其中有 6批未达到 2005年版中国药典中
胡黄连含量测定项下胡黄连苷 和胡黄连苷
总量不得少于 9 0%的规定。这 6 批样品中有 5
批来自普通药店, 1批来自医院药房,且有 2 批胡黄
连苷和胡黄连苷 总量不到 2%。( 2)产地对药
材品质有一定影响, 产于西藏、云南、缅甸的胡黄连
品质较好。( 3)种属差异较大,虽 2005年版中国药
典仅收载了西藏胡黄连的根茎为正品, 但据中华
本草[ 5]可知, 胡黄连药材的来源还有玄参科植物胡
黄连 Picror hi z a kur rooa Roy le ex Benth. 的根茎,
也称印度胡黄连。根据王菁等[ 4]对西藏胡黄连和印
度胡黄连中胡黄连苷 的定量测定研究可知,两种
胡黄连中胡黄连苷 的量差别较大, 印度胡黄连中
胡黄连苷平均量为 1 62%, 西藏胡黄连中胡黄连
苷 平均量为 7 23%。因此, 种属差异是测定结果
差异较大的原因之一。
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