全 文 ：表 1 　正交试验设计和结果
Table 1 　Design and results of orthogonal test
试验号 A/ MPa B/ K C/ (mL ·min - 1 )D/ (g ·min - 1 ) 提取率/ %
1 20 3081 15 1 15 01 091
2 20 3181 15 2 20 01 201
3 20 3231 15 3 25 01 295
4 20 3281 15 4 30 01 371
5 30 3081 15 2 25 01 293
6 30 3181 15 1 30 01 129
7 30 3231 15 4 15 01 375
8 30 3281 15 3 20 01 347
9 35 3081 15 3 30 01 349
10 35 3181 15 4 25 01 391
11 35 3231 15 1 20 01 201
12 35 3281 15 2 15 01 345
13 40 3081 15 4 20 01 368
14 40 3181 15 3 15 01 349
15 40 3231 15 2 30 01 308
16 40 3281 15 1 25 01 213
K1 01 2395 01 2753 01 1585 01 2900
K2 01 2860 01 2675 01 2868 01 2793
K3 01 3215 01 2948 01 3350 01 2980
K4 01 3095 01 3190 01 3763 01 2893
R 01 0700 01 0515 01 2178 01 0188
MPa ,温度 328115 K ,夹带剂流量 4 mL/ min , CO2
流量 25 g/ min ,各影响因素对提取率的影响程度 :
夹带剂流量 > 压力 > 温度 > CO2 流量 ;冬凌草甲素
的提取率可达到 01402 % , 优于文献中报道的
0139 %的提取率。
参考文献 :
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[3 ] 　耿中峰 ,吕惠生 ,张敏华1 石蒜中加兰他敏的超临界 CO2 萃取
工艺研究[J ]1 中草药 ,2008 ,39 (4) :54325461
[ 4 ] 　徐晓芳 ,吕惠生 ,张敏华 ,等 1 超临界 CO2 萃取烟叶中茄尼醇
的影响因素分析[J ]1 中草药 ,2007 ,38 (10) :1504215051
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[ 6 ] 　肖观秀 1 超临界萃取技术提取石蒜中加兰他敏的工艺研究
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高效液相色谱2二极管阵列检测法测定冠心宁注射液中丹参素、
原儿茶酸 、原儿茶醛 、阿魏酸 、迷迭香酸和丹酚酸 B
张 　雪 ,褚文静 ,刘伟娜 ,侯海妮 ,黄喜茹 3
(河北医科大学药学院 分析化学教研室 ,河北 石家庄 　050017)
摘 　要 :目的 　建立高效液相色谱2二极管阵列检测法同时测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏
酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 6 种水溶性成分。方法 　采用 Diamonsil TM C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相
为甲醇25 %冰醋酸 ,进行梯度洗脱 ;体积流量 110 mL/ min ;进样体积 20μL ;柱温 30 ℃;检测波长 286 nm。结果 　
在此色谱条件下 6 种水溶性成分可完全分离。丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 的线性
范围分别为 87168～438140 ng ( r = 01999 3) ,29168～148140 ng ( r = 01999 7) ,14103～70116 ng ( r = 11000 0) ,
30140～152100 ng ( r = 01999 9) ,103170～518140 ng ( r = 01999 6) ,193120～966100 ng ( r = 01999 6) 。平均回收率
丹参素为 9812 %(RSD 为 0127 %) ,原儿茶酸为 9814 % ( RSD 为 112 %) ,原儿茶醛为 9912 % ( RSD 为 113 %) ,阿魏
酸为 9819 %( RSD 为 0196 %) ,迷迭香酸为 9811 % ( RSD 为 0182 %) ,丹酚酸 B 为 9913 % ( RSD 为 0131 %) 。结论
该方法简单、准确、重现性好 ,可用于冠心宁注射液的质量控制。
关键词 :冠心宁注射液 ;丹参素 ;原儿茶酸 ;原儿茶醛 ;阿魏酸 ;迷迭香酸 ;丹酚酸 B ;高效液相色谱 ;二极管阵列检测
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0234 03
　　冠心宁注射液具有活血化瘀、通脉养心、扩张冠
脉增加冠脉血量、加速缺血心肌修复、促进梗死区心
肌再生、解除微血管痉挛 ,改善微循环 ,抑制血小板
聚集、抗血栓形成、抗氧化及保护心脏微血管内皮细
胞等作用 ,临床用于冠心病、心绞痛、脑栓塞等心脑
血管疾病、肺脏、肝脏、肾脏等疾病的治疗。处方中
含丹参和川芎 ,丹参为该制剂的君药。制剂中有效
成分主要为丹参的水溶性成分丹参素、原儿茶酸、原
·432· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009204226　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :河北省中医药局资助项目 (05057) ;河北省科技厅科技项目 (062761372)
作者简介 :张　雪 (1984 —) ,女 ,河北邯郸人 ,在读硕士研究生 ,从事药物分析研究。E2mail :zhangxuedd @sina. com3 通讯作者　黄喜茹　Tel : (0311) 86265623 　E2mail :hxiru @1631com
儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸 B 以及川芎中的阿魏酸
等[1 ] 。已报道有以该制剂中丹参素和原儿茶醛作为
质量控制指标 ,采用 H PL C 法进行定量[2 ] 。本实验
采用高效液相色谱2二极管阵列检测法同时测定制
剂中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸
和丹酚酸 B 6 种活性成分 ,该法简单、准确、重现性
好 ,适于全面评价冠心宁注射液的质量。
1 　仪器与试药
Agilent 1200 全自动高效液相色谱仪 (二极管
阵列检测器、四元泵、柱温箱、自动控温进样器) ,
Agilent 化学工作站 ,J A1203A 型电子天平 (上海精
密科学仪器有限公司) , TCQ —250 超声波清洗器
(北京医疗设备二厂) 。
丹参素钠 (批号 1108552200405) 、原儿茶酸 (批
号 1108092200503 ) 、原 儿 茶 醛 ( 批 号 1108102
200506) 、阿魏酸 (批号 1115812200302) 、丹酚酸 B
(批号 1115622200504)对照品均由中国药品生物制
品检定所提供 ,迷迭香酸对照品 (成都曼思特生物科
技有限公司 ,质量分数在 98 %以上) ,甲醇为进口色
谱纯 ,冰醋酸为分析纯 ,水为重蒸水。
冠心宁注射液为市售品 ,10 mL/ 支 ,分别为山西
瑞福莱药业有限公司 (批号 06032212) 、石家庄神威药
业股份有限公司 (批号 0801092、08041101)生产。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性试验 :Diamonsil TM C18
色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :甲醇
(A)25 %冰醋酸 (B) ,进行梯度洗脱 ,0～6 min ,30 %
A ,6～10 min , A 线性改变至 40 % , 10～30 min ,
40 % A ;停止时间 30 min ,后运行 10 min ;体积流
量 :110 mL/ min ;进样方式 :自动进样 ,进样体积 :20
μL ;柱温 :30 ℃;检测波长 :286 nm。理论塔板数按
丹参素计算不低于 6 000 ,按原儿茶醛计算不低于
8 000 ,各组分与相邻色谱峰的分离度均大于 115 ,
且各组分的色谱峰对称 ,色谱图见图 1。
212 　对照品溶液的制备 :分别精密称取丹参素、原
儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸 B 对
照品适量 ,置于 25 mL 量瓶中 ,用 20 %甲醇溶解并
稀释至刻度 ,配制成质量浓度分别为 10916、14814、
35108、15210、12916、19312 μg/ mL 的对照品储备
液。分别精密吸取上述对照品储备液 0140、0110、
0120、0110、0140、0150 mL 置 10 mL 量瓶中 ,用
20 %甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,配制成质量浓度分别为
41384、11484、017016、11520、51184、91660 μg/ mL
的混合对照品溶液。
12丹参素　22原儿茶酸　32原儿茶醛　42阿魏酸
52迷迭香酸　62丹酚酸 B
12danshensu 　22protocatechuic aicd 　32protocatechuic aldehyde
42ferulic aicd 　52rosmarinic acid 　62salvianolic aicd B
图 1 　对照品( A)和冠心宁注射液( B)的 HPLC2DAD色谱图
Fig11 　HPLC2DAD Chromatograms of reference 　　　
substances ( A) and Guanxinning Injection ( B)
213 　供试品溶液的制备 :精密量取冠心宁注射液
015 mL ,置 25 mL 量瓶中 ,用 20 %甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,用 0145μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　线性关系的考察 :取混合对照品溶液过 0145
μm 滤膜后 ,按上述色谱条件分别进样 10、20、30、
40、50、60、70、80、90μL ,记录色谱峰面积 ,以峰面积
( A) 对进样量 ( C)进行线性回归 ,得各组分的回归方
程和相关系数 ,见表 1。
表 1 　回归方程和相关系数
Table 1 　Regression equation and correlation coeff icients
成 分 回归方程 相关系数 线性范围/ ng
丹参素 A = 406104 C - 01 499 4 01 999 3 87168～438140
原儿茶酸 A = 1 712180 C - 21 787 8 01 999 7 29168～148140
原儿茶醛 A = 3 300140 C + 01 270 6 11 000 0 141 03～70116
阿魏酸 A = 1 519160 C + 11 403 9 01 999 9 30140～152100
迷迭香酸 A = 735128 C + 11 577 8 01 999 6 103170～518140
丹酚酸 B A = 230129 C + 01 725 0 01 999 6 193120～966100
215 　检测限的测定 :取混合对照品溶液逐步稀释
后 ,注入高效液相色谱仪 ,以峰高为基线噪音 3 倍
计 , 丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香
酸、丹酚酸 B 的最低检测浓度分别为 214、016、013、
016、113、412μg/ mL 。
216 　精密度试验 :按上述色谱条件 ,取混合对照品
溶液 20μL 注入高效液相色谱仪 ,连续进样 5 次 ,结
果丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸、
丹酚酸 B 峰面积的 RSD 分别为 0135 %、01085 %、
0116 %、0152 %、0123 %、0155 %。
217 　稳定性试验 : 取同一供试品溶液 (批号
06032212) ,在 2、4、6、8、10、12、24 h 分别进样 20μL ,
记录峰面积 ,计算 ,结果丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、
阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 峰面积的 RSD 分别为
0125 %、115 %、0136 %、0158 %、1100 %、0153 %。
218 　重现性试验 : 取同一批号注射液 (批号
06032212) ,制备 5 份供试品溶液 ,各进样 20μL ,进
样测定 ,计算得丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏
·532·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 的平均质量浓度分别为
21907 mg/ mL ( RSD 为 0125 %) 、01162 2 mg/ mL
( RSD 为 0164 %) 、01 450 5 mg/ mL ( RSD 为
0135 %) 、01129 9 mg/ mL (RSD 为 0183 %) 、01285 6
mg/ mL ( RSD 为 0173 %) 、01575 9 mg/ mL ( RSD 为
0152 %) 。
219 　回收率试验 :精密量取 015 mL 批号 08041101
冠心宁注射液 3 份 ,置 5 mL 量瓶中 ,分别加入混合
对照品溶液 116、118、210 mL ,用 20 %甲醇加至刻
度 ,摇匀。在上述色谱条件下 ,分别进样 20μL ,每
个加入量的溶液均连续进样 3 次 ,计算加样回收率 ,
结果丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香
酸、丹酚酸 B 的平均加样回收率分别为 9812 %
(RSD 为 0127 %) 、9814 % ( RSD 为 112 %) 、9912 %
(RSD 为 113 %) 、9819 % ( RSD 为 0196 %) 、9811 %
(RSD 为 0182 %) 、9913 %(RSD 为 0131 %) ( n = 9) 。
2110 　样品的测定 :取冠心宁注射液样品溶液 ,制备
供试品溶液 ,按上述色谱条件进样 ,用外标法计算各
成分的质量浓度 ,结果见表 2。从结果可见 ,不同厂
家、不同批号的原儿茶醛和阿魏酸的质量浓度接近 ,
但其他 4 种成分相差较大 ,说明该注射液的质量标
准有待进一步规范。
表 2 　冠心宁注射液中有效成分的测定结果( n = 5)
Table 2 　Determination of components in Guanxinning Injection ( n = 5)
样品
生产厂
批 号
丹参素
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
原儿茶酸
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
原儿茶醛
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
阿魏酸
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
迷迭香酸
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
丹酚酸 B
质量浓度/
(mg ·mL - 1 )
RSD/
%
山西 　 06032212 21 900 01 25 01163 2 11 5 01 449 2 0136 01 124 8 01 58 01 2851 11 00 015741 01 53
石家庄 0801092 61 246 01 09 01201 1 11 3 01 400 5 0149 01 114 8 01 93 01099 4 01 56 016422 01 65
石家庄 08041101 41 677 01 06 01080 4 11 6 01 421 6 0109 01 112 0 01 49 01477 3 01 62 41 019 01 10
3 　讨论
经二极管阵列检测器对 6 种成分进行全波长扫
描 ,丹参素和原儿茶醛的最大吸收波长为 281 nm ,
原儿茶酸最大吸收波长为 260 nm ,阿魏酸在 320
nm 有较强吸收 ,迷迭香酸的最大吸收波长为 330
nm ,丹酚酸 B 的最大吸收波长为 286 nm。本实验
考察了采用不同检测波长时检出的信号强度和检测
灵敏度 ,结果在 286 nm 各组分信号较强 ,且基线稳
定 ,因此采用 286 nm 为检测波长。
　　文献报道[ 3 ] ,丹参素在高体积分数醇溶液中不
稳定 ,极易分解 ,建议用水溶解丹参素和原儿茶醛。
为了能够使样品溶液性质与流动相尽量相近而不影
响出峰效果 ,本实验采用 20 %甲醇溶解对照品。
参考文献 :
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HPLC2ELSD 法测定银杏滴丸中银杏内酯 A 、B 、C和白果内酯
高 　蓓 3
(天津市第一中心医院 药剂科 ,天津 300192)
摘 　要 :目的 　采用高效液相2蒸发光散射检测 ( HPLC2EL SD)法测定银杏滴丸中银杏内酯 A、B、C 及白果内酯。方
法 　样品以甲醇溶解 ,蒸干后水溶 ,醋酸乙酯提取处理。采用 HPLC2EL SD 法测定 ,ALLtech C18色谱柱 (250 mm ×
415 mm ,5μm) ;流动相 :甲醇2四氢呋喃2水 (35 ∶10 ∶65) ;体积流量 :018 mL/ min ;气速 :2185 L/ min ;漂移管温度 :
105 ℃;柱温 :30 ℃。结果 　银杏内酯 A、B、C 及白果内酯的平均加样回收率分别为 9815 %、10315 %、9917 %、
10116 % ,RSD 分别为 215 %、119 %、218 %、210 %。结论 　建立的滴丸制剂中银杏内酯 A、B、C 及白果内酯的定量
方法可行性好、简便、可靠。
关键词 :银杏滴丸 ;银杏内酯 A、B、C ;白果内酯 ; HPLC2EL SD
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0236 03
·632· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009206220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :高　蓓 (1977 —) ,女 ,河北省故城县人 ,药师 ,毕业于天津中医药大学中药学专业 ,现工作于天津市第一中心医院药学部。
E2mail :gaojiapei @hot mail . com