全 文 ：3 　讨论
指纹图谱技术是国际公认的控制中药质量的有
效手段 ,它以其信息量大的特点克服了中药材、中成
药的复杂性。本实验通过高效液相色谱法建立了清
风胶囊的指纹图谱 ,结果表明 10 批不同清风胶囊各
峰的相对保留时间基本一致 ,色谱图形基本一致。
同时该方法可以对处方主要药材进行鉴定 ,同时对
药材中的已知主要有效物质进行鉴定 ,为该制剂的
质量控制提供很好的依据。
通过对图谱的分析 ,在色谱图中 8 号峰面积大、
分离效果好 ;通过归属分析该峰为君药青风藤药材
中的青藤碱峰。青藤碱是青风藤中生物碱成分 ,也
是中国药品生物制品检定所确认的标准物质 , 因此
选定 8 号峰为本指纹图谱技术要求的参照峰。
本制剂为中药复方制剂 ,成分复杂 ,故采用梯度
洗脱。通过分析本品主要含生物碱和皂苷类物质 ,
而生物碱的高效液相法测定时 ,一般采用 p H 值较
高的流动相系统 ,所以色谱柱的选择时选用能耐受
高 p H 的色谱柱。分别考察了依利特柱、戴安柱、
Waters 柱及 Ultimate 柱对指纹图谱的分离情况 ,
结果显示 , Ultimate 柱对色谱峰的峰分离好 ,峰型
对称 ,故选 Ultimate 色谱柱作为检测柱 ;同时比较
甲醇2水2磷酸盐缓冲液及乙腈2水2磷酸盐缓冲液等
系统以及不同的梯度洗脱方法等 ,结果发现本实验
采用的乙腈2水2磷酸盐缓冲液系统可以使样品色谱
峰得到较好地分离 ,且色谱峰峰形较好 ,故选用该系
统为流动相。
参考文献 :
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HPLC2DAD 法测定炮制辅料吴茱萸汁中绿原酸、吴茱萸内酯、
吴茱萸碱和吴茱萸次碱
蒋 　俊1 ,2 ,贾晓斌1 ,2 3 ① ,陈 　彦1 ,蔡宝昌3 ,吴 　皓3
(11 江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室 ,国家中医药管理局中药释药系统重点研究室 ,江苏 南京 　210028 ;
21 江苏大学药学院 ,江苏 镇江 　212013 ; 31 南京中医药大学 江苏省中药炮制重点实验室 ,江苏 南京 　210029)
摘 　要 :目的 　测定萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中 3 类组分的 4 个代表性成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内
酯、绿原酸 ,为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。方法 　采用 HPLC2DAD 法 ,色谱柱为 Zorbax
SB2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2011 %磷酸 ,梯度洗脱程序 ;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 :205、
225、324 nm ;柱温 :25 ℃。结果 　绿原酸、吴茱萸内酯均为水溶性成分 ,在吴茱萸汁中的质量分数分别为 61638、
81234 mg/ g ,吴茱萸碱和吴茱萸次碱均为脂溶性成分 ,在吴茱萸汁中的质量分数分别为 01406、01380 mg/ g。结论
萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中主要含有绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等成分 ,对这些成分进行测定 ,
可为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。
关键词 :萸黄连 ;炮制辅料 ;吴茱萸汁 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320396203
　　萸黄连的炮制是取吴茱萸汁制黄连 ,炮制目的
是用药性辛热的吴茱萸来抑制黄连的苦寒之性 ,使
黄连寒而不滞的同时又增强黄连清气分湿热 ,散肝
胆郁火的功效 ,主要用于积滞内阻、胸膈痞闷、胁肋
胀满、下痢脓血等症[1 ] 。吴茱萸具有散寒止痛、助阳
止泻等功能[2 ] ,主要含有生物碱、苦味素、挥发油、萜
类、有机酸类等成分 ,其中吴茱萸碱、吴茱萸次碱等
生物碱类成分和吴茱萸内酯等苦味素类成分是主要
活性成分[3 ] 。因此吴茱萸汁的制备及其质量将直接
影响到萸黄连的临床疗效。目前 ,对吴茱萸药材或
·693· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009208210　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江苏省中医药领军人才专项 (2006) ;江苏省中药炮制重点实验室开放课题 ( ZYPZ002)
作者简介 :蒋　俊 (1986 —) ,男 ,江苏镇江人 ,主要从事中药新剂型、新技术和中药炮制、制剂分析等方面研究。
Tel : (025) 85637809 　E2mail : xuyan9323 @1261com
饮片中相关成分的测定报道较多[ 4～6 ] ,但对萸黄连
的炮制辅料吴茱萸汁中成分的研究报道很少 ,还没
有炮制辅料吴茱萸汁的质量控制标准。本实验研究
建立 H PL C2DAD 法同时测定萸黄连的炮制辅料吴
茱萸汁中生物碱、苦味素、有机酸类等 3 类组分的 4
个代表性成分 :吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、
绿原酸 ,以期此方法能为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁
的质量控制和质量标准的制定提供重要依据。
1 　仪器与试药
Agilent HP1200 高效液相色谱仪 ,包括四元
泵 ,DAD 检测器 (美国 Agilent 公司) 。
吴茱萸药材购自湖北阳新县吴茱萸药业公司 ,
经南京中医药大学生药教研室吴德康教授鉴定为芸
香科植物石虎 Evodi a rutaecar p a (J uss1 ) Bent h1
var1 of f ici nal is (Dode) Huang 的干燥近成熟果
实 ;绿原酸 (批号 07532200111) 、吴茱萸碱 (批号
11080 22200606) 、吴茱萸次碱 (批号 080129702) 、吴
茱萸内酯 (批号 1108002200404) 对照品均购自中国
药品生物制品检定所 ;甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯 ;
水为超纯水 ,其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　吴茱萸汁的制备 :称取吴茱萸药材 2 g ,加水
16 倍 ,提取 3 次 ,每次 115 h ,合并 3 次提取液 ,离
心 ,抽滤 ,得吴茱萸汁。
212 　色谱条件 :色谱柱为 Zorbax SB2C18 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2011 %磷酸 ,梯度洗脱
程序 : 0～7 min :乙腈 5 %～8 % ,7～13 min :乙腈
8 %～11 % ,13～40 min : 乙腈 11 %～40 % ,40～70
min :乙腈 40 %～60 % ;体积流量 : 1 mL/ min ;检测
波长 :205、225、324 nm ;柱温 :25 ℃。在此条件下 ,
绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱均达到
基线分离。H PL C 图谱见图 1。
213 　对照品溶液的制备 :精密称取绿原酸 3145
mg ,吴茱萸内酯 3153 mg ,吴茱萸碱 3120 mg ,吴茱
萸次碱 4118 mg ,加甲醇稀释至 10 mL ,作为储备
液。取储备液各 1 mL 加甲醇定容至 10 mL ,即得。
214 　供试品溶液的制备 :将所得吴茱萸汁加蒸馏水
定容至 100 mL ,加入甲醇至 200 mL ,充分振荡后 ,
静置过夜 ,滤过 ,定容至 200 mL ,即得。
215 　线性试验 :精密称取绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱
萸碱、吴茱萸次碱适量 ,配制成质量浓度分别为
01345、01334、01320、01418 mg/ mL ,分别精密进样
1、2、5、10、20、30、40、60μL 。以进样量为横坐标 ,峰
面积为纵坐标进行线性回归 得 种成分的回归方
12绿原酸　22吴茱萸内酯　32吴茱萸碱　42吴茱萸次碱
a2绿原酸对照品　b2吴茱萸内酯对照品　c2吴茱萸碱对照品
d2吴茱萸次碱对照品
A2检测波长 324 nm(检测绿原酸) 　B2检测波长 205nm (检测吴
茱萸内酯) 　C2检测波长 225nm(检测吴茱萸碱、吴茱萸次碱)
12caffeotannic acid 　22evodin 　32evodiamine 　42rutecarpine
a2caffeotannic acid reference substance 　b2evodin reference
substance 　c2evodiamine reference substance 　d2rutecarpine
reference substance
A2detection wavelengt h 324 nm (detecting caffeotannic acid)
B2detection wavelengt h 205 nm (detecting evodin) 　C2detection
wavelengt h 225 nm (detecting evodiamine and rutecarpine)
图 1 　吴茱萸汁样品和对照品的 HPLC色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of Fructus Evodiae
juice sample and reference substances
程、相关系数及线性范围 ,见表 1。
表 1 　回归方程、相关系数及线性范围
Table 1 　Equation , correlation coeff icient , and linear range
成　分 线性方程 r 线性范围/μg
绿原酸　　 Y = 589164 X + 721 286 01999 8 01 345～20170
吴茱萸内酯 Y = 243165 X - 1071 63 01999 2 01 334～20104
吴茱萸碱　 Y = 2 45311 X + 5673 01998 6 01 320～19120
吴茱萸次碱 Y = 697197 X + 7761 9 01995 6 01 418～25108
216 　精密度试验 :精密吸取上述各对照品溶液 ,进
样 10μL ,重复 6 次 ,测定峰面积值 ,结果绿原酸、吴
茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的 RSD 分别为
0174 %、0137 %、0145 %、0156 %。
217 　重现性试验 :取批号为 080901 样品 ,精密称
定 5 份样品 ,按供试品溶液制备方法分别制备 5 份
供试品溶液 ,进行重复性试验 ,测定 4 种成分的量 ,
计算各成分质量分数的 RSD 值 ,结果绿原酸为
2106 %、吴茱萸内酯为 1178 %、吴茱萸碱为 1195 %、
吴茱萸次碱为 1165 %。
218 　稳定性试验 :取批号为 080901 样品 ,制备供
试品溶液 按上述色谱条件 分别于 0、1、2、4、8、12、
·793·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
24 h 进样测定 ,每次 60μL ,计算峰面积的 RSD 值 ,
结果绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的
分别为 1164 %、1169 %、1158 %、1139 % ,表明供试
品溶液在 24 h 内稳定。
219 　回收率试验 :取批号为 080901 样品 ,精密称
取 1 g ,按样品溶液处理方法制备吴茱萸汁 ,重复 6
份 ,分别加入绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸
次碱对照品 61823、71885、01421、01382 mg ,按上述
色谱条件测定 ,计算加样回收率 ,结果绿原酸、吴茱
萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的回收率分别为
96111 %、109186 %、98178 %、98165 % ,RSD 分别为
1108 %、2116 %、1172 %、2106 %。
2110 　样品测定 :取 5 批样品 ,每批平行 3 份 ,制备
供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,外标法计算 ,各
成分的测定结果见表 2。
表 2 　吴茱萸汁中各成分的测定结果( n = 3)
Table 2 　Determination of every component in
Fructus Evodiae juice ( n = 3)
批号
绿原酸/
(mg ·g - 1)
吴茱萸内酯/
(mg ·g - 1)
吴茱萸碱/
(mg ·g - 1)
吴茱萸次碱/
(mg ·g - 1)
080901 61855 71969 01 407 01391
080902 61751 81080 01 408 01407
080903 61300 81259 01 447 01403
080904 61636 81376 01 384 01348
080905 61646 81479 01 383 01351
3 　讨论
实验中对绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱
萸次碱进行全波长扫描发现 ,绿原酸在 324 nm 有
最大吸收 ,吴茱萸内酯在 205 nm 有最大吸收 ,且在
其他波长吸收很弱 ,吴茱萸碱和吴茱萸次碱在 225
nm 处有最大吸收 ;为便与检测 ,且考虑到样品中各
成分含量不高 ,故选用 205、225、324 nm 同时测定
吴茱萸汁中成分。该方法准确、可靠、重现性好 ,可
以用于辅料吴茱萸汁的质量控制。
在吴茱萸汁的制备过程中 ,采用了正交试验优
选出的吴茱萸最佳水提工艺 ,即加入 16 倍量的水 ,
提取 3 次 ,每次 115 h。实验中发现 ,不宜将吴茱萸
药材粉得太细 ,否则在水煎煮过程中易起泡且会影
响吴茱萸中有效成分的溶出 ,此结论也与文献报道
一致[7 ] 。本实验中未粉碎 ,在提取前浸泡 30 min 后
加热提取 ,效果较好。
萸黄连作为一种传统的炮制工艺 ,能一直沿用
至今 ,可见其临床疗效确切 ;但是 ,迄今为止仍未有
对萸黄连及其辅料进行质量控制的统一标准 ,这给
辅料生产制备带来了随意性 ,工艺不规范、质量不明
确 ,其质量好坏无从考证和判断。这样 ,严重影响了
辅料的质量和其在主药中所发挥的作用。因此 ,为
提高辅料的质量 ,开展辅料制备工艺规范化研究 ,并
制定出切实可行的质量标准意义重大。本研究对吴
茱萸汁进行成分分析和质量控制为萸黄连炮制辅料
的质量标准的制定提供了重要依据。
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化瘀通脉汤的 HPLC指纹图谱研究
马 　瑛 ,刘　芳 ,柴士伟
①
(天津中医药大学第一附属医院 ,天津 　300193)
摘 　要 :目的 　建立化瘀通脉汤剂的高效液相色谱指纹图谱 ,以评价化瘀通脉汤剂的质量。方法 　采用大连依利特
Hypersil ODS2 C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈20105 %甲酸 ,梯度洗脱 ;体积流量 :110 mL/ min ;检
测波长 :280 nm ;柱温 :30 ℃;进样量 :20μL 。测定了 12 批化瘀通脉汤剂并进行指纹图谱分析。结果 　建立了丹参
水溶性成分指纹图谱共有模式 ,显示 14 个共有峰 ,指认了阿魏酸、丹酚酸B 2 个特征峰。结论 　指纹图谱色谱图中
·893· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009210230　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :马　瑛 (1969 —) ,女 ,天津人 ,副主任药师 ,硕士 ,主要从事中药鉴定、临床药学等。