全 文 ：降低 bax 基因的表达, 细胞内 Ca2+ 浓度及 caspase
3 活性。已有研究发现,黄芪提取物能够促进缺氧
复氧损伤的神经元细胞 pAkt 表达增加 [ 6]。本研
究在 AST 对 H 2O2诱导的 H9c2 细胞凋亡具有保
护作 用 的 基 础 上, 应 用 PI3K/ Akt 抑 制 剂
LY294002, 发现阻断 PI3K/ Akt 通路后, AST 对
H 2O 2诱导的 H 9c2 细胞损伤的保护作用被部分取
消。本实验还通过 Western blot t ing 检测显示,
AST 能够上调 pA kt 的表达, 这都说明 AST 的保
护作用是部分依赖于 PI3K/ Akt 通路的。
总之, AST 对 H 2O 2诱导的 H9c2 细胞氧化损
伤具有一定的保护作用, 其作用机制与其激活
PI3K/ Akt 细胞信号通路有关。
参考文献:
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蒺藜皂苷预适应对心肌缺血再灌注损伤大鼠心功能的影响
张 爽,李 红 ,魏征人,梁 蕾, 张 问,杨世杰
(吉林大学基础医学院 药理学教研室,吉林 长春 130021)
摘 要: 目的 建立 Langendo rff 离体心脏灌流系统, 制备缺血再灌注实验模型, 观察蒺藜皂苷 ( g ro ss saponins
fr om T r ibulus terr estr is , GST T ) 预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心功能的影响。方法 56 只大鼠随机分为 7
组, 正常对照组、缺血/再灌组 ( I/ R)、心肌缺血预适应组 ( IPC)、阳性药腺苷组、GSTT 200、100、50 mg/ L 组, 缺血
30 min,再灌 40 min, 记录给药前、再灌后 5、10、15、20、30 m in 心率 ( H R)、左室收缩压 ( LVSP ) 等心功能指标 ,并
同步记录冠脉流量 ( CF ) , 同时测定心肌组织 ATP 水平。结果 I/ R 组再灌注后 5、10、15、20、30 m in HR、LVSP
明显下降 ( P< 0 001) ; IPC 组, GSTT 200、100 mg / L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后 5、10、15、20、30 min H R、
LVSP 均明显升高 (P < 0 05、0 01) ; I/ R 组再灌注后各时间点 ( 5、10、15、20、30 min) CF 明显减少 ( P< 0 001) ;
与 I/ R 组相比, IPC 组, GST T 200、100 mg / L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后各时间点 ( 5、10、15、20、30 min)
CF 均增加 ( P< 0 05、0 01、0 001) ; I/ R 组 Na+ K + ATP 酶活力明显降低 (P < 0 001)。与 I/ R 组相比, IPC 组,
GST T 200、100 mg / L 预适应组和腺苷预适应组 Na+ K+ AT P 酶活力明显升高 ( P< 0 05、0 01)。I/ R 组的 Ca2+
Mg 2+ ATP 酶活力有增高趋势, 与 I/ R 组相比, IPC 组, GSTT 200、100 mg / L 预适应组和腺苷预适应组 Ca2+
Mg 2+ ATP 酶活力明显升高 (P< 0 05、0 01)。结论 GST T 可抑制心功能低下, 舒张冠状动脉, 增加冠脉血流量
而改善心肌的供血、供氧; GSTT 还可增加心肌组织 ATP 酶活性, 通过抑制 Na+ / Ca2+ 交换, 使得细胞摄取的 Ca2+
减少。
关键词: 蒺藜皂苷; 缺血再灌注损伤; 缺血预适应; 心功能; ATP 酶
中图分类号: R286 2 文献标识码: A 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0959- 05
!959!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
收稿日期: 20091010 基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30472020, 30672654) ; 高校博士点基金资助项目 ( 2005183129)作者简介:张 爽( 1975 ∀ ) ,女,吉林省长春市人,药理学博士,吉林大学电子科学与工程学院讲师,研究方向为分子药理学。
Email : mariazs@ 163. com
* 通讯作者 李 红 Em ail: LH ong@ jlu. edu. cn
蒺藜 T r ibulus terr estr i s L. 为蒺藜科蒺藜属植
物,又名刺蒺藜、硬蒺藜、白蒺藜,是中医在治疗心脑
血管性疾病中应用较多的一味中药。蒺藜皂苷
( gross saponins from T . ter r estr is, GST T) 为蒺藜
全草提取的有效成分, 是以呋甾醇和螺甾醇皂苷为
主的多种皂苷混合物。研究表明 GST T 具有降低
血压、调血脂、降血糖、舒张血管、抗血小板聚集等作
用,对大鼠结扎冠状动脉左前降支所致的心肌缺血、
对离体心脏缺血再灌注损伤、对体外培养的心肌细
胞缺氧再给氧损伤以及对急性脑缺血损伤等具有保
护作用[ 1~ 5] 。也有文献报道,应用含有 GST T 的营
养液对离体大鼠心脏灌流, 减少细胞内钙离子浓度,
使心肌收缩力下降, 减少心肌耗能保护心脏[ 6]。本
实验采用 Langendor ff 离体心脏灌流模型, 在大鼠
心肌缺血再灌注损伤前,预先用含有 GST T 的心肌
营养液灌流代替短暂的缺血预刺激, 在心肌复灌时
灌流液中不再加入 GST T,观察 GST T 是否可对抗
心肌缺血再灌注损伤。
1 材料与方法
1 1 实验动物: 健康 Wistar 大鼠, 雌雄各半,体质
量 280~ 320 g,由吉林大学基础医学院动物实验研
究中心提供。
1 2 药品与仪器:注射用蒺藜皂苷, 吉林敖东洮南
药业股份有限公司,批号 050601,以 KH 营养液配
制;腺苷注射液, 沈阳光大制药有限公司, 批号
07020603。A TP 酶试剂盒 (不离速) , KH 营养液
各成分均为市售国产分析纯试剂, 以蒸馏水配制。
ESJ60 ∀ 4 电子天平,沈阳龙腾电子称量仪器有限公
司; 755B 紫外可见分光光度计, 上海精密科学仪器
有限公司; RM ∀ 6000 八道生理记录仪,日本; HL ∀
2 型横速输液泵, 上海精科公司; 恒温循环水浴箱,
北京医疗设备厂。
1 3 心肌缺血再灌注损伤模型的建立: 大鼠用
20% 乌拉坦 ( 1 5 g / kg) ip 麻醉, 立即开胸取出心
脏,放入 4 # KH 营养液中, 轻轻挤压心室, 使心
腔中残余血排出, 后迅速行主动脉插管,将心脏连于
Langendo rf f灌流系统上, 心脏复跳后先以 10 mL/
m in 流速主动脉逆行灌流 10 min。继之行肺静脉
插管,以备顺向灌流;再向左心室插管, 记录左室收
缩压。逆向灌流 10 min, 待心脏活动稳定后, 改为
顺向灌流,整个实验过程中持续通入 95% O 2、5%
CO 2混合气体, 并且保持离体心脏在前负荷 1 17
kPa,后负荷 5 38 kPa 的条件下进行工作。实验中
灌流液保持在 ( 37 ∃ 5) # 左右, 且 pH 值保持
7 2~ 7 4。以 RM ∀ 6000 型记录仪同步记录左室
收缩压 ( LVSP) 及心率 ( HR) ,同时记录冠脉流量
( CF)。纸速为 25 mm/ s,定标: 1 mm= 1 mV。
心脏搏动稳定后按给药前, 再灌注后 5、10、15、
20、30 m in 的顺序观察。给药前、再灌注后同步记
录诸指标于 RM ∀ 6000型记录仪上。
KH 液成分 ( mmol/ L ) : N aCl 118. 5、KCl
4. 70、CaCl2 22. 50、MgSO 4 41. 20、NaHCO 3 25. 00、
KH2 PO 4 1. 20, 葡萄糖 11 10, 以蒸馏水配制, 经
0 45 m 滤器滤过。
1 4 实验分组: 将 56 只 Wistar 大鼠随机分为 7
组,每组 8只。 正常对照组:以 KH 液持续灌流
100 min。% 缺血/再灌 ( I/ R) 组: 以 KH 液稳定
灌流后,停灌 30 min (保温, 保湿) ,再恢复 KH 液
灌流 40 min。& 心肌缺血预适应 ( IPC) 组: 以 K
H 液稳定灌流后, 先停止灌流 5 m in, 再复灌流 5
min, 重复 3次, 然后停灌 30 m in,后再恢复 KH 液
灌流 40 min。∋阳性药腺苷组: 以 KH 液稳定灌
流后, 先以含腺苷 ( 2 67 mg/ L ) KH 液灌流 15
min, 然后停灌 30 m in,再灌 40 min。( GST T 高剂
量组:以 KH 液稳定灌流后,先以含 GSTT 200 mg/
L KH 液灌流 15 min, 然后停灌 30 min, 再灌 40
min。)GSTT 中剂量组: 以 KH 液稳定灌流后, 先
以含 GSTT 100 mg/ L KH 液灌流 15 min,然后停灌
30 min,再灌 40 min。 ∗GST T 低剂量组:以 KH 液
稳定灌流后, 以含 GSTT 50 mg/ L KH 液灌流 15
min,然后停灌 30 min,再灌 40 min。
1 5 心功能及心电图记录: 备 3 根铂金丝作为电
极,两根分别置于左右心房,一根置心尖部, 记录表
面心电图。用一充满生理盐水的内径 0 3 cm 的斜
面硬度适中的塑料导管自心尖部插入左心室, 另一
端连接在压力换能器上, 记录给药前,再灌后 5、10、
15、20、30 min LVSP、HR 等心功能指标并同步记
录 CF。
1 6 心肌组织 AT P 的测定: 实验完毕,取下心脏,
留取左心室相同部位的部分心肌组织, 准确称取组
织质量及体积, 加 9 倍生理盐水制成 10% 匀浆,
4 # 3 000 r / min 离心 10 min,取上清, 10% 组织匀
浆液 0 2 mL 加 0 8 mL 生理盐水稀释成 2% 组织
匀浆,按试剂盒说明书测定 ATP 水平。
1 7 统计学分析:应用 SPSS 软件对测量结果进行
统计处理,以 x ∃ s 表示。
2 结果
2 1 对离体心脏 HR 的影响: 给药前, 各组间 HR
!960! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
未见明显差异 ( P> 0 05)。对照组整个灌流期间
HR 均无明显变化 ( P> 0 05) ; I/ R 组再灌注后各
时间点 ( 5、10、15、20、30 min) HR 明显下降 ( P<
0 001) ; 与 I/ R 组相比, IPC 组, GSTT 200、100
mg/ L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后各时间点
( 5、10、15、20、30 min) HR 均有明显升高 ( P <
0 05、0 01) ; GSTT 50 mg/ L 预适应组 HR 无明显
变化。GSTT 作用存在一定的剂量依赖关系, 结果
见表 1。
2 2 对离体心脏LVSP的影响 : 给药前 , 各组间
表 1 GSTT 对大鼠离体心脏缺血再灌注后 HR 的影响 (x ∃ s, n= 8)
Table 1 Ef fects of GSTT on heart rate in reperfused ischemic rats ( x∃ s, n= 8)
组别 /
( mg ! L- 1 )
HR/ (次! min- 1)
给药前 再灌后 5 min 再灌后 10 min 再灌后 15 min 再灌后 20 min 再灌后 30 min
对照 - 181 37 ∃ 3 59 180 36 ∃ 302 180 92 ∃ 370 180 78 ∃ 289 180 78 ∃ 4 35 180 88 ∃ 3 37
I/ R - 182 45 ∃ 2 73 157 18 ∃ 635 + + + 171 57 ∃ 518 + + + 172 60 ∃ 493 + + + 176 34 ∃ 2 04 + + + 176 56 ∃ 1 48+ + +
IPC - 182 99 ∃ 3 95 178 70 ∃ 201* * * 182 64 ∃ 228 184 70 ∃ 236* 182 58 ∃ 2 49 181 56 ∃ 3 05*
腺苷 2 67 181 13 ∃ 3 58 174 58 ∃ 086* * * 175 78 ∃ 119* 176 34 ∃ 203* 178 27 ∃ 2 10* 181 08 ∃ 3 65* * *
GSTT 200 181 98 ∃ 3 88 174 06 ∃ 150* * * 175 22 ∃ 131 177 48 ∃ 210* 179 46 ∃ 2 59* 181 53 ∃ 3 25* * *
100 181 24 ∃ 3 13 173 71 ∃ 117* * * 175 05 ∃ 132 176 22 ∃ 142* 177 63 ∃ 1 78 178 04 ∃ 2 23*
50 182 10 ∃ 2 78 161 68 ∃ 458 169 83 ∃ 355 172 46 ∃ 269 175 83 ∃ 1 76 177 89 ∃ 1 14
与对照组比较: + + +P< 0 001; 与 I/ R 组比较: * P < 005 * * * P < 0 001
+ + + P< 0 001 v s cont rol group; * P < 0 05 * * * P < 0 001 v s I/ R group
LVSP 未见明显差异 ( P> 0 05)。对照组在灌流期
间 LVSP 无明显变化 ( P> 0 05) ; I/ R 组再灌注后
各时间点 ( 5、10、15、20、30 m in) LVSP 明显下降
( P< 0 001) ; 与 I/ R 组相比, IPC 组, GST T 200、
100 mg/ L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后各时
间点 ( 5、10、15、20、30 min) LVSP 均有明显升高
( P< 0 05、0 01、0 001) ; GSTT 50 mg/ L 预适应组
再灌注后 15、20、30 m in 时间点 LVSP 亦有所升高
( P< 0 05、0 01)。GSTT 剂量依赖关系明显,结果
见表 2。
2 3 对离体心脏 CF 的影响: 给药前, 各组 CF 均
值未见明显差异 ( P> 0 05)。对照组整个灌流期间
CF 无明显变化 ( P> 0 05) ; I/ R 组再灌注后各时间
点 ( 5、10、15、20、30 min) CF 明显减少 ( P <
0 001) ; 与 I/ R 组相比, IPC 组, GSTT 200、100
mg/ L 预适应组和腺苷预适应组再灌注后各时间点
( 5、10、15、20、30 min) CF 均增加 ( P< 0 05、0 01、
0 001) ; GSTT 50 mg/ L 预适应组对 CF 没有明显
影响 ( P> 0 05)。剂量依赖关系明显,结果见表 3。
2 4 对心肌组织 AT P 酶水平的影响: 再灌后, 与
对照组相比, I/ R 组 Na+ K + ATP 酶活力明显降低
( P< 0 001)。与 I/ R 组相比, IPC 组, GST T 200、
100 mg / L 预适应组和腺苷预适应组 Na+ K + AT P
酶活力明显升高 ( P< 0 05、0 01) , GST T 50 mg/ L
预适应组有增高趋势, 但无统计学意义。不同剂量
之间存在一定的剂量依赖关系。对 Ca2+ Mg2+
ATP 酶而言, I/ R 组的活力反而有增高趋势, 与 I/
R组相比, IPC 组, GST T 200、100 mg/ L 预适应组
和腺苷预适应组 Ca2+ Mg 2+ ATP 酶活力明显升高
( P< 0 05、0 01)。GSTT 50 mg/ L 预适应组有增
高趋势,但无统计学意义。不同剂量之间存在一定
的剂量依赖关系,结果见表 4。
3 讨论
影响心肌耗氧量的诸多因素中,心室壁张力、心
表 2 GSTT对大鼠离体心脏缺血再灌注后 LVSP 的影响 (x ∃ s, n= 8)
Table 2 Effects of GSTT on LVSP in reperfused ischemic rats ( x ∃ s, n= 8)
组别 /
( mg ! L- 1 )
LVSP/ kPa
给药前 再灌后 5 min 再灌后 10 min 再灌后 15 min 再灌后 20 min 再灌后 30 min
对照 - 13 37 ∃ 0 51 11 85 ∃ 081 12 32 ∃ 063 12 23 ∃ 0 62 12 78 ∃ 0 85 12 91 ∃ 1 30
I/ R - 12 95 ∃ 0 45 8 77 ∃ 028 + + + 8 97 ∃ 028 + + + 9 46 ∃ 0 24 + + + 9 79 ∃ 0 21+ + + 10 00 ∃ 0 23 + + +
IPC - 13 26 ∃ 0 51 10 18 ∃ 055* 10 52 ∃ 083* 11 16 ∃ 0 68* * 11 63 ∃ 0 66* * 12 36 ∃ 0 58* * *
腺苷 2 67 12 96 ∃ 0 44 10 63 ∃ 047* * 10 73 ∃ 040* 11 51 ∃ 0 33* * 12 01 ∃ 0 40* * * 12 73 ∃ 0 41* * *
GSTT 200 12 90 ∃ 0 44 10 38 ∃ 032* * 10 88 ∃ 027* * 11 17 ∃ 0 19* * * 11 96 ∃ 0 24* * * 12 68 ∃ 0 40* * *
100 12 94 ∃ 0 47 10 22 ∃ 015* 10 40 ∃ 016* * 10 59 ∃ 0 16* * 11 00 ∃ 0 19* * 11 52 ∃ 0 21* *
50 12 92 ∃ 0 39 9 20 ∃ 015 9 50 ∃ 013 9 69 ∃ 0 16* 10 02 ∃ 0 27* 10 39 ∃ 0 13* *
与对照组比较: + + +P< 0 001; 与 I/ R 组比较: * P < 005 * * P< 0 01 * * * P< 0 001
+ + + P< 0 001 v s cont rol group; * P < 0 05 * * P< 0 01 * * * P < 0001 v s I/ R g rou p
!961!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
表 3 GSTT 对大鼠离体心脏缺血再灌注后 CF 的影响 (x ∃ s, n= 8)
Table 3 Effects of GSTT on CF in reperfused ischemic rats ( x∃ s, n= 8)
组别 /
( mg ! L- 1 )
CF/ ( mL ! min- 1)
给药前 再灌后 5 min 再灌后 10 min 再灌后 15 min 再灌后 20 min 再灌后 30 min
对照 - 833 ∃ 0 61 7 42 ∃ 066 8 00 ∃ 0 71 7 75 ∃ 0 52 8 08 ∃ 0 66 8 25 ∃ 0 61
I/ R - 808 ∃ 0 74 3 33 ∃ 052 + + + 3 42 ∃ 0 74 + + + 4 00 ∃ 0 45+ + + 5 17 ∃ 0 41 + + + 5 92 ∃ 0 86 + + +
IPC - 800 ∃ 0 71 4 42 ∃ 116 5 08 ∃ 2 01 5 50 ∃ 1 82* 6 50 ∃ 1 00* * 7 42 ∃ 0 58
腺苷 2 67 817 ∃ 0 68 4 58 ∃ 049* 5 08 ∃ 0 92* * 5 67 ∃ 0 88* 6 42 ∃ 0 49* 7 17 ∃ 0 61* *
GSTT 200 817 ∃ 0 68 4 75 ∃ 052* * 5 08 ∃ 0 58* * 5 58 ∃ 0 49* * * 6 50 ∃ 0 63* * 7 25 ∃ 0 76* * *
100 817 ∃ 0 68 4 42 ∃ 049* 4 83 ∃ 0 61* * 5 33 ∃ 0 41* * 6 08 ∃ 0 38* 7 08 ∃ 0 80* *
50 800 ∃ 0 71 3 25 ∃ 042 3 58 ∃ 0 58 4 50 ∃ 0 71 5 33 ∃ 1 03 6 17 ∃ 0 75
与对照组比较: + + +P< 0 001; 与 I/ R 组比较: * P < 005 * * P< 0 01 * * * P< 0 001
+ + + P< 0 001 v s cont rol group; * P < 0 05 * * P< 0 01 * * * P < 0001 v s I/ R g rou p
表 4 GSTT对大鼠离体心脏缺血再灌注后心肌组织
ATP 酶水平的影响 (x ∃ s, n= 8)
Table 4 Effects of GSTT on ATPase concentration
in myocardic tissue of reperfused ischemic
rats ( x∃ s, n= 8)
组别 /
( mg ! L- 1)
N a
+ K+ AT Pase/
( mol Pi! mg- 1 ! h- 1)
Ca
2+ Mg2+ ATPase/
( mol Pi! mg- 1 ! h- 1 )
对照 - 6 47 ∃ 0 76 4 97 ∃ 0 81
I/ R - 2 91 ∃ 0 84+ + + 6 30 ∃ 1 15+
IPC - 4 53 ∃ 1 07* 8 75 ∃ 1 48* *
腺苷 2 67 5 91 ∃ 1 43* * 8 28 ∃ 0 98* *
GSTT 200 6 23 ∃ 1 67* * 8 10 ∃ 0 65* *
100 4 66 ∃ 1 44* 7 81 ∃ 1 15*
50 4 10 ∃ 1 28 7 08 ∃ 1 73
与对照组比较: +P < 0 05 + + +P < 0 001
与 I/ R 组比较: * P < 0 05 * * P< 0 01
+P < 0 05 + + +P < 0 001 v s cont rol group
* P< 0 05 * * P< 0 01 v s I/ R group
肌收缩性和心率起主要作用。因此检测 HR、
LVSP、CF 等血流动力学参数, 可以正确反映心肌
收缩性能[ 1~ 9]。在在体情况下,由于前、后负荷及神
经、体液的影响,很难正确评价药物对心肌收缩性能
的影响[ 10] 。采用离体灌流后, 排除了以上影响因
素,从而能更好地说明药物对心肌收缩的直接作用。
研究表明, GSTT 能增加冠状动脉血流量和心
肌血流量,增加冠状动脉供血供氧;并能降低冠状动
脉阻力,降低心肌收缩力,从而降低心肌耗氧量[ 6]。
本实验结果表明, 大鼠心肌缺血再灌注后, HR、
LVSP、CF 均明显降低, 提示缺血再灌后心功能低
下。给予 GST T 200、100 mg/ L 可使 HR、LVSP、
CF 值有所增加,但仍比正常水平低, 提示 GSTT 可
能具有调节作用, 能抑制再灌后引起的心功能低下。
心肌缺血、缺氧后, ATP 供应不足, 抑制了
Na
+ K+ AT P 酶、Ca2+ Mg2+ AT P 酶等离子泵的
主动性运转及慢钠通道增加等, 导致 N a+ 内流增
多,使得细胞内 Na+ 大量积累,刺激细胞膜的 N a+ /
Ca
2+ 交换体反向运转,将大量 Ca2+ 转运到细胞内,
使得细胞内的 Ca2+ 增加, 进而导致细胞内钙超载。
有研究报道, 抑制 Na+ K + AT P 酶和 Ca2+ Mg2+
ATP 酶活性有减弱预处理缩小心肌梗死范围的作
用[ 11~ 12] , 这说明抗 Ca2+ 作用和心肌缺血预适应作
用紧密相关。本研究结果表明, 预先给予 GST T
200、100 mg / L 可使 N a+ K + AT P 酶、Ca2+ Mg2+
ATP 酶活性明显升高, 提示 GST T 通过抑制 Na+ /
Ca2+ 交换, 使得细胞摄取的 Ca2+ 减少, 具有良好的
抗 Ca2+ 超负荷作用,而 GST T 对 Ca2+ Mg2+ AT P
酶、Na+ K + ATP 酶活性影响有所不同,其原因可
能是这两种酶在线粒体上的分布和量不同所致, 其
具体机制有待进一步研究。
综上所述, 预先给予 GST T 能诱导对随后缺
血/再灌注损伤适应性保护作用,即可产生药理性预
适应保护作用。
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止颤胶囊对帕金森模型大鼠脑内单胺氧化酶 B的影响
刘亚珍1 ,施雨露2 ,刘永茂2 ,万 全3
( 1 吉林大学第一医院 药剂科,吉林 长春 130021; 2 吉林大学白求恩医学院, 吉林 长春 130021;
3 吉林大学生命科学学院 生物技术系,吉林 长春 130051)
摘 要: 目的 探讨止颤胶囊对帕金森病 ( PD ) 模型大鼠脑内单胺氧化酶 B ( MAOB) 表达的调节作用。方法
应用脑内定位注射 6羟基多巴胺 ( 6OHDA) 方法制备部分损伤 PD 模型;采用逆转录聚合酶链反应 ( RTPCR )
对 PD 大鼠脑内 MAOB mRNA 的表达进行分析;采用生化法对脑内 MAOB 活性进行测定。结果 从给药后第
10 天开始, 模型组 MAOB mRNA 表达明显增加,扩增产物的量为止颤胶囊的 4 728 倍,远远高于止颤胶囊组和
对照组; M AOB 的活性检测结果与 RTPCR 分析结果一致,止颤胶囊对大鼠脑内 M AOB 活性抑制率大于 40%。
结论 止颤胶囊对 PD 大鼠脑内 MAOB mRNA 表达和活性有下调作用, 可使 6OHDA 引起的脑内 MAOB mR
NA 高表达得到抑制。
关键词: 止颤胶囊; 帕金森病; 单胺氧化酶 B ( MAOB)
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0963- 03
帕金森病 ( Parkinson,s disease, PD) 是一种神
经系统疾病, 多发于中老年,呈缓慢的神经元细胞变
性。主要病理特点是黑质致密区多巴胺 ( DA ) 能
神经元严重缺失[ 1]。6羟基多巴胺 ( 6OHDA ) 对
黑质 DA 能神经元的损伤程度与注入的剂量有关。
调整 6OHDA 的用量可相对保留较多的 DA 能神
经元, 从而制造部分损伤的 PD 大鼠模型, 以模拟
中、早期 PD 病人的症状 [ 2]。单胺氧化酶 ( mono
amine oxidase, MAO) 在大脑和周围神经组织中催
化生物体产生的胺, 氧化脱氨产生过氧化氢[ 3]。因
此, MA OB 活力的变化与 PD 密切相关。
以滋养肝肾, 育阴熄风作为根本法则, 由生黄
芪、人参、白首乌、女真子、续断、厚朴、川芍为主要组
分的止颤胶囊方药具有改善大鼠旋转行为、提高黑
质纹状体 DA 量和抗自由基酶活性的作用,临床应
用也取得一定疗效。研究表明止颤胶囊对 PD模型
大鼠血液中超氧化物歧化酶 ( SOD )、丙二醛
( MDA) 的量以及小鼠免疫功能均有影响[ 4~ 6]。本
实验主要研究止颤胶囊对 PD 模型大鼠脑内 MAO
B 基因表达及活性变化的影响, 为止颤胶囊治疗 PD
研究提供理论依据。
1 材料与方法
1 1 药品和试剂:止颤胶囊由长春中医学院盖国忠
教授研制; 6OHDA 是美国 Sigma 公司产品; T rizol
试剂为美国 Life Technolog ics; 逆转录试剂盒、Taq
酶、DL2000 M ar ker、DEPC、琼脂糖均由日 本
Takar a 生物工程公司提供; MA OB 和 ∀act in PCR
引物由上海生物工程技术服务公司合成; 溴乙锭为
瑞士 Fluka 产品,其他试剂均为国产分析纯。
1 2 仪器: 日本 Narishig e 公司生产的 WDT ∀ −
脑立体定位仪; 日本岛津公司生产的 UV ∀ 7200 紫
外分光光度计; 美国 PE 公司生产的 9700 型 PCR
仪;杭州天能生物科技有限公司生产的凝胶成像系
统;德国 Heraeus 公司生产的 Biofuge pr imo R 高
温离心机等。
1 3 动物: SD 大鼠 150~ 160 g, 白求恩医学院实
验动物中心生产,清洁级动物。
1 4 PD 动物模型制备: 参照陈生弟等[ 7] 方法, 选
用体质量 150~ 160 g SD 大鼠, 麻醉后固定于立体
定向仪上,确定黑质坐标: 前囱后 4. 4 mm , 中线旁
开 1. 1 mm, 硬膜下 7. 5 mm, 以微量注射器向上述
坐标点注入 6OHDA 10 L/ min,注药后留针 1~ 5
!963!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
收稿日期: 20091127 基金项目:吉林省自然科学基金资助项目 ( 2000006)作者简介:刘亚珍( 1959 ∀ ) ,女,吉林省长春市人,主管药师,研究方向为中药治疗帕金森病作用机制。
Tel: ( 0431) 85619709 Email: l ymmm8338@ sin a. com