全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 12 期 2011 年 12 月

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凌霄花中洋丁香苷的制备
张 桥 1, 2, 3，沈 娟 1, 2, 3，赵祎武 1, 2, 3，王振中 1, 2, 3，萧 伟 1, 2, 3*
1. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
3. 江苏省企业院士工作站，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 从凌霄花中制备洋丁香苷。方法 凌霄花 70%乙醇提取液经 D-101 型大孔吸附树脂纯化、凝胶 Sephadex LH-20
柱精制制备洋丁香苷。结果 产品经 HPLC、ESI-MS 分析确定为洋丁香苷，质量分数＞95%。结论 该方法操作简便，克
服耗费大量有机溶剂、收率低等弊端，适合洋丁香苷制备。
关键词：凌霄花；洋丁香苷；D-101 大孔吸附树脂；Sephadex LH-20 柱色谱；HPLC
中图分类号：R284.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)12 - 2465 - 03
Preparation of acteoside from Campsis Flos
ZHANG Qiao1, 2, 3, SHEN Juan1, 2, 3, ZHAO Yi-wu1, 2, 3, WANG Zhen-zhong1, 2, 3, XIAO Wei1, 2, 3
1. Jingsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
2. State Key Laboratory of Pharmaceutical Process New-tech for Chinese Medicine, Lianyungang 222001, China
3. Enterprises Academician Workstations in Jiangsu Province, Lianyungang 222001, China
Key words: Campsis Flos; acteoside; D-101 macroporous resin; Sephadex LH-20 column chromatography; HPLC

凌霄花为常用中药，收载于《中国药典》2010
年版，来源于紫葳科植物凌霄 Campsis grandiflora
(Thunb.) K. Schum.或美洲凌霄 Campsis radicans
(L.) Seem.的干燥花，具有凉血、化瘀、祛风的功效，
用于月经不调、经闭癥瘕、产后乳肿、风疹发红、
皮肤瘙痒、痤疮等症。主要化学成分是以齐墩果酸、
熊果酸、α-香树脂醇、β-香树脂醇为主的三萜类化
合物、苯乙醇苷类等[1-2]。洋丁香苷（acteoside）是
其中的一个主要活性成分，具有抗氧化[3]、免疫抑
制[4]等作用。齐墩果酸等常用作药材及其相关制品
的质量控制指标，未见把洋丁香苷列入质控指标之
中。增添洋丁香苷为质控指标，可以更全面控制凌
霄花药材质量。文献报道[5]肉苁蓉中洋丁香苷制备
方法主要是有机溶剂萃取、纤维素柱色谱梯度洗脱。
本实验采用大孔树脂吸附技术对凌霄花提取液进行
了分离纯化、凝胶 Sephadex LH-20 色谱玻璃小柱精
制，得到质量分数超过 95%的洋丁香苷，克服文献
方法[5]耗费大量有机溶剂、工艺烦琐、收率低等弊
端，为从其他科属植物中制备洋丁香苷提供依据。
1 仪器与材料
凌霄花药材经南京中医药大学吴启南教授鉴定
为紫葳科植物凌霄 Campsis grandiflora (Thunb.) K.
Schum.的干燥花；洋丁香苷（批号 111530-200706，
中国药品生物制品检定所）；D-101、HPD-100、
HPD-450 大孔吸附树脂（天津农药总厂），AB-8 大
孔树脂（南开大学化工厂）；柱色谱硅胶（青岛海洋
化工厂）；Sephadex LH-20 填料（上海信然生物技
术有限公司）；甲醇（色谱纯，Tedia，美国）；水（重
蒸馏，自制）；甲醇、磷酸、药用 95%乙醇（南京
化学试剂有限公司）；Agilent 1100 高效液相色谱仪
（美国 Agilent 公司），配自动进样器、四元泵、MWD
检测器；AE240 电子分析天平（瑞士 Mettler 公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇（A）-0.1%

收稿日期：2011-05-25
基金项目：国家科技部重大新药创制“创新中药中试放大研究技术平台”（2009ZX09313-032）
作者简介：张 桥，男，硕士，工程师，从事中药新药研究与开发。Tel: (0518)85521949 E-mail: dafuyuan_hubei@163.com
*通讯作者 萧 伟 Tel: (0518)85521956 E-mail: wzhzh-nj@tom.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 12 期 2011 年 12 月

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磷酸水溶液（B），梯度洗脱：0～10 min，40%～
46% A；体积流量 1 mL/min，柱温 30 ℃，检测波
长 334 nm。
2.2 提取工艺
取凌霄花 10.0 kg，依次加入 10 倍、8 倍 70%
乙醇回流提取 2 次，合并提取液，滤过，滤液减压
浓缩至 1∶1（药液为含药材 1 g/mL）。搅拌加入乙
醇至乙醇体积分数为 80%，静置过夜，滤过，滤液
减压回收至无醇味，加水稀释至 1∶1，静置过夜，
滤过，弃去不溶物，得滤液备用。
2.3 纯化工艺
2.3.1 树脂筛选 由于“2.2”项下制备的滤液含大
量极性杂质成分，需要用树脂工艺纯化。考察
D-101、HPD-100、HPD-450、AB-8 4 种大孔树脂对
样品中洋丁香苷的吸附、解吸附效果。首先对树脂
预处理：取 D-101、HPD- 100、HPD-450、AB-8 大
孔吸附树脂适量，分别用乙醇浸泡、溶胀，并用乙
醇洗脱，直至流出的乙醇液与水混合不呈现白色乳
浊现象；再加纯化水洗脱至无醇味，备用。
按“2.2”项下工艺制备样品液（含生药材 1
g/mL），平行取 4 份，100 mL/份，分别加入到已处
理好的含 40 g HPD-450、D-101、HPD-100、AB-8
大孔吸附树脂柱中，吸附，水洗，水液减压浓缩，
甲醇定容至 100 mL；适量 50%乙醇洗脱，合并洗脱
液，回收乙醇，至无醇味，甲醇定容至 100 mL。
取上样液和洗脱浓缩液，分别采用 HPLC 法测
定，计算，结果见表 1。可以看出 D-101 大孔吸附
树脂的吸附及解吸附能力较理想。
2.3.2 洗脱溶剂的筛选 取 D-101 大孔吸附树脂
40 g，上样液（含生药材 1 g/mL）100 mL，平行 6

表 1 树脂种类筛选
Table 1 Screening of resin types
上样液洋丁香苷 洗脱液洋丁香苷 水洗液洋丁香苷
树脂种类 质量浓度/
(mg·mL−1)
吸附量/
(mg·g−1)
解吸率/
%
质量浓度/
(mg·mL−1)
吸附量/
(mg·g−1)
解吸率/
%
质量浓度/
(mg·mL−1)
吸附量/
(mg·g−1)
解吸率/
%
HPD-450 1.13 － － 0.81 2.82 71.68 0 － －
HPD-100 1.13 － － 0.92 2.82 81.42 0 － －
D-101 1.13 － － 1.09 2.82 96.46 0 － －
AB-8 1.13 － － 0.77 2.12 90.59 0.28 － －

份，上样吸附，水洗脱至 Molish 反应呈阴性后，分
别用 20%、30%、40%、50%、60%、95%乙醇 200 mL
洗脱，收集洗脱液，浓缩至 100 mL。HPLC 法测定，
计算回收率，结果见表 2。结果表明 5倍树脂量 40%、
50%乙醇洗脱，洋丁香苷回收率均超过 90%，其他
体积分数乙醇洗脱，洋丁香苷回收率均小于 80%。
综合成本等因素考虑，确定采用 40%乙醇洗脱洋丁
香苷，洗脱体积与树脂质量比为 5∶1。
2.3.3 洗脱体积流量的筛选 另取预处理完毕的 3
根 D-101 大孔吸附树脂色谱柱（树脂 40 g），分别
上样 100 mL（含生药材 1 g/mL），吸附，水洗脱至
Molish 反应呈阴性后，用 40%乙醇洗脱，体积流量
分别为 1、2、3 BV/h，收集洗脱液，浓缩，定容至
100 mL，HPLC 检测，计算回收率，结果见表 3。
结果洗脱体积流量确定为 1～2 BV/h。
2.3.4 最佳树脂纯化工艺 取“2.2”项下备用液通
过 D-101 大孔树脂色谱柱（树脂与生药质量之比为
4∶10），水洗脱至 Molish 反应呈阴性后，再以 5 倍
表 2 不同体积分数乙醇对洋丁香苷洗脱的影响
Table 2 Influence of different ethanol concentration
on acteoside elution
洋丁香苷 洋丁香苷
乙醇 质量浓度/
(mg·mL−1)
回收率/
%
乙醇 质量浓度/
(mg·mL−1)
回收率/
%
20% 0.655 57.98 50% 1.091 96.52
30% 0.811 71.76 60% 0.863 76.35
40% 1.094 96.80 95% 0.366 32.37

表 3 体积流量对洋丁香苷洗脱的影响
Table 3 Influence of flow rate on acteoside elution
洋丁香苷
体积流量/(BV·h−1)
质量浓度/(mg·mL−1) 回收率/%
1 1.084 95.92
2 1.035 91.58
3 0.958 84.75
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树脂量 40%乙醇洗脱，体积流量为 1～2 BV/h，收
集醇洗脱液，减压浓缩至适量，备用。
3 批验证重复实验收率（按生药计算，下同）
分别为 4.1%、4.3%、4.0%，其中洋丁香苷平均质量
分数为 26.15%，说明工艺收率稳定。
2.3.5 硅胶纯化工艺确定 对色谱硅胶（200～300
目）用量进行考察，硅胶量超过浸膏量 5 倍，洋丁
香苷回收率大幅降低；硅胶量小于浸膏量 4 倍，样
品洋丁香苷质量分数降低，故确定硅胶与浸膏质量
之比为 4～5。
对洗脱液醋酸乙酯-乙醇（95∶5、9∶1、8∶2）
进行考察，结果醋酸乙酯-乙醇（95∶5）洗脱洋丁
香苷很难洗脱；醋酸乙酯-乙醇（8∶2）洋丁香苷易
洗脱但杂质多；醋酸乙酯-乙醇（9∶1）效果较好。
最佳硅胶纯化工艺：取“2.3.4”项下浸膏，加
适量乙醇溶解后加入等量粗硅胶（80～100 目）拌
匀，烘干，添加在装有 4～5 倍量色谱硅胶（200～
300 目）色谱柱上，用 4 倍柱体积醋酸乙酯-乙醇（9∶
1）洗脱，收集目标组分（365 nm 荧光下蓝色荧光），
减压蒸干，粉碎，得黄色粉末，为洋丁香苷粗品，
备用。3 批验证重复实验收率分别为 1.3%、1.3%、
1.1%，其中洋丁香苷平均质量分数为 70.24%，说明
工艺收率稳定。
2.4 精制
对 Sephadex LH-20 色谱洗脱溶剂甲醇、乙醇进
行比较，结果基本一致，综合考虑甲醇有毒性的因
素选用乙醇作为洗脱溶剂。对粗品与填料不同比例
（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25）进行比较，结果填
料用量小，产物质量分数低；填料用量大，乙醇溶
剂消耗大。故选用粗品与填料质量之比为 1∶20。
精制工艺：取“2.3.5”项下粗品，适量乙醇溶
解，通过 Sephadex LH-20 色谱玻璃小柱（样品与填
料质量之比为 1∶20），4 倍柱体积乙醇洗脱，收集
目标组分，70 ℃以下减压蒸干，粉碎，即得淡黄色
粉末。3 批验证重复实验收率分别为 0.075%、
0.069%、0.071%，说明工艺收率稳定。
2.5 纯度检测
取“2.4”项下淡黄色粉末，加甲醇溶解，采用
HPLC 外标法检测，结果洋丁香苷保留时间为 6.6
min，峰面积归一化测得其质量分数为 95.82%。精
制产物经 ESI-MS 分析，得准分子离子峰 623 [M－
H]−。1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ: 1.08 (3H, d, J =
6 Hz, 鼠李糖甲基质子), 2.81 (2H, t, J = 7 Hz,
Ar-CH2-CH2-), 3.84 (3H, s, -OCH3), 4.34 (1H, d, J =
8 Hz, 葡萄糖端基质子), 5.15 (1H, s, 鼠李糖端基质
子), 6.27 (1H, d, J = 16 Hz, Ar-CH＝CH-), 6.5～7.1
(6H, Ar-H), 7.59 (1H, d, J = 16 Hz, Ar-CH＝CH-)。
13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 苷元: 131.9 (C-1),
116.7 (C-2), 145.1 (C-3), 146.6 (C-4), 117.6 (C-5),
121.8 (C-6), 72.7 (C-α), 37.1 (C-β)；咖啡酸: 128.2
(C-1), 115.1 (C-2), 150.0 (C-3), 147.1 (C-4), 117.0
(C-5), 123.7 (C-6), 168.7 (C-α), 115.4 (C-β), 148.4
(C-γ)；葡萄糖: 104.7 (C-1), 76.4 (C-2), 82.1 (C-3),
70.9 (C-4), 76.6 (C-5), 62.9 (C-6)；鼠李糖: 103.5
(C-1), 72.4 (C-2), 72.9 (C-3), 74.3 (C-4), 71.2 (C-5),
18.9 (C-6)。与洋丁香苷[1]完全相符。
3 讨论
本实验以凌霄花为原料，采用乙醇提取、醇沉、
水沉、大孔吸附树脂制备洋丁香苷，克服了耗费大
量有机溶剂、工艺烦琐、收率低等弊端，为从其他
科属植物中制备洋丁香苷提供实验依据。
本实验采用醇沉、水沉等工艺去除大量杂质，
能延长后续工艺中大孔吸附树脂使用寿命；大孔吸
附树脂纯化能大大降低硅胶柱纯化中硅胶、有机试
剂的用量，硅胶柱等度洗脱，操作方便且提高收率。
粗品洋丁香苷通过凝胶 Sephadex LH-20 玻璃
色谱小柱纯化，乙醇洗脱，杂质成分先流出，收集
蓝色荧光部分（365 nm），即可获得质量分数超过
95%的洋丁香苷。
参考文献
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