全 文 ：Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第18卷 第9期
Vol.18 No.9
2012年 9月
September.2012
美洲凌霄花抗凝血功能研究*
韩海燕，姚 士，褚纯隽，张 健（通讯作者）
（苏州大学药学院，江苏 苏州 215123）
[摘要] 目的：研究美洲凌霄花的抗凝血作用，初步探讨其抗凝血机制。方法：采用断尾法和毛细管法分别测定小鼠尾出
血时间（BT）、毛细管凝血时间（CT），并测定小鼠肺栓塞时间（PET），通过试剂盒测定小鼠体外凝血酶时间（TT）、凝血酶原时
间（PT）、活化部分凝血激酶时间（APTT）、血浆复钙时间（PRT）。结果：美洲凌霄花醇提物剂量依赖性延长小鼠CT、BT并剂量依
赖性缩短小鼠肺栓塞时间（PET）；其不同萃取层中水层能显著延长小鼠CT、BT（P<0.05），并能延长TT、PT、PRT（P<0.05）；粗多
糖能够延长小鼠CT、BT，并能延长APTT、PT、PRT（P<0.05）。结论：美洲凌霄花具有抗凝血作用，其活性强度为多糖>水层>醇提物。
[关键词] 美洲凌霄花；不同部位；抗凝血作用
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2012）07-0075-03
Research on Anti-coagulation Effect of the Flower of Campsis Radicans(L)Seem
HAN Haiyan, YAO Shi, CHU Chunjun, ZHANG Jian(Corresponding Author)
（College of Pharmaceutical Science, Soochow University, Suzhou 215123, China）
[Abstract] Objective: To investigate the anti-coagulation activities effect of flower of Campsis radicans(L) Seem. Methods:
Bleeding time(BT) and coagulation time(CT) was determined by cutting-tail method. And the pulmonary embolism time(PET)
was also tested. Activated partial thromboplastin time(APTT), thrombin time(TT), prothrombin time(PT) and plasma
recalcification time(PRT) were evaluated by test tube method in mice. Results: The bleeding time(BT) and coagulation time(CT)
were prolonged and the pulmonary embolism time(PET) was cut short, which was dose dependent; In the five different
extraction, the water extract can not only prolong the BT and CT(P <0.05), but also the PT, TT and PRT(P <0.05);
polysaccharide extract prolonged the BT and CT, as well as the APPT, PT and PRT(P <0.05). Conclusion: The flower of
Campsis radicans(L.)Seem has significant effect on anti -coagulation. The polysaccharide has stronger effect than the water
extraction and acoparia-alcohol extract. And the the water extraction has stronger effect than acoparia-alcohol extract.
[Key words] Campsis Radicans(L)Seem; Different Extraction; Anti-coagulation Effect
美洲凌霄花为紫葳科凌霄属植物美洲凌霄Campsis radi－
cans(L.)Seem.的干燥花，江苏、上海、湖南等地有栽培，性味
甘、酸、寒，归肝、心包经，有凉血、化瘀、祛风之功效，主治血
滞经闭、痛经、崩中漏下、血热风痒、疮疥隐疹等；与同属植物
凌霄Campsis grandiflora（Thunb.）K.Schum.的干燥花共同作为
凌霄花入药[1]。作为活血化瘀药，目前研究最多的是凌霄花的
化学成分及药理活性[2]，对于美洲凌霄花的研究却鲜有报道，
对于美洲凌霄花的化学成分及药理活性有待于进一步的研
究。本研究观察了美洲凌霄花总的醇提物对小鼠出血、凝血
时间及对小鼠肺栓塞的影响，并观察了不同萃取部位及多糖
对小鼠凝血功能的影响。现报告如下。
1 材 料
1.1 动物 ICR雄性小鼠，体重18-22 g，扬州大学动物繁殖
中心提供，实验动物生产许可证：SCXK（苏）2007-0001。
1.2 药物与试剂 美洲凌霄花，江苏连云港栽培。苏州大学
药学院陆叶博士鉴定。美洲凌霄花以70%乙醇-水分别15∶1、
12∶1提取两次，合并提取液浓缩后得醇提物，将醇提物分别用
石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水萃取浓缩得各层浸膏。美洲凌霄
花水提醇沉，60%三氯乙酸去除蛋白，透析，得美洲凌霄花多
糖，紫外分光光度法测定多糖含量为508 mg·g-1。阿司匹林肠
溶片（批号：H32026500），南京白敬宇制药有限责任公司。凝
血酶（南京鼎国生物有限公司）。凝血酶原时间（PT）试剂盒
（编号：YZB/沪0556-40-2009）、活化部分凝血酶时间（APTT）
试剂盒（编号：YZB/沪0555-40-2009）和凝血酶时间（TT）试剂盒
（编号：YZB/沪0558-40-2009），上海太阳生物制品有限公司。
1.3 仪器 HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），
纯水机（Hi-tech Instruments Co.Ltd），电子天平（北京赛多利
斯天平有限公司），台式高速冷冻离心机（Sigma，美国）。酶标
仪（型号1500，Thermo Electrom Corporation）。
2 实验方法
2.1 美洲凌霄花醇提物对小鼠出血时间、凝血时间及肺栓塞*基金项目：江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2012.09.042
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时间的影响
2.1.1 小鼠出血时间（BT） 采用断尾法[3]观察各组小鼠的出
血时间。取雄性ICR小鼠50只，随机分为5组，每组10只。正常
对照组按0.1mL/10g灌胃生理盐水，其余各组均按等体积灌胃相
应的药液，分别给美洲凌霄花醇提物低剂量75 mg/kg、中剂量
150mg/kg、高剂量300mg/kg、和阿司匹林50mg/kg，每天给药1次，
连续给药7 d。各组动物禁食12 h，然后分别给药1次。于末次灌胃
后57-59min，将小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，至灌胃后第
60min，在尾尖处剪断鼠尾，每隔30 s用滤纸轻吸尾尖血液，直至
吸不出血液，记录断尾至出血停止时间间隔，即为出血时间。
2.1.2 小鼠凝血时间（CT） 采用毛细管法[4]观测各组小鼠的
凝血时间。给药方法及剂量同“2.1.1”，于末次给药后1 h，用
长10 cm、内径1 mm的玻璃毛细管插入小鼠眼内眦后静脉丛
中，深约4-5 mm，轻轻转动，自血液注满开始计时，取出毛细
管平放于桌上，每隔约15 s折断一端约0.5 cm，并缓慢向左右
拉开，观察折断处出现凝血丝所需时间。
2.1.3 小鼠肺栓塞时间（PET） 给药方法及剂量同“2.1.1”，
在末次给药后0.5h，尾静脉注入ADP-肾上腺素混合溶液0.1mL/10g
（0.02 mg/mL-01 mg/mL），注射后小鼠立即产生肢体偏瘫的脑血
栓症状。观察小鼠状态并记录恢复正常状态所需要的时间。
2.2 美洲凌霄花各萃取层对小鼠出血时间、凝血时间和凝血
功能的影响
2.2.1 小鼠出血时间（BT）、凝血时间（CT） 取雄性ICR小鼠
70只，随机分为7组，每组10只。给药方法同“2.1.1”，给药剂量
正丁醇萃取层、水层、石油醚萃取层、乙酸乙酯萃取层、氯仿
萃取层均为200 mg/kg。测试方法同“2.1.1”、“2.1.2”。
2.2.2 对小鼠凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）和活化部
分凝血激酶时间（APTT）的影响 给药方法及剂量同“2.2.1”，
于末次给药1 h后摘眼球取血，取血约0.9 mL，加入装有0.1 mL
3.8%枸橼酸钠抗凝剂的试管中，混匀，3000 r/min离心15 min，
得贫血小板血浆（platelet poor plasma，PPP），置冰浴中备用。
用凝固比浊法测定TT、PT和APTT。
2.2.3 对血浆复钙时间（PRT）的影响 取血方法及取血量同
“2.2.2”，血液与抗凝剂混匀后1000 r/min离心10 min，得富血
小板血浆（platelet rich plasma，PRP），置冰浴中备用。酶标板
置37℃水面上，每孔加入混合血浆100 μL，温育1 min，迅速加
入37℃预温0.025 mol/L氯化钙溶液100 μL立即混匀，加氯化钙
时开动秒表，每隔10 s以钢丝轻轻向上挑动，至生成固体细丝
即纤维蛋白终止计时，重复以上操作2次，自加钙至纤维蛋白
形成的时间即为PRT。
2.3 美洲凌霄花多糖对小鼠出血时间、凝血时间和凝血功能
的影响
2.3.1 小鼠出血时间（BT）、凝血时间（CT）取雄性ICR小鼠50
只，随机分为5组，每组10只。给药方法同“2.1.1”，分别给美洲
凌霄花粗多糖低剂量50 mg/kg、中剂量100 mg/kg、高剂量
200 mg/kg、和阿司匹林40 mg/kg。测试方法同“2.1.1”、“2.1.2”。
2.3.2 对小鼠凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）和活化部
分凝血激酶时间（APTT）的影响 给药方法及剂量同“2.3.1”，
测试方法同“2.2.2”、“2.2.3”。
2.4 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量
资料采用（x±s）表示，计量资料采用方差分析，组间比较用q检验。
3 结 果
3.1 美洲凌霄花醇提物对小鼠出血时间、凝血时间及肺栓塞
时间的影响 与空白组比较，美洲凌霄花醇提物剂量依赖性
延长小鼠尾尖出血时间，在剂量为300 mg·kg-1时，差异具有统
计学意义（P＜0.05）；并能够剂量依赖性延长小鼠凝血时间及
缩短小鼠肺栓塞时间，在剂量为75、150和300 mg·kg-1时均有明
显差异；阳性药阿司匹林也能显著延长小鼠尾尖出血时间、
凝血时间及缩短小鼠肺栓塞时间。（见表1）
表1 美洲凌霄花醇提物对小鼠出血时间、凝血时间及肺栓塞
时间的影响 （x±s，n=10）
组别 剂量（mg·kg-1） 出血时间BT（s） 凝血时间CT（s） 肺栓塞时间（s）
空白 -- 94.33±25.57 109.12±25.21 304.11±141.21
醇提物低剂量 75 102.11±31.13 154.23±41.64a 223.00±56.32
醇提物中剂量 150 118.44±49.54 187.68±65.66b 126.89±42.43b
醇提物高剂量 300 125.40±34.32a 193.89±69.40b 92.67±34.30b
阿司匹林 50 300.30±73.14a 243.44±82.98b 73.44±21.26b
注：与空白组比较，aP<0.05，bP<0.01。
3.2 美洲凌霄花各萃取层对小鼠出血时间、凝血时间及凝血
功能的影响 与空白组比较，美洲凌霄花水层能明显延长小
鼠凝血时间、出血时间并能延长TT、PT、PRT（P<0.05，P<0.05，
P<0.01），但对APTT作用不明显；石油醚层也能延长TT（P<
0.01）；阳性药阿司匹林也能明显延长小鼠小鼠尾尖出血时
间、凝血时间并能明显延长TT、PT、PRT和APTT。（见表2）
表2 美洲凌霄花各萃取层对小鼠出血时间、凝血时间及凝血功能的影响 （x±s）
组别 出血时间（s） 凝血时间（s） TT（s） PT（s） APTT（s） PRT（s）
空白 154.0±33.2 89.5±20.2 24.0±1.6 17.7±0.7 46.9±5.1 162.5±9.0
正丁醇层 158.3±34.9 108.1±21.1 26.8±4.4 18.5±1.9 51.1±7.2 167.4±13.8
水层 194.8±48.2a 134.3±28.4b 27.1±2.6a 19.5±1.9a 51.0±5.3 193.1±15.6b
乙酸乙酯层 167.8±46.8 106.0±34.8 27.3±4.0 16.4±0.9 47.5±8.6 166.0±20.2
石油醚层 159.1±36.0 92.3±27.5 30.2±2.9b 20.3±1.3 50.9±8.2 172.9±15.0
氯仿层 153.8±35.2 100.9±32.7 27.6±5.5 18.3±1.3 51.9±9.2 157.7±21.9
阿司匹林 195.9±44.9a 136.2±28.1b 27.9±3.3b 20.1±1.7b 59.0±7.6b 184.9±20.4a
注：与空白组比较，aP<0.05，bP<0.01。
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表3 美洲凌霄花多糖对小鼠出血时间、凝血时间及凝血功能的影响 （x±s）
组别 剂量（mg·kg-1） BT（s） CT（s） TT（s） PT（s） APTT（s） PRT（s）
空白 --
低剂量组 50
中剂量组 100
高剂量组 200
阿司匹林 40
注：与空白组比较，aP<0.05，bP<0.01。
168.8±77.1 56.1±13.8 20.5±1.5 18.5±1.1 26.6±2.9 77.7±9.2
279.6±96.0b 86.2±16.9b 21.3±1.6 19.5±1.8 26.4±3.8 103.7±16.5
265.1±98.1a 88.7±16.3b 21.1±2.1 19.8±1.3a 28.3±4.6 114.7±19.9b
341.5±103.4b 92.6±24.5b 22.0±2.4 19.8±1.4a 33.3±6.4a 118.0±21.2b
407.8±88.5b 101.6±23.3b 23.3±1.8b 21.5±1.2b 36.8±5.6b 125.1±14.2b
3.3 美洲凌霄花多糖对小鼠出血时间、凝血时间及凝血功能
的影响 与空白组比较，美洲凌霄花多糖能显著延长小鼠凝
血时间、出血时间并能延长APTT、PT、PRT（P<0.05，P<0.05，
P<0.01），但对TT作用不明显；阳性药阿司匹林也能明显延长
小鼠小鼠尾尖出血时间、凝血时间并能显著延长TT、PT、PRT
和APTT。（见表3）
4 讨 论
血栓形成与心血管疾病密切相关，促使血栓形成的因素
主要有血管内皮损伤、内外凝血系统异常和血流动力学异常
等，若能防止血液凝固或抑制血小板功能，则可以预防血栓
的形成[5]。近几十年，中药药理研究表明活血化瘀中药在改善
微循环障碍，改善血液流变学，降低血液黏滞性，扩张血管，
抑制血小板黏附、聚集、释放，增强抗凝和纤溶活性方面具有
独特的作用[6]。文献报道凌霄花对离体猪冠状动脉条具有抑
制收缩的作用，且作用强于丹参注射液；对大鼠血栓形成具
有抑制作用；而美洲凌霄花无抑制血栓形成作用[7]。作为活血
化瘀药，美洲凌霄花在抑制血小板功能方面的研究未见报
道。本实验首先测定了美洲凌霄花醇提物对小鼠凝血时间、出
血时间及小鼠肺栓塞时间的影响，发现美洲凌霄花醇提物能
延长小鼠尾尖出血时间，延长小鼠毛细管凝血时间，缩短小
鼠肺栓塞时间，具有抗凝血作用；进而测定各萃取部分对小
鼠凝血时间，出血时间及凝血功能的影响，确定了美洲凌霄
花的抗凝血作用有效部位为水层及粗多糖，其中多糖的作用
最强，但其抗凝血作用的机制仍需进一步研究。
参考文献
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究[J].天然产物研究与开发,2010,22(3):490-492
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物研究与开发,1995,7(2):6-11
（收稿日期：2012-05-25 编辑：李海洋）
我省新增15个国家中医药重点学科
近日，我省又新增国家中医药重点学科15个，总数达到26个，位居各省市区前列。全省中医药重点学科结构布局
大幅改善。
中医药重点学科建设是一项关乎中医药事业全面协调可持续发展的综合性系统工程，是统领中医药各项业务建
设的基础和平台，也是培养和造就高素质创新人才和名医的重要途径。我省高度重视国家十二五中医药重点学科
建设申报工作，从去年11月开始着手准备，做了大量扎实有效的工作，在专家评审基础上，向国家局推荐申报17个重
点学科，其中15个被列为国家中医药重点学科。
此次新增的重点学科建设点除覆盖中医基础、中医临床、中药、针灸及中西医结合等传统学科外，还新增了一批
培育学科，如湖南中医药大学中医药信息学、九芝堂股份有限公司中医药工程学，这些学科建设点的出现，将进一步
完善我省中医药学科体系，提升中医药服务能力。尤其是新增企业作为建设单位，对加快我省中医药学术发展，推进
我省中医药医疗、保健、科研、教育、产业、文化等全面协调发展将起到更大的的推动作用。（陈丽君）
[来源：湖南省中医药管理局官网2012-09-14]
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