全 文 ：描 ,在 280 nm 时 ,4 个指标成分有最大吸收 ,且干扰
成分吸收较小 ,因此选择该波长为检测波长。
3. 3 　柱温的选择 :在选择柱温方面 ,分别选择了
25、30、35 ℃的柱温进行比较 ,通过对比各种柱温的
色谱图发现在 30 ℃的柱温下有较好的峰形。所以
选择了 30 ℃的柱温进行 HPL C 分析。
3. 4 　样品提取条件的选择 :对提取方式 (煎煮、回流
和超声)和提取溶媒 (水、不同浓度的甲醇和乙醇溶
液)进行同时考察 ,确定乙醇回流提取效果最好。但
存在较多干扰峰 ,且本底高 ,因此对样品进一步处
理。考虑所测成分均为黄酮类化合物 ,而聚酰胺对
该类化合物有双重色谱作用 ,因此样品萃取后经聚
酰胺柱色谱 ,结果显示干扰峰少 ,本底有所降低 ,分
离度理想。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20051
[ 2 ] 　孙艳秋 , 刘　珂 ,王守愚 , 等1 槲寄生的研究进展 [J ]1 中草 药 , 2000 , 31 (6) : 47124741[3 ] 　王志勇 , 初文峰 , 王　玲 , 等1 槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用 [J ]1 哈尔滨医科大学学报 , 2005 ,39 (3) : 2441[4 ] 　何晓树 , 杨福秋1 高圣草素及其 B 环异构物的合成和结构特征 [J ]1 中国医药工业杂志 , 1987 , 18 (12) : 53425361[5 ] 　Mori A , Nishino C , Nnoki N , et al1 Cytotoxicity of plantflavonoids against Hela cells [J ]1 Phytochemist ry , 1988 , 27 :1017210201[6 ] 　Garo E , Maillard M , Antus S , et al1 Five flavans f rom mar2iscus psilostachys [J ]1 Phytochemist ry , 1996 , 43 ( 6 ) :1265212691[7 ] 　Doostdar H , Burke M D , Mayer R T1 Bioflavonoids : selec2tive subst rates and inhibitors for cytochrome P450 CYP1Aand CYP1B1 [J ]1 Tox icology , 2000 , 144 (123) : 312381[8 ] 　Rao Y K , Geet hangili M , Fang S H , et al1 Antioxidant andcytotoxic activities of naturally occurring phenolic and relatedcompounds : A [J ]1 Food Chem Tox icol , 2007 , 45 ( 9 ) :1770217761[9 ] 　张广文 , 马祥全 , 苏镜娱 , 等 1 广藿香中的黄酮类化合物[J ]1 中草药 , 2001 , 32 (10) : 53425361[ 10 ] 　徐建富 , 杜秀宝 , 孔景临 , 等1 RP2HPLC 测定槲寄生中紫丁香的含量 [J ]1 中国中医药信息杂志 , 2004 , 11 ( 2 ) :492501[ 11 ] 　赵云丽 , 马铭研 , 高晓霞 , 等1 槲寄生中高圣草素272O2β2D2葡萄糖苷的分离及含量测定 [J ]1 色谱 , 2006 , 24 ( 5 ) :47924811
肿节风中落新妇苷及柚皮苷的 HPLC分析
李可强1 ,张广财2 ,宋宇宁1 ,张振秋2
①
(11 辽宁省中药研究所 ,辽宁 沈阳 　110161 ;21 辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连 　116600)
摘 　要 :目的 　采用 HPLC 法测定中药材肿节风中黄酮类成分落新妇苷及柚皮苷的量。方法 　采用 Diamonsil C18
色谱柱 (200 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;以乙腈 (A)20. 1 %磷酸水溶液 (B) 水溶液为流动相 ,采用梯度洗脱 :0～10 min ,
A2B (10 ∶90) ;10～25 min ,A2B (10 ∶90) →A2B (15 ∶85) :25～35 min ,A2B (15 ∶85) →A2B (20 ∶80) →B 保留 15
min ;体积流量采用程序控制 0～10 min ,0. 5 mL/ min ;10～25 min ,0. 5 →0. 75 mL/ min ;25～35 min ,0. 7 →0. 8 mL/
min ;保留 15 min ;检测波长为 290 nm ;柱温 : 30 ℃。结果 　落新妇苷及柚皮苷的平均回收率分别为 97. 3 %、
95. 6 % ,RSD 分别为 2. 2 %、2. 3 % ;线性范围分别为 0. 028～0. 27μg ( r = 0. 999 6) ,0. 030～0. 29μg ( r = 0. 999 5) 。
结论 　该方法简便、灵敏、快速、准确、重现性好 ,为肿节风药材的质量控制及合理开发利用提供了科学依据。
关键词 :肿节风 ;黄酮 ;落新妇苷 ;柚皮苷 ;反相高效液相色谱
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0137 - 02
　　肿节风为金粟兰科植物草珊 S arcandra glabra
( Thunb1) Nakai 的全株 ,又名草珊瑚、九节茶、接骨金
粟兰等 ,其味苦、辛 ,性平 ,具有清热凉血、活血消斑、
祛风通络之功效 ,用于血热紫斑、紫癜 ,风湿痹痛 ,跌
打损伤[1 ] 。现代医药研究表明 ,肿节风全草含黄酮、
香豆素、有机酸及酚类等多种化学成分 ,具有抗菌、抗
炎、镇痛等药理活性[2 ] 。这些作用与肿节风的功效相
符 ,是临床应用的药理基础之一。目前对于肿节风的
定量测定报道多集中在香豆素类的异秦皮啶和有机
酸类的反丁烯二酸 2 种化学成分上[2 ,3 ] ,而对其黄酮
类成分的定量测定则未见报道。另一方面 ,目前国内
已有应用肿节风总黄酮制剂进行临床研究的报道[4 ] 。
因此 ,对肿节风药材中黄酮类成分进行定量分析也有
其必要性。为此 ,本实验首次建立了肿节风中黄酮类
成分落新妇苷及柚皮苷的 HPCL 分析方法 ,并对来自
全国 10 个不同收集地的肿节风药材样品进行了测
定。结果表明 ,该方法准确、简便、可靠 ,适用于肿节
风的定量分析 ,可为全面控制与评价其内在质量及药
·731·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203209
　　作者简介 :李可强 (1967 —) ,男 ,高级工程师 ,博士。　E2mail :sylkq @sina. com
　　3 通讯作者　张振秋　Tel : (0411) 87586058 　E2mail :zhangzhenqiu @sina. com
材的合理开发利用提供科学依据。
1 　仪器与试剂
日立 U —3010 紫外可见双光束扫描分光光度
计 ;Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪 ; Chemsta2
tion 色谱工作站 ; G13142A 紫外检测器。落新妇苷
对照品 (99 %以上) ,供定量测定用 ,购自南京青泽医
药科技开发有限公司 ;柚皮苷 (批号 72228803) ,供
定量测定用 ,购自中国药品生物制品检定所 ;肿节风
药材分别购自河北、广西等地 ,均经辽宁中医药大学
李峰教授鉴定。高效液相色谱用乙腈为色谱纯 ,水
为重蒸馏水 ,其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
2. 1 　对照品溶液制备 :精密称取落新妇苷、柚皮苷
对照品 6. 82、7. 26 mg ,分别置 100 mL 量瓶中 ,加甲
醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成含落新妇苷
0. 068 2 mg/ mL ,柚皮苷 0. 072 6 mg/ mL 的溶液 ;
分别精密量取上述溶液各 2 mL ,置于同一 10 mL
量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。
2. 2 　供试品溶液制备 :取肿节风药材粉末 (过三号
筛)约 0. 5 g ,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加 50 %乙醇
100 mL ,回流提取 2 h ,滤过 ,用 50 %乙醇洗涤残渣 ,
合并提取液和洗涤液 ,水浴蒸干 ,用 50 %乙醇溶解
置 25 mL 量瓶中 ,加 50 %乙醇至刻度 ,用微孔滤膜
(0. 45μm)滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2. 3 　色谱条件 :色谱柱为 Diamonsil C18 (200 mm ×
4. 6 mm , 5 μm) 柱 ;流动相 :乙腈 ( A)20. 1 %磷酸
(B)梯度洗脱 : 0～10 min , A2B ( 10 ∶90) ; 10～25
min ,A2B (10 ∶90) →A2B (15 ∶85) ;25～35 min ,A2
B (15 ∶85) →A2B (20 ∶80) →B 保留 15 min ;体积流
量采用程序控制 0～10 min ,0. 5 mL/ min ;10～25
min , 0. 5 →0. 7 mL/ min ; 25～ 35 min , 0. 7 →0. 8
mL/ min ;保留 15 min ;柱温 : 30 ℃;检测波长 : 290
nm ;在此条件下 ,理论塔板数按落新妇苷峰计算应
不低于 3 000。色谱图见图 1。
2. 4 　线性关系 :分别精密吸取对照品溶液 2. 0、
6. 0、10. 0、14. 0、16. 0、20. 0μL ,注入高效液相色谱
仪 ,按上述色谱条件测定色谱峰面积 ,以进样量 X
(μg)为横坐标 ,峰面积 Y 为纵坐标 ,进行线性回归。
其回归方程及线性范围分别为 : 落新妇苷 Y =
2 280 . 20 X + 22 . 94 ( r = 0 . 999 6) , 0. 028～0. 27
μg ;柚皮苷 Y = 4 072 . 3 X - 42 . 99 ( r = 0 . 999 5) ,
0 . 030～0 . 29μg。各成分在各自进样量范围内线性
关系良好。
2. 5 　精密度试验 :精密吸取同一供试品溶液 10
12落新妇苷　22柚皮苷
12astilbin 　22naringin
图 1 　对照品( A)和肿节风药材(玉林)样品( B)色谱图
Fig. 1 　Chromatograms of reference substances ( A)
and Herba Sa rcandrae sample ( B)
μL ,按上述色谱条件 ,连续进样 5 次 ,测定落新妇苷
及柚皮苷峰面积积分值并计算 RSD 分别为 2. 3 %、
2. 7 %。表明仪器精密度良好。
2. 6 　稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 10
μL ,于制备后 0、2、4、6、8 h 分别进样 ,测定落新妇苷
及柚皮苷峰面积积分值 ,计算 RSD 分别为 1. 3 %、
2. 2 % ,说明供试品溶液在 8 h 内稳定。
2. 7 　重现性试验 :精密称取同一样品 5 份 ,按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件进样 10
μL 。测定计算落新妇苷及柚皮苷分别为 1. 024 0、
0. 692 2 mg/ g ( n = 5) ; RSD 分别为 1. 3 %、2. 6 %。
表明方法重现性较好。
2. 8 　回收率试验 :取已测知量 (落新妇苷 1. 024 0
mg/ g、柚皮苷 0. 692 2 mg/ g) 的样品 5 份 ,每份约
0. 25 g ,精密称定 ,精密加入落新妇苷对照品溶液 4
mL (质量浓度为 0. 068 2 mg/ mL) ,柚皮苷对照品溶
液 2. 5 mL (质量浓度为 0. 072 6 mg/ mL) ,按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液 ,求得落新妇苷及柚皮苷
的平均回收率分别为 97. 3 %、95. 6 % ; RSD 分别为
2. 2 %、2. 3 %。表明回收率良好。
2. 9 　样品测定 :对 10 批不同收集地的肿节风药材
样品 ,按“2. 2”项下方法制备供试品溶液 ,分别精密
吸取上述各溶液及对照品溶液 5～20μL ,进样 ,外
标一点法计算质量分数。结果见表 1。
3 　讨论
3. 1 　溶液制备方法的考察 :本实验曾以甲醇、乙醇、
水为提取溶剂对回流和超声 2 种提取方法进行了考
察 ,结果表明 ,乙醇回流提取效果好。在此基础上 ,
设计正交试验 L9 (34 ) 对同一供试样品以及乙醇浓
度、提取时间、提取次数 ,进行了 3 因素 ,3 水平的提
取条件的优选考察 ,最终确定了本实验的供试品溶
液制备方法。
(下转附 2 页)
·831· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
　·附 2 ·　　　　　　　　　中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 11 期 2010 年 1 月 　　　　　　　　
[ 58 ] 　Li J Z , Liu H Y , Lin YJ , et al1 Six new C21 steroidal glyco2
sides f rom A sclepias curassavica L1 [J ]1 S teroi ds , 2008 , 73
(6) : 59426001
[ 59 ] 　Warashina T , Noro T1 Steroidal glycosides f rom t he root s of
A sclepias curassavica [J ]1 Chem Pharm B ull , 2008 , 56 (3) :
31523221
[ 60 ] 　Hamed A I , Sheded M G , Abd E12Shaheen S M , et al1 Poly2
hydroxypregnane glycosides f rom Ox ystelma esculent um var1
al pine [J ]1 Phytochemist ry , 2004 , 65 (7) : 97529801
[ 61 ] 　Zhang Q Y , Zhao Y Y , Wang B , et al1 New pregnane glyco2
sides f rom S telmatocry pton khasianum [J ]1 S teroi ds , 2002 ,
67 (5) : 34723511
[ 62 ] 　Vo Duy H , Kazuhiro O , Ryoji K , et al1 Sweet Pregnane
Glycosides f rom Telosma p rocumbens [J ]1 Chem Pharm
B ul l , 2001 , 49 (4) : 45324601
[ 63 ] 　Liu Y , Tang W , Yu S , et al1 Eight new C21 steroidal glyco2
sides f rom D regea sinensis var1 corrugata [J ]1 S teroi ds ,
2007 , 72 (627) : 51425231
[ 64 ] 　Liu Y B , Qu J , Yu S S , et al1 Nine novel C21 steroidal glyco2
sides substituted wit h ort hoacetate f rom D regea sinensis var1
corrugate [J ]1 S teroi ds , 2008 , 73 : 18421921
[ 65 ] 　Kim M S , Baek J H , Park J A , et al1 Wilfoside KIN isolated
f rom Cy nanchum wil f ordii inhibit s angiogenesis and t umor
cell invasion [J ]1 I nt J Oncol , 2005 , 26 (6) : 1533215391
[ 66 ] 　Wang H , Wang Q , Srivastava R K , et al1 Effet s of total gly2
cosides f rom baishouwu of human breast and prostate cancer
cell proliferation [J ]1 A ltern Ther Health Med , 2003 , 9 (5) :
622661
[ 67 ] 　张如松 , 叶益萍 , 刘雪莉1 白首乌中体外抑制肿瘤细胞活性
成分研究 [J ]1 中草药 , 2000 , 31 (8) : 59926011
[ 68 ] 　王冬艳 , 张洪泉 , 李　心1 白首乌 C21甾体苷诱导肝癌细胞
凋亡的作用及其机制 [J ]1 药学学报 , 2007 , 42 ( 4 ) :
36623701
[ 69 ] 　尹家乐 , 李　心 , 张士侠 , 等1 白首乌 C21甾体酯苷对小鼠急
性四氯化碳肝损伤的保护作用 [J ]1 安徽医药 , 2007 , 11
(3) : 19821991
[ 70 ] 　陆佳静 , 王晓岚 , 姚文杰 , 等1 白首乌 C21甾苷对小鼠脑缺血
再灌注致学习记忆损伤的保护作用 [J ]1 中成药 , 1991 , 31
(3) : 46324651
[ 71 ] 　王冬艳 , 李　心 , 张洪泉1 江苏地产白首乌 C21甾体苷对荷
瘤小鼠的免疫保护作用 [J ]1 中国临床药理学与治疗学 ,
2007 , 12 (2) : 16821721
[ 72 ] 　Lee K Y , Yoon J S , Kim E S , et al1 Anti2acetylcholinester2
ase and anti2amnesic activities of a pregnane glycoside , cyn2
at roside B , f rom Cy nanchum at ratum [J ]1 Planta Med ,
2005 , 71 (1) : 72111
[ 73 ] 　Zhao Y B , He H P , Lu C H , et al1 C21 steroidal glycosides
of seven sugar residues f rom Cy nanchum otophy ll um [J ]1
S teroi ds , 2006 , 71 (11) : 93529411
[ 74 ] 　王虎根 , 叶益萍1 黑鳗藤新苷 A 的溶血性及其对卵清白蛋白
免疫小鼠的免疫佐剂作用 [J ]1 中国天然药物 , 2005 , 3 (1) :
38223861
[ 75 ] 　陈峰阳 , 叶益萍 , 李晓誉 , 等1 黑鳗藤新苷 K的急性毒性及
体内抑制细胞和体液免疫的实验研究 [J ]1 中华中医药学刊 ,
2009 , 27 (3) : 60826101
[ 76 ] 　周俐斐 , 陈峰阳 , 李晓誉 , 等1 黑鳗藤新苷 K对大鼠佐剂性
关节炎和同种异体皮肤移植排斥反应的治疗作用 [J ]1 中华
中医药学刊 , 2009 , 27 (3) : 56625691
[ 77 ] 　Ye Y P , Chen F Y , Sun H X , et al1 Stemucronatoside K , a
novel C21 steroidal glycoside f rom S tephanotis mucronata , in2
hibited t he cellular and humoral immune response in muce
[J ]1 I nt I mmunopharmacol , 2008 , 8 : 1231212381
[ 78 ] 　Chen F Y , Ye Y P , Sun H X , et al1 Stemucronatoside L , a
pregnane glycoside f rom t he root s of S tephanotis mucronata ,
inhibit s Th1/ Th2 immune responses in vit ro [J ]1 Chem
B iodivers , 2009 , 6 (6) : 91629231
[ 79 ] 　Zhu Y N , Zhao W M , Yang Y F , et al1 Periplocoside E , an
effective compound f rom Peri ploca sepium Bge , inhibited T
cell activation in vit ro and in vivo [J ]1 J Pharmacol Ex p
T her , 2006 , 316 (2) : 66226691
[ 80 ] 　Zhu Y N , Zhong X G , Feng J Q , et al1 Periplocoside E in2
hibit s experimental allergic encephalomyelitis by suppressing
interleukin 122dependent CCR5 expression and interferon2
gamma2dependent CXCR3 expression in T lymphocytes [J ]1
J Pharmacol Ex p Ther , 2006 , 318 (3) : 1153211621
[ 81 ] 　Wan J , Zhu Y N , Feng J Q , et al1 Periplocoside A , a preg2
nane glycoside f rom Peri ploca sepium Bge1 , prevent s con2
canavalin A2induced mice hepatitis t hrough inhibiting N KT2
derived inflammatory cytokine productions [J ]1 I nt I mmuno2
pharmacol , 2008 , 8 (9) : 1248212561
[ 82 ] 　Zhang J , Ni J , Chen Z H , et al1 Periplocoside A prevent s ex2
perimental autoimmune encephalomyelitis by suppressing IL2
17 production and inhibit s differentiation of Th17 cells [J ]1
A cta Pharmacol S in , 2009 , 30 : 1144211521
　　(上接第 138 页)
表 1 　肿节风药材中落新妇苷及柚皮苷的分析结果( n = 3)
Table 1 　Analysis of astilbin and naring in
in S1 glabra ( n = 3)
编号 收集地 落新妇苷/ % 柚皮苷/ %
01 玉林 0. 111 3 0. 058 2
02 广州 0. 019 2 0. 112 3
03 樟树 0. 102 4 0. 069 2
04 北京 0. 013 1 0. 049 6
05 安国 0. 010 9 0. 065 1
06 常州 0. 015 5 0. 066 4
07 苏州 0. 014 0 0. 110 6
08 南京 0. 003 2 0. 077 9
09 成都 0. 036 1 0. 033 9
10 福州 0. 028 3 0. 003 9
3. 2 　流动相的选择 :考察了乙腈2水溶液、甲醇2水
溶液、甲醇2磷酸水溶液、乙腈2磷酸水溶液、乙腈2甲
醇2磷酸水溶液等溶剂系统 ,结果显示不同的流动相
系统分离效果相差较大 ,其中 ,甲醇2水溶液分离效
果较差 ,乙腈2甲醇2磷酸水溶液与乙腈2磷酸水溶液
分离效果较好 ,故最终选择乙腈2磷酸水溶液系统作
为流动相。
3. 3 　检测波长的选择 :经紫外扫描 ,落新妇苷和柚
皮苷的最大紫外吸收分别为 290、284 nm ,二者相
近 ,故选择 290 nm 为测定波长 ,此时基线平稳 ,可
获得满意的分离和测定结果。
本实验所建立的肿节风药材中黄酮类成分落新
妇苷及柚皮苷定量测定方法 ,准确可靠 ,重现性好 ,
回收率满意 ,可以用于其药材的质量分析。结果表
明 ,不同收集地肿节风药材中落新妇苷及柚皮苷的
差别均很大 ,在所测定的 10 批供试样品中落新妇苷
及柚皮苷量最高分别相差 34. 7、8. 1 倍 ,进一步提示
对黄酮类成分进行质控的必要性。
参考文献 :
[1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20051
[2 ] 　郁建生 , 李英伦 1 草珊瑚研究进展 [J ]1 安徽农业科学 ,
2005 ; 33 (12) : 2390223921
[3 ] 　王钢力 , 陈道峰 , 林瑞超1 肿节风的化学成分及其制剂质量
控制研究进展 [J ]1 中草药 , 2003 , 34 (8) : 附 122131
[4 ] 　王　砚 , 王钢力 , 姚令文 , 等1 肿节风药材中反丁烯二酸和
异秦皮啶的含量测定 [J ]1 华西药学杂志 , 2005 , 20 ( 1) :
602621