全 文 ：表 9
4 种方法提取液含药血清吸光度测定结果
Table 9
Serum fingerprint of four kinds of extracting
solution by absorbance
峰
序
SBEE法
nm A
SBE 法
nm A
WE法
nm A
AE法
nm A
1 576 0
051 576 0
053 576 - 0
057 576
0
055
2 541 0
062 540 0
059 542 - 0
078 541 - 0
078
3 414 1
720 413 2
480 414 1
630 280
2
050
4 280 3
045 280 3
120 281 2
580 272
1
930
5 271 2
963 270 3
070 271 2
350 265
2
450
6 265 2
973 265 2
270 265 3
010 251
2
530
7 250 2
927 250 2
030 250 3
680
8 204 1
298
X 1
963 1
798 1
874
1
489
Y U 0
883 4 0
082 5 0
451 4 - 1
417 4
表 10
4 种方法提取液血清指纹图谱标准化值
Table 10
Standardized value of serum f ingerprint
in four kinds of extracting solution
方
法 Y200 Y250 Y 280 YU Y总
SBEE
0
985 6
0
831 8
0
986 7
0
883 4
0
921 9
SBE
0
547 4 - 0
887 5 - 0
192 8
0
082 5 - 0
112 6
WE - 0
299 9
0
563 8 - 0
011 7
0
451 4
0
175 9
AE - 1
233 1 - 0
508 1 - 0
782 3 - 1
417 4 - 0
985 2
法)的血清指纹图谱进行研究比较,对指纹图谱峰面
积和个数以及紫外吸收度进行了标准化处理, 加权
求和后得标准化值, 结果以新西兰兔用药后 2 h 含
药血清的指纹图谱的综合 Y 值最大, 4种方法提取
液给药后 2 h含药血清的综合 Y 值,以 SBEE 液最
大,进一步说明半夏白术天麻汤用 SBEE 法提取较
其他 3种提取方法优越。
通过 DAD检测器和紫外全波长扫描, 该样品
在220、250、280 nm 处有较强吸收,故分析这3个检
测波长下的血清指纹图谱。
4种方法提取液 220 nm 处含药血清 HPLC 指
纹图谱的标准化值 Y 的大小顺序为: Y SBEE> Y SBE>
YWE> YAE ; 250 nm 处的标准化值 Y 的大小顺序为:
Y SBEE> YWE > Y SBE > YAE ; 280 nm 处的标准化值 Y
的大小顺序为: Y SBEE> YWE> Y SBE> YAE ( WE 和 SBE
的 Y 值无显著性差异, P> 0
05) ;吸光度的标准化
值 Y 的大小顺序为: Y SBEE> YWE> Y SBE> YAE ; 4种方
法提取液血清指纹图谱的综合 Y 值大小顺序为:
Y SBEE> YWE > Y SBE > YAE。说明 SBE 液中吸收短波
长的成分较多, WE 液吸收较长波长的成分较多。
SBEE 液无论短波长还是长波长,均有较强吸收,说
明 SBEE 液中成分的数量和种类多于其他 3种提取
液,能较大程度的提取活性混合成分。
不同的分析方法只能检测到相应结构的成分,
应该使用多种分析方法, 多角度分析验证。这个问
题有待继续研究探讨。对于指纹图谱中各个峰位所
对应的成分的确定也有待于进一步深入研究。
参考文献:
[ 1]
王淑玲,孙秀梅,张兆旺,等
半夏白术天麻汤 4种方法提取液
指纹图谱比较[ J ]
杭州师范大学学报:自然科学版, 2010, 9
( 2) : 127-134

[ 2]
王淑玲, 张兆旺,孙秀梅, 等
半仿生-酶法提取的半夏白术天
麻汤中甘草次酸的含量测定[ J ]
承德医学院学报, 2008, 25
( 2) : 119- 120

[ 3]
李小娜,王
巧,张国华,等
山茱萸提取液指纹图谱及其不同
有效部位的血清指纹图谱研究 [ J]
中华中医药杂志, 2006, 21
( 10) : 617-619

[ 4]
孙秀梅,张兆旺,郭
婕,等
黄精不同炮制品半仿生提取液与
水提取液成分的比较[ J]
中草药, 2007, 38( 11) : 1648-1651

正交试验优选人参中人参皂苷 Rg1 的酶解工艺研究
赵啸虎1 ,张红梅3 , 杨金葳1 , 郭建鹏1, 2*
( 1
延边大学药学院, 吉林 延吉
133000; 2
长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室,吉林 延吉
133002;
3
长春市人民医院 药剂科,吉林 长春
130000)
摘
要:目的
优化酶解法提取人参皂苷 Rg1 的工艺条件。方法
采用高效液相色谱法为测定方法,以人参皂苷
Rg1 提取率为指标, 通过正交设计试验进行优选。结果
纤维素酶酶解为最优方法, 且酶用量、酶解时间、酶解温
度对人参皂苷 Rg 1 提取率有显著性影响; 提取人参皂苷 Rg1 的最佳工艺条件为: 纤维素酶用量为 1
4% , 酶解 60
min, 酶解温度为 45
。结论
优化后的提取工艺简单、稳定、提取率高。
关键词:人参; 人参皂苷 Rg 1; 正交设计;酶解 ;高效液相色谱
中图分类号: R286
02


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 08-1279-04

1279
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 2009- 10-12





















基金项目:吉林省中医药管理局中医药科技资助项目( 08SYS-102)作者简介:赵啸虎( 1984
) ,男,硕士研究生,研究方向为中药新剂型与新技术。E- mail : xiaoh u2062@ tom
com
* 通讯作者
郭建鹏
T el: ( 0433) 2660607
E- mai l: gjp807@ ybu
edu
cn
Enzymolysis technology of ginsenoside Rg1 from Panax ginseng by orthogonal design
ZHAO Xiao-hu1 , ZHANG H ong-mei3 , YANG Jin-w ei1 , GU O Jian-peng1, 2
( 1
Colleg e o f Pharmacy , Yanbian Univer sity , Yanji 133000, China; 2
Key Labo rato ry of Natural Resources of Changbai
Mounta in & Funct ional M olecules, M inistry of Education, Yanji 133002, China; 3
Department of Pharmacy,
Changchun Peoples Hospital, Changchun 130000, China)
Abstract: Objective
To optim ize the enzymo lysis techno logy of ginsenoside Rg1
Methods
Taking
ginseno side Rg1 content as the index, or thogonal design method w as used for opt imizat ion and HPLC fo r
determ inat ion
Results
Cellulase enzymoly sis w as the best ex t ract ing pro cess, and enzyme amount, enzy-
molysis time, and enzymolysis temperature had obvious effect on the ex traction of g insenoside Rg1
The
opt imum ex tract ion technolog ies w er e as fo llow s: cellulase amount w as 1
4%, enzymolysis t ime 60 min,
the enzymolysis temperature 45

Conclusion
T he opt imizat ion ex t ract ion technolo gy is simple, steady,
and the ex t ract ing rate is high

Key words: Panax ginseng C
A
Mey. ; ginsenoside Rg1 ; o rtho gonal design; enzymolysis; HPLC


人参为五加科植物人参 Panax g inseng C
A

Mey
的干燥根,主要成分为人参皂苷及多糖等, 其
中人参皂苷 Rg1 具有使中枢神经兴奋, 抗疲劳, 改
善记忆、学习机能以及治疗勃起功能障碍等作
用[ 1-2]。酶解法是近年来用于天然植物有效成分提
取的一项新型技术。选用恰当的酶,可较温和地将
植物组织分解, 加速有效成分的释放,从而提高提取
率[ 2-4]。采用酶解法提取人参, 不仅能降低生产成
本,减少工序,而且有利于提高有效成分的提取率。
因此本实验对比了水提法与多种酶解法对人参皂苷
Rg1 提取率的影响, 通过正交试验优选酶解法提取
人参皂苷 Rg1 的工艺条件,为酶解法在人参提取中
的应用提供实验依据。
1
仪器与试药
日立 L
2400高效液相色谱仪; 人参皂苷 Rg1
对照品(中国药品生物制品检验所, 批号 110703-
200726) ; 纤维素酶( 0
5 U/ mg, Sigma 公司, 批号
20071015) ; 果胶酶 ( 0
4 U / mg , Sigma 公司, 批号
20070918) ;甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水;其余试剂
均为分析纯;人参为市售,经延边大学药学院刘永镇
教授鉴定为五加科植物 人参 Panax g inseng
C
A
Mey
的干燥根。
2
方法与结果
2
1
人参皂苷 Rg1 的高效液相色谱法测定 [ 5]
2
1
1
色谱条件: 色谱柱为 Diamonsil C18柱 ( 250
mm
4
6 mm, 5
m) ; 流动相为乙腈-水( 19
81) ;
体积流量 1 mL/ min;检测波长 203 nm;柱温 30
。
2
1
2
对照品溶液的配制:精密称取人参皂苷 Rg1
对照品 5
0 mg 置 10 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并稀
释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液, 其质量浓度为
0
5 mg/ mL。
2
1
3
供试品溶液的配制:分别将不同提取方法得
到的样品溶液浓缩至稠膏, 用甲醇超声 30 min 溶
解,定容至 50 mL,即得。
2
1
4
系统适用性试验:分别取人参皂苷 Rg1 对照
品溶液和供试品溶液各 10
L,注入色谱仪,测定,见
图 1。理论塔板数按人参皂苷 Rg1 峰计算不低于
2 000。该色谱条件下,样品可得到较好的分离。
*-人参皂苷 Rg1
* -ginsenoside Rg1
图 1
人参皂苷 Rg1 ( A)和样品( B)的 HPLC图谱
Fig
1
HPLC Chromatograms of ginsenoside Rg1
reference substance ( A) and sample ( B)
2
1
5
线性关系的考察: 精密量取人参皂苷 Rg1
对照品溶液 2、6、10、14、18
L, 注入色谱仪, 测定峰
面积,以峰面积( Y)对进样量( X )进行回归,得回归
方程为 Y= 411 401X+ 66 917, r= 0
999 8,线性范
围 1
00~ 9
00
g。
2
1
6
精密度试验: 精密吸取人参皂苷 Rg1 对照
品溶液,每次进样 10
L,重复进样 5次, 以峰面积
为指标,测定,结果显示 RSD为 0
21%。
2
1
7
稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液,分
别于 0、2、4、8、12 h, 进样 10
L, 测定人参皂苷 Rg1
峰面积,计算得 RSD为 1
06%。
2
1
8
重现性试验:精密称取同一批样品 5份,制

1280
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
备供试品溶液, 进样 10
L, 测定, 人参皂苷 Rg1 质
量分数的 RSD为 1
80%。
2
1
9
加样回收率试验:精密量取样品溶液适量,
共 6份,精密加入人参皂苷 Rg1 对照品 0
30 mg ,制
备供试品溶液, 进样 10
L,测定,计算回收率, 结果
平均回收率为 99
12% , RSD为 1
55%。
2
2
人参皂苷 Rg1 提取工艺的选择[ 4]
2
2
1
水提法:称取过 14目的人参粗粉 20 g,加入
14倍量水浸泡 2 h,回流提取 2次,每次 60 m in。提
取液滤过, 定容至 500 mL,即得。
2
2
2
醇提法:称取过 14目的人参粗粉 20 g,加入
14倍量 80%乙醇浸泡 2 h, 回流提取 2 次, 每次 60
min。提取液滤过,定容至 500 mL,即得。
2
2
3
纤维素酶酶解法 [ 6] : 称取过 14 目的人参粗
粉 20 g,加入 10倍量水浸泡 2 h, 加热煮沸 5 m in,
冷却,置恒温水浴锅中,加入新鲜配制的 5%纤维素
酶溶液,用量为 0
35 g, 搅拌, 酶解 45 min, 酶解温
度为 65
,酶解结束后加热回流提取 2 次, 每次 45
min, 收集提取液,滤过,定容至 500 mL,即得。
2
2
4
果胶酶酶解法 [ 7] : 称取过 14 目的人参粗粉
20 g,加入果胶酶 0
35 g, 同纤维素酶酶解法操作,
即得。
2
2
5
混合酶酶解法 [ 7] : 称取过 14 目的人参粗粉
20 g,加入纤维素酶与果胶酶各 0
175 g, 同纤维素
酶酶解法操作, 即得。
2
2
6
提取方法比较: 以上样品制备供试品溶液,
各重复测定 3次,结果见表 1。
表 1
各提取方法的对比试验结果( x
s, n= 3)
Table 1
Comparison of extracting methods ( x
s, n= 3)
提取方法 人参皂苷 Rg1 提取率/ ( mg
g- 1 )
水提法



1
17
0
052
醇提法



1
55
0
054
纤维素酶酶解法 1
58
0
050
果胶酶酶解法
1
26
0
057
混合酶酶解法
1
39
0
055


结果表明, 不同方法提取人参皂苷 Rg1 提取率
依次为纤维素酶酶解法> 醇提法> 混合酶酶解法>
果胶酶酶解法> 水提法。因此在本实验条件下提取
人参皂苷 Rg1 的最优方法为纤维素酶酶解法。
2
3
纤维素酶酶解法工艺条件的优选
2
3
1
提取流程:称取人参 20 g 加水浸泡 2 h后,
加热煮沸 5 min,冷却,降温至约 40
, 置恒温水浴
锅中, 酶解, 酶解结束后加热回流提取 2次, 每次
1 h,收集提取液,滤过,即得。
2
3
2
正交试验优化酶解工艺条件:影响人参皂苷
Rg1 提取率的因素有酶解时间、酶用量、酶解温度、
pH 值、提取次数等。根据文献报道[ 7-8]和预试验,其
中酶解时间、酶用量、酶解温度对人参皂苷 Rg1 提取
率影响较大。因此以样品中人参皂苷 Rg1 提取率为
评价指标,采用正交设计试验优选纤维素酶酶解人参
的最佳提取工艺。因素水平设置见表 2,正交试验安
排及结果见表 3、4,方差分析结果见表 5。
表 2
因素与水平
Table 2
Factors and levels
水平 因
素
A 酶解时间/m in B酶解温度/
C酶用量/ %
1 30 45 0
8
2 45 55 1
1
3 60 65 1
4
表 3
正交试验安排及结果
Table 3
Arrangement and results of orthogonal design
试验号 A B C D(空白) 人参皂苷 Rg1 提取率/
( m g
g- 1)
1 3 3 1 3 1
45
2 1 2 3 3 1
72
3 3 1 3 2 2
06
4 1 3 2 2 1
52
5 2 3 3 1 1
60
6 3 2 2 1 1
85
7 2 2 1 2 1
63
8 2 1 2 3 1
95
9 1 1 1 1 1
61
表 4
多水平均值检验
Table 4
Multiple comparison of levels
因素( I) 因素( J) 均数差( I- J) 标准差 P
A ( 1) A ( 2) - 0
110 0 0
035 6 0
091
A ( 3) - 0
170 0 0
035 6 0
041
A ( 2) A ( 3) - 0
060 0 0
035 6 0
234
B ( 1) B ( 2)
0
140 0 0
035 6 0
059
B ( 3)
0
350 0 0
035 6 0
010
B ( 2) B ( 3)
0
210 0 0
035 6 0
028
C ( 1) C ( 2) - 0
210 0 0
035 6 0
028
C ( 3) - 0
230 0 0
035 6 0
023
C ( 2) C ( 3) - 0
020 0 0
035 6 0
631
表 5
方差分析
Table 5
Analysis of variance
方差来源 离差平方和 自由度 均方差 F值 显著性
A 0
045 2 0
022 11
737 P > 0
05
B 0
186 2 0
093 49
000 P < 0
05
C 0
097 2 0
049 25
632 P < 0
05
误差 0
004 2 0
002


结果表明,因素 A对人参皂苷 Rg1 提取率无显
著性影响, B、C因素具有显著性影响,各因素对人参
皂苷 Rg1 提取率影响的主次关系为 B> C> A。考
虑生产成本, 实验条件下优化水平的最佳组合为
A 3B1C3 , 即酶解时间 60 m in, 纤维素酶用量为

1281
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
1
4% ,酶解温度为 45
。
2
3
3
验证试验:分别按上述酶解最优提取工艺条
件提取人参皂苷 Rg1 ,重复进行 3次平行试验。结
果,人参皂苷 Rg1 提取率为( 2
05
0
047) mg/ g,
与正交试验最大值 2
06 mg/ g 接近。
3
讨论
本实验结果提示,与传统水提和醇提相比,采用
纤维素酶酶解提取人参皂苷 Rg1 提取率更高, 溶剂
用量减少, 对设备无特殊要求, 适合于工业化大生
产。酶解法提取最佳工艺条件为, 酶解时间 60
min, 纤维素酶用量为 1
4 % , 酶解温度为 45
。
酶解后用水回流提取 2次, 每次 1 h。优化后的提取
工艺稳定、可行。
参考文献
[ 1]
黎
阳,张铁军,刘素香, 等
人参化学成分和药理研究进展
[ J]
中草药, 2009, 40( 1) : 164-附 2

[ 2]
陈琳琳,贾韦国,苏
华等
人参用于治疗勃起障碍的最新机
制及临床研究[ J]
现代药物与临床, 2010, 25( 2) : 116-120

[ 3]
陈
栋, 周永传
酶法在中药提取中的应用和进展[ J]
中国
中药杂志, 2007, 32(2) : 99-101

[ 4]
杨皓明,齐
崴,何志敏,等
复合酶法提取丹参中丹参素的研
究[ J]
中草药, 2008, 39( 8) : 1161-1164

[ 5]
宋宏新,刘
静,张彦娟
半仿生酶法提取三七皂苷工艺研究
[ J]
中草药, 2009, 40( 6) : 905-907

[ 6]
孙
艳,张卫同,陈海滨,等
HPLC法测定参芪颗粒中人参皂
苷 Rg1 和 Re [ J ]
中草药, 2007, 38( 7) : 1009- 1010

[ 7]
郭建鹏,张红梅
高山红景天酶解工艺研究 [ J ]
中国中药杂
志, 2007, 32( 17) : 1817-1819

[ 8]
李元波,殷辉安,唐明林,等
复合酶解法提取三七皂苷的实验
研究[ J]
天然产物研究与开发, 2005, 17( 4) : 488-492

[ 9]
傅博强,谢明勇,周
鹏, 等
纤维素酶法提取茶多糖[ J]
无
锡轻工大学学报, 2002, 21( 7) : 4

清咽滴丸极性成分的高效液相指纹图谱及其模式识别的研究
张铁军1 ,韩世柳2 ,田成旺1 ,朱宏吉2*
( 1
天津药物研究院,天津
300193; 2
天津大学化工学院, 天津
300072)
摘
要: 目的
研究清咽滴丸的质量控制方法。方法
采用高效液相色谱建立了清咽滴丸极性部分的 H PLC 的指
纹图谱, 收集了不同批次的 12 批产品进行测定,并使用主成分分析对指纹图谱进行了模式识别研究。采用 H PLC-
DAD 技术进行了药材与制剂的相关性分析。结果
通过主成分分析可知, 甘草苷为其中比较重要的指标。相关
性研究表明,所确定的共有峰中有 6 个色谱峰来自甘草, 5 个色谱峰来自诃子。结论
此方法可较系统地用于清咽
滴丸的质量控制。
关键词:清咽滴丸; 指纹图谱;主成分分析
中图分类号: R286
02


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 08-1282-04
HPLC Fingerprint and chemical pattern recognition method of polar components
in Qingyan Dropping Pill
ZHANG T ie- jun1 , HAN Sh-i liu2 , T IAN Cheng-w ang1 , ZHU Hong- ji2
( 1
T ianjin Inst itute of Pharmaceutical Resear ch, T ianjin 300193, China; 2
Schoo l o f Chemical Eng ineering
and Techno lo gy , T ianjin Univer sity, T ianjin 300072, China)
Abstract: Objective
T o establish a method for the quality cont ro l of Qingyan Dropping Pill
Methods
An HPLC method w as developed to establish the f ing er print of polar components in Qingyan Dr opping
Pill, and 12 samples f rom various batches w ere analy zed. Furthermo re, principal component analysis
( PCA) w as used to dif ferent iate and evaluate the w hole f ingerprints
T he relat ionship betw een Qingyan
Dropping Pill and their original her bs w ere invest igated w ith HPLC-DAD method
Results
T he result
show ed that liquir it in w as the key component of quality cont ro l
Among the chromatogr aphic peaks, there
w ere six chromatog raphic peaks coming f rom Gly cy r rhiz ae Radix et Rhiz oma; F ive chromatographic
peaks coming from Chebulae Fr uctus
Conclusion
This method can be used as quality contr ol for Qingyan
Dropping Pill

Key words: Qingyan Dr opping Pill; f ingerprint ; principal component analysis ( PCA)

1282
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 2009- 10-15