全 文 ：高效液相色谱法同时测定槲寄生中 4 种黄酮
王欣杨1 ,于治国1 ,高晓霞1 ,宋 　爽1 ,李颖辉2 ,赵云丽1
①
(11 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 　110016 ; 21 辽宁省医药实业有限公司 ,辽宁 沈阳 　110005)
摘 　要 :目的 　建立同时测定槲寄生药材中高圣草素、槲皮素23 ,3′2二甲醚、商陆素和藿香黄酮醇量的反相高效液
相色谱法。方法 　固定相为 Diamonsil C18柱 (250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ,流动相为甲醇20. 1 %磷酸溶液 (40 ∶60)
(A)和乙腈 (B)梯度洗脱 ,体积流量为 1. 0 mL/ min ,柱温为 30 ℃,检测波长为 280 nm。结果 　在上述条件下测得
高圣草素、槲皮素23 ,3′2二甲醚、商陆素和藿香黄酮醇的质量浓度分别在 0. 041 2～0. 824、0. 007 6～0. 152、
0. 036 0～0. 720、0. 003 20～0. 064 0 mg/ mL 时与色谱峰面积之间线性关系良好 ;平均回收率分别为 97. 63 %( RSD
为1. 6 %) ,96. 4 %(RSD 为 1. 9 %) ,97. 5 % ( RSD 为 1. 7 %) ,98. 1 %( RSD 为 2. 5 %) 。结论 　该方法准确、灵敏 ,可
作为槲寄生药材质量控制的一个有效方法。
关键词 :槲寄生 ;高圣草素 ;槲皮素23 ,3′2二甲醚 ;商陆素 ;藿香黄酮醇 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0135 - 03
　　槲寄生为桑寄生科植物槲寄生 V iscum colora2
t um ( Komar1 ) Nakai 的干燥带叶茎枝 ,其味苦、平 ,
归肝、肾经 ,有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎作用[1 ] 。
现代药理研究发现槲寄生在治疗心血管系统疾病、
抗肿瘤等方面疗效较好 ,其中黄酮类化合物发挥重
要作用[2 ,3 ] 。如高圣草素具有抑制血小板聚集和增
加冠脉流量的作用[4 ] ,且能够抗真菌、抑制子宫颈癌
细胞的生长[5～7 ] ; 商陆素有抗氧化、细胞毒素活
性[ 8 ] ;藿香黄酮醇有抗真菌活性[9 ] 。鉴于黄酮类化
合物是槲寄生发挥药效的主要成分 ,对该类成分在
药材中的量进行研究的重要性就显得尤为突出。目
前关于槲寄生药材的定量测定 ,《中国药典》2005 年
版以齐墩果酸为对照进行薄层色谱扫描测定 ,其他
文献报道[10 ,11 ] 以单一黄酮苷成分或某类成分总量
控制槲寄生药材的质量。本研究采用高效液相色谱
法 ,首次对槲寄生中高圣草素、槲皮素23 ,3′2二甲醚、
商陆素和藿香黄酮醇 4 种黄酮苷元量进行同时测
定。该方法具有灵敏度高、结果准确的特点 ,可用于
槲寄生的质量控制。
1 　仪器与试药
高效液相色谱仪 (日本岛津公司) ,包括 L C —
10A Tvp 输液泵 , SPD —10Avp 可变波长紫外检测
器 ; H T —130 柱温箱 ;N2010 色谱数据处理系统。
高圣草素 (赵云丽惠赠 , H PL C 归一化质量浓
度 98. 5 %) ;槲皮素23 ,3′2二甲醚、商陆素和藿香黄
酮醇 (自制 , H PL C 归一化质量浓度 98. 5 %) ,以上
标准物质均通过核磁共振和质谱数据确证。槲寄生
药材部分采购于全国各地药材公司或药店 ,部分采
集于长白山余脉张广才岭 (经沈阳药科大学孙启时
教授鉴定为正品) 。甲醇 (色谱纯) ,乙腈 (色谱纯) ,
二次蒸馏水 (自制) ,磷酸 (分析纯) 。
2 　方法与结果
2. 1 　色 谱 条 件 : 色 谱 柱 为 Diamonsil C18 柱
(250 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;流动相 : A 相为甲醇2
0. 1 %磷酸溶液 (40 ∶60) ,B 相为乙腈 ;洗脱程序 :
0～5 min ,25 %B ;5～25 min ,25 %B～55 %B ;体积
流量 :1. 0 mL/ min ;柱温 :30 ℃;检测波长 :280 nm ;
进样量 :10μL 。各峰与相邻峰的分离度均大于1. 5 ,
理论板数按藿香黄酮醇峰计算不低于 3 000。供试
品及对照色谱图见图 1。
2. 2 　对照品溶液的制备 :取高圣草素、槲皮素23 ,3′2
二甲醚、商陆素、藿香黄酮醇适量 ,精密称定 ,置同一
10 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得
混合对照储备液 (高圣草素 2. 06 mg/ mL 、槲皮素2
3 ,3′2二甲醚 0. 380 mg/ mL 、商陆素 1. 80 mg/ mL 、
藿香黄酮醇 0. 160 mg/ mL) 。
精密量取混合储备液 1. 0 mL ,置 10 mL 量瓶
中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得混合对照溶液。
2. 3 　供试溶液的制备 :取槲寄生药材粉末 (过 80 目
筛)约 4. 0 g ,精密称定 ,加乙醇 100 mL 回流 2 h ,滤
·531·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203225
　　基金项目 :国家自然科学基金 (30901967) ;辽宁省博士科研启动基金 (20091078) ;辽宁省教育厅科学技术研究项目 (2009A684)
　　作者简介 :王欣杨 (1980 —) ,女 ,黑龙江人 ,沈阳药科大学药物分析专业硕士研究生 ,主要进行中药提取及质量控制研究。
Tel : (024) 23986295 ,13080718807 　E2mail :4150609wang @sohu. com
　　3 通讯作者　赵云丽　Tel : (024) 23986295 　E2mail : Yunli76 @163. com
12高圣草素　22槲皮素23 ,3′2二甲醚　32商陆素　42藿香黄酮醇
12hmoeriodictyol 　22quercetin 3 ,3′2dimet hyl et her 　32omuine
　42pachypodol
图 1 　对照品溶液( A)和供试溶液( B)色谱图
Fig. 1 　Chromatograms of reference solution ( A)
and sample solution ( B)
过 ,收集滤液 ,残渣用乙醇洗涤 3 次 ,每次 5 mL ,合
并洗液与滤液 ,减压回收乙醇 ,蒸干 ;残渣加氯仿 5
mL 溶解 ,置预处理过的聚酰胺小柱 (60～80 目 ,5
g ,内径 0. 9 cm) ,用水 50 mL 洗涤 ,弃去洗液 ,再用
甲醇 50 mL 洗脱 ,收集洗脱液 ,回收甲醇至干 ,残渣
用甲醇溶解并定量稀释至 2 mL ,摇匀 ,经 0. 45μm
微孔滤膜滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2. 4 　标准曲线的制备 :精密量取混合储备液 0. 1、
0. 2、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 mL ,分别置 5 mL 量瓶中 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得系列标准溶液 ,分别进样
10μL ,以标准溶液浓度 ( X) 为横坐标 ,色谱峰面积
( Y)为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得高圣草素回归方程
为 : Y = 5. 41 ×106 X - 4. 92 ×104 ( r = 0. 999 4) ;槲
皮素23 ,3′2二甲醚回归方程为 : Y = 2. 94 ×106 X -
5. 41 ×103 ( r = 0. 999 0) ;商陆素回归方程为 : Y =
7. 20 ×105 X - 1. 42 ×104 ( r = 0. 999 0) ;藿香黄酮醇
Y = 4. 75 ×106 X - 4. 95 ×103 ( r = 0. 999 0) 。高圣
草素、槲皮素23 ,3′2二甲醚、商陆素、藿香黄酮醇分别
在 0. 041 2 ～ 0. 824、0. 007 6～ 0. 152、0. 036 0～
0. 720和 0. 003 2～0. 064 0 mg/ mL 呈良好线性关系。
2. 5 　精密度试验 :精密吸取同一对照品溶液 10
μL ,重复进样 6 次 ,记录色谱图 ,测量峰面积 ,4 种黄
酮量的 RSD 分别为 0. 8 %、0. 9 %、1. 2 %、1. 3 % ,表
明色谱系统重现性良好。
2. 6 　重现性试验 :按“2. 3 供试溶液的制备”项下方
法平行制备 6 份供试品溶液 (寄生于杨树 ,产地 :延
吉) ,进样 ,测定峰面积 ,计算质量分数 ,4 种黄酮的
RSD 分别为 1. 7 %、1. 9 %、1. 9 %、1. 8 % ,表明方法
精密度良好。
2. 7 　稳定性试验 :取新制备的同一份供试品溶液 ,
分别在室温放置 0、1、2、4、8、12 h 后进样 ,记录色谱
图 ,测量峰面积 ,4 种黄酮量的 RSD 分别为 1. 5 %、
1. 8 %、1. 4 %、1. 2 % ( n = 6) ,结果表明供试溶液在
12 h 内稳定。
2. 8 　加样回收率试验 :称取已知量的槲寄生样品 (寄
生于杨树 ,产地 :延吉) 9 份 ,每份 2. 0 g ,精密称定 ,分
别精密加入混合对照品溶液 0. 5、1. 0、1. 5 mL ,每个
样品平行 3 份 ,按“2. 3”项下的方法操作 ,在上述色谱
条件下进样分析 ,计算高圣草素、槲皮素23 ,3′2二甲
醚、商陆素和藿香黄酮醇的量 ,并根据加入量计算回
收率 ,结果平均回收率分别为 97. 63 % ( RSD 为
1. 6 %) , 96. 4 % ( RSD 为 1. 9 %) , 97. 5 % ( RSD 为
1. 7 %) ,98. 1 %(RSD 为 2. 5 %) 。
2. 9 　样品测定 :取不同寄主和产地的样品 ,按“2. 3 供
试溶液的制备”项下的方法操作 ,精密取供试溶液 10
μL 进样分析 ,以外标法计算各成分的量 ,结果见表 1。
表 1 　样品测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of samples ( n = 3)
样品来源
质量分数/ (mg ·g - 1)
高圣草素
槲皮素23 ,
3′2二甲醚 商陆素 藿香黄酮醇
寄主 桦树　 0. 029 0 0. 007 1 0. 030 3 0. 007 3
榆树　 0. 101 0. 003 3 0. 033 4 0. 003 2
梨树　 0. 038 5 n. d. 0. 035 1 0. 007 4
椴树　 0. 046 8 0. 002 4 0. 033 0 0. 007 8
杨树　 0. 098 3 0. 019 7 0. 107 0. 008 2
产地 河北　 0. 060 2 0. 005 1 0. 029 8 0. 004 6
黑龙江 0. 101 n. d. n. d. n. d.
新疆　 0. 037 2 0. 007 0 0. 027 1 0. 011 2
内蒙古 0. 065 4 0. 006 8 0. 023 3 0. 003 2
唐山　 0. 039 7 0. 017 1 0. 034 2 0. 010 0
上海　 0. 065 4 0. 008 8 0. 023 3 0. 003 2
宾县　 0. 038 9 0. 008 0 0. 035 5 0. 007 5
沈阳　 0. 075 5 0. 095 0. 034 0 0. 006 5
鞍山　 0. 197 n. d. n. d. n. d.
辽宁　 0. 039 0 0. 010 3 0. 020 6 0. 005 9
　　n. d. 代表低于定量限 ,未能检测到
n. d. not detected below quantitative limit
3 　讨论
3. 1 　流动相的选择 :分别对甲醇2水、甲醇2水2磷酸、
乙腈2水、乙腈2水2磷酸、乙腈2甲醇2磷酸的等度与梯
度条件进行考察 ,结果表明以乙腈2甲醇2磷酸梯度洗
脱系统色谱峰峰形好 ,柱效高 ,可达到理想的分离度。
3. 2 　检测波长的选择 :对待测成分进行了紫外扫
·631· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
描 ,在 280 nm 时 ,4 个指标成分有最大吸收 ,且干扰
成分吸收较小 ,因此选择该波长为检测波长。
3. 3 　柱温的选择 :在选择柱温方面 ,分别选择了
25、30、35 ℃的柱温进行比较 ,通过对比各种柱温的
色谱图发现在 30 ℃的柱温下有较好的峰形。所以
选择了 30 ℃的柱温进行 HPL C 分析。
3. 4 　样品提取条件的选择 :对提取方式 (煎煮、回流
和超声)和提取溶媒 (水、不同浓度的甲醇和乙醇溶
液)进行同时考察 ,确定乙醇回流提取效果最好。但
存在较多干扰峰 ,且本底高 ,因此对样品进一步处
理。考虑所测成分均为黄酮类化合物 ,而聚酰胺对
该类化合物有双重色谱作用 ,因此样品萃取后经聚
酰胺柱色谱 ,结果显示干扰峰少 ,本底有所降低 ,分
离度理想。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20051
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肿节风中落新妇苷及柚皮苷的 HPLC分析
李可强1 ,张广财2 ,宋宇宁1 ,张振秋2
①
(11 辽宁省中药研究所 ,辽宁 沈阳 　110161 ;21 辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连 　116600)
摘 　要 :目的 　采用 HPLC 法测定中药材肿节风中黄酮类成分落新妇苷及柚皮苷的量。方法 　采用 Diamonsil C18
色谱柱 (200 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;以乙腈 (A)20. 1 %磷酸水溶液 (B) 水溶液为流动相 ,采用梯度洗脱 :0～10 min ,
A2B (10 ∶90) ;10～25 min ,A2B (10 ∶90) →A2B (15 ∶85) :25～35 min ,A2B (15 ∶85) →A2B (20 ∶80) →B 保留 15
min ;体积流量采用程序控制 0～10 min ,0. 5 mL/ min ;10～25 min ,0. 5 →0. 75 mL/ min ;25～35 min ,0. 7 →0. 8 mL/
min ;保留 15 min ;检测波长为 290 nm ;柱温 : 30 ℃。结果 　落新妇苷及柚皮苷的平均回收率分别为 97. 3 %、
95. 6 % ,RSD 分别为 2. 2 %、2. 3 % ;线性范围分别为 0. 028～0. 27μg ( r = 0. 999 6) ,0. 030～0. 29μg ( r = 0. 999 5) 。
结论 　该方法简便、灵敏、快速、准确、重现性好 ,为肿节风药材的质量控制及合理开发利用提供了科学依据。
关键词 :肿节风 ;黄酮 ;落新妇苷 ;柚皮苷 ;反相高效液相色谱
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0137 - 02
　　肿节风为金粟兰科植物草珊 S arcandra glabra
( Thunb1) Nakai 的全株 ,又名草珊瑚、九节茶、接骨金
粟兰等 ,其味苦、辛 ,性平 ,具有清热凉血、活血消斑、
祛风通络之功效 ,用于血热紫斑、紫癜 ,风湿痹痛 ,跌
打损伤[1 ] 。现代医药研究表明 ,肿节风全草含黄酮、
香豆素、有机酸及酚类等多种化学成分 ,具有抗菌、抗
炎、镇痛等药理活性[2 ] 。这些作用与肿节风的功效相
符 ,是临床应用的药理基础之一。目前对于肿节风的
定量测定报道多集中在香豆素类的异秦皮啶和有机
酸类的反丁烯二酸 2 种化学成分上[2 ,3 ] ,而对其黄酮
类成分的定量测定则未见报道。另一方面 ,目前国内
已有应用肿节风总黄酮制剂进行临床研究的报道[4 ] 。
因此 ,对肿节风药材中黄酮类成分进行定量分析也有
其必要性。为此 ,本实验首次建立了肿节风中黄酮类
成分落新妇苷及柚皮苷的 HPCL 分析方法 ,并对来自
全国 10 个不同收集地的肿节风药材样品进行了测
定。结果表明 ,该方法准确、简便、可靠 ,适用于肿节
风的定量分析 ,可为全面控制与评价其内在质量及药
·731·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203209
　　作者简介 :李可强 (1967 —) ,男 ,高级工程师 ,博士。　E2mail :sylkq @sina. com
　　3 通讯作者　张振秋　Tel : (0411) 87586058 　E2mail :zhangzhenqiu @sina. com