全 文 ：蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用
邢
伟1, 2 ,孔维涵1, 3 ,方步武1 * 
( 1
天津医科大学 药理教研室, 天津
300070; 2
天津医科大学总医院 药剂科, 天津
300052;
3
天津医院 临床药学室,天津
300070)
摘
要:目的
探讨蒿鳖养阴软坚方对牛血清白蛋白 ( BSA ) 免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用。方法
以 18 mg/
mL BSA 与等体积的弗氏不完全佐剂混悬液足跖皮下多点注射 5 次免疫大鼠后, 尾静脉攻击注射 BSA 生理盐水
(每次 2 mg / 0. 4 mL 递增至 3
4 mg / 0. 4 mL ) 15 次,每周 2 次, 制备肝纤维化模型;按体质量随机区组法分为模型
组,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量 ( 8
2、2
59、0
82 g / kg, 2
59 g / kg 为临床等效剂量) 组, 复方鳖甲软肝片组, 秋
水仙碱组,各治疗组均于造模结束后 ig 给药 ( 1 mL / 100 g) ,每日1 次,连续 2 个月,对照组和模型组分别 ig 等体积
蒸馏水。酶谱法检测肝组织基质金属蛋白酶2 和 9 ( MMP2、MMP9) ,荧光法测定血清丙二醛 ( MDA ) , 放免法
检测血清透明质酸 ( H A)、层黏连蛋白 ( LN )、 型胶原 ( C)、!型前胶原 ( PC! )。结果
蒿鳖养阴软坚方各剂
量均能显著降低肝组织羟脯氨酸 ( Hyp)、MM P2 及 MMP9、肝纤维化程度、血清 HA、LN、 C 水平 ( P< 0
05) ,
其高、中剂量能明显降低血清 MDA 水平 (P < 0
05)。结论
蒿鳖养阴软坚方对 BSA 免疫性肝纤维化大鼠具有治
疗作用,抗脂质过氧化与降低 MM P2 及 MMP9 为其部分作用机制。
关键词:蒿鳖养阴软坚方; 牛血清白蛋白; 肝纤维化; 基质金属蛋白酶2; 丙二醛
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2010) 10 1667 06
Therapeutic effects of Haobie Yangyin Ruanjian Prescription on immunity hepatic fibrosis rats
XING Wei1, 2 , KONG Weihan1, 3 , FANG Buwu1
( 1. Department of Pharmacolog y, T ianjin Medical U niversit y, T ianjin 30070, China; 2. Depa rtment of Pharmacy,
Gener al H ospital of T ianjin Medical Univer sity, T ianjin 300052, China; 3. Depar tment of Clinical
Pharmacy , T ianjin Hospital, T ianjin 300070, China)
Abstract: Objective
To explor e the therapeut ic effect o f Haobie Yangyin Ruanjian Prescript ion
( HYRP) on immunity hepat ic f ibro sis rat caused by bovine ser umalbumin ( BSA ) immunolo gic injury.
Methods
T en r ats w ere taken random ly as normal control, others w ere immuno logically sc injected at sev
eral po ints of foo t pad w ith BSA 18 mg/ mL suspended w ith Freund∀s incomplete adjuvant fo r 5 t imes, then
BSA in NS ( 2 mg/ 0. 4 mL gr adually increased to 3. 4 mg/ 0. 4 mL) w as injected into tail vein for 15 t imes,
tw o t imes per w eek, hepat ic f ibr osis w as induced successfully. Af ter that the rats w er e divided by random
ized block o f body w eight into model contr ol, high ( 8. 2 g / kg) , middle ( 2. 59 g / kg, equivalency to clinical
therapeutic dose) , and low ( 0. 82 g/ kg ) do se gr oups of HYRP, compound recipe o f Biejia Ruangan T ablet
group, colchine group, and then ig adm inisted corresponding drugs ( 1 mL/ 100 g ) after model established,
once a day for 2 months; While normal control and model control w ere given distilled w ater ( 1 mL/ 100 g)
instead. M atr ix metallopro teinase2, 9 ( MMP2 and MMP9) in liv er w ere determined w ith gelatin
zymography , serum malondialdehyde ( MDA ) w ith f luor ospect ropho tometr y, serum hyaluronic acid
( HA) , laminin ( LN) , colleg en type IV ( IVC) and pr ecollagen type ! ( PC !) w ith r adioimmunoassay.
Results
Groups o f 0. 82, 2. 59, and 8. 2 g/ kg of HYRP could reduce the level o f hepat ic hydro xypro line
( Hyp) , MMP2, MMP9, hepat ic fibrosis degree, serum HA, LN, and IVC signif icant ly ( P< 0
05) ,
2. 59 and 8. 2 g/ kg groups of HYRP could low er MDA remarkably ( P< 0
05) . Conclusion
HYRP has
therapeutic effect on hepat ic f ibro sis r at caused by BSA immunolog ic injury, one of its mechanisms may be
ant iper oxidat ion o f lipid and decrease in MMP2 and MMP9.
Key words: Haobie Yangy in Ruanjian Pr escription ( HYRP) ; bov ine serum album in ( BSA) ; hepatic
fibrosis; matr ix metallopro teinase2 ( MMP2) ; malondialdehyde ( MDA)
#1667#中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091224





















基金项目:国家自然科学基金面上项目 ( 30772856) ; 天津市应用基础研究计划重点资助项目 ( 06YFJZJC 02900)作者简介:邢
伟,男,河北省廓坊市人,硕士,天津医科大学总医院药师,主要从事中药药理学研究。
T el : ( 022) 60363379
Em ail: xingw ei530@ 163. com
* 通讯作者
方步武
Email: f angdch@ yahoo. com. cn


许多慢性肝脏疾病均可引起肝纤维化, 其中免
疫因素发挥了重要作用。即使在酒精性肝炎和肝硬
化,也有 58% ~ 60% 患者被检测出循环免疫复合
物 ( CIC) [ 1] ;慢性活动型肝病患者体液免疫异常亢
进,过多的脂多糖 ( LPS) 等可封闭 Kupf fer 细胞
( KC) 的功能;适当大小的免疫复合物 ( IC) 可沉积
于肝脏引起炎症反应,若 KC 吞噬功能障碍, 则炎症
持续及慢性化, 而形成肝纤维化。慢性肝病常见证
型之一是阴虚血瘀[ 2] ,其活动期则又常伴血热毒蕴。
慢性活动型肝病病情较重、治疗较难、预后较差, 但
未见针对阴虚血瘀毒蕴证型的上市药物。以往研究
表明,养阴活血合剂对免疫性肝纤维化有一定的预
防作用[ 35]。故本研究采用由青蒿、鳖甲、生地、丹
参、虎杖、白花蛇舌草等组成的具有养阴活血、凉血
解毒功效的蒿鳖养阴软坚方, 在牛血清白蛋白
( BSA) 免疫性肝纤维化形成后用药, 评价其对免疫
性肝纤维化的治疗作用, 并初步探讨其作用机制, 为
其应用及研发提供实验依据。
1
材料
1
1
实验动物: SPF 级 Wistar 大鼠, 317 只, 分 5
批 (分别为 55、60、60、62、80 只) 购买,第 1 批雄鼠
多 1只,第 2、5批雌雄各半, 第 3批均雄性, 第 4 批
均雌性,体质量 100~ 140 g, 由军事医学科学院实
验动物中心提供, 动物许可证: SCXK(军 ) 2002
001,饲养于天津医科大学实验动物中心, 室温 20~
22 ∃ , 24 h 昼夜节律。实验前大鼠适应环境 3 d, 自
由进食饮水。
1
2
药物:根据正交试验和药理试验筛选结果, 蒿
鳖养阴软坚方中含丹酚酸 B ( 5
91 % 0
17) mg/ g、
大黄素 ( 4
09 % 0
13) mg/ g 和虎杖苷 ( 3
69 %
0
03) mg/ g。采用水煮醇提法及中试生产规模制
备成原料药粉, 用前配成混悬液。复方鳖甲软肝片:
内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司产品, 批号
20080206。秋水仙碱: Sigma 公司产品。
1
3
主要试剂: BSA: Fraction V, roche 735108 产
品,分装。弗氏不完全佐剂: 羊毛脂 50 g、液体石蜡
100 mL (化学纯, 天津化学试剂二厂) , 加热至
70 ∃ 混匀, 高压灭菌。L羟脯氨酸 ( H yp) : 电泳
纯,上海康达氨基酸厂。放免试剂盒: 透明质酸
( HA)、 型胶原 ( C)、!型前胶原 ( PC!)、层黏
连蛋白 ( LN) ,均为北京北方生物技术研究所产品。
蛋白定量试剂盒: 天根生化科技(北京)有限公司。
凝胶配制试剂盒: 江苏碧云天生物技术研究所。生
物染色剂:丽春红 S, 上海三爱思试剂有限公司; 维
多利亚蓝 B,华东师范大学化工厂。
1
4
主要仪器: VIS & 7220 紫外可见分光光度计,
北京瑞利分析仪器公司; RF & 510 型荧光分光光度
计,日本岛津;低温高速离心机, eppendo rf 产品; 小
型电泳仪、垂直电泳槽、凝胶分析仪, 均为 BIORAD
产品。
2
方法
2
1
分组、模型制备及给药: 每批随机取 2只大鼠
(雌雄各 1只) 为对照组, 其余大鼠均按文献方法造
模[ 3 ] :以 9 mg / mL BSA 弗氏不完全佐剂乳剂每次
每只 0
5 mL 足垫皮下多点注射以致敏动物, 共 5
次,第 1、2次间隔 2 周, 其余间隔 1 周; 末次致敏注
射后 1周,采血,以琼脂双向扩散法测血清中抗 BSA
抗体,结果阳性者进入实验。每只大鼠 sc 0. 05 mg/
mL 肾上腺素 0. 3~ 0. 4 mL,尾静脉攻击 iv BSA生理
盐水稀释液 18 mg/ mL,每次每只剂量由 2 mg ( 0. 4
mL) 递增至 3. 4 mg ( 0. 4 mL) ,每周 2次,共 15 次。
其后随机取 6只留肝组织,作 HE 染色和 Hyp检测,
证实肝纤维化形成 ( 6只模型动物中1期肝纤维化的
有 1只大鼠, 4期肝纤维化的有 5只大鼠,肝纤维化计
分为 23
08 % 10
17,说明模型成功)。将造模大鼠按
体质量随机区组法分 6组:模型组,蒿鳖养阴软坚方
高、中、低剂量组,复方鳖甲软肝片组,秋水仙碱组,每
批造模大鼠被分至各组的例数基本相同,剂量分别为
蒿鳖养阴软坚方 8
2、2
59 (临床等效剂量)、0
82 g/
kg,复方鳖甲软肝片 0
55 g/ kg、秋水仙碱 0. 1 mg/
kg,用药量为 1 mL/ 100 g, ig 给药,每日 1次, 共 2个
月,至实验结束。模型组和对照组 ig 等体积蒸馏水。
末次给药后处死动物。
2
2
标本留取与指标观测
2
2
1
取材:大鼠称体质量,乙醇麻醉,下腔静脉取
血,分离血清, - 20 ∃ 保存。取肝,称质量; 取肝右
叶相同部位以 10% 甲醛缓冲溶液固定; 另一部分
肝入液氮速冻, 转入 - 80 ∃ 保存;其余肝以氯仿
甲醇 ( 2∋ 1) 脱水脱脂。
2
2
2
大鼠一般情况观察: 包括精神、活动、进食、
体质量等状况。
2
2
3
肝组织形态:石蜡切片, HE 染色,胶原染色
用新染法[ 6]并按表 1标准评定[ 7]。
2
2
4
Hyp 测定,采用 Jamall方法[ 8] ,用肝组织干粉。
2
2
5
血清中相关指标测定: HA、LN、 C、PC !
检测采用放免法, 按试剂盒说明书操作。
2
2
6
血清 MDA 测定:按 Yagi方法[ 9]测定。
2
2
7
肝组织基质金属蛋白酶2( MMP2)和基
#1668# 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
表 1
肝纤维化程度的分期和计分标准
Table 1
Criteria of staging and scoring
for hepatic fibrosis degree
分期 纤维化程度 计分
中央静脉
周窦周 (L )
汇管区
( P)
纤维间隔 (S)
数量( N) 宽度 (W)*
0 无 0 无 无 无 -
1 汇管区扩大 ,纤维化 1 限局、少数 扩大无隔 < 6/ cm 细
2


汇管区周围纤维化, 纤维
隔形成, 小叶结构保留
2


弥漫、多数


扩大有隔


> 6/ cm


疏松、宽


3


纤维隔伴小叶结构紊乱,
无肝硬化
3


-


肝硬化


肝硬化


致密、宽


4


早期肝硬化或肯定的肝
硬化
4


-


-

(2/ 3活检面积


计分: L+ P+ 2( N ) W) ; * 标本内仅一细纤维隔, W计分 0
5


S coring: L+ P+ 2( N) W)


* W scored 0. 5 if there is a thin f iber septum
质金属蛋白酶9 ( MMP9) 测定: 采用明胶酶谱
法[ 10] 。肝组织用 PBS 冰浴匀浆后离心, 用考马斯亮
蓝 G250法定量蛋白。配制 SDSPAGE 胶 (底物明
胶已加入) ,以每孔 50
g 蛋白量上样。电泳结束后,
凝胶经洗脱、孵育、考马斯亮蓝染色、脱色至显示出
MMP2 和 MMP9为位于蓝色背景上的透亮带。比
对标准蛋白, 为酶原型 MMPs。通过凝胶成像仪扫
描,用分析软件测定酶分解条带的亮度和面积,条带
酶解量= 条带面积) (条带灰度- 背景灰度)。
2
3
统计分析:采用 SPSS 15
0 统计软件;计量资
料以 x % s 表示, 采用单因素方差分析, 方差齐性时
用 T ukey HSD 检验, 方差不齐时用 Tamhane 检
验;偏态分布者用 KruskalWallis 及 MannWhit
ney U 检验; 单向有序的计数资料采用 Ridit 分析。
3
结果
3
1
大鼠一般情况及存活率:对照组大鼠生长、饮
食、活动、体质量状况良好,皮毛柔顺有光泽; 模型组
大鼠精神萎靡, 活动少,体质量减轻,肝脏指数增加,
皮毛松弛无光泽;各治疗组大鼠皮毛少光泽, 体质量
增加,一般状况改善。见表 2。第 1、2、3、4、5 批各
剩下 12、3、16、6、31只,其中第2批因最后无模型组
大鼠故废弃,故存活大鼠以 65 只计, 治疗前处死模
型组 6 只,对照组 10只,造模鼠存活率为 27
0%。
3
2
对大鼠肝组织中 Hyp 的影响:模型组肝组织
Hyp 水平显著高于对照组, 蒿鳖养阴软坚方各剂量
组及复方鳖甲软肝片组、秋水仙碱组 Hyp水平明显
低于模型组 ( P< 0
05)。见表 2。
3
3
对血清 MDA 的影响:模型组血清 MDA 水平
显著高于对照组,蒿鳖养阴软坚方高、中剂量组及秋
水仙碱组 MDA 水平明显低于模型组 ( P< 0
05)。
见表 2。
表 2
蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝质量、肝中 Hyp
和血清中 MDA 水平的影响 (x % s)
Table 2
Effects of HYRP on liver weight, Hyp in liver,
and MDA level in serum of hepatic fibrosis rat
( x% s)
组
别
剂量 /
( g# kg- 1 )
动物/
只
Hyp/
(mg # g- 1)
MDA/
( nmol# mL- 1 )
体质量 /
g
肝脏指数/
( g# kg- 1 )
对照 - 10 0
45 % 0
18 6
42 % 1
00 415
8% 130
4 31
4 % 4
0
模型 - 10 1
30 % 0
50* 8
97 % 1
58* 306
1% 51
5* 42
9 % 11
2*
蒿鳖养阴软坚方 8
2 9 0
62 % 0
18 ∗ 6
87 % 1
08∗ 402
8% 74
8 ∗ 39
3 % 8
9
2
59 9 0
63 % 0
20 ∗ 7
06 % 0
90∗ 407
3% 69
1 ∗ 37
2 % 3
7
0
82 9 0
72 % 0
20 ∗ 8
52 % 1
77 424
7% 64
1 ∗ 35
4 % 2
4
复方鳖甲软肝片 0
55 9 0
65 % 0
23 ∗ 7
51 % 0
94 385
1% 63
9 ∗ 36
0 % 3
2
秋水仙碱 0
000 1 9 0
56 % 0
20 ∗ 7
06 % 1
65∗ 430
8% 60
9 ∗ 31
8 % 2
8∗


与对照组比较: * P < 0
05;
与模型组比较: ∗P < 0
05


* P < 0
05 v s cont rol group;
∗P < 0
05 v s model group
3
4
大鼠肝组织形态变化
3
4
1
大体形态: 模型组大鼠肝表面亮度降低,颜
色灰暗,边缘较钝,质韧,剪切时有沙粒感;各治疗组
肝表面较光亮,质稍韧。
3
4
2
肝组织病理变化


( 1)胶原染色:对照组汇管区胶原纤维少。模型
组汇管区胶原纤维增多并向小叶内伸展形成多个大
小不等的假小叶; 各治疗组汇管区纤维组织增多并
向小叶内伸展,但多数未形成假小叶。见表 3,图 1。
表 3
蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化程度分期
及计分的影响
Table 3
Ef fects of HYRP on staging and scoring
of hepatic f ibrosis degree in rats
组
别 剂量/
( g # kg- 1)
动物/
只
肝纤维化程度分期/例
0 1 2 3 4
肝纤维化程度计分
( x % s)
对照 - 8 8 - - - - 0
00 % 0
00
模型 - 10 - 1 2 3 4* * 15
00 % 9
73* *
蒿鳖养阴软坚方 8
20 9 2 4 2 1∗ ∗ - 3
06 % 2
78∗ ∗
2
59 9 2 1 3 3∗ - 4
94 % 2
80∗
0
82 9 - 3 3 3∗ - 5
83 % 3
88∗
复方鳖甲软肝片 0
55 9 - 5 1 2 1∗ 8
56 % 8
94
秋水仙碱 0
000 1 9 - 3 4 2∗ 4
94 % 1
93∗ ∗


与对照组比较: * * P< 0
01


与模型组 (治疗后) 比较: ∗ P< 0
05
∗ ∗P < 0
01


* * P < 0
01 v s cont rol group


∗P < 0
05
∗ ∗P< 0
01 v s m odel group


(2) HE 染色:对照组肝组织结构正常,汇管区无扩
大,肝小叶结构完整,未见炎细胞浸润。模型组汇管区
扩大,充满纤维组织,炎细胞浸润,界板破坏,肝细胞坏
死,肝小叶结构破坏, 被纤维隔分割成肝细胞团;各治
疗组汇管区未见明显扩大,炎细胞浸润和纤维组织增
生少,界板完整,肝小叶结构破坏轻。见图2。
#1669#中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
图 1
大鼠肝组织胶原染色
Fig. 1
Rat hepatic tissue collagen staining
图 2
大鼠肝组织 HE 染色
Fig. 2
Rat hepatic tissue HE staining
3
5
对大鼠血清中肝纤维化标志物的影响: 模型组
血清 HA、LN 和 C 水平显著高于对照组, 治疗
组 HA、LN 和 C 水平明显低于模型组 ( P <
0
05)。各组间的血清 PC ! 水平未见统计学差异,
见表 4。
3
6
对大鼠肝组织 MMP2 和 MMP9 水平的影
响: 与对照组比较, 模型组大鼠肝组织 MMP2、
MMP9水平均显著升高; 与模型组比较, 各治疗组
MMP2、MMP9 均明显降低 ( P< 0
05)。见表 5,
图 3。
4
讨论


由于目前我国的慢性肝病主要由乙型和丙型病
毒性肝炎引起,其中免疫因素发挥了重要作用, 如慢
性活动期肝病患者体液免疫反应异常亢进, 甚至 B
细胞在 CCl4所致小鼠肝纤维化中也发挥重要作
用[ 1 1] ,故本研究采用 BSA 制备免疫性肝纤维化模
型,经肝组织形态学、肝 Hyp 和血清中肝纤维化标
志物等证实肝纤维化模型形成。该模型主要是由!
型变态反应引起的慢性炎症所致, 在其纤维化过程
中转化生长因子1 ( TGF1 ) 及其受体表达增加、
肝星状细胞 ( HSC) 增殖[ 12] ,造模结束后脂质过氧
化物增多。人血清白蛋白 ( HSA) 所致肝纤维化过
程中,尾静脉攻击注射中期 MMP2 和 MMP9 基
因表达达峰值,造模后 1
5和 3 个月二者表达仍均
#1670# 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
表 4
蒿鳖养阴软坚方对大鼠血清中肝纤维化指标的影响 (x % s)
Table 4
Ef fects of HYRP on hepatic f ibrosis indices in serum of rats (x % s)
组别 剂量/ ( g # kg - 1 ) 动物/只 HA/ ( ng # mL - 1) LN/ ( ng# mL- 1 ) C/ ( ng# mL- 1 ) P C!/ ( ng# mL- 1 )
对照 - 10 135
41% 28
98 103
04% 10
58 3
84% 2
63 14
57 % 5
33
模型 - 10 246
16% 69
86* 180
16% 88
70* 9
33% 3
88* 20
73 % 9
26
蒿鳖养阴软坚方 8
2 9 158
78% 35
59 ∗ 111
64% 36
04 ∗ 4
93% 3
51∗ 14
97 % 5
60
2
59 9 145
23% 36
97 ∗ 98
48% 22
99 ∗ 6
18% 2
94∗ 16
06 % 2
84
0
82 9 161
18% 39
04 ∗ 114
03% 45
56 ∗ 5
97% 2
02∗ 13
67 % 3
29
复方鳖甲软肝片 0
55 9 163
18% 41
60 ∗ 131
30% 72
59 ∗ 4
01% 1
94∗ 15
56 % 8
77
秋水仙碱 0
000 1 9 172
35% 38
22 ∗ 115
33% 41
46 ∗ 4
56% 2
28∗ 16
72 % 9
66


与对照组比较: * P< 0
05;
与模型组比较: ∗P < 0
05


* P< 0
05 v s con tr ol group;
∗ P< 0
05 v s model g rou p
表 5
蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝 MMP2、
MMP9 酶解量的影响 ( x% s)
Table 5
Effects of HYRP on MMP2 and MMP9 enzy
molysis in liver of hepatic f ibrosis rats ( x% s)
组别
剂量/
( g # kg- 1)
动物/
只
MMP2
( ) 107 )
M MP9
( ) 107 )
对照 - 10 2
068 1 % 0
321 1 8
529 8 % 0
270 0
模型 - 10 4
116 9 % 0
190 5* 14
223 8 % 0
831 2*
蒿鳖养阴软坚方 8
2 9 2
013 3 % 0
212 1∗ 10
561 5 % 0
649 8∗
2
59 9 2
632 2 % 0
632 1∗ 10
597 4 % 0
719 2∗
0
82 9 2
484 9 % 0
127 2∗ 11
834 1 % 0
785 2∗
复方鳖甲软肝片 0
55 9 3
003 0 % 0
305 1∗ 10
570 1 % 0
562 6
秋水仙碱 0
000 1 9 2
125 1 % 0
129 8∗ 12
626 0 % 0
719 1∗


与对照组比较: * P< 0
05;
与模型组比较: ∗P < 0
05


* P< 0
05 v s con tr ol group;
∗ P< 0
05 v s model g rou p
1秋水仙碱组
2复方鳖甲软肝片组
3~ 5蒿鳖养阴软坚方
低、中、高剂量组
6模型对照组
7对照组
1colchicine group
2 compound recipe of Biejia Ruangan T ablet
group
3 & 5HYRP low , middle, an d hig h dose groups
6model group
7cont rol gr ou p
图 3
大鼠肝脏 MMP2、MMP9 酶解条带
Fig. 3
Enzymolysis band caused by MMP2
and MMP9 in rat liver
明显高于正常组[ 13] , 在 CCl4所致肝纤维化中呈类
似变化[ 1314]。本实验观察到 BSA 引起肝纤维化后
2个月, MMP2和 MMP9酶原水平皆明显高于对
照组,但活性酶的水解条带很弱, 此时反映活性氧
( ROS) 净效应的脂质过氧化物之一的 MDA 水平
仍明显升高,肝组织炎细胞浸润及肝细胞变性坏死,
表明慢性炎症仍存在, 炎性损伤引起 ROS 增加,
MMP2介导了 ROS 的效应,引起 HSC 增殖等[ 15] ,
故胶原蛋白显著增多。
本研究采用蒿鳖养阴软坚方于 BSA 引起大鼠
肝纤维化后治疗用药 2个月,能明显改善肝脏病理
变化,减轻肝纤维化程度分期和计分, 降低肝组织
Hyp及血中 HA、LN、 C 水平 ( P< 0
05) , 表明
蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化具有治疗作用,
且以 8
2、2
59 g/ kg (临床等效剂量) 的效果为佳,
其综合效应略优于复方鳖甲软肝片和秋水仙碱。
蒿鳖养阴软坚方能显著降低 MDA 水平,减轻
ROS 的效应,同时能降低 MMP2 及 MMP9水平,
且对主要由 HSC产生的 MMP2的影响更突出,系
列研究发现该方能抑制肝脏 平滑肌肌动蛋白 ( 
SMA) 表达, 在体外该方含药血清能抑制 HSC 增
殖及阻止 HSC 由 G 0 / G 1期进入 S 期, 表明蒿鳖养
阴软坚方可能通过减轻自由基损伤、减少 MMP2
产生、抑制 HSC 增殖及活化等,减少胶原蛋白、HA
等细胞外基质,其是否还通过增加 MMP13 等而起
作用有待进一步研究。
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当归多糖铁复合物在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内药动学比较研究
刘金玉1 ,张
玉2 , 王凯平1 *  ,李石军2 ,刘茂昌1 , 曾
芳1
( 1
华中科技大学同济医学院药学院,湖北 武汉
430030; 2
华中科技大学同济医学院协和医院 药剂科,湖北 武汉
430022)
摘
要:目的
比较当归多糖铁复合物 ( APIC) 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学差异, 为优化临床给
药方案提供参考。方法
采用低铁饲料并辅以定期放血法建立缺铁性贫血模型, 缺铁性贫血大鼠与正常大鼠分别
随机分为 APIC 低、中、高剂量 ( 5
83、8
75、17
5 mg/ kg) 组, ig 给药, 以原子吸收法测定各时间点血清铁浓度, 用
DAS 2
0 软件求算药动学参数,并采用 SPSS 13
0 软件对同剂量组的缺铁性贫血大鼠和正常大鼠的主要药动学参
数进行 t检验。结果
APIC 在两种不同生理状况下大鼠的药动学过程均符合二室模型, 3个剂量组的缺铁性贫血
大鼠的血清铁浓度在 4 h 以后均显著高于健康大鼠, 3个剂量组的 CL/ F、t1/ 2与正常组均有显著差异 ( P< 0
05) ,
但只有高剂量组的 t1/ 2 与正常组有显著差异。结论
APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学存在显
著差异,并且这种差异与剂量有一定的关系。
关键词:当归多糖铁复合物; 药动学; 缺铁性贫血
中图分类号: R285
61


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2010) 09 1672 05
In vivo pharmacokinetic comparison of Angelica sinensis polysaccharideiron complex
in irondeficiency anemia rats and normal rats
LIU Jinyu1 , ZHANG Yu2 , WANG Kaiping 1 , LI Shijun2 , LIU M aochang1 , ZENG Fang 1
( 1
School of Pharmacy, T ongji Medical Colleg e, H uazhong U niversit y of Science and Techno log y, Wuhan 430030, China;
2. Department of Pharmacy, Wuhan Union H ospital, T ongji Medical Colleg e, H uazhong Univ ersity of
Science and T echnolog y, Wuhan 430022, China)
Abstract: Objective
T o study the pharmacokinet ic dif ferences of A ng el ica sinensi s poly saccharide
iron complex ( APIC) in irondef iciency anem ia ( IDA) rats and no rmal rats. Methods
The IDA model rats
w ere established by feeding ir ondef iciency diet and periodic bleeding , IDA rats and normal rats w ere ran
dom ly dev ided into three g roups, respect iv ely . In APIC low , medium, and high ( 5. 83, 8. 75, and 17. 5
mg/ kg ) dosage gr oups, serum iron concentrat ion w as assayed by atomic absorpt ion spect rometry af ter ig
administ ration of A PIC, the pharmacokinetic parameters w ere analy zed by DAS 2. 0 sof tw are. T he stat ist i
cal test w as carr ied out by SPSS 13. 0 to compare the main pharmacokinet ic parameters ( ttest ) betw een
IDA rats and normal rats o f the same dosage. Results
T he concentrat iont ime curves o f APIC in all
groups w ere fit ted to tw ocompartment open model. M ar ked dif ferences of ir on concentrat ion in serum
were found 4 h af ter administ ration betw een IDA rats and normal rats, the serum iron concentrat ion in
IDA rats w as significant ly higher than that in normal rats ( P< 0
05) . In low , medium , and high dosage
groups t1/ 2 of the IDA rats w as significant ly longer than that o f the normal rats, but there w as marked
#1672# 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091222





















基金项目:湖北省自然基金重点项目 ( 2008CDA064)作者简介:刘金玉( 1985 & ) ,女,湖南衡阳人,硕士研究生,主要研究药物新剂型及其生物有效性。
T el : 15871397942
Email: cherrylan yu@ 163. com
* 通讯作者
王凯平
T el: ( 027) 63559222
Email: w kpzcq@ 163. com