全 文 ：,二甲基烯丙焦磷酸酯( DMAPP)的生物合成;
2)三萜环碳环系统的生物合成; 3)环上复杂的官能
化反应过程,最终形成完整的三萜皂苷分子 [ 17]。黄
芪甲苷、黄芪皂苷和黄芪皂苷的化学结构母核
都是环阿屯烷型的三萜皂苷, 只是后两者在糖上进
行了乙酰基取代,在碱性条件下可以转化为黄芪甲
苷。从表 2中可以看出, 年平均气温可能是影响环
阿屯烷型皂苷母核生物合成的关键酶的因素, 而年
平均无霜期则是影响母核乙酰化酶的关键因素。
参考文献:
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泽泻的双波长 HPLC指纹图谱研究
谢 普,毕开顺,俞 悦, 苏 丹,张天虹,陈晓辉* ∀
(沈阳药科大学药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 采用双波长 HPLC 法建立泽泻指纹图谱 ,为科学评价和控制泽泻的质量提供依据。方法 色谱柱
为 Kromasil C18 ( 250 mm # 4 6 mm, 5 m) ;流动相为乙腈水; 检测波长: 254 nm( 0~ 13 00 min) , 210 nm ( 13 01~
60 00 min) ; 体积流量: 1 0 mL/ min。结果 采用双波长对福建和四川两个产地 20 批泽泻进行指纹图谱研究, 分
别确定了 18 和 23个共有峰, 并指认其中 3 个色谱峰。结论 建立的双波长 H PLC 法色谱指纹图谱可以为泽泻药
材的鉴别和质量评价提供依据。
关键词:泽泻; 双波长;指纹图谱
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10171204
HPLCDualwavelength fingerprint of Alisma or ientalis
XIE Pu, BI Kaishun, YU Yue, SU Dan, ZHANG T ianhong , CHEN Xiaohui
( Schoo l of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical Univ ersity , Shenyang 110016, China)
Abstract: Objective The HPLC dualwavelength chromato graphic fingerprint w as established fo r
ev aluat ing and controlling the quality of A li sma or iental i s Methods Kromasil C18 ( 250 mm # 4 6 mm,
5 m) w as used w ith acetonit rilewater g radient elut ion, at flow rate of 1 0 mL/ m in T he detection w ave
∃1712∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
∀收稿日期: 20100305 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 20875064)作者简介:谢 普( 1985- ) ,男,湖南省常德市人,硕士研究生。 T el : ( 024)23986296 Email: xiepu@ yahoo cn
* 通讯作者 陈晓辉 T el: ( 024) 23986259 Email: cxh _syphu@ yahoo com cn
length w as 254 nm ( 0- 13 00 min) and 210 nm ( 13 01- 60 00 m in) Results Fingerprint o f 20 batches
of A . oriental i s f rom Fujian and Sichuan Provinces w as established, and 18 and 23 characterist ic peaks
w ere ident if ied, respectively, o f which three peaks w ere ident if ied Conclusion T he HPLC dual
wavelength chromatographic f ing erprint method established in this study could provide the evidence fo r
ident ificat ion and quality cont rol of A or iental i s
Key words: A l isma orientali s ( Sam ) Juzep ; dualwavelength; fingerprint
泽泻为泽泻科植物泽泻 A l isma or iental is
( Sam ) Juzep 的干燥块茎 [ 1]。首载于%神农本草
经&, 列为上品, 又名水泻,性味甘、寒,归肾、膀胱经,
具有利水、渗湿、泻热的功能, 用于小便不利、水肿胀
满、泄泻、尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高血脂等证。
产自福建、江西者称∋建泽泻(, 产自四川者称∋川泽
泻(。泽泻的化学成分含多种四环三萜、倍半萜、二
萜类化合物[ 2] ,主要成分为三萜类化合物, 其中 24
乙酰泽泻醇 A( 24acetate alisol A )具有利尿、降血
脂等活性, 泽泻醇 A( aliso l A)具有抗变态反应等作
用[ 3] , 23乙酰泽泻醇 B( 23acetate aliso l B)具有较
强的保肝作用[ 4] 。%中国药典&2005年版一部该品
种项下无测定项, 只有理化指标的鉴别。文献报道
采用测定 24乙酰泽泻醇 A、23乙酰泽泻醇 B 来评
价其质量优劣[ 5] 。指纹图谱可以综合反应药材中各
主要成分及相对量,能提供更全面丰富的质量评价
信息[ 69] 。许枬等[ 10] 对不同来源的泽泻药材指纹图
谱进行了初步研究, 确定了 7 个共有峰。刘洪昌
等[ 11]只建立了四川产泽泻药材的指纹图谱,确定了
2个色谱峰。本研究收集了 20批不同来源的泽泻,
其中 12批产地为福建, 8批产地为四川。采用双波
长 HPLC法分别建立了两个产地泽泻的色谱指纹
图谱,该方法准确、重现性好、操作简便,为泽泻的鉴
别和全面质量控制提供依据。
1 材料
SHIMADU LC ) 2010A 高效液相色谱仪,
CLASS ) V P 工 作 站, MET TLER T OLEDO
AB135 ) S 十万分之一天平。对照品:泽泻醇 A, 23
乙酰泽泻醇 B和 24乙酰泽泻醇 A 均为自制(采用
面积归一化法, 质量分数> 99 0%)。乙腈为色谱
纯,甲醇为分析纯,水为自制重蒸水。泽泻药材样品
购自福建、四川等地,经沈阳药科大学药用植物教研
室孙启 时教授鉴定 为泽泻 A li sma or iental is
( Sam ) Juzep 的干燥块茎, 样品产地见表 1。
2 方法与结果
2 1 检测波长的确定:本研究考察了 210 nm 和
254 nm单一波长检测结果。在210 nm检测时, 谱
表 1 泽泻样品的产地
Table 1 Origins of A orientalis
编号 产 地 编号 产 地
1 福建 11 福建∗
2 福建 12 福建+
3 福建, 13 四川
4 福建! 14 四川
5 福建− 15 四川,
6 福建 . 16 四川 .
7 福建 / 17 四川−
8 福建0 18 四川 .
9 福建1 19 四川 /
10 福建+ 20 四川0
图的前 13 min 不成峰型, 而 13~ 60 min 有大量的
色谱峰,见图 1A。在 254 nm 检测时,前 13 m in有
7个色谱峰, 而 13~ 60 min 只有少量的几个色谱
峰,见图 1B。因此本研究采用了双波长切换法, 在
0~ 13 00 min检测波长设定为 254 nm, 13 01 min
时将检测波长切换至 210 nm,并保持至色谱图记录
完成( 58 m in)。本研究采用的双波长切换法将两个
不同波长检测到的色谱信息记录在同一张色谱图
上,而且两波长检测到的色谱峰没有相互掩盖, 采集
的色谱峰丰富,更加全面地反映了泽泻的质量。
t/ min
图 1 210 nm波长(A)与 254 nm波长(B)检测泽泻样品色谱图
Fig 1 Chromatograms of 210 nm ( A) and 254 nm ( B)
wavelength of A. orientalis
2 2 色谱条件: Kr omasil C18色谱柱( 250 mm # 4 6
mm, 5 m) ; 流动相为乙腈水; 检测波长: 254 nm
∃1713∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
( 0~ 13 00 min) , 210 nm ( 13 01~ 60 00 min) ; 柱
温: 35 2 ;体积流量: 1 0 mL/ min;进样量: 10 L。
2 3 溶液的制备
231 对照品溶液的制备: 分别取泽泻醇 A、24乙
酰泽泻醇 A和 23乙酰泽泻醇 B对照品适量,精密称
定,加乙腈溶解并定容, 配制成质量浓度分别为
0637 0、0 470 0、0 526 0 mg/ mL 的混合对照品溶
液,摇匀,经 0 22 m微孔滤膜滤过,取续滤液备用。
2 3 2 供试品溶液的制备:取泽泻药材粉末(粉碎,
过 40 目筛) ,约 1 0 g,精密称定, 置锥形瓶中, 加入
甲醇 100 mL, 超声提取 30 min,提取液滤过, 回收溶
剂,甲醇溶解残渣并转移至 10 mL 量瓶中, 用甲醇
稀释至刻度,摇匀,经 0 22 m 微孔滤膜滤过, 取续
滤液备用。
2 4 方法学考察
2 4 1 精密度试验:取泽泻药材( No 8) ,制备供试
品溶液,在上述色谱条件下连续进样 6次,测定结果
表明各共有色谱峰与内参比峰( 10号色谱峰)的相
对保留时间和相对保留峰面积 RSD 均小于 3 0% ,
表明仪器精度良好。
2 4 2 重现性试验:取泽泻药材( No 8) ,制备供试
品溶液,平行制备 6份, 在上述色谱条件下测定, 结
果各共有色谱峰与内参比峰( 10号色谱峰)的相对
保留时间和相对保留峰面积 RSD均小于 2 5%, 表
明方法重现性良好。
2 4 3 稳定性试验:取泽泻药材( No 8) ,制备供试
品溶液,分别在 0、2、4、8、12 h在上述色谱条件下测
定,结果各共有色谱峰与内参比峰( 10号色谱峰)的
相对保留时间和相对保留峰面积 RSD 均小于
2 8% ,表明供试品在 12 h内稳定。
2 5 样品色谱指纹图谱的建立: 以鉴定的 20 批泽
泻药材为研究对象, 进行特征指纹图谱研究。在上
述色谱条件下分析, 记录色谱图。获得包括泽泻醇
A、24乙酰泽泻醇 A、23乙酰泽泻醇 B在内的 20多
个峰,从建泽泻和川泽泻图中分别选定 18 个和 23
个共有峰作为指纹图谱的特征峰,组成建泽泻和川
泽泻的指纹图谱。
2 6 系统聚类分析: 本研究应用 SPSS软件,对 20
个批次样品同时聚类分析,采用组间均联法, 以夹角
余弦作为样品相似性的测度。聚类分析结果将 20
批样品分为两类, 分类结果基本与产地相同, 除 J3
( No 3)外, 其余批次的建泽泻和川泽泻均分别聚为
同一类,川泽泻样品中, C3( No 15)的欧氏距离也与
其他批次相差较大。根据以上结果, 确定建泽泻 J3
( No 3)和川泽泻 C3( No 15)为非推荐品,其余各批
准均为推荐品。聚类谱系图见图 2。
图 2 聚类分析结果
Fig 2 Dendrogram of clustering analysis
2 7 特征图谱相似度评价: 结合聚类分析结果, 选
取福建和四川两产地共 18批推荐品,按产地分别建
立共有模式。将色谱图导入国家药典委员会推荐的
∋中药色谱指纹图谱相似度评价系统( 2004A )(, 生
成特征图谱和对照谱图,见图 3。
t/ min
a泽泻醇 A b24乙酰泽泻醇 A c23乙酰泽泻醇 B
aalis ol A b24 acetate alis ol A c23 acetate alis ol B
图 3 对照图谱(SA, SB) ,建泽泻( A)和川泽泻( B)
共有模式图谱
Fig 3 HPLC Specific chromatograms of reference
( SA and SB ) , A orientalis f rom Fujian (A)
and Sichuan (B) Provinces
∃1714∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
再将对照谱图和样品色谱图导入∋中药色谱指
纹图谱相似度评价系统( 2004B)(, 既可计算出样品
与对照谱图的相似度, 结果见表 2。相似度分析结
果与系统聚类分析结果一致, 2种方法得到了相互
验证。根据相似度和聚类分析结果确定相似度在
090以上的样品为推荐品, 0 90以下的为非推荐品。
表 2 相似度分析
Table 2 Analysis of similarity
编号 相似度 编号 相似度
1 0976 11 0 997
2 0993 12 0 975
3 0642 13 0 959
4 0983 14 0 941
5 0982 15 0 779
6 0975 16 0 984
7 0973 17 0 991
8 0974 18 0 994
9 0972 19 0 987
10 0980 20 0 924
3 讨论
3 1 内参照物的选择:泽泻药材主要含三萜类化合
物,以泽泻醇为主。其中泽泻醇 A 为其药理活性的
主要成分之一, 其量较高, 峰面积稳定, 出峰时间居
中,分离度较好,故选定泽泻醇 A 作为内参比峰。
3 2 聚类分析和相似度评价结果分析:泽泻药材中
化学成分复杂, 仅以单一成分控制其质量不够全面,
因此有必要建立其特征图谱[ 12]。本研究以各产地
的特征色谱峰为量化指标进行聚类分析,将共 20批
不同产地的泽泻样品分为推荐品和非推荐品 2类,
相似度评价结果和聚类分析结果基本一致, 2 种方
法得到了相互验证。
3 3 不同产地泽泻指纹图谱比较结果:建立的泽泻
指纹图谱显示,建泽泻有 18个共有峰,川泽泻有 23
个共有峰。川泽泻指纹图谱中 8、11、12、21和 23号
色谱峰均为川泽泻特有, 建泽泻指纹图谱中相同的
保留时间无峰,表明两产地泽泻中所含有效成分不
尽相同。建泽泻中的 5、13和 15号等色谱峰与川泽
泻中的 5、16和 18号等色谱峰保留时间相同,但峰
面积大小有明显差异, 表明两产地泽泻中含有的相
同有效成分量不同。
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不同水分处理对夏枯草花期生长和生理特性的影响
郭巧生* ∀ ,周黎君,武 征, 张志远
(南京农业大学 中药材研究所,江苏 南京 210095)
摘 要:目的 研究不同水分处理对夏枯草花期生长与生理的影响。方法 采用每天定时定量称其质量的方法处理
夏枯草植株,测定相关指标,结合统计方法进行分析比较。结果 随水分胁迫处理时间的延长,植株以 S2长势最好,
S3增量最大且抽薹数最多; 超氧化物歧化酶 ( SOD) 呈现出先上升后下降趋势,脯氨酸 ( Pro) 呈上升趋势; 相同处理时
间下,随水分胁迫梯度不同, SOD、丙二醛 ( MDA ) 与 Pro 呈先上升后下降趋势,并以 S2量最低; 可溶性糖量随逆境加
深而下降。结论 夏枯草保护酶与渗透调节物质是一个整体,当植株受到外界胁迫时,共同发挥保护与协调作用; 花
期夏枯草所需水分以 65%~ 70% 最有利于成花,以 80% ~ 85% 抗氧化与渗透调节物指标最低,形态生长最好。
关键词:夏枯草; 水分处理; 生理; 花期生长
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 08 1715 05
∃1715∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
∀收稿日期: 20091227 基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30772730, 81072986) ; 国家科技基础条件平台工作项目 ( 2005DKA21004)作者简介:郭巧生( 1963 ) ) ,男,江苏苏州人,教授、博士生导师,长期从事药用植物的教学、科研工作。
T el : ( 025) 84396591 Em ail: gqs@ njau. edu. cn