全 文 ：ＨＰＬＣ同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸含量
蒋 晔，郝 福，李艳荣，任淑萌
（河北医科大学 药学院，河北 石家庄 ０５００１７）
［收稿日期］ ２００７０４１３
［基金项目］ 河北省科技攻关计划项目（０６２７６１９５６）
［通讯作者］ 蒋晔，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６６０６９，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｅ＠
ｈｅｂｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
桂枝颗粒是在汉代名医张仲景所著《伤寒论》
第一方桂枝汤的基础上，由桂枝、白芍、甘草、生姜与
大枣制成的现代中药制剂。该制剂的指标成分是芍
药苷、桂皮酸与甘草酸，这三类成分单独测定的方法
文献报道较多。
现行的桂枝颗粒国家药品标准［１］仅对臣药白
芍中芍药苷进行了含量测定，而对其他药味则采用
鉴别手段作为质量控制方法。目前尚未见到同时测
定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷与甘草酸含量的报道。
然而复方中药药效的发挥是多组分共同作用的结
果，各指标成分的含量及其比例均会影响药效，为了
更好地评价桂枝颗粒的质量，作者建立了 ＨＰＬＣ测
定同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷和甘草酸的
含量，该方法专属性强，准确、快速，为桂枝颗粒的质
量表征提供新的分析手段。
１ 仪器与试药
液相色谱仪系统包括：ＰＥＲＫＩＮＥＬＭＥＲＳｅｒｉｅｓ
２００泵（美国），ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７８５Ａ检测器（美
国），ＨＷ色谱工作站（南京千谱软件有限公司）。
桂皮酸、芍药苷和甘草酸对照品均购于中国药
品生物制品检定所（批号分别为 １１０７８６２００５０３，
１１０７３６２００６２９，１１０７３１２００４０８）；乙腈为色谱纯；冰
醋酸为分析纯；水为双蒸水。
桂枝、白芍、炙甘草、生姜和大枣均为市售中药
材，经本院生药教研室聂凤?教授鉴定。
２ 方法
２．１ 色谱条件
ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相乙腈（Ａ）１％冰醋酸水溶液（Ｂ）（调
ｐＨ３７），流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２５０ｎｍ；柱
温为室温；进样量 ２０μＬ。梯度洗脱程序 Ａ：０～６
ｍｉｎ，１９％；６～１０ｍｉｎ，１９％ ～３０％；１０～２５ｍｉｎ，
３０％～４５％（Ａ＋Ｂ＝１００％）。
２．２ 桂枝颗粒的制备
参照桂枝颗粒的质量标准［１０］，由河北医科大学
制药厂制备了 ３批（批号分别为 ０６０８０１，０６０８０２，
０６０８０３）样品，用于质量研究。
２．３ 溶液制备
２．３．１ 对照品贮备液的制备 精密称取芍药苷对
照品１２１５ｍｇ置１０ｍＬ量瓶中，用３５％乙腈溶解并
稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为１２１５μｇ·
ｍＬ－１的芍药苷对照品贮备液。
精密称取桂皮酸对照品１２６０ｍｇ置１０ｍＬ量
瓶中，用３５％乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成
质量浓度为１２６０μｇ·ｍＬ－１的溶液，精密量取上述
溶液５０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，用３５％乙腈溶解并
稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为 ６３０μｇ·
ｍＬ－１的桂皮酸对照品贮备液。
精密称取甘草酸对照品８０ｍｇ置２５ｍＬ量瓶
中，用３５％乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质
量浓度为３２０μｇ·ｍＬ－１的甘草酸对照品贮备液。
精密量取芍药苷对照品贮备液１０ｍＬ、桂皮酸
对照品贮备液２０ｍＬ、甘草酸对照品贮备液５０ｍＬ
置１０ｍＬ量瓶中，用３５％乙腈溶解并稀释至刻度，
摇匀，配制成含芍药苷、桂皮酸、甘草酸质量浓度分
别为１２１５，１２６，１６０μｇ·ｍＬ－１的混合对照品溶液，
作为线性１号工作液。
２．３．２ 供试品溶液的制备 精密称取桂枝颗粒粉
末１０ｇ，置１００ｍＬ具塞三角瓶中，精密加入甲醇
２５０ｍＬ，密塞，称定质量，超声提取３０ｍｉｎ，室温放
置３０ｍｉｎ后，以甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过。
精密量取续滤液１０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中用甲醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
２．３．３ 阴性对照溶液的制备 按照２．２项下方法
分别制备缺桂枝、缺白芍、缺炙甘草的桂枝颗粒阴性
样品。按照２．３．２项下方法分别制备各阴性对照溶
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液。
２．４ 线性关系的考察
精密量取１号工作溶液５０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶
中，用３５％乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成２号工作
溶液，依次采用倍比稀释法配制３～７号工作溶液，
以各组分浓度（Ｃ）为横坐标，相应的峰面积（Ａ）为
纵坐标，绘制标准曲线。结果，芍药苷、桂皮酸、甘草
酸分别在１８９８～１２１５，１９６９～１２６，２５～１６０μｇ
·ｍＬ－１内线性关系良好，ｒ均大于０９９９８，结果见
表１。
表１ 指标成分的线性关系
成分 线性方程 ｒ
线性范围
／μｇ·ｍＬ－１
芍药苷 Ａ＝１３３×１０４Ｃ＋２１１×１０３ ０９９９９ １８９８～１２１５
桂皮酸 Ａ＝４８５×１０４Ｃ＋１７７×１０３ ０９９９９ １９６９～１２６０
甘草酸 Ａ＝０８６×１０４Ｃ＋１７７×１０３ ０９９９９ ２５００～１６００
２．５ 系统适用性试验
取线性３号工作溶液注入色谱仪，结果在该色
谱条件下，芍药苷、桂皮酸、甘草酸与相邻成分分离
度均大于３０，３指标成分色谱峰的理论板数分别不
低于８０００，７０００，１５０００，重复进样６次，３成分峰
面积的ＲＳＤ分别为０９％，０７５％，０６９％，色谱图
见图１。
图１ 对照品（Ａ）与供试品（Ｂ）ＨＰＬＣ图
１芍药苷；２桂皮醛；３甘草酸
２．６ 检测限
取线性７号工作溶液进一步稀释，以峰高为基
线噪音３倍计，芍药苷、桂皮酸、甘草酸的最低检测
浓度分别为０３，００６，０２μｇ·ｍＬ－１。
２．７ 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，重复进样６次，芍药
苷、桂皮酸、甘草酸峰面积的 ＲＳＤ分别为 １３％，
１３％，１８％。
２．８ 稳定性试验
取同一供试品溶液在０，２，４，８，１２ｈ分别进样，
芍药苷、桂皮酸、甘草酸含量的 ＲＳＤ分别为１６％，
１４％，２０％。
２．９ 专属性试验
取供试品溶液和阴性对照溶液，分别进样，结果
供试品中芍药苷、桂皮酸、甘草酸与相邻成分分离度
良好，阴性样品在对照品色谱峰相应的位置上无干
扰峰，表明供试品溶液中的其他成分对测定结果无
影响，其色谱图见图２。
图２ 阴性对照ＨＰＬＣ图
ａ缺甘草；ｂ缺白芍；ｃ缺桂枝
２．１０ 回收率试验
取已知芍药苷、桂皮酸和甘草酸含量的桂枝颗
粒（批号０６０８０１）样品６份，每份０５ｇ，精密称定，
每份分别精密加入１０１２ｍｇ·ｍＬ－１芍药苷对照品
溶液１０ｍＬ，０７５２ｍｇ·ｍＬ－１桂皮酸对照品溶液
１０ｍＬ和２４１８ｍｇ·ｍＬ－１甘草酸对照品溶液１０
ｍＬ，挥干溶剂，按２．３．２项下 测定各组分含量，计算
加样回收率，结果见表２。
表２ ３种成分的回收率（ｎ＝６）
成分
取样量
／ｇ
样品
中量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得
量／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
芍药苷 ０５０４２ １０４９ １０１２ ２０７２ １０１１９ ９７ １９
０４９８３ １０３６ １０１２ ２０３７ ９８８
０４８８４ １０１６ １０１２ ２０１５ ９８６
０５１３３ １０６８ １０１２ ２１０８ １０２８
０５２１０ １０８４ １０１２ ２０７７ ９８１
０５００２ １０４０ １０１２ ２０４４ ９９１
桂皮酸 ０５０４２ ０７５６ ０７５２ １４９４ ９８０ ９９３ １６
０４９８３ ０７４７ ０７５２ １５０６ １００９
０４８８４ ０７３３ ０７５２ １４７６ ９８７
０５１３３ ０７７０ ０７５２ １５２２ ９９９
０５２１０ ０７８２ ０７５２ １５４１ １０１０
０５００２ ０７５０ ０７５２ １４８３ ９７３
甘草酸 ０５０４２ ２４２０ ２４１８ ４８０６ ９８６ ９８８ １７
０４９８３ ２３９２ ２４１８ ４７７７ ９８６
０４８８４ ２３４４ ２４１８ ４８１０ １０２０
０５１３３ ２４６４ ２４１８ ４８１６ ９７２
０５２１０ ２５０１ ２４１８ ４８６２ ９７６
０５００２ ２４０１ ２４１８ ４７９０ ９８８
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２．１１ 含量测定
取不同批号桂枝颗粒，按２．３．２项下方法制备
供试品溶液，进样分析，以标准曲线法计算３个组分
的含量，同时计算各组分含量的比例。结果见表３。
表３ 指标成分的质量分数及其比例（ｎ＝３）
ｍｇ·ｇ－１
批号 芍药苷 桂皮酸 甘草酸 组分含量比例
０６０８０１ ２０８ １５０ ４８０ １３９∶１∶３２０
０６０８０２ １９４ １４８ ４７４ １３１∶１∶３２０
０６０８０３ ２０５ １５３ ４９４ １３４∶１∶３２３
３ 讨论
文献报道的关于３个组分的单独提取方法有甲
醇超声提取芍药苷［国家食品药品监督管理局，ＷＳ
１８４（Ｚ０２３）２００１］、５０％甲醇水超声提取桂皮
酸［２］、甲醇回流提取甘草酸［３］。本研究供试品溶液
的制备考察了提取方法（超声、回流）与提取时间
（２０，３０，４５，６０ｍｉｎ）。结果两种提取方法提取的各
成分含量相差不大，从操作简便角度考虑，确定提取
方法为超声提取；回收率结果表明，超声提取 ３０
ｍｉｎ，可将３种指标成分提取完全。
流动相选择芍药苷与桂皮酸、甘草酸的极性差
异较大［２４］，为了能同时分析３个成分，选择了梯度
洗脱。流动相使用甲醇１％冰醋酸时，系统基线波
动较大，不宜定量；而使用乙腈１％冰醋酸时基线平
稳，且重复性好。甘草酸和桂皮酸极性相近，二者较
难分离，试验结果表明，二者的分离度受有机相比例
影响较小，受流动相ｐＨ的影响较大，而醋酸的加入
不仅可以优化二者的分离而且可以改善甘草酸和桂
皮酸色谱峰的拖尾，故选择乙腈１％冰醋酸（调 ｐＨ
３７）作为流动相。
目前中成药的质量控制标准，多为单成分、单指
标的含量控制，虽有的为有效成分，但实际上也只是
指标性地控制，不能表达其整体的质量，达不到以
“量”控制“质”的目的。在同一方剂中，药味的不同
配伍比例对指标成分体内药动学特征及复方药效具
有显着影响［１，５］，所以复方中药各指标成分含量及
其比例不仅可以反映制剂工艺水平，而且可以表征
和保证复方中药（及其制剂）的药效。本研究建立
了同时测定桂枝颗粒中芍药苷、桂皮酸与甘草酸含
量的方法并计算了组分含量的比例，该法具有操作
简便、结果可靠等特点，能够应用于桂枝颗粒的质量
评价与质量控制。
［参考文献］
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关系的相关性分析［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００３，９
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［５］ 张 壮，刘 楠，陈可冀，等．川芎赤芍配伍比例对阿魏酸在
麻醉犬体内药代动力学的影响［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，
２００５，１１（３）：２８． ［责任编辑 鲍 雷］
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