全 文 ：丹皮酚体外黏膜渗透性及影响因素的考察
陈晓兰１，２，杜守颖１，陆洋１，姚宗玲１
（１北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２；２贵阳中医学院，贵州 贵阳 ５５０００２）
［摘要］ 目的：考察牡丹皮提取物丹皮酚的体外黏膜渗透性及影响因素。方法：选择离体牛蛙皮肤为渗透模型，采用改
良的Ｆｒａｎｚ扩散池进行体外经皮吸收实验；ＨＰＬＣ测定丹皮酚的含量，研究接收液、蛙皮及药物浓度对丹皮酚体外黏膜渗透的
影响。结果：接收液的渗透压和ｐＨ对丹皮酚的渗透有一定的影响；同一牛蛙不同部位的皮肤对丹皮酚渗透的影响较大，其表
观渗透系数：腹皮＞背皮＞侧腹皮；丹皮酚黏膜渗透性良好，累积渗透率与时间符合一级吸收过程。结论：以离体牛蛙腹皮为
渗透模型，丹皮酚的体外渗透性质与黏膜吸收的特点有相似性。
［关键词］ 丹皮酚；离体蛙皮；黏膜渗透；表观渗透系数（Ｐａｐｐ）
［收稿日期］ ２００９０４０３
［基金项目］ 科技部“重大新药创制”科技重大专项（２００９ＺＸ０９５０２
００８）
［通信作者］ 杜守颖，教授，博士生导师，主要从事中药新剂型与
新技术研究，Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６４５，Ｅｍａｉｌ：ｄｕｓｈｏｕｙｉｎｇ＠２６３．ｎｅｔ
［作者简介］ 陈晓兰，在读博士研究生，主要从事中药经鼻给药系
统研究
非胃肠道黏膜给药系统受到越来越多的关注，
药物经（口腔、鼻、舌下等）黏膜吸收可以避免首过
效应，提高生物利用度，达到全身治疗的目的；同时
黏膜给药有一定的靶向作用，用法方便，患者易于接
受。但黏膜渗透模型即离体动物黏膜来源有限，分
离困难，一定程度阻碍了药物黏膜渗透研究［１］。
牡丹皮为毛茛科植物牡丹 ＰａｅｏｎｉａＳｕｆｒｕｔｉｃｏｓａ
Ａｎｄｒ．的干燥根皮，有清热凉血、和血化瘀的功能，丹
皮酚是其主要有效成分之一。丹皮酚是一个小分子
的酚类化合物，具有镇痛、抗炎、抗氧化、抗动脉粥样
硬化等药理作用。近年来，随着对传统中药的开发研
究不断深入，丹皮酚的应用范围进一步扩大，已有文
献报道，丹皮酚对脑缺血具有一定的脑保护作用［２］。
本研究利用蛙皮与黏膜的结构相似性，采用离体蛙皮
模型考察了接收介质、蛙皮部位及药物浓度对牡丹皮
提取物丹皮酚体外黏膜渗透的影响，以此评价以离体
蛙皮模型研究丹皮酚的黏膜渗透的可行性，为丹皮酚
的黏膜给药制剂的进一步研究和开发奠定基础。
１ 材料
高效液相色谱仪（ＬＣ１０ＡＤ，ＳＰＤ１０２０Ａ检测
器，岛津）；超声波清洗器（ＣＸ１００型，北京医疗设
备厂）；电子分析天平（ＢＳ１１０Ｓ型，北京赛多利斯
公司）；智能透皮试验仪（ＴＰ２Ａ型，南京红蓝电子
科技有限公司）。
牛蛙，体重（５００±１０）ｇ，由北京中医药大学实
验动物中心提供。
丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批
号１１０７０８２００５０５）；丹皮酚（由本实验室采用水蒸
汽蒸馏法提取所得，纯度＞９９％）；甲醇（ｐｒｏｍｐｔａｒ公
司，色谱纯）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团）；其
他试剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２１ ＨＰＬＣ测定丹皮酚方法学
２１１ 色谱条件
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ钻石 Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相甲醇水（６０! ４０），流速 １０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测波长 ２７４ｎｍ；柱温常温；进样量 １０μＬ。
丹皮酚的相对保留时间约为１５１ｍｉｎ。渗透液其他
物质无干扰见图１。
２１２ 线性关系考察
丹皮酚质量浓度（Ｃ）在５０５６～１０１１２０ｍｇ·
Ｌ－１与峰面积（Ａ）线性关系良好，回归方程 Ａ＝５
３５４Ｃ＋１７８３８（ｒ＝０９９９９）。
２１３ 精密度试验
精密度试验取低、中、高浓度（２０，４０，８０ｍｇ·
Ｌ－１）的丹皮酚甲醇溶液，按上述色谱条件各连续进
样６次，记录峰面积，计算 ＲＳＤ分别为 ０３３％，
０１２％，０１２％。
０４
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
Ａ空白渗透液；Ｂ丹皮酚对照品；Ｃ丹皮酚渗透样品；１丹皮酚。
图１ 丹皮酚蛙皮渗透样品ＨＰＬＣ图
２２ 丹皮酚体外黏膜渗透试验
２２１ 离体皮肤的制备
牛蛙断颈处死，分离蛙腹部皮肤，用生理盐水反
复冲洗，至无混浊为止。用塑料薄膜包裹后于
２０
℃冷冻保存，１周内用完。
２２２ 体外渗透试验［３］
将蛙皮固定在渗透扩散装置的扩散室与接收室
之间，外侧皮肤面向扩散室。在接收室中注入脱气
生理盐水作为接收液，排除气泡，使液面完全与皮肤
内层接触，３００ｒ·ｍｉｎ－１磁力搅拌，恒温至３７℃，扩
散室中加入０５ｍＬ１ｇ·Ｌ－１丹皮酚溶液，计时，在
设定时间取样０５５ｍＬ并补加相同体积的新鲜接收
液。样液用ＨＰＬＣ测定丹皮酚含量。计算相应时间
的丹皮酚质量浓度Ｃ，按下式计算累积透过量（Ｑ）
式中Ｑ为累积透过量（μｇ·ｃｍ－２）；Ｖ为接收室
中接收液的体积（ｍＬ）；Ｃｎ为第ｎ个取样点测得的药
物质量浓度（ｍｇ·Ｌ－１）；Ｓ为渗透面积（ｃｍ２）。
以ｄＱ／ｄｔ对时间 ｔ做图，其斜率为药物的渗透
速率Ｊｓ（μｇ·ｃｍ－２·ｍｉｎ－１），截距为时滞Ｔｌａｇ，药物
的表观渗透系数 Ｐａｐｐ＝Ｊｓ／Ｃ，Ｃ为扩散池中药物浓
度。
２２２１ 蛙皮对丹皮酚稳定性的研究 取一定浓
度丹皮酚生理盐水溶液２５ｍＬ置锥形瓶中，按１ｍｇ
·Ｌ－１加入剪碎的蛙腹皮，３７℃水浴恒温，３００ｒ·
ｍｉｎ－１磁力搅拌，于 ０，２，４，６，８，１０，１２ｈ取样 ０５
ｍＬ，过滤，ＨＰＬＣ测定各时间溶液中丹皮酚含量，计
算ＲＳＤ０６８％。结果表明，１２ｈ内丹皮酚在蛙皮渗
透液中稳定性良好。
２２２２ 接收液对丹皮酚表观渗透系数的影响 分
别以生理盐水、纯水、１８％ＮａＣｌ、生理盐水（ｐＨ
４０１）和生理盐水（ｐＨ１０００）作为接收液，考察接收
液渗透压和ｐＨ对药物表观渗透系数的影响，见表１。
表１ 接收液（渗透介质）对丹皮酚表观渗透
系数的影响（ｎ＝３）
接收液 Ｑｔ ｒ Ｐａｐｐ／１０－５ｃｍ２·ｓ
纯水
ｙ ＝ １９９１ｘ ＋
３７２０
０９９２８ １７３±００９
１８％ＮａＣｌ ｙ＝２１９４ｘ９７４８ ０９９９４ １９２±００５
生理盐水（ｐＨ６８８）
ｙ ＝ ２１４６ｘ ＋
１６６８
０９９５３ １８４±００８
生理盐水（ｐＨ４０１）
ｙ ＝ １０５３ｘ ＋
８３３５
０９９１７ １８１±００２
生理盐水（ｐＨ１０００）
ｙ ＝ ００５１ｘ ＋
０６０７
０９８９５１６４±００８
由表１可知，用ｔ检验进行统计学分析，接受液
的渗透压和 ｐＨ对丹皮酚的渗透有一定的影响，
１８％ＮａＣｌ组的表观渗透系数比其他组大，但与生
理盐水组无显著差异，而时滞较生理盐水组长；在酸
性条件下丹皮酚的表观渗透系数比生理盐水组小但
无显著性差异，而在碱性条件下丹皮酚的表观渗透
系数明显减小。总体来说，丹皮酚在符合体内环境
的渗透介质（生理盐水）中透过率较大，时滞短。
２２２３ 同一牛蛙的不同部位皮肤对丹皮酚表观
渗透系数的影响 取同一只牛蛙的正背皮、侧面皮和
正腹皮，考察不同部位蛙皮对药物表观渗透系数的
影响，见表２。
表２ 同一牛蛙不同部位对丹皮酚表观渗透
系数的影响（ｎ＝３）
皮肤 Ｑｔ ｒ Ｐａｐｐ／１０－５ｃｍ２·ｓ
腹皮 ｙ＝２０７０ｘ＋８５０３ ０９９００ １７９±００２
背皮 ｙ＝１２０５ｘ１２９３８ ０９９９３ １０７±００６
侧腹皮 ｙ＝０９３８ｘ１２７２０ ０９９７５ ０８４±０１６
注：Ｐ＜００１ｖｓ腹皮。
由表２可知，同一牛蛙不同部位的蛙皮对丹皮
酚的渗透有较大的影响，其表观渗透系数为腹皮 ＞
背皮＞侧皮。
２２２４ 不同牛蛙腹皮对丹皮酚渗透影响 取３只
牛蛙的正腹皮，考察不同牛蛙腹皮对药物表观渗透
系数的影响，见表３。
由表３可知，选择质量在５００ｇ左右牛蛙的腹
皮作为丹皮酚体外黏膜渗透模型，不同的牛蛙之间
表观渗透系数无显著性差异。
２２２５ 丹皮酚浓度对渗透的影响 考察不同质
量浓度（００１，００２，０１，０５，１，２５，５，１０ｇ·Ｌ－１）
丹皮酚表观渗透系数，见表４。
１４
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
表３ 不同牛蛙腹皮对丹皮酚表观渗透系数的影响（ｎ＝３）
牛蛙 Ｑｔ ｒ Ｐａｐｐ／１０－５ｃｍ２·ｓ
１ ｙ＝２０９３ｘ＋７２１５９ ０９９４４ １８１±００８
２ ｙ＝２２２４ｘ＋１７５６７ ０９９０８ １９１±００５
３ ｙ＝２０３７ｘ＋１５８３ ０９９２８ １７５±００７
注：Ｐ＜００５ｖｓ牛蛙１；Ｐ＜００１ｖｓ牛蛙１。
表４ 丹皮酚质量浓度对渗透的影响
给药质量
浓度／ｇ·Ｌ－１
Ｑｔ ｒ Ｐａｐｐ／１０－５ｃｍ２·ｓ
０．０１ ｙ＝０．０１９ｘ＋０．４８１５０．９９１１ １．６１±０．０９
０．０２ ｙ＝０．０４０ｘ＋０．４９０１ ０．９８７４ １．６７±０．０５
０．１ ｙ＝０．２０４ｘ＋１．８９４４ ０．９９００ １．７５±０．０９
０．５ ｙ＝１．０８０ｘ＋１１．７１５ ０．９８６５ １．８４±０．１１
１．０ ｙ＝２．０３７ｘ＋１５．８３０ ０．９９２８ １．７５±０．０７
２．５ ｙ＝４．７４５ｘ－２０．２９７ ０．９９９９ １．６８±０．１６
５．０ ｙ＝７．９０３ｘ－２８．５０４ ０．９９９５ １．４０±０．１０
１０．０ ｙ＝９．４２０ｘ－１８．７８７ ０．９９８１ ０．７０±０．０６
注：Ｐ＜００５ｖｓ１ｇ·Ｌ－１；Ｐ＜００１ｖｓ１ｇ·Ｌ－１。
由表４可知，２５ｇ·Ｌ－１以下质量浓度的丹皮
酚的渗透速率差异不明显，质量浓度≥５０时，由于
扩散池内药物结晶析出而影响药物的渗透，从而导
致渗透速率减小。可以认为在符合漏槽条件下，丹
皮酚的表观渗透系数与浓度无关。
２２３ 丹皮酚累积渗透曲线
累积渗透率时间曲线 以生理盐水为接收液，
按２２２项下方法研究丹皮酚累积渗透率时间（Ｒ
ｔ）曲线。
图２ 丹皮酚蛙皮渗透累积渗透率（ｎ＝３）
３ 小结与讨论
药物黏膜吸收需要适宜的水溶性和脂溶性，以
便能透过生物膜脂质双分子层［４］。在前期研究中，
作者采用ＨＰＬＣ对牡丹皮提取物丹皮酚在生理盐水
中的平衡溶解度和表观油水分配系数进行了测定，
以期为中药成分的构效关系、吸收代谢研究提供借
鉴；结果丹皮酚在生理盐水中的平衡溶解度为
５３２９０ｍｇ·Ｌ－１，符合漏槽条件；表观正辛醇／水分
配系数为 Ｐ＝１６５９７，ｌｎＰ＝２２２。经典理论认为
ｌｎＰ较小的化合物吸收差，ｌｎＰ大于１的化合物吸
收较好。本实验结果表明，丹皮酚表观渗透系数较
大，能以较快的速率透过蛙皮，８ｈ累积渗透率在
９０％左右；这与上述理论的结果一致。
实验中必须使用脱气渗透介质，否则实验过程
中会产生大量气泡吸附于蛙皮上，影响实验结果，如
有气泡也应及时排出。接受液的渗透压和 ｐＨ对丹
皮酚的渗透有一定的影响，总体来说，在符合体内环
境的渗透介质（生理盐水）中透过率较大，时滞短；
动物皮肤个体差异对丹皮酚渗透也有一定的影响，
在该研究中选择质量在５００ｇ左右牛蛙的腹皮实验
结果较好，误差小；而同一牛蛙不同部位的蛙皮对丹
皮酚的渗透有较大的影响，其渗透系数：腹皮 ＞
背皮＞侧皮；质量浓度在２５ｇ·Ｌ－１以下的丹皮酚
的渗透速率无显著差别，质量浓度过高时，由于扩散
池内药物结晶析出而影响药物的渗透，从而导致渗
透速率减小。
丹皮酚体外蛙皮渗透性良好，符合一级吸收过
程，蛙皮没有角质层，故渗透过程的时滞作用不明
显，这与黏膜吸收特点一致。
［参考文献］
［１］ 徐叔云，卞如濂，陈修药理实验方法学［Ｍ］２版北京：人
民卫生出版社，１９９１：６３５
［２］ 张广钦，禹志领，赵厚长丹皮酚对大鼠反复性脑缺血的保护
作用［Ｊ］１９９７，２０（１２）：６２６
［３］ 陆洋，杜守颖，姚宗玲，等栀子提取物粘膜渗透影响因素研
究［Ｊ］中国中药杂志，２００９，３４（３）：２７３
［４］ ＤｒｅｓｓｍａｎＪＢ，ＬｅｎｎｅｍａｓＨ．ＯｒａｌＤｒｕｇＡｂｓｏｒｐｔｉｏｎ：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎａｎｄ
Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｍ］ＮｅｗＹｏｒｋ：ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｈｃ，２０００：５１
２４
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
Ｓｔｕｄｙｏｎｉｎｖｉｔｒｏｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｆａｃｔｏｒｓａｆｅｃｔｉｎｇ
ｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｐａｅｏｎｏｌ
ＣｈｅｎＸｉａｏｌａｎ１，２，ＤＵＳｈｏｕｙｉｎｇ１，ＬＵＹａｎ１，ＹＡＯＺｏｎｇｌｉｎｇ１
（１ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ；
２ＧｕｉｙａｎｇＣｏｌｅｇｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐａｅｏｎｏｌａｎｄｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｔｈａｔａｆｅｃｔｓｕｃｈｐｅｒｍｅａｂｉｌ
ｉｔｙＭｅｔｈｏｄ：Ｂｕｌｆｒｏｇｓｋｉｎｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ，ａｎｄｔｈｅｍｏｄｉｆｉｅｄＦｒａｎｚｄｉｆｕｓｉｏｎｃｅｌｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅ
ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏＣｏｎｔｅｎｔｏｆｐａｅｏｎｏｌｗａｓｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｂｙＨＰＬＣＫｉｎｄｓｏｆｒｅｃｅｉｖｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐａｒｔｓｏｆｂｕｌｆｒｏｇｓｋｉｎａｎｄｉｍ
ｐａｃｔｓｏｆｄｒｕｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｙｓｔｕｄｉｅｄＲｅｓｕｌｔ：Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｏｆｐａｅｏｎｏｌ
ｗａｓｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔａｆｅｃｔｅｄｂｙｏｓｍｏｔｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｐＨｖａｌｕｅｏｆｔｈｅｒｅｃｅｉｖｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎＡｂｄｏｍｉｎａｌｓｋｉｎ，ｌａｔｅｒａｌａｂｄｏｍｉｎａｌｓｋｉｎａｎｄｄｏｒ
ｓａｌｓｋｉｎ，ｗｉｔｈｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｆｏｒｍｈｉｇｈｔｏｌｏｗ，ｈａｄｇｒｅａｔｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｏｆｐａｅｏｎｏｌＴｈｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄａｇｏｏｄｐｅｒ
ｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｏｆｐａｅｏｎｏｌＡｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｒａｔｅａｎｄｔｉｍｅｗａｓｃｏｉｎｃｉｄｅｄｗｉｔｈｔｈｅｆｉｒｓｔ
ｏｒｄｅｒｋｅｎｅｔｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔａｋｅｎｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏａｂｄｏｍｉｎａｌｓｋｉｎｏｆｂｕｌｆｒｏｇａｓｔｈｅｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ，ｓｏｍｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｗｅｒｅｒｅ
ｖｅａｌｅｄｂｅｔｗｅｅｎｉｎｖｉｔｒｏｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｏｆｐａｅｏｎｏｌａｎｄｍｕｃｏｓａｌａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｐａｅｏｎｏｌ；ｆｒｏｇｓｋｉｎ；ｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ；Ｐａｐｐ
［责任编辑 周驰］
３４
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９