全 文 ：丹皮酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤的线粒体膜脂的保护作用
湖北医科大学药理教研室 (武汉 3 0 04 7 1 )张卫 国釜 张志善
摘要 丹皮酚每天腹腔注射60 m g k /g, 连续 15 d , 每天 2次 , 然后结扎大鼠左降枝冠状动脉 45 m i n ,
解除结扎恢复血流灌注 60 m i n ,复制大 鼠心肌缺血再灌注损伤模型 。观察丹皮酚对心肌细胞线粒 体
膜胆固醇 /磷醋的比值 、膜 C a + 十一A T P酶活性 、膜脂流动性及心肌细胞游离脂肪酸的影响 。结果丹皮
酚能降低线粒体膜胆固醇 /磷脂的比值 , 减少心肌细胞游离脂肪酸含量 , 改善 C a + + 一 A T P酶活性 ,
改善和调节线粒体膜脂的流动性。 表明丹皮酚能明显改善缺血再灌注损伤心肌线粒体膜的结构和
功能 , 与保护心肌细胞膜脂结构有关 。
关健词 丹皮酚 心肌缺血再灌 线粒体 膜脂流动性。
丹皮酚是牡丹皮的有效成分之一 。 具有明显的抗炎、 镇痛作用 , 以及抗动脉粥样硬化 ,
抗血小板聚集和抗心律失常 、 降压作用〔 `〕 。本 室在心肌缺血再灌注损伤实验 中证实该药有抗
膜脂质过氧化作用 。 本文报道该药在线粒体膜脂的变化 , 研究线粒体膜脂的保护作用 。
1 材料和方法
1
.
1 药 品: 丹皮酚为上海第一制药厂产品 ; D P H ( 1 , 6一 d i p h e n y l一 1 , 3 , 5一h e x a t r i e n e , 1 , 6 -
二苯基一 l , 3 , 5一己三烯 ) 为 is g m a产品 , 其余未注明药品均为国产分析纯 。
1
.
2 动物 : 健康雄性 S D大鼠 , 体重 2 20 士25 9 , 随机分 3组 。 丹皮酚组按每天腹腔注 射 , 60
m g / k g
, 连续 1 5 d , 2次/ d , 常规饮食喂养 ; 假手术组和缺血再灌组腹腔注射相应体积的生理
盐水 。 1 5 d后分别进行心脏缺血再灌注实验 。
1
.
3 缺血再灌注损伤模型 : 大 鼠用 20 %乌拉坦腹注麻醉 , 行气管插 管 , 接人工呼 吸 机 。
于心尖博动明显处上方剪断肋骨 , 分离心包 , 暴露心脏 , 在距主动脉根部 Zm m处结扎左 前
降支 , 以心电图监测结扎情况和连续记录标 亚导联 的心电变化 。 结扎 45 m i n , 解 除结扎 60
m i n
。 实验末取出心脏 , 从结扎线以下剪取心肌组织作生化指标测 定 。
1
.
4 线粒体制备和膜流动性测定 : 按常规分离线粒体方法制备线粒体 , 每 0 . 59 心肌组织加
0
.
s m l
, 分离液制备线粒体悬浮液 。 膜流动性测定采用荧光偏振技术 , 将线粒体悬浮液加少
许 2拼m o l / L D P H , 2 5 oc 水溶 3 o m i n 后 , 摇匀 , 以激发波长 3 6 2 n m , 发射 波长 4 3 2 n m , 光栅
狭缝 1 0 n m , 测定荧光偏振度 ( P ) , 膜脂微粘度 ( 月 ) , 分析膜的流动性 。
1
.
5 生化分析: 采用 F ol i n 一L o w r y法测定心肌蛋白及线粒体蛋白含量 。 依 F al h ol t法测定
心肌游离脂肪酸 ( F r e e F a t y A o i d , F A A ) 。 化学法测定心肌 总磷脂 。 采用邻苯二甲醛
直 接显 色法测定心 肌胆固醇含量及与磷脂的比值 。 按文献〔幻测定 C a 十 十一 A T P酶活性 。
2 结果
2
.
1 对大 鼠心肌线粒体膜脂流动性 的影响 : 表 1所示 , 心肌缺血再灌后 , P 、 月值明显升高 ,
表明心肌缺血再灌注时 , 线粒体膜脂流动性降低 。 而丹皮酚组 , 使升高的 P 、 : 值明显降低 ,
趋于正常 , 说 明丹皮酚能维持和改善缺血再灌损伤心肌线粒体膜的流动性 。
.
A d d
r e s s . Z h a n g W
e i g u o
,
D e P a r t m e n t o f P h a r m a e o l o g y
,
H
u b e i M e d i e a l U n i v e r s i t y
,
《 中草药 》 1 9 9 4年第 2 5卷第 4期
W
u h a n
·
1 9 3
.
2
.
2 对线粒体膜胆固醇 、 磷脂及胆固醇/ 磷脂比值和心肌游离脂肪酸含量的影响 : 表 2所示 ,
心肌缺血再灌后 , 与正常组相比 , 线粒体总磷脂含量显著降低 , 总胆固醇含量及胆 固醇 /磷
脂比值均显著增加 , 并使心肌游离 脂 肪 酸明显上升 。 丹皮酚组线粒体 膜 总 磷 脂 含 量 明
显增加 , 总胆 固醇及胆 固醇 /磷脂 比值均有 表 1 丹皮. 对大鼠心肌线粒体膜脂
显著降低 。 并能明显降低心肌游离脂肪酸 。 流动性的影晌 ( * + sD )
2
.
3 对线粒体膜 C +a + 一 A T P 酶 活 性 的 影
响 , 表 3所示 , 心肌缺血再灌后 , 线粒体膜的
C a
+ + 一 A T P酶活性明显降低 。 丹皮酚能明显
抑制缺血再灌注对膜酶活性降低作用 ,恢 复
膜酶的活性 。
组 别 P 月
假手术组 0 。 1 9士 0 。 0 0 8 1。 4上 0 。 1
再 灌 组 0 。 2 5士 0。 0 1 2 . 4士 0 。 2
丹皮酚组 0 . 2 士 0 . 0 0 7中 1 . 6士 0 . 1中 申
n 二 8 ~ 10 与再灌组 比 (下同 ) 中尸 < 。。 0 5 中 . 尸 < 0 . 01
裹 2 丹皮珊对大眼心肌线粒休膜胆 固醉 、 礴脂及胆固醉磷脂比值和
心肌游离脂肪酸含 , 的影晌 (厉 土 5 0 )
组 别
胆固醇 ( C h )
( n m o l /m g
。
P t o )
磷脂 ( P I )
( n m
o l l i P i d P i /m g
.
P r o
C h / P I
F F A
(
n m o l /m g
.
P
r o )
假手术组
再 灌 组
丹皮酚组
3 3。 3士 6。 3
4 6士 7。 2
3 5
。
4士 6 . 1二
15
。
1士 1。 3
6
。
7士 1
1 3
。
5士 1。 5 .
2。 2土 0 。 4
6
。
9士 1。 6
2
。
4士 0。 4
0 。 8 3士 0。 1 6
;::
士 0。 3
士 0 。 l
3 讨论
生物膜是由脂质 ( 磷脂 、 胆 固醇等 )组
成的超分子体系 , 具有维持细胞完整性和正
常功能的作用 。 有资料表明〔3 〕 , 心肌缺血 再
灌过程中 , 生物膜易发生严重损伤 , 可包括
以下几方面 : 膜磷脂的降解 , 膜胆固醇含量
衰 3
组 别
丹皮珊对线粒体膜 C a 呼 + 一 A丁P醉
活性的影响 ( 牙 十 5 0 )
C a
干 ` 一
A T P酶 ( 卜m o l p i / h . m g . p r o
假手术组
再 灌 组
丹皮酚组
1 9
。
4土 1。 3
1 1
。
6 士 0 。 8
1 5
.
8士 r . 8 . ,
及胆 固醇 /磷脂比值增加 , 引起膜脂流动性降低 ,尤以线粒体膜脂破坏 明显 , 并引起膜结合的
c a
` 十 一 A T P酶活性降低〔4 〕 , 同时伴有磷脂分解产物游离脂肪酸的聚 集 。 本文结果证 实 , 丹
皮酚能明显改善线粒体膜脂的流动性 , 明显 降低心肌匀浆中的游离脂肪酸 , 明显降低线粒体
膜总胆固醇含量及胆固醇 /磷脂比值 , 改善和恢复线粒体膜 C a 十 十 一 A T P酶活性 。 对 缺血再灌
注心肌的线粒体膜脂的结构和功能有明显的保护作用 。 最近研究表明 , 在细胞水平上膜结构
和功能的破坏是再灌注损伤的发病关键环节 。 本文研究也初步证 实丹皮酚有抗氧自由基和抑
制脂质过氧化作用 。 说明丹皮酚对缺血再灌损伤的心肌线粒体膜脂保护作用与抗脂质过氧化
有关 。
参 考 文 献
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王治荣 , 等 . 生理科学进展 , 1 9 8 7 , 18 : 2 20
( 19 9 3
一 0 4 一 0 5收稿 )
·
19 4
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t h e e n ot n .t of b ai c al i n i n rh i s P e rP a r at i on
。
A s e s a r ul t of s t ab i l i t y t e s t
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1 5 e s t i m a t e d t o b e l
。
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( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g o 1 8 2 )
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《 中草药》 19 9 4年第 25 卷第 4期 · 2 2 3 ·