全 文 ：糙苏素的抗肿瘤活性研究
谢文利!! 朱江! 赵艳威! 李玲
武警医学院 药理教研室!天津 )$$#+#
$摘要%!目的&探讨藏药螃蟹甲中环烯醚萜类成分糙苏素!A?V/0R/的抗肿瘤作用( 方法#采用9NN法检测糙苏素对体
外培养的 + 种人肿瘤细胞增殖的抑制作用)体内试验采用小鼠实体瘤 8($%肝癌J++ 细胞株接种小鼠$连续给药 & U$计算抑
瘤率( 采用9NN比色法检测糙苏素对 8($ 荷瘤小鼠;b细胞杀伤活性的影响和对 8($ 荷瘤小鼠N淋巴细胞增殖反应的影
响( 结果#糙苏素在 $ j$ 0D-Fd对 + 种肿瘤细胞增殖均有抑制作用$且呈剂量依赖关系!%e$f*(*$9l$f$) 体内试验
结果显示小鼠分别灌胃给予 +f$$$ 0D-[Dd) 个剂量的糙苏素$对接种的实体瘤 8($%肝癌 J++ 细胞株的抑瘤率分别为
+(fg j#f$g$)f$g j%&fg( 同时$糙苏素可显著提高 8($ 荷瘤小鼠淋巴细胞增殖活性!9l$f$$显著增加 8($ 荷
瘤小鼠;b细胞的杀伤能力!9l$f$( 结论#糙苏素对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用$能够
增强淋巴细胞增殖功能和;b细胞的杀伤能力$具有抗肿瘤和免疫调节功能(
$关键词%!螃蟹甲)糙苏素)抗肿瘤作用
$稿件编号%!+$$*$(+*$$+
$基金项目%!武警总部级基金课题!ZbJ+$$%5+
$通信作者%!!谢文利$教授$主要从事生化药理研究$H50BRV# 7RQ5
,Q2VR3SR2Bf./0
!!螃蟹甲为唇形科糙苏属植物螃蟹甲 9?(<*;$
B<)-?)$,&-A;0W[QC1QQU的干燥块根( 藏医药理论
认为螃蟹甲具有清热消肿%止咳祛痰等功效$广泛用
于治疗感冒%咳嗽%疮疥肿毒%肺炎%支气管炎等*+ (
糙苏素为螃蟹甲中的一种环烯醚萜类成分$现代药
理研究表明$植物中许多环烯醚萜苷类化合物有抗
炎%抗肿瘤%抗氧化和抗菌等活性*++ $本文将探讨该
成分是否具有抗肿瘤作用(
!材料和方法
]!药物!糙苏素购自中国药品生物制品检定所$
批号 $%$)环磷酰胺购自恒瑞医药股份有限公
司$批号 $%$*$+( 糙苏素和环磷酰胺用 I9H9培
养基溶解$用 $f++
0滤器过滤除菌备用(
]!动物%细胞株及动物瘤株!健康 :<>小鼠$由
北京维通利华实验动物中心提供$体重!+ k&f#
D$雌雄各半( 人白血病细胞 b#+%人宫颈癌细胞
JQVB细胞株均购自中国医学科学院药物研究所$液
氮保存( 动物移植性肿瘤小鼠J++ 肝癌$8($ 实体
瘤购自天津医药科学研究所(
]&!试剂与仪器!I9H9!L:M
豆蛋白4!I98O!8RD0B公司( LF5+9高速冷冻离心机!湘
仪仪器有限公司)酶标仪!MR/5>4I$)
培养
箱 !;4G
制作用!按文献方法细胞复苏$传代*)+ ( 消化并计
数$细胞 i$&个=0F接种于 *# 孔板上$每孔 $$
F$置于 )% h$g
培养箱中培养 +& ?( 细胞分
为空白对照组%糙苏素组!$$$$$$ 0D-Fd %
环磷酰胺!$$ 0D-[Dd组$每孔加入 $$
F相应
浓度药物或空白培养基$做 & 复孔( 相同条件继续
培养 &( ?( 终止培养前 & ? 加入 +$
F9NN$培养
结束后$离心去除上清液$每孔加入 +$$
FI98O$
振荡器混匀$在酶标仪上于 &*$ 20测定溶液#(
]$!糙苏素对小鼠 J++ 肝癌%8($ 实体瘤的生长
抑制作用!按文献方法*&+分别取生长良好的 + 种荷
瘤小鼠$颈椎脱臼处死( 无菌条件下剥取长势良好
的瘤块$研磨$用生理盐水稀释成 i$%个=0F的
细胞悬液$接种于 :<>小鼠的腋下$每只小鼠接种
$f+ 0F瘤液( 接种次日$将动物按体重随机分组$
分别设对照组%环磷酰胺阳性对照组和糙苏素低%
中%高剂量组!+f$$$ 0D-[Dd$每组 ( 只动物(
各组于接种次日开始每天给药 次$连续给药 & U(
环磷酰胺阳性对照组;E$$ 0D-[Dd-U d)受试药
物组;给药$剂量为 $f$+ 0F-Dd) 对照组给与
等量生理盐水( & U 后颈椎脱臼处死动物$分别称
量体重$瘤重$并计算肿瘤抑制率( 抑制率!g e
-*(-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
!空白组平均瘤重d给药组平均瘤重=空白组平均
瘤重i$$g(
][!糙苏素对 胞增殖的影响!采用 9NN比色法*+ $ 取接种 8($
实体瘤 U的小鼠颈椎脱臼处死$在无菌条件下$剥
离脾脏$研碎脾脏制备单细胞悬液$+$$ 目尼龙网过
滤$用 $f()g氯化铵除去红细胞$用 JB2[p8 液洗涤
) 次$ $$$ C-0R2d离心 0R2 弃上清$并调节细
胞为 i$#个=0F( 将细胞加入 *# 孔细胞培养板$
每孔 $$
F$然后在各实验孔中加入不同浓度的糙
苏素溶液!+f$$$ 0D-Fd$
F$加入9NN!终
浓度为 $f) D-Fd$于 )% h培养箱中培养 +& ?(
以终浓度为 0D-Fd的 酶标仪测#$测定波长 %$ 20( 淋巴细胞增殖活性
按下式计算#刺激指数 8:e#样品=#空白(
]%!糙苏素对 8($ 荷瘤小鼠;b细胞活性的影响
!小鼠脾细胞制备同 ][$按文献*#+方法$调整细
胞为 i$ #个=0F$作为效应细胞$以 i$#个=0F
的b#+ 细胞为靶细胞( 在 *# 孔细胞培养板中$分
别设效应细胞孔%效靶细胞孔和靶细胞孔 ) 组$每孔
加入 $$
F相应细胞悬液$效靶细胞比例为 $r(
在实验孔中加入不同浓度的糙苏素溶液!+$$$$
0D-F
d
$
F( 置于 )% h$g
培养箱中培
养 +& ?( 9NN比色法测定细胞活性$;b细胞杀伤
活性e* d!#效靶细胞 d#效应细胞=#靶细胞+ i$$g(
]\!统计学处理!试验数据采用 8G88 f$ 软件
进行分析$多组间比较行方差分析和Q检验(
!结果
]!糙苏素对体外培养的人 b#+$JQVB细胞的抑
制作用!糙苏素对 + 种肿瘤细胞均具有抑制作用$
且在 $ j$ 0D-Fd抑制作用呈剂量依赖性$%e
$f*(*$9l$f$$见表 (
表 !糙苏素对b#+$JQVB细胞的抑制作用!
$
8k$$-e&
组别
剂量
=0D-F
d
# 抑制率=g
b#+ JQVB b#+ JQVB
对照!! d $-%* k$-+ $-() k$-+
糙苏素! $
$-#% k$-%
$-#) k$-
-( +&-$*
$$
$-&+ k$-#
$-&+ k$-+
+
&#-() &*-+
$
$-)% k$-$)
+
$-) k$-$
+
)-# %-()
环磷酰胺 $$
$-+ k$-$&
+
$-+% k$-$#
+
#(-) #%-&#
!!注#与对照组比较9l$f$$+9l$f$!表 + j& 同)环磷酰胺剂量单位为0D-[Dd(
]!糙苏素对小鼠 J++ 肝癌%8($ 实体瘤的生长
抑制作用 !实验过程中可观察到糙苏素和环磷酰
胺组小鼠饮食饮水正常%皮毛柔顺光滑%活动自如$
生活质量明显优于对照组小鼠( 与对照组比较$环
磷酰胺组小鼠体重增加减缓$差异明显!9l$f$(
同时$) 个剂量的糙苏素对肿瘤具有抑制作用$高%
中剂量作用明显!9l$f$$抑制强度呈剂量依赖
性( 见表 +(
表 +!糙苏素对小鼠J++ 肝癌%8($ 实体瘤的生长抑制作用!
$
8k$$-e(
组别
剂量
=0D-[D
d
体重增加=D 瘤重=D 抑制率=g
8($ J++ 8($ J++ 8($ J++
对照!! d &-& k- &-# k- -& k$-)+ -%% k$-)
糙苏素! +- &-# k-% &-( k-+
-$ k$-&&
- k$-+)
+(- )-$
-& k-) &-$ k-&
$-% k$-+
$-() k$-
+
&*- )-
$ -) k-# &-) k-(
$-&* k$-$%
+
$-& k$-+
+
#-$ %&-
环磷酰胺 $$
+-& k-$
)- k$-#
$- k$-$)
+
$-+( k$-$
+
*+-* (&-
]&!糙苏素对 胞增殖的影响!中%高剂量糙苏素可显著提高 8($
荷瘤小鼠淋巴细胞增殖活性$具有一定的量效关系$
低剂量组与对照组相比差异不显著$表明中%高剂量
糙苏素可以促进机体细胞免疫( 见表 )(
]Y!糙苏素对 8($ 荷瘤小鼠 ;b细胞活性的影
响!) 个剂量的糙苏素均可显著增加 8($ 荷瘤
小鼠 ;b细胞的杀伤能力$并存在剂量依赖性关
系$表明糙苏素具有提高机体免疫功能状态的作
用$见表 &(
-$*-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
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9B6$ +$$
表 )!糙苏素对淋巴细胞增殖的影响!
$
8k$$-e&
组别 剂量=0D-Fd # 刺激指数
对照 $-$# k$-$$) -$$
糙苏素 +- $-$% k$-$$# -+ k$-$&
$-$(( k$-$
-( k$-+
$ $-$ k$-$*
-($ k$-%
+-$(* k$-
+
表 &!糙苏素对 8($ 荷瘤小鼠;b细胞
活性的影响!
$
8k$$-e&
组别 剂量=0D-Fd ;b细胞活性=g
对照 d ))-& k)-$
糙苏素 +- &%-% k&-%
&-# k-+
$
#)-%& k%-%
+
##-) k*-++
+
&!讨论
糙苏素为螃蟹甲中的一种环烯醚萜类成分$而
部分环烯醚萜类具有抗肿瘤作用$这与藏药螃蟹甲
的治疗.疮疥肿毒/ 作用相符*%+ ( 近年来对该属植
物的化学成分和药理研究逐渐增多$但药效学研究
很少涉及*(+ ( 本文采用体内%外 + 种方法对其抗肿
瘤作用进行了研究$结果显示$糙苏素对体外培养的
人b#+$JQVB细胞具有抑制作用)同时$糙苏素对小
鼠J++ 肝癌%8($ 实体瘤的生长也有抑制作用$可
使移植小鼠的瘤重减轻!9l$f$$肿瘤抑制率提
高$提示糙苏素对实体瘤具有一定的抗肿瘤作用(
但糙苏素对腹水瘤是否具有抑制作用$还需进一步
研究(
目前$国内%外学者分别从基础理论%实验研究
与临床治疗效果等方面$对中药作用机制包括直接
抗肿瘤$通过免疫途径或作为抗肿瘤药物的增效剂
而发挥间接抗肿瘤作用进行了多层面%多靶点的广
泛研究( 在杀伤肿瘤细胞%抑制肿瘤细胞增殖的免
疫学作用中$N细胞参与的细胞免疫应答起重要作
用$许多中药成分对 N细胞的增殖活性均有很强的
促进作用);b细胞是机体主要的非特异性肿瘤杀
伤细胞$中药成分可刺激小鼠 ;b细胞增殖$协同
活性**+ ( 因此$还对糙苏素的抗肿瘤机制进行了初
步探讨$体外免疫学实验表明#糙苏素可显著提高小
鼠淋巴细胞增殖活性%增加;b细胞的杀伤能力$说
明糙苏素有增强小鼠免疫功能的作用$推断糙苏素
的抗肿瘤作用可能与其增强免疫功能的作用有关(
同时从体内%外抑瘤实验还发现$糙苏素对肿瘤细胞
的抑制作用较强$说明糙苏素还可能具有直接细胞
毒作用( 本实验结果可见$糙苏素的抑瘤率可达
#g$%&g$表明其抗瘤活性较强$这可能与该成分
既有对肿瘤细胞的直接杀伤作用$又可调动机体免
疫系统$增强机体N淋巴细胞和;b细胞活性$间接
抵抗肿瘤的双重作用有关(
$参考文献%
*+!边巴次仁$旺姆$魏锋$等f藏药螃蟹甲挥油化学成分的 L<5
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!##$f
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0QDBS@RD0B2QDV6./SRUQSTC/0G?V/0RSBWCQB*X+-G?6@/.?Q0RS@C6$
+$$$$ !&#))f
*(+!邓瑞雪$李军波$刘普$ 等-糙苏属植物苷类活性成分及药理
研究进展*X+-海峡药学$ +$$*$ +!#&f
**+!张静$ 单保恩-中药抗肿瘤的免疫学调节作用和作用机制研
究进展*X+-中国免疫学杂志$+$$#$ ++!&#)(f
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QU-9NN0Q@?/U ,BSWSQU @/BSSQSS@?QAC/VRTQCB@R/2 /TNSAVQQ2 V60A?/.6@Q.QVSB2U @?QB.@RcR@6/T;b.QVSR2 @W0/C5]QBCR2D0R.Q
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R2?R]R@QU @?QAC/VRTQCB@R/2 /T@?CQQ[R2US/T@W0/C.QVS;- J;%<$ B2@R@W0/CQTQ.@/TA?V/0R/V
,BSR2 BU/SQ5UQAQ2UQ2@0B22QC!%e$f*(*$ 9l$f$-N?QR2?R]R@/C6CB@QS/TA?V/0R/V!+f$ $ $ 0D-[D
d
,QCQ+(fg5
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]QBCR2D0R.Q,R@? 8($ B2U R2.CQBSQ@?QB.@RcR@6/T@?Q;b.QVS-G?V/0R/V./WVU R2?R]R@@?QAC/VRTQCB@R/2 /T@?CQQ[R2US/T@W0/C.QVS;-
J;%<$ ACQSQ2@B2@R@W0/CQTQ.@/2 @?Q@W0/C5]QBCR2D0R.Q$ B2U R0AC/cQ@?QR00W2/V/DR.BVTW2.@R/2f
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$责任编辑!张宁宁%
+$$ 海峡两岸暨<8;>全国第九届天然药物资源学术研讨会通知第一轮(
+$$海峡两岸暨<8;>全国第九届天然药物资源学术研讨会拟定于 +$$ 年 % 月 %0+$ 日在广东省广州市召开$会期 )
天( 本届学术研讨会由<8;>天然药物资源专业委员会%中国药材L4G研究促进会!香港%广东省人民政府%化州市人民政
府主办$广东绿色生命集团承办( 现在开始进行学术研讨会报名和学术论文征集工作( 会议的具体事项将在第 + 轮通知中发
出( 欢迎踊跃报名参加本次会议3
!时间!+$$ 年 % 月 %0+$ 日( 研讨会报名截止时间 +$$ 年 月 )$ 日)论文及论文摘要提交截止时间 +$$ 年 # 月 日(
+!地点!会议地点为广东省广州市$专题研讨及考察为广东省化州市(
)!主题!产学研合作$推进我国中药及天然药物资源健康发展(
&!交流研讨内容!中药及天然药物资源调查与研究)中药材规范化生产!L4G与产业化发展)中药及天然药物资源化学研
究与综合利用)生物多样性与珍稀濒危野生药用动植物资源的积极保护)中药及天然药物资源学科建设与人才培养(
!组织形式!
#
学术研讨会开幕式和大会特邀报告$届时将邀请我国中药及天然药物资源科学领域院士%著名专家和主管
部门领导到会并作学术报告(
$
分会场学术交流!初步确定中药资源调查与研究%中药材规范化生产!L4G与产业化发展%
中药及天然药物资源化学研究与综合利用三个分会场$具体将根据代表到会和论文征集情况予以调整(
%
大会期间组织赴
化州中药材L4G基地考察$具体路线第 + 轮通知再具体说明(
&
本届年会将出版&第九届全国天然药物资源学术研讨会论文
集$请按要求撰写论文和投稿( 并邀请相关杂志编辑参会(
中国自然资源学会!?@A#==,,,f.S2Cf/CD=%&中国中药杂
志%&中药材%&中草药%&中国现代中药%&现代中药研究与实践等杂志上将公布本届学术研讨会的消息$与会者可以在
报名和投稿有效期内$复印或下载相关表格$并按照要求办理报名和投稿手续(
(
参加会议通知及报到事宜将在第 + 轮通知
中告知(
)
会议期间将召开中国药材L4G研究促进会第三次扩大理事会$请理事%理事单位准时参会$不另行文(
#!会议论文征集!会议论文可围绕主题和交流研讨内容$具体内容包括前瞻性综述$学科现状%前沿及展望$系统性研究成
果$原创性研究工作等( 拟参加会议者!不提供论文也可参加会议$请于 +$$ 年 # 月 日前提交论文及摘要(
请向会议提供Z/CU软件录入的论文电子版( 并同时提供论文打印稿 份$请打印在4& 纸上$上下各空 ) .0$左右空 +f+ .0$
用激光打印机输出(
%!联系方法!江苏省南京仙林大学城仙林大道 )( 号!南京中医药大学药学院 <8;>天然药物资源专业委员会办公室$邮
码#+$$&#$电话#$+5((&=((*$传真#$+5((+&$联系人#单鸣秋 *($+($#$严辉 )+)%()$电子信箱#
@C6,+$$3+#f./0(
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