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Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月
滇丁香中抑制 α-葡萄糖苷酶活性成分研究
康文艺 1,2*，张 丽 1,2，宋艳丽 1,2
（1. 河南大学 天然药物研究所，河南 开封 475004；2. 河南大学 药学院，河南 开封 475004）
[摘要] 目的：寻找滇丁香中具有抑制 α-葡萄糖苷酶活性的成分。方法：利用体外抑制 α-葡萄糖苷酶活性模型进行追
踪，采用各种色谱法分离，运用多种谱学技术鉴定结构，并对活性较强的几个单体化合物进行酶抑制动力学研究。结果：
滇丁香的醋酸乙酯部分具有较高的活性，从中分离出 5 个抑制 α-葡萄糖苷酶活性的化合物，分别鉴定为：莨菪内酯（1），
5-甲氧基-8-羟基香豆素（2），1α，3β，24-三羟基熊果酸（3），熊果酸（4）和齐墩果酸（5），其中化合物 4（IC50 3.3 mg·L-1），
5（IC50 2.88 mg·L-1）的活性最好，明显高于阳性对照阿卡波糖（IC50 1 081.27 mg·L-1）。化合物 3 为竞争性抑制。结论：化
合物 1~4 为首次报道对 α-葡萄糖苷酶有抑制活性。
[关键词] 滇丁香；α-葡萄糖苷酶；抑制剂

滇丁香 Luculia pinciana Hook.为茜草科滇丁香
属植物，分布在喜马拉雅山至我国云南和广西。其
根、花、果入药，可治疗百日咳、慢性支气管炎、
肺结核、月经不调、痛经、风湿疼痛、偏头痛、尿
路结石、病后头昏、心慌；外用可以治疗毒蛇咬
伤[1]。
α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制小肠内 α-葡萄糖苷
酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道的吸收，从而
有效降低餐后高血糖。由于其独特的优势，目前已
被广泛用于糖尿病及其并发症的防治，临床上主要
使用阿卡波糖和伏格列波糖等。作者在对滇丁香系
列研究中，相继分离得到了萜及其苷类化合 物
[2-6]。并利用体外筛选模型，从滇丁香醋酸乙酯活性
部位得到 5 个具有抑制 α-葡萄糖苷酶活性的成分。
1 仪器与试剂
Multiskan MK3 酶标仪（美国 Thermo Electron
公司）；LRH-150 恒温培养箱（上海一恒科技有限
公司）；DELTA 320 型 PH 计（梅特勒-托利多仪器
有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公
司）。XRC-1 型显微熔点测定仪（温度未校正）；
Bruker Am-400 超导核磁共振仪；Finnegan-4510 质
谱仪；200~300 目及硅胶 H 和 GF254 硅胶板均购自
烟台汇友硅胶开发有限公司，Sephadex LH-20（瑞

[收稿日期] 2008-08-23
[基金项目] 河南省教育厅基础研究计划（2008A360002）
[通信作者] *康文艺，Tel：(0378)3880680，E-mail：kangweny@hotmail.
com
典 Pharmacia 公司）。
α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase，EC 3.2.1.20）；
4-硝基苯 -α-D-吡喃葡萄糖苷（4-ntrophenyl-α-D-
glucopyranoside，PNPG，026K1516）；阿卡波糖
（acarbose，Lot 16869）和 DMSO 均购自 Sigma 公
司；滇丁香于 2001 年 7 月采自于云南大理地区，
经中国科学院昆明植物所彭华研究员鉴定为茜草
科滇丁香属植物滇丁香 L. pinciana。
2 方法
2.1 提取与分离
滇丁香干燥枝干 20 kg，粉碎后，用 95%乙醇
冷浸 3 次，过滤，回收乙醇，将浓缩物分散于水中，
依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇各萃取 3 次，得
相应提取物 65，300，450 g。醋酸乙酯部分 300 g
经过 200~300 目硅胶柱色谱，三氯甲烷-丙酮梯度洗
脱（95∶5~7∶3），分别得到三氯甲烷-丙酮（20∶1）
和（8∶2）部分具有抑制 α-葡萄糖苷酶活性。三氯
甲烷-丙酮（20∶1）部分经硅胶 H 柱色谱，三氯甲
烷-丙酮（20∶1）洗脱，以 TLC 检测合并，经
Sephadex LH-20 柱色谱，丙酮洗脱，得到化合物 4
（5.2 g），5（108 mg）。 三氯甲烷-丙酮（8∶2）部
分反复硅胶常压柱色谱，并经 Sephadex LH-20 柱色
谱，丙酮洗脱，得到化合物 1（121 mg），2（58 mg），
3（234 mg）。
2.2 α-葡萄糖苷酶活性成分的筛选方法
2.2.1 检测方法 本检测在 96 孔板上进行，反应体


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系参照李婷等 [7]的方法，按照 I%=[1-（A 样品-
A 样品空白）/（A 阴性-A 空白）]×100%计算抑制率，并用
Origin 软件求出相应 IC50 值。
2.2.2 标准曲线制作 根据采用的反应体系，用磷
酸缓冲液（pH 6.8）配制 1 000 μmol·L-1 PNP，稀释
成 400，300，200，150，100，50，25，5，0 μmol·L-1。
分别取 7 种不同浓度的 PNP 溶液各 160 μL，加入
0.2 moL·L-1 Na2CO3 溶液 80 μL，混匀，在 405 nm 下
测定 A 值，测 3 组取平均值。以 A 值为纵坐标，对
硝基苯酚浓度为横坐标，做出标准曲线。
2.2.3 α-葡萄糖苷酶活力的测定 根据所采用的反
应体系：112 μL 磷酸钾缓冲液（pH 6.8），加入 20
μL 0.2 U·mL-1 α-葡萄糖苷酶，8 μL DMSO，37℃恒
温 15 min 后加入 2.5 mmoL·L-1PNPG 20 μL，37℃恒
温反应 15 min。再加入 80 μL 0.2 moL·L-1 的 Na2CO3
溶液，于 405 nm 波长下测 A 值。
酶活力单位定义：37 ℃，pH 6.8 条件下，每分
钟水解底物所产生 1 μmoL 对硝基苯酚的酶量，规
定为 1 个酶活力单位（U）[8]。
3 结果与讨论
3.1 结构鉴定
化合物 1 浅黄色晶体（三氯甲烷），mp
231~232 ℃。EI-MS m/z（%）192 [M]+（100），177
（31），164（16），149（24），121（10）。1H-NMR
（CD3COCD3，400 MHz）和 13C-NMR（CD3COCD3，
100 MHz）数据与文献[9]报道一致，确定化合物 1
为莨菪内酯（scopletin）。
化合物 2 黄色针状晶体（丙酮），mp 226~227
℃。EI-MS m/z（%）192 [M]＋（100），177（72），
164（34），149（77），121（34），79（44），69（75）。
1H-NMR（CDCl3，400 MHz）和 13C-NMR（CDCl3，
100 MHz）数据与文献[10]报道一致，确定化合物 2
为 5-甲氧基-8-羟基香豆素（5-methoxy-8-hydroxy-
coumarin）。
化合物 3 白色粉末，mp 260~262 ℃，EI-MS
m/z（%）488 [M]+（2），470（5），442（5），288
（9），248（100），222（27），203（48）。1H-NMR
（C5D5N，400 MHz）δ：5.05（1H，br s，H-1），
4.30（1H，dd，J = 4.3，11.6 Hz，H-3），5.57（1H，
br s，H-12），2.66（1H，d，J = 11.2 Hz，H-18），
1.71（3H，s，H-23），4.40，4.03（2H，dd，J = 10.6，
10.3 Hz，H-24），1.66（3H，s，H-25），1.63（3H，
s，H-26），1.19（3H，s，H-27），1.01（3H，d，
J=6.6 Hz，H-29），0.93（3H，d，J = 5.5 Hz，H-30）。
13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：67.5（C-1），28.1
（C-2），73.3（C-3），46.5（C-4），49.1（C-5），18.6
（C-6），33.3（C-7），41.3（C-8），48.2（C-9），37.5
（C-10），23.8（C-11），126.1（C-12），138.7（C-13），
43.1（C-14），28.8（C-15），25.0（C-16），48.6（C-17），
53.7（C-18），41.4（C-19），39.4（C-20），31.1（C-21），
36.9（C-22），14.8（C-23），67.1（C-24），17.7（C-25），
18.9（C-26），24.1（C-27），180.0（C-28），17.5（C-29），
21.4（C-30）。以上数据与文献[5]报道一致，确定化
合物 3 为 1α，3β，24-三羟基熊果酸（1α，3β，
24-trihydroxy-ursolic acid）。
化合物 4 白色粉末，mp 305~308 ℃。EI-MS
m/z（%）456[M]＋（20），410（8），248（100），233
（30），213（75），175（33），131（30），119（40），
105（45），91（35）。1H NMR（C5D5N，400 MHz）
和 13C-NMR（C5D5N，100 MHz）数据与文献[11]
报道一致，确定化合物 4 为熊果酸（ursolic acid）。
化合物 5 无色针状结晶（丙酮）；mp 202~204
℃。EIMS m/z（%）456[M]＋（20），410（8），248
（100），233（30），213（75），175（33），131（30），
119（40），105（45），91（35）。1H-NMR（C5D5N，
400 MHz）和 13C-NMR（C5D5N，100 MHz）数据
与文献[11]报道一致，确定化合物 5 为齐墩果酸
（oleanolic acid）。
3.2 提取部位 α-葡萄糖糖苷酶活性成分的筛选
滇丁香提取物不同部位的 α-葡萄糖糖苷酶抑
制活性见表 1。从表 1 结果可见，醋酸乙酯部分的
抑制活性较好，抑制率明显高于其他部位以及阳性
对照药物，所以可采用活性追踪方式对醋酸乙酯部
分继续分离。
表 1 滇丁香不同提取物的 α-葡萄糖苷酶抑制活性
提取物 抑制率/% IC50/mg·L-1
石油醚部分 21.07 ND
醋酸乙酯部分 99.4 12.46
正丁醇部分 103.08 542
acarbose 68.43 1 081.27
注：初筛终浓度 1.5 g·L-1。

3.3 受试化合物抑制 α-葡萄糖苷酶活性筛选


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活性追踪分离醋酸乙酯部分得到的 5 个化合物
对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的 IC50分别为化合物
1 35.03 mg·L-1，2 69.26 mg·L-1，3 18.48 mg·L-1，4
3.3 mg·L-1，5 2.88 mg·L-1（图 1）。 5 个化合物 IC50
值均低于 100 mg·L-1，远小于阳性对照药阿卡波糖
的 IC50 值（1 081.27 mg·L-1），其中化合物 4，5 抑
制活性最高。图 1 显示，5 个化合物对 α-葡萄糖苷
酶抑制活性均与浓度呈正量效关系。

图 1 受试化合物浓度对其抑制活性的影响

3.4 受试化合物抑制类型的确定
5 个化合物分别取合适的两个不同浓度，PNPG
取 4 个不同浓度，分别测定反应速度。按
Lineweave-Burk 作图法，以 1/[S]为横坐标，1/V 为
纵坐标，分别绘制 5 个化合物的抑制作用动力学曲
线（图 2~6），得到 α-葡萄糖苷酶的 Km 值为 2.89
mmol·L-1。

图 2 化合物 1 Lineweave-Burk 双倒数曲线


图 3 化合物 2 Lineweave-Burk 双倒数曲线

图 4 化合物 3 Lineweave-Burk 双倒数曲线


图 5 化合物 4 Lineweave-Burk 双倒数曲线


图 6 化合物 5 Lineweave-Burk 双倒数曲线

从图中可以看出，化合物 1，2，4，5 对 α-葡
萄糖苷酶抑制作用属非竞争性抑制，反应速度 Vmax
随着受试化合物浓度的增大而变小，米氏常数 Km
保持不变。根据非竞争性抑制动力学方程 [12-13]
1/V′max=1/Vmax(1+[I]/Ki)，可以求出 4 个化合物的 Ki
值分别为 2.44，167.83，195.04，3.36 mg·L-1。而化
合物 3 则属于竞争性抑制剂，反应速度 Vmax 随受试
化合物浓度增大保持不变，说明该化合物与 α-葡萄
糖糖苷酶底物在该酶上的络合位点是一样的。根据
竞争性抑制动力学方程：1/Km=1/{Km (1+[I]/Ki)}求
得化合物 3 的 Ki 为 3.36 mg·L-1。
4 结论
本研究首次利用体外 α-葡萄糖苷酶抑制活性
筛选模型对滇丁香不同提取物的 α-葡萄糖苷酶抑
制活性进行了初步筛选，结果表明醋酸乙酯部分有


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较高的抑制活性。该部分主要活性化合物的结构类
型主要为五环三萜和香豆素类化合物，并且齐墩果
酸抑制 α-葡萄糖苷酶活性最高。
化合物 1，2，4，5 对 α-葡萄糖苷酶抑制作用
属于非竞争性抑制类型，说明它既可以和酶，也可
以和酶-底物复合物结合，从而降低酶活性，达到降
低血糖作用。而化合物 3 则属于竞争性抑制剂，与
阿卡波糖属于同一抑制 α-葡萄糖苷酶类型，但其抑
制活性远远高于阿卡波糖，表明该化合物具有一定
的应用价值。
[参考文献]
[1] 吴征镒. 新华本草纲要[M]. 上海：上海科技出版社，1991：447.
[2] 康文艺，杨小生，赵 超，等. 中型滇丁香挥发油化学成分分析
[J]. 天然产物研究与开发，2002，14(1)：39.
[3] 康文艺，杨小生，赵洪芳，等. 滇丁香抗耐药菌株活性研究[J]. 天
然产物研究与开发，2002，14(3)：39.
[4] Kang Wenyi，Wang Jinsong，Yang Xiaosheng，et al. Triterpenoid
saponins from luculia pinceana Hook[J]. J Chin Chem，2003，21，
1501.
[5] Kang Wenyi，Du Zhizhi，Yang Xiaosheng，et al. A new triterpene
from Luculia pinceana Hook[J]. J Asian Nat Prod Res，2005，7 (1)：
91.
[6] 康文艺，郝小江. 滇丁香萜苷类化合物研究[J]. 中国中药杂志，
2007，32(24)：2607.
[7] Li Ting，Zhang Xiaodong，Song Yiwen，et al. A microplate-based
screening methA for alpha-glucosidase inhibitors[J]. Chin J Clin
Pharmacol Ther，2005，10(10)：1129.
[8] 顾江萍，梁鑫淼. 中药对 α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究[J]. 中华
现代中医学杂志，2005，1(2)：116.
[9] 段朝辉，石宝俊，吴立宏，等. 长梗秦艽的化学成分[J]. 中国天
然药物，2007，5(6)：417.
[10] Reiko S，Gen I N，Itsuo N. Phenol glucoside gallates from Mallotus
japonicus[J]. Phytochemistry，1989，28(9)：2443.
[11] Mahato S B ， Kundu A P. 13C NMR spectra of pentacylic
triterpenoids[J]. Phytochemistry，1994，37 (6) ：1517.
[12] 王镜岩，朱圣庚，徐长法. 生物化学[M]. 北京：高等教育出版社，
2002：371.
[13] 马庆一，陈丽华，杨海延，等. 山茱萸中 α-葡萄糖苷酶抑制活性
因子的筛选(Ⅱ)[J]. 食品科学，2007，28(2)：73.


α-Glucosidase inhibitors from Luculia pinciana

KANG Wenyi 1,2*，ZHANG Li1,2，SONG Yanli 1,2
（1. Institute of Natural Products, Henan University, Kaifeng 475004, China
2. Pharmaceutical College of Henan University, Kaifeng 475004, China）

[Abstract] Objective：To search α-glucosidase inhibitors from Luculia pinciana. Method: The α-glucosidase inhibitor was
isolated by the column chromatographic techniques and the bioassay-guided method in vitro. A combination of MS and NMR
spectroscopy was used to identify the chemical structures. The inhibitory kinetic of the isolations was also investigated. Result: The
ethyl acetate extract showed strongest inhibitory activity, and five active compounds were isolated and identified as scopletin (1),
5-methoxy-8-hydroxycoumarin (2), 1α,3β,24-trihydroxyursolic acid (3), ursolic acid (4) and oleanolic acid (5). The IC50 values of all
compounds were lower than that of acarbose. Four of them shown noncompetitive type manner on α-glucosidase inhibition except
that compound 3 is competitive type manner. Conclusion: Compounds 1-4 as the inhibitors of α-glucosidase were reported for the
first time.
[Key words] Luculia pinciana; α-glucosidase; inhibitors; inhibitory type
[责任编辑 王亚君]