全 文 ：·研究报告·
石榴花中多酚物质的纯化工艺研究
热依木古丽·阿布都拉１，２，刘力１，仲婕１，阿吉艾克拜尔·艾萨１
（１．中国科学院 新疆理化技术研究所 植物资源化学实验室，新疆 乌鲁木齐 ８３００１１；
２．中国科学院 研究生院，北京 １０００４９）
［摘要］　目的：探索石榴花中多酚物质纯化的最佳工艺。方法：以多酚含量为指标，采用静态吸附解吸方法，考察１７种
大孔吸附树脂的吸附效果并系统研究大孔树脂动态吸附性能及洗脱参数。结果：Ｄ１０１树脂分离效果最好，其最佳工艺为药
液质量浓度００１２ｇ·ｍＬ－１（相当于原生药）的提取液，以３ＢＶ·ｈ－１吸附速率吸附于径高比为１∶４的大孔吸附树脂柱上，上样
量为１２ＢＶ（树脂床体积）；再用３ＢＶ７０％乙醇，以２ＢＶ·ｈ－１的流速进行洗脱效果最佳。结论：经Ｄ１０１树脂处理后的石榴花
总酚含量可达到７５％。该法简单易行，周期短、成本低、所得多酚纯度高，对工业化大生产具有重大指导意义。
［关键词］　石榴花；多酚；大孔吸附树脂
［收稿日期］　２００９０３０２
［基金项目］　中科院知识创新工程重要方向项目（ＫＳＣＸ２ＹＷＲ１３２）
［通信作者］　阿吉艾克拜尔·艾萨，Ｔｅｌ：（０９９１）３８３５６７９，Ｅｍａｉｌ：
ｈａｊｉ＠ｍｓ．ｘｊｂ．ａｃ．ｃｎ
　　石榴花是石榴科落叶灌木或小乔木石榴Ｐｕｎｉｃａ
ｇｒａｎａｔｕｍＬ．的干燥花瓣，花蕾为红色。花后期，收集
自然脱落的花瓣，晾干。石榴花收载卫生部《药品标
准》（维吾尔药分册），具有收敛止泻、止血等功效，用
于腹泻日久等病症。外用可作为治疗出血不止，口舌
生疮，脱肛痔疮，口臭牙痛，皮肤瘙痒的药物使用［１］。
目前，有关石榴花多酚药效方面的研究比较多，
但对石榴花多酚提取纯化方面几乎未见报道。据文
献，石榴花提取物中多酚总量与其多种生物活性呈
明显的正相关性［２８］。因此，本文应用大孔吸附树脂
对石榴花多酚进行纯化，工艺简单可行，适合于工业
化生产。
１　材料
紫外可见分光光度仪：岛津 ＵＶ２５５０型（日本
产）；旋转蒸发仪：ＢｕｃｈｉＲ２１０型（瑞士产）；冷冻干
燥器：ＥＹＥＬＡＦＤＵ２１００型（日本产）；真空干燥箱：
ＤＺＦ６０５０Ｂ型（上海齐欣科学仪器有限公司）；全温
震荡培养箱：ＨＺＱＦ１６０型（上海市实验仪器总厂）。
石榴花购自新疆和田地区策勒县，经中科院新
疆生态与地理研究所植物分类研究室沈观冕研究员
鉴定为石榴科植物石榴 Ｐ．ｇｒａｎａｔｕｍ的花；没食子
酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１０８３１
２００３０２）；ＨＰＤ１００，ＨＰＤ４５０，ＨＰＤ６００，ＨＰＤ７５０
（沧州宝恩化工有限公司），Ｄ１０１（上海摩速科学器
材有限公司），Ｄ１４０，Ｄ４０２０，ＡＢ８，ＮＫＡ９，Ｘ５（南开
大学化工厂）型大孔吸附树脂；液体和固体试剂均
为国产分析纯试剂，水为纯化水。
２　方法与结果
２．１　石榴花提取液的制备
取石榴花２００ｇ，加２０倍量６０％乙醇，在５０℃
下提取２次，每次１ｈ，合并滤液，回收乙醇，浓缩至
药液质量浓度为 ００６ｇ·ｍＬ－１（相当于原生药）。
２．２　标准曲线的绘制
精密称取没食子酸对照品０００５８ｇ，置于５０ｍＬ
棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取此溶液１０ｍＬ加入２５ｍＬ棕色量瓶中，用水稀释到
刻度，作为对照品溶液（４６４０ｍｇ·Ｌ－１）。分别精确
吸取没食子酸对照品溶液１０，２０，３０，４０，５０ｍＬ，
分别置于２５ｍＬ棕色量瓶中，加磷钼钨酸溶液１０
ｍＬ，用水稀释到１４ｍＬ，再用２９％饱和碳酸钠溶液稀
释至刻度，摇匀，放置３０ｍｉｎ，同时做空白。在５００～
９００ｎｍ波长范围光谱扫描，确定７６５ｎｍ处的最大吸
收波长为检测波长。以吸光度（Ａ）为纵坐标，浓度
（Ｃ，ｍｇ·Ｌ－１）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程
Ａ＝０１０６９０Ｃ－００９７８３，ｒ＝０９９９８。
２．３　供试溶液含量测定
精密量取供试溶液１０ｍＬ，置于５０ｍＬ棕色量
瓶中，加水稀释至刻度。再精密量取１０ｍＬ，置于
２５ｍＬ棕色量瓶中，按照２．２标准曲线的绘制方法，
·５６２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
测定吸光度，代入回归方程，按没食子酸计算出总酚
含量。
２．４　树脂的筛选
称取１０种已处理好的大孔吸附树脂各２ｇ，加
３０ｍＬ石榴花提取液 ｐ０（总酚质量浓度为 １８０２４ｇ
·Ｌ－１），置于摇床，振摇（２５℃，８７ｒ·ｍｉｎ－１）２ｈ，放
置１０ｈ，抽滤，滤液定容，测定多酚质量浓度 ｐｅ。滤
去提取液后的大孔树脂水洗抽干，加３０ｍＬ，７０％乙
醇，振摇（２５℃，８７ｒ·ｍｉｎ－１）２ｈ，放置２ｈ，进行静
态解吸，测定解吸液多酚质量浓度 ｐｄ。分别按下式
计算吸附量、吸附率、解吸率，结果见表１。
吸附量（ｍｇ·ｇ－１干树脂）＝（ｐ０－ｐｅ）×Ｖｏ／ｍ
吸附率（％）＝（ｐ０－ｐｅ）×ｌ００／ｐ０
解吸率（％）＝ｐｄ×ｌ００／（ｐ０－ｐｅ）
其中ｍ为树脂质量（ｇ）。
表１　１０种大孔树脂静态吸附解吸情况
树脂种类 极性 吸附量／ｍｇ·ｇ－１ 吸附率／％ 解吸率／％
ＨＰＤ１００ 非极性 ６９３６ ５５３９ ７８１０
ＨＰＤ４５０ 弱极性 ５２５１ ５１６６ ６６８７
ＨＰＤ６００ 强极性 ５５７１ ５４６２ ５６６７
ＨＰＤ７５０ 中极性 ８９８６ ５９９０ ７２００
Ｄ１０１ 非极性 ８８７９ ５９１４ ７９００
Ｄ１４０ 非极性 ５３３４ ５１８３ ７００４
Ｄ４０２０ 非极性 ５３０９ ５１７７ ６９４３
ＡＢ８ 弱极性 ７８５９ ５７４０ ７８８７
ＮＫＡ９ 极性　 ２９３９ ５５８１ ５０１５
Ｘ５ 非极性 ８０４９ ５７８６ ７４７０
　　从表１可以看出，ＨＰＤ７５０，Ｄ１０１，Ｘ５，ＡＢ８型
号树脂对石榴花多酚具有较强的吸附性能，Ｄ１０１，
ＡＢ８，ＨＰＤ１００等解析率效果比较好。综合考虑，
其中 Ｄ１０１树脂具有较高的吸附率及最高的解析
率。因此，选择Ｄ１０１树脂纯化石榴花多酚。
２．５　上柱条件的研究
２．５．１　药液浓度的考察　取石榴花提取液（总酚
质量浓度为１２８６ｇ·Ｌ－１）２００ｍＬ，分别加水稀释
至１，２，３，４倍，加入１２ｇ（３ｃｍ×１８ｃｍ）树脂柱（树
脂床体积为５０ｍＬ）上，以２ＢＶ·ｈ－１流速进行吸附
后，收集流出液，于７６５ｎｍ处测定多酚含量，计算出
吸附量，结果见图１。
从图１可以看出，随着药液浓度的稀释，吸附量
在持续增加，当药液浓度稀释大于４倍时，其吸附量
呈现下降趋势，这说明吸附时间长，有一部分先吸附
的总酚被上样液洗脱下来。因此，选择药液稀释至
　　
图１　上样液浓度的影响
３倍为最佳。
２．５．２　树脂柱径高比例的考察　量取药液（总酚
质量浓度为５５４９ｇ·Ｌ－１）４份，以２ＢＶ·ｈ－１流速
吸附于径高比为１∶２，１∶４，１∶６，１∶８的大孔树脂柱，
收集流出液，于７６５ｎｍ处测定多酚含量，计算出吸
附量（分别为 ７８００，８１８９，８２２０和 ７９５３ｍｇ·
ｇ－１）。结果发现，径高比在１∶２～１∶６吸附量逐渐增
加，但到１∶８吸附量减少，这是因为树脂柱过高，随
之吸附时间变过长，导致先吸附的多酚被洗脱下来。
因此，径高比选择为１∶４。
２．５．３　吸附速率的考察　取石榴花提取液（总酚
质量浓度为 ５５４９ｇ·Ｌ－１）６００ｍＬ，吸附在于 １００
ｍＬ（径高比为１∶４）Ｄ１０１树脂柱上，分别以１，２，３，
４ＢＶ·ｈ－１的流速进行吸附后，吸附量分别为
６８１８，６８１１，６７６３，６２８６ｍｇ·ｇ－１）。从实验得
知，当吸附速率成倍增加时，多酚类物质的吸附量反
而下降，当吸附速率为４ＢＶ·ｈ－１时，吸附量明显减
少。当上柱液吸附流速太慢时，导致工作效率低下。
因此，选择吸附率为３ＢＶ·ｈ－１。
２．５．４　上样量的考察　取石榴花提取液（总酚质
量浓度为５５４９ｇ·Ｌ－１），上１００ｍＬＤ１０１树脂柱
上，以２ＢＶ·ｈ－１流速进行吸附后，收集流出液，于
７６５ｎｍ处测定总酚含量，结果见图２。
图２　吸附泄露曲线
·６６２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
书　　从泄露曲线来看，上样量从 ９ＢＶ开始，泄露速
度趋于稳定，即９～１２ＢＶ达到一个动态平衡。但从
１３ＢＶ开始，泄露速度又直线上升，到 １５ＢＶ时，流
出液与上样液总酚含量几乎相等。因此确定上样量
为１２ＢＶ时，树脂柱已达到吸附饱和。
２．５．５　洗脱溶剂浓度的考察　取石榴花提取液
（总酚质量浓度为 ５５４９ｇ·Ｌ－１）６００ｍＬ，加入 １００
ｍＬ（２５ｇ）Ｄ１０１树脂柱上，以 ３ＢＶ·ｈ－１流速进行
吸附，再以５ＢＶ·ｈ－１流速用水洗后，分别用２０％，
４０％，６０％，８０％，１００％的乙醇溶液洗脱，收集
洗脱液２５０ｍＬ，于７６５ｎｍ处测定总酚含量见图３。
图 ３　洗脱溶剂考察
　　从图３可知，当用７０％乙醇溶液作为洗脱溶剂
时，洗脱效果最好。
２．５．６　洗脱溶剂用量的确定　将吸附饱和的树脂
用７０％乙醇，以２ＢＶ·ｈ－１的速度洗脱，按树脂床体
积倍数收集洗脱液，于 ７６５ｎｍ处测定吸光度，计算
多酚含量。
结果为洗脱剂用量为３ＢＶ时，多酚的洗脱效率
达到平衡。
２．５．７　除杂用水量考察　将吸附饱和的树脂柱用
纯净水，以５ＢＶ·ｈ－１的流速洗脱树脂之间未吸附
的溶液，收集流出液，测定多酚含量。
结果为当用水量到３ＢＶ时，将树脂之间未吸附
的提取液都被洗出来，而且流出液接近无色，因此水
洗量选择为３ＢＶ。
３　结论
通过对影响大孔树脂吸附及解吸的各种因素系
统研究，最后确定了大孔树脂纯化石榴花总酚的最
佳工艺：树脂型号为沧州宝恩化工有限公司生产的
Ｄ１０１型大孔树脂，树脂柱径高比为 １∶４，药液质量
浓度为００１２ｇ·ｍＬ－１（相当于原生药），吸附速率
为３ＢＶ·ｈ－１时吸附效果最好，即上柱量为 １２ＢＶ
（树脂床体积）；吸附好的树脂先用３ＢＶ水，以５ＢＶ
·ｈ－１的流速洗净树脂，再用 ３ＢＶ的 ７０％乙醇洗脱
多酚，效果最佳。经 Ｄ１０１树脂处理后的石榴花总
酚含量可达到 ７５％。该法简单易行，周期短、成本
低、所得多酚纯度高，对工业化大生产具有指导
意义。
［参考文献］
［１］　 中华人民共和国卫生部药品标准．维吾尔药分册［Ｓ］．乌鲁木
齐：新疆科技卫生出版社，１９９９，８：１９．
［２］　 茹克娅木·沙德克．维吾尔常用药材学［Ｍ］．乌鲁木齐：新疆
科技卫生出版社，１９９３：１２８．
［３］　 ＬｉＹｕｈａｏ，ＱｉＹａｎｆｅｉ．ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅｆｌｏｗｅｒ：ａｕｎｉｑｕｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｍｅｄｉｃｉｎｅｗｉｔｈＰＰＡＲα／βａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．
ＤｉａｂｅｔｅｓＥｂｅｓｉｔｙＭｅｔａｂ，２００８，１０：１０．
［４］　 ＴｏｍＨｓｕｎＷｅｉＨｕａｎｇ，ＧａｎｇＰｅｎｇ，ＢｈａｖａｎｉＰｒａｓａｄＫｏｔａ，ｅｔａｌ．
Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅｆｌｏｗｅｒｉｍｐｒｏｖｅｓｃａｒｄｉａｃｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎａｄｉａｂｅｔ
ｉｃｒａｔｍｏｄｅｌ：ｒｏｌｅｏｆｌｏｗｅｒｉｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｌｉｐｉｄｓ［Ｊ］．ＢｒＪＰｈａｒｍａ
ｃｏｌ，２００５，４５：７６７．
［５］　 ＴｏｍＨ．Ｗ．ＨｕａｎｇＢＰｈａｒｍ，ＱｉｎｇｌｉｎＹａｎｇ，ｅｔａｌ．Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ
ｆｌｏｗｅｒｅｘｔｒａｃｔｄｉｍｉｎｉｓｈｅｓｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｚｕｃｋｅｒｄｉａｂｅｔｉｃｆａｔｙ
ｒａｔｓｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｒｄｉａｃｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１ａｎｄｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａ
Ｂｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．ＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＰｈａｒｍａｃｏｌＴＭ，２００５，４６：８５６．
［６］　 李海霞，王钊，刘延泽．石榴科植物化学成分及药理活性研究
进展［Ｊ］．中草药，２００２，３３（８）：７６５．
［７］　 石碧，狄莹．植物多酚［Ｍ］．北京：科学出版社，２０００：１３８．
［８］　 贾冬英，姚开，等．石榴皮中多酚提取条件的优化［Ｊ］．林产化
学与工业，２００６，２６（３）：１２３．
［９］　 曹炜，索志荣．ＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕ比色法测定蜂蜜中总酚酸的含
量［Ｊ］．食品与发酵工业，２００３，２９（１２）：８０．
［１０］　杨荣平，王宾豪，方艾权，等．大孔树脂分离葛根总黄酮工艺
优化［Ｊ］．中成药，２００４，２６（１０）：７８４．
［责任编辑　周驰］
·７６２２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９