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Five flavonoids from Spatholobus suberectus

鸡血藤黄酮类化合物的研究



全 文 :3.Dept.ofPharmacy,ShanghaiSixthPeople'sHospital,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200233,China;
4.Dept.ofPharmacy,SuzhouHighTechFengqiaoPeople'sHospital,Suzhou,215129,China)
[Abstract] Objective:TodevelopanHPLCmethodforthequantitativeanalysisoflupoelinleavesofIlexcornuta.Method:
ThechromatographicseparationwasaccomplishedonanAgilentZorbaxODScolumn(4.6mm×150mm,5μm)elutedwithamobile
phasecomposedofacetonitrileandwater(8∶2),andwithaflowrateof1.0mL·min-1.TheRPHPLCexperimentswereachievedat
25℃,andUVdetectionwassetat210nm.Result:Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.2512.7μg(r=0.9998)for
lupoel,withacceptableprecisionandaccuracy.ThemethodwasappliedtosamplesofI.cornutafrom10diferentlocations.Conclu
sion:Theestablishedmethodwasprovedtobesimple,reproducible,accurate,andcanbeusedtoevaluatethequalityofleavesofI.
cornuta.
[Keywords] Ilexcornuta;lupeol;RPHPLC
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20070411
[基金项目] 国家自然科学基金项目(20432030)
[通讯作者] 赵玉英,Tel:(010)82801592,Email:nmechem
@bjmueducn
鸡血藤黄酮类化合物的研究
郑 岩,刘 桦,白焱晶,马彦梅,赵玉英
(北京大学 医学部 药学院 天然药物学系,北京 100083)
[摘要] 目的:研究鸡血藤Spatholobussuberectus的化学成分。方法:用色谱法分离,用波谱法鉴定结构。结
果:分离并鉴定了5个黄酮类化合物,分别为3羟基9甲氧基紫檀烷(1)、芒柄花素钠(2,7二羟基4′甲氧基异黄
酮钠)(2)、芒柄花素(3)、大豆苷元(4)、7,4′二羟基3′甲氧基异黄酮(5)。结论:化合物1,2,5为首次从本属植物
中得到。
[关键词] 鸡血藤;黄酮
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)02015203
  鸡血藤是一味沿用千年的活血化瘀中药,以其
藤汁红如鸡血而得名,药用历史悠久,始见于《本草
备要》,历代本草均有记载,是一个植物来源较多的
中药品种,临床药用很早就分为鸡血藤药材和鸡血
藤膏两种方式。2005年版《中国药典》规定鸡血藤
原植物为密花豆 SpatholobussuberectusDunn的干
燥藤茎,具有补血、活血、舒筋活络的功效,用于治疗
月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛等症。为
研究鸡血藤活性成分,首先对其的主要化学成分进
行了分离,本研究报道用溶剂法和色谱法从鸡血藤
的95%乙醇提取物的石油醚及醋酸乙酯萃取物中
分离鉴定了5个化合物:分别为3羟基9甲氧基紫
檀烷(1,medicarpin,即3hydroxy9methoxypterocar
pane)、芒柄花素钠(2,7羟基4′甲氧基异黄酮钠,
即7Osodium4′methoxyisoflavone)、芒柄花素(3,
formononetin,即 7hydroxy4′methoxyisoflavone)、
大豆苷元(4,daidzein;7,4′dihydroxyisoflavone)、
7,4′二羟基3′甲氧基异黄酮(5,4′dihydroxy3′
methoxyisoflavone)。化合物1,2,5为首次从本属植
物得到。
1 仪器与材料
岛津260型紫外分光光度仪。VXR-300型,
INOVA-500型核磁共振波谱仪,TMS内标。提取
分离用甲醇、乙醇、氯仿、醋酸乙酯、石油醚、丙酮等
均为北京化工厂分析纯产品。薄层硅胶 GF254,粗
孔硅胶(100~200目,200~300目)均为青岛海洋
化工厂产品,SephadexLH-20购自北京欧亚新技
术公司。鸡血藤药材2005年8月购于广西,由北京
大学医学部药学院天然药物学郑俊华和陈虎彪教授
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第33卷第2期
2008年1月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 2
January,2008
鉴定为豆科密花豆属植物密花豆S.suberectus。
2 提取分离
鸡血藤藤茎粗粉10kg,依次用10倍量95%乙
醇及70%乙醇渗漉提取,渗漉液减压浓缩后加水混
悬,再依次用石油醚,醋酸乙酯和正丁醇萃取,得到
95%乙醇提取物的石油醚萃取物30g,醋酸乙酯萃
取物400g,正丁醇萃取物84g,70%乙醇提取物的
醋酸乙酯萃取物17g,正丁醇萃取物346g。
将95%乙醇提取物的石油醚萃取物30g,经硅
胶柱色谱分离,石油醚丙酮(95∶5~8∶2)梯度洗脱,
共得55流分(PFr.1~55),PFr.15~28经硅胶柱分
离,氯仿甲醇(98∶2)洗脱,得18流分(Fr.1~18),
Fr.14~15经硅胶柱(氯仿丙酮 98∶2)、薄层制备
(氯仿丙酮 9∶1)及 SephadexLH-20(氯仿甲醇
2∶1~3∶1)分离纯化得化合物1。PFr.29~44经硅
胶柱分离,石油醚丙酮(75∶25)洗脱,共得51流分
(Fr.1~51),Fr.10~51经硅胶柱分离,氯仿甲醇
(98∶2)洗脱,得20流分(Fr.1~20),其中CFr.6~8
经硅胶(氯仿丙酮98∶2)、SephadexLH-20(氯仿
甲醇2∶1)柱色谱纯化,丙酮重结晶得化合物 3,
CFr.11~12反复经PTLC(氯仿丙酮9∶1,氯仿甲醇
9∶1,95∶5)纯化得化合物5,CFr.13~14经PTLC(氯
仿甲醇9∶1)及 SephadexLH-20(氯仿甲醇2∶1)
纯化得化合物2。将95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃
取物400g,经硅胶柱分离,氯仿丙酮(10∶1~8∶2)
梯度洗脱液,经薄层检识,合并得3流分(Fr.1~3)。
将柱体分割为 16部分,分别用 95%乙醇洗脱,得
Sec.1~16。Sec.8~16部分与70%乙醇提取物醋
酸乙酯萃取部分合并,经硅胶柱分离,氯仿甲醇
(98∶2~9∶1)梯度洗脱,共得40流分(CFr.1~40),
CFr.22~31经 PTLC(氯仿丙酮 7∶3)及 Sephadex
LH-20柱色谱(氯仿甲醇 1∶1)分离,得到化合物
4。
3 结构鉴定
化合物 1 白色粉末。1HNMR(DMSOd6,
500MHz)δ:726(1H,d,J=85Hz),647(1H,dd,
J=85,25Hz),626(1H,d,J=25Hz);723
(1H,d,J=80Hz),644(1H,dd,J=80,20Hz),
641(1H,d,J=20Hz);1个甲氧基信号δ369及4
个紫檀烷类化合物的特征脂肪氢信号 δ554(1H,
d,J=65Hz),423(1H,dd,J=95,35Hz),356
(1H, t, J = 95Hz), 360 (1H, m)。
13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:1321(C1),1097
(C2),1587(C3),1028(C4),1563(C4a),
659(C6),395(C6a),1194(C6b),1252(C
7),963(C8),1605(C9),1060(C10),1603
(C10a),781(C11a),1113(C11b),553
(OCH3)。其
1HNMR和13CNMR谱特征与紫檀烷类
化合物相似。将其1HNMR和13CNMR数据与文献
[1]报道的3羟基9甲氧基紫檀烷对照,数据一致,
故确定其结构为3羟基9甲氧基紫檀烷。
化合物 2 白色粉末。化合物 2,3的 UV
(MeOH)均为248nm,1HNMR均显示 δ>8的单峰
质子信号和1个 δ38的甲氧基单峰质子信号,说
明2个化合物均为具有甲氧基取代的异黄酮类化合
物。分析其1HNMR数据,发现2个化合物取代基
位置也相同,A环均为 ABX系统,B环均为 AABB
系统。NOESY数据显示2个化合物的甲氧基取代
均在B环4′位,化合物2的 NOESY谱显示甲氧基
单峰质子信号δ378与B环3′,5′质子信号 δ696
(2H,d,J=87Hz)相关;化合物3的NOESY谱显示
甲氧基单峰质子信号δ379也与 B环3′,5′质子信
号δ699(2H,d,J=87Hz)相关,见图1。但是2个
化合物的1HNMR和13CNMR(DMSOd6)数据不同,
见表1,2。化合物3的1HNMR和13CNMR(DMSO
d6)数据与文献报道的芒柄花素数据
[2]完全一致,
所以确定化合物3的结构为芒柄花素(7羟基4′甲
氧基异黄酮)。化合物2的 +TOFMS显示m/z291
[M+1],306[M-Na+K],269[M+1-Na+H],
254[269-CH3],226[254-CO];TOFMS显示 m/z
325[M+Cl],267[M-Na],252[267-CH3],195
[A1+1+Cl],132[B1],所以确定化合物2的结构
为芒柄花素钠,即7羟基4′甲氧基异黄酮钠,见图
1,与芒柄花素数据对照归属了其1HNMR和13C
NMR数据。
图1 化合物2,3的结构和主要NOESY相关
化合物 3 白色粉末,UV(MeOH)248nm,
1HNMR (DMSOd6,300 MHz) 和
13 CNMR
(DMSOd6,75MHz)数据见表1,2。以上数据与文
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 2
January,2008
  表1 化合物2,3的1HNMR数据(300MHz,DMSOd6)
No. 化合物2 化合物3
2 806,1H,s 835,1H,s
5 769,1H,d,J=87Hz 798,1H,d,J=87Hz
6 696,1H,dd,J=87,21Hz 694,1H,dd,J=87,21Hz
8 628,1H,d,J=21Hz 688,1H,d,J=21Hz
2′6′ 748,2H,d,J=87Hz 751,2H,d,J=87Hz,
3′5′ 696,2H,d,J=87Hz 699,2H,d,J=87Hz
OCH3 378,3H,s 379,3H,s
表2 化合物2,3的13CNMR数据(DMSOd6)
No. 化合物21) 化合物22) 化合物32)
2 1517 1518 1532
3 1225 1224 1231
4 1740 1739 1746
5 1262 1262 1273
6 1186 1190 1152
7 1586 1586 1626
8 1016 1015 1021
9 1587 1589 1589
10 1135 1134 1166
1′ 1252 1252 1242
2′6′ 1300 1300 1301
3′5′ 1135 1134 1136
4′ 1586 1586 1574
OCH3 551 551 551
  注:1)化合物2(150MHz);2)化合物2,3(75MHz)
献[2]报道的芒柄花素一致,所以确定其结构为芒
柄花素。
化合物4 白色粉末,1HNMR(DMSOd6,300
MHz)δ:830(1H,s,2H),797(1H,d,J=87Hz,
5H),692(1H,dd,J=87Hz,21Hz,6H),686
(1H,d,J=21Hz,8H),739(2H,d,J=87Hz,
2′,6′H),680(2H,d,J=87Hz,3′,5′H)。
13CNMR(DMSOd6,75MHz)δ:1572(2C),1235
(3C),1747(4C),1273(5C),1151(6C),
1625(7C),1021(8C),1574(9C),1166(10
C),1225(1′C),1301(2′,6′C),1149(3′,5′
C),1529(4′C)。以上数据与文献[2]报道的大豆
苷元一致,确定其结构为大豆苷元。
化合物 5 白色粉末,UV(MeOH)248nm,
(MeOH+NaOAc)257nm,1HNMR(DMSOd6,300
MHz)δ:801(1H,s,2H),765(1H,d,J=87Hz,
5H),644(1H,brd,J=87Hz,6H),618(1H,d,
J=21Hz,8H),714(1H,d,J=18Hz,2′H),
693(1H,dd,J=81,18Hz,6′H),678(1H,d,
J=81Hz,5′H),378(3H,s,OCH3),
13CNMR
(DMSOd6,75MHz)δ:1515(2C),1227(3C),
1740(4C),1261(5C),1151(6C),1589(7
C),1015(8C),1515(9C),1191(10C),1239
(1′C),1133(2′C),1462(3′C),1470(4′C),
1114(5′C),1214(6′C),556(OCH3)。NOESY
谱显示甲氧基单峰质子信号 δ378与 B环2(位质
子信号δ714(1H,d,J=18Hz)相关,说明其甲氧
基取代位于3′位。以上数据与文献[3]报道的7,
4′二羟基3′甲氧基异黄酮一致,所以确定其结构
为7,4′二羟基3′甲氧基异黄酮。
[参考文献]
[1] 海力茜,梁 鸿,赵玉英,等.多序岩黄芪化学成分研究[J].中
国中药杂志,2002,27(11):843.
[2] 韩丽平.鸡血藤化学成分研究[J].中国药房,2006,17(20):
1596.
[3] 李占林,芦晓燕,孟大利,等.苦马豆中化学成分研究[J].中草
药,2005,36(1):25.
FiveflavonoidsfromSpatholobussuberectus
ZHENGYan,LIUHua,BAIYanjing,MAYanmei,ZHAOYuying
(DepartmentofNaturalMedicines,SchoolofPharmceuticalSciences,PekingUniversity,Beijing100083,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatethechemicalconstituentsofSpatholobussuberectus.Method:Chromatographictech
niqueswereemployedforisolationandpurificationoftheconstituents.Thestructureswereelucidatedbyspectralanalysis.Result:
FiveflavonoidswereisolatedfromS.suberectusandtheirstructureswereidentifiedasmedicarpin(3hydroxy9methoxypterocarpane,
1),formononetinsodium(7Osodium4′methoxyisoflavone,2),formononetin(7hydroxy4′methoxyisoflavone,3),daidzein(7,4′
dihydroxyisoflavone,4),7,4′dihydroxy3′methoxyisoflavone5).Conclusion:Threecompounds1,3,5wereobtainedfromthege
nusforthefirsttime.
[Keywords] Spatholobussuberectus;flavonoids [责任编辑 牛泽宇]
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