全 文 ：经前舒颗粒对 ＰＭＳ肝气郁证大鼠额叶皮层和海马
５ＨＴ１Ａ受体结合活性的影响
孙世光，张惠云
（山东中医药大学，山东 济南 ２５０３５５）
［收稿日期］　２００８０８２６
［通信作者］　张惠云，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｈｕｉｙｕｎ＠１６３．ｃｏｍ
　　经前期综合征（ｐｒｅｍｅｎｓｔｒｕａｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＳ）是
指经常发生在经前，影响妇女日常生活和工作，涉及
身体、精神和行为三方面的症候群，其中，肝气郁证
是其主要亚型之一［１］。国外研究证明：ＰＭＳ症状的
发生与中枢神经系统５羟色胺（５ＨＴ），γ氨基丁酸
（ＧＡＢＡ）和孕酮（Ｐ）代谢有关［２］。结合作者前期实
验基础，采用放射性配体受体结合技术检测额叶皮
层和海马５ＨＴ１Ａ受体的特异结合活性变化，来研究
ＰＭＳ肝气郁证发病的中枢机制，并初步探讨中药复
方经前舒颗粒预防治疗 ＰＭＳ肝气郁证的中枢作用
机制。
１　材料
１．１　动物　健康未孕雌性 ＳＰＦ级 ＳＤ种大鼠，３５～
４５日龄，体重１８０～２００ｇ，山东中医药大学实验动
物中心，许可证号 ＳＣＸＫ（鲁）２００５００１５。
１．２　试剂和药物　ＴｒｉｓＢａｓｅ（Ｂｏｃｈｒｉｎｇｅｒ公司），考
马斯亮蓝 Ｇ２５０（Ｆｌｕｋａ公司），ＴｒｉｔｏｎＸ１００（北京化
学试剂公司），３Ｈ８ＯＨＤＰＡＴ０２５ｍｃｉ（放射性比
活度１３５ｃｉｍ·ｍｏｌ－１）（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ公司），
ＰＰＯ（Ｆｌｕｋａ公司），ＰＯＰＯＰ（Ｐｈｉｌｉｐｓｂｕｒｇ．ＮＪ公司）。
经前舒颗粒 （秦皇岛市山海关制药厂，批号
Ｚ２００５３０８７）。
１．３　仪器　ＦＪ２１０７Ｐ液体闪烁计数仪（西安 ２６２
厂），３１８ＭＣ型酶标仪（上海三科仪器有限公司），高
速分散器（广州仪科实验室技术有限公司）。
２　方法
２．１　动物筛选　整个实验周期大鼠饲养于昼夜颠
倒环境，每日于２１：００开灯，９：００关灯，并试验前预
适应环境１周。采用旷场实验筛选得分相近大鼠进
入实验；采用阴道涂片镜检法［３４］确定正常未孕大鼠
的动情期，同时大鼠动情周期评定辅助采用宏观行
为药理学观察方法，即将雌鼠引入雄鼠笼中，观察
大鼠动情行为（跳跃，奔走，摇耳，弓背，雄鼠击打雌
鼠背部）确定大鼠动情周期，同时阻止雄鼠爬跨雌
鼠。大鼠动情前期／动情期（也即动情周期接受期）
动情行为活跃，而动情间期／动情后期（也即动情周
期非接受期）动情行为减退或消失，中间间隔约２
ｄ左右。最后选取旷场得分相近、动情行为规则出
现且活跃、处于动情周期非接受期的大鼠纳入本实
验。
２．２　造模及给药　根据筛选结果，选取合适大鼠
３０只，分为３组，每组１０只，分别为正常组、肝
郁模型组、经前舒颗粒组。①正常组：不给予任何
刺激，放入鼠笼内，每天给予相同剂量的蒸馏水。
②肝郁模型组：参照文献方法造模［５］，将拟造模
大鼠前足与对侧后足用无菌纱布捆缚，妨碍其自由
活动，以大鼠稍能活动、取食为度，同时造模笼中
放入自由活动大鼠以增强致郁效应。造模同时给予
与正常组相同剂量的蒸馏水。③经前舒颗粒组：造
模后，同时给予经前舒颗粒（前期试验摸索较佳给
药剂量为１０００ｇ·Ｌ－１，即１ｍＬ药液含原生药１ｇ，
相当于人临床８倍剂量）。大鼠给药量２ｍＬ／只，即
每１００ｇ体重给药１ｍＬ，１次／ｄ，连续给药５ｄ。造
模完成后即进行宏观行为学观察以及旷场实验进行
模型评价。
２．３　旷场实验［６］　旷场实验箱１００ｃｍ×１００ｃｍ×
５０ｃｍ，周壁底面为黑色，底面用白线划分为面积相
等的２５块，沿墙格称外周格，其余为中央格。操作
者握住大鼠尾根部１／３处，小心放入旷场正中格，用
摄像系统记录动物３ｍｉｎ的行为变化，①水平得分：
动物穿越底面方块数为水平活动得分（四爪均进入
的方格方可记数，为水平运动得分）；②垂直得分：
直立次数为垂直活动得分（两前爪腾空或攀附墙
壁，为垂直运动得分）；旷场实验总分 ＝① ＋②。试
验前动物筛选和造模后模型评价各进行一次测定，３
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ｍｉｎ／次。行为评定采用盲法，３位观察者观看录像
评分，３个人一致性很高（Ｋａｐｐａ值大于０９５）。
２．４　放射性配体受体结合法检测５ＨＴ１Ａ受体的结
合活性　行为学实验结束，冰盒上取额叶皮层、海
马，分别置１０ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管８ｍＬＰＢＳ缓冲液高
速分散器匀浆，４℃１２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心３０ｍｉｎ，弃
上清，如是离心３次；１８ｍＬ的 ＴｒｉｓＨＣｌ反应液匀
浆混匀沉淀后取３个管如是加样：总结合管１，２分
别依次加入１００μＬ匀浆液，２００μＬＢｕｆｅｒ，２０μＬ标
记物；非特异性结合管依次加入１００μＬ匀浆液，１００
μＬＢｕｆｅｒ，１００μＬ非标记物，２０μＬ标记物。２５℃
孵育３０ｍｉｎ，用０℃冰冷的 Ｔｒｉｓ柠檬酸缓冲液负压
抽滤，并用冷缓冲液２０ｍＬ分３次洗涤。将滤膜置
于闪烁杯中，加入甲苯ＴｒｉｔｏｎＸ１００闪烁液５ｍＬ，放
置过夜，于闪烁计数仪上测定放射性（ｃｐｍ值）。采
用考马斯亮蓝法测定突触膜中的蛋白的浓度，用牛
血清白蛋白作为标准蛋白制作标准曲线。所有实验
操作如无特殊说明均在冰浴中进行。
特异性结合量（ｆｍｏｌ·ｍｇ－１）＝
（样品总ｃｐｍ－非特异ｃｐｍ）
总计数ｃｐｍ ×
每管配基的ｆｍｏｌ数
样品蛋白的ｍｇ数
２．５　统计方法　利用 ＳＡＳ８０统计软件进行单因
素方差分析，实验数据采用 珋ｘ±ｓ，Ｐ＜００５为有显著
性差异。
３　结果
３．１　大鼠行为学观察　较正常组大鼠，肝郁模型大
鼠不活跃，精神萎靡，眼神呆滞，相互扎堆睡觉，对外
界刺激不敏感；用电笔刺激，正常组大鼠激惹时常迅
速躲开，肝郁模型大鼠亦逃避电笔刺激，但反映迟
缓，速度较慢。而给药组大鼠则变化不明显。
３．２　大鼠旷场实验得分比较　旷场实验水平得分
反映动物的兴奋性，垂直得分反映动物对环境的适
应程度，旷场实验总分是动物探索行为及兴奋性的
总体反映。结果表明，较正常组大鼠，造模后大鼠水
平得分、垂直得分及旷场实验总分均显著减少（Ｐ＜
００１，Ｐ＜００５，Ｐ＜００１），说明肝郁模型大鼠活动
兴奋性及认知能力均有显著性降低，结合宏观行为
学观察可初步评价肝郁模型是成功的；较肝郁模型
组大鼠，造模同时给予经前舒颗粒预防治疗后，大鼠
水平得分、垂直得分及旷场实验总分均有显著性回
升（Ｐ＜００１），说明方药经前舒颗粒对 ＰＭＳ肝郁模
型大鼠有明显的预防治疗作用（表１）。
表１　各组大鼠旷场实验得分（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量／ｇ·ｋｇ－１ 水平得分 垂直得分 旷场实验总分
正常　　　 － ４９９２±２９１１ １１５８±５４１ ６１５０±３０９３
肝郁模型　 － １３５８±６８５２） ６５０±２９４１） ２００８±８９８２）
经前舒颗粒 １０ ３８１７±４７０３） １４６７±３８１３） ５２８３±８２０３）
　　注：与正常组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与肝郁模型组比较３）Ｐ＜００１（表２同）。
３．３　大鼠额叶皮层和海马５ＨＴ１Ａ受体的结合活性
　结果表明，与正常组比较，肝郁模型组大鼠额叶皮
层和海马５ＨＴ１Ａ受体的结合活性均有显著性下调
（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）；给予经前舒颗粒预防治疗后，
大鼠额叶皮层和海马５ＨＴ１Ａ受体的结合活性均得
到了显著性纠正（Ｐ＜００１），从而说明额叶皮层和
海马５ＨＴ１Ａ受体的结合活性下调可能是导致 ＰＭＳ
肝气郁证的微观机制之一，而方药经前舒颗粒可通
过对上述变化的纠正作用来达到预防治疗 ＰＭＳ的
目的。
４　讨论
中医学认为脏腑气血功能失调为 ＰＭＳ发病的
主要病机；乔明琦教授等［７］认为，ＰＭＳ发病的主要
病机是肝疏泄失常，其通过临床调查中得出ＰＭＳ证
候分布明朗，其中，肝气郁证占２７５％，是其主证与
常见证之一。
表２　各组大鼠额叶皮层和海马５ＨＴ１Ａ受体的
［３Ｈ］８ＯＨＤＰＡＴ结合活性（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
结合活性／ｆｍｏｌ·ｍｇ－１
额叶皮层 海马
正常　　　 － １６０２８±４２１３ １５７５８±３８７８
肝郁模型　 － ９８８９±３８８５１） ８１２３±３１３９２）
经前舒颗粒 １０ １８１３８±６７９２３） １６８７２±４２２３３）
　　现代研究表明，ＧＡＢＡＡ受体、５ＨＴ１Ａ受体与抑
郁情绪和 ＰＭＳ密切相关。ＧＡＢＡ是成熟哺乳动物
中枢神经系统最主要的抑制性神经递质，在控制
神经元兴奋性方面发挥着重要作用；５ＨＴ递质系
统障碍与 ＰＭＳ发病的病因学密切相关，而 ５ＨＴ１Ａ
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受体与焦虑情绪关系最为密切，是情绪研究尤其
是抑郁症研究中的热点；目前严重 ＰＭＳ患者临床
治疗的首选药物还是５ＨＴ能抗抑郁药，例如选择
性５ＨＴ再吸收抑制剂［８１０］。最近多项研究发现，
一系列５ＨＴ１Ａ受体激动剂具有明显缓解焦虑症作
用，其中比较典型的８羟基２Ｎ，Ｎ（双正丙基）氨
基四氢萘（８ＯＨＤＰＡＴ）在多种动物模型上均具有
抗焦虑作用。
本实验中 ＰＭＳ肝气郁证动物模型采用束缚四
肢的造模刺激法，通过旷场实验结果，结合宏观行
为学观察，可初步评价模型的制备是成功的；放射
免疫法结果显示肝郁模型大鼠额叶皮层和海马５
ＨＴ１Ａ受体特异性结合活性的改变非常灵敏，这也
和５ＨＴ１Ａ受体与焦虑抑郁情绪关系最为密切相吻
合。给予经前舒颗粒可以显著上调肝郁模型大鼠
额叶皮层和海马 ５ＨＴ１Ａ受体结合活性的异常变
化，提示方药预防治疗 ＰＭＳ与调节额叶皮层和海
马５ＨＴ１Ａ受体结合活性的变化密切相关，但是其
结合活性的调节机制目前并不清楚。作者仅就目
前试验结果初步推断，经前舒颗粒中的某些有效
成分或其代谢成分可能透过血脑屏障进入脑脊
液，阻断额叶皮层和海马５ＨＴ能神经末梢对５ＨＴ
的再摄取，从而发挥其抗抑郁作用，但这还需要后
面工作的进一步证实。
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ｒａｔｓ：ａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆｐｒｅｍｅｎｓｔｒｕａｌｉｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｐｓｙ
ｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１，２４（５）：５０２．
［责任编辑　古云侠］
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