全 文 ：ＨＰＬＣ法测定头花蓼及制剂热淋清颗粒中
槲皮苷的含量
谢　宇１，张丽艳１，梁　斌２，李孟林２，唐靖雯２
（１．贵阳中医学院，贵州 贵阳 ５５０００２；
２．贵州威门药业股份有限公司，贵州 贵阳 ５５００１８）
［摘要］　目的：建立头花蓼及热淋清颗粒中槲皮苷的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ（钻
石）Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相 甲醇１％醋酸四氢呋喃，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ
－１，检测波长２５８ｎｍ，柱温２５℃。结
果：槲皮苷在００８２～０４０８μｇ线性关系良好（ｒ＝０．９９９９７），头花蓼平均回收率１０２３％，ＲＳＤ０．９９％，热淋清颗粒平均回收
率１０２７％，ＲＳＤ２．２％。结论：该法重复性好，专属性强，可用于控制头花蓼药材及其单方制剂热淋清颗粒的质量。为头花蓼
药材规模化种植提供科学依据。
［关键词］　头花蓼；热淋清颗粒；槲皮苷；高效液相色谱；含量测定
［收稿日期］　２００８１２２８
［基金项目］　黔科合重大专项（２００８６０２０）
［通信作者］　张丽艳，Ｔｅｌ：（０８５１）５６１５３４４，Ｅｍａｉｌ：ｚｌｙ１９６４＠１６３．
ｃｏｍ
　　头花蓼为蓼科植物头花蓼 Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｃａｐｉｔａｔｕｍ
Ｂｕｃｈ．Ｈａｍ．ｅｘＤ．Ｄｏｎ的干燥全草或地上部分，是
贵州别具特色的苗药资源之一，具清热利湿，解毒止
痛，活血散瘀，利尿通淋功效。同时，头花蓼又是贵
州省中药现代化重点发展的“十大苗药”和重点培
育发展的“十大中药产业链”的品种之一。收载于
《贵州省中药材、民族药材质量标准》２００３年版［１］。
长期临床应用表明，头花蓼在治疗泌尿系统感染方
面具有显著的疗效。
其单方制剂———热淋清颗粒，具有清热解毒、利
尿通淋之功。用于湿热蕴结，小便黄赤，淋漓涩痛之
症，尿路感染、肾盂肾炎见上述证候者。是国家中药
保护品种，同时，又被遴选为国家基本用药目录及国
家基本医疗保险目录。收载于《中药成方制剂》第
１７册［２］。
因头花蓼药材及其成方制剂热淋清颗粒的质量
标准［１２］均较为简单，不能很好的评价药材及制剂内
在品质。其中，头花蓼药材中只规定了以槲皮素为
指标的含量测定方法，而其成方制剂热淋清颗粒的
质量标准中则无含量测定项，故本实验以槲皮苷为
指标，对头花蓼药材及其单方制剂热淋清颗粒中槲
皮苷的测定方法进行了研究。为头花蓼药材及其制
剂热淋清颗粒的质量稳定、可控、均一提供一定技术
支撑。
１　仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型高效液相色谱仪，安捷伦液相色
谱系统化学工作站；ＡＧ１３５型电子天平（ＭｅｔｌｅｒＴｏ
ｌｅｄｏ）；ＣＳＦ１Ｂ超声波清洗仪。
头花蓼样品来源于贵州施秉头花蓼 ＧＡＰ基地
及贵州主要产地，经贵阳中医学院魏升华教授鉴定
为蓼科 Ｐｏｌｙｇｏｎａｃｅａｅ植物头花蓼 Ｐｃａｐｉｔａｔｕｍ的干
燥地上部分。热淋清颗粒（贵州威门药业股份有限
公司）。
槲皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批
号１１１５３８２００４０３）；甲醇为色谱纯，水为纯净水，其
余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ（钻石）Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相甲醇１％冰醋酸四氢呋喃（２０∶６５∶
１５），流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２５８ｎｍ，柱温
２５℃。理论塔板数按槲皮苷峰计不低于２０００。
２．２　对照品溶液的制备
精密称取槲皮苷对照品适量，加甲醇溶解并制
成每１ｍＬ含００２ｍｇ的溶液，即得。
２．３　供试品溶液的制备
２．３．１　头花蓼药材供试品溶液制备　取头花蓼药
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材细粉约０４ｇ，精密称定，置５０ｍＬ具塞锥形瓶中，
精密加入５０％甲醇２５ｍＬ，称重，加热回流３０ｍｉｎ，
放冷，称重，用 ５０％甲醇溶液补足减失的质量，摇
匀，滤过，取续滤液５ｍＬ于２５ｍＬ量瓶中，加５０％
甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液用微孔滤膜
（０４５μｍ）滤过，即得。
２．３．２　热淋清颗粒供试品溶液制备　取热淋清颗
粒细粉约１ｇ，精密称定，置５０ｍＬ具塞锥形瓶中，精
密加入５０％甲醇２５ｍＬ，称重，加热回流３０ｍｉｎ，放
冷，称重，用５０％甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，
滤过，取续滤液５ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，加５０％甲醇
稀释至刻度，摇匀，过滤，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤
过，即得。
２．３．３　测定方法　精密吸取对照品溶液、头花蓼药
材供试品溶液、热淋清颗粒（无糖型）供试品溶液各
１０μＬ，热淋清颗粒（含糖型）供试品溶液２０μＬ注
入液相色谱仪测定，即得。
２．４　系统适用性试验及专属性考察［３］　分别吸取
对照品溶液、头花蓼药材供试品溶液、热淋清颗粒
（无糖型）供试品溶液、阴性供试品溶液各１０μＬ注
入色谱仪，记录色谱图，见图１。
２．５　线性关系的考察
Ａ．对照品；Ｂ．热淋清颗粒样品；Ｃ．头花蓼样品；１．槲皮苷。
图１　头花蓼药材及热淋清颗粒ＨＰＬＣ图
　　精密吸取浓度为００４０８４ｇ·Ｌ－１的槲皮苷对
照品溶液２，４，６，８，１０μＬ，按上述色谱条件进行测
定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准
曲线，得回归方程 Ｙ＝２．７３×１０３Ｘ－１３６（ｒ＝
０９９９９７）。结果表明，槲皮苷在００８１６４～０４０８４
μｇ线性关系良好。
２．６　精密度试验
精密吸取同一份槲皮苷对照品溶液（００４０８４
ｇ·Ｌ－１），在上述色谱条件下测定，连续进样５次，
每次４μＬ，测定峰面积，ＲＳＤ０４６％。
２．７　重复性试验
２．７．１　热淋清颗粒重复性试验　取同一批号的热
淋清颗粒（无糖型）样品粉末１ｇ，共５份，照２．３．２
项下的方法进行制备，按上述条件测定，计算槲皮苷
的含量。结果槲皮苷的平均含量为０８６ｍｇ·ｇ－１，
ＲＳＤ１４％。说明本法重复性良好。
２．７．２　头花蓼药材重复性试验　取同一产地的头
花蓼药材粉末０４ｇ，共５份，照２．３．１项下的方法
进行制备，按上述条件测定，计算槲皮苷的含量。结
果槲皮苷的平均含量为５５６ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ２７％。
说明本法重复性良好。
２．８　稳定性试验
２．８．１　热淋清颗粒供试品溶液　取同一批号的热
淋清颗粒（无糖型）样品粉末１ｇ，照２．３．２项下的
方法进行制备，按上述条件，分别于０，２，４，６，８，１２ｈ
进样测定，以峰面积积分值计算 ＲＳＤ，结果 ＲＳＤ
１２％，表明溶液中待测成分在１２ｈ内稳定。
２．８．２　头花蓼药材供试品溶液　取同一产地的头
花蓼药材粉末０４ｇ，照２．３．１项下的方法进行制
备，按上述条件，分别于０，２，４，６，８，１２ｈ进样测定，
以峰面积积分值计算ＲＳＤ，结果ＲＳＤ１８％，表明溶
液中待测成分在１２ｈ内稳定。
２．９　回收率试验
２．９．１　热淋清颗粒加样回收率试验　取６份已知
含量的热淋清颗粒（无糖型）粉末 ０５ｇ，精密称
定，分别精密加入槲皮苷对照品０４５９ｍｇ，照２．３．２
项下的方法进行制备，按上述色谱条件进行测定，
计算平均回收率为１０２７％，ＲＳＤ２２％。见表１。
２．９．２　头花蓼药材加样回收率试验　取６份已知
含量的头花蓼药材粉末０２ｇ，精密称定，分别精密
加入槲皮苷对照品１１２５ｍｇ，照２．３．１项下的方法
进行制备，按上述色谱条件进行测定，平均回收率为
１０２３％，ＲＳＤ０９９％。见表２。
２．１０　样品测定
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表１　热淋清颗粒加样回收率
取样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０４９５０ ０４２５７ ０９０３２ １０４０３
０５０４７ ０４３４０ ０９１１８ １０４９６ 　 　
０５０１９ ０４３１６ ０８９８７ １０１７６ １０２７ ２２
０５０５８ ０４３５０ ０９１２９ １０４１２ 　 　
０５０６８ ０４３５８ ０９０５９ １０２４２ 　 　
０５０９２ ０４３７９ ０８９１０ ９８７１ 　 　
　　注：加入量均为０４５９ｍｇ。
表２　头花蓼药材加样回收率
取样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０２０７５ １１５３７ ２２９４１ １０１３７
０２００８ １１１６４ ２２５３５ １０１０８ 　 　
０２０４１ １１３４８ ２２８９６ １０２６５ １０２３ ０９９
０２０４８ １１３８７ ２３０１８ １０３３９ 　 　
０２０２１ １１２３７ ２２７０２ １０１９１ 　 　
０２０６５ １１４８１ ２３１１９ １０３４５
　　注：加入量均为１１２５ｍｇ。
２．１０．１　头花蓼药材样品测定　取不同产地（贵州
施秉头花蓼ＧＡＰ基地，贵州盘县洒基乡落嘎村峰子
岩，贵州水城阿嘎乡马场村，贵州盘县盘关，贵州贵
阳高坡）的头花蓼药材样品，按上述方法测定（ｎ＝
３），结果样品中槲皮苷分别为 ５４６，５４８，４６９，
４３２，３７８ｍｇ·ｇ－１。
２．１０．２　热淋清颗粒样品测定　取１０个不同批号
（０７１１０１，０８０４０５，０８０２０１，０７０５０２，０７０８０３，０７１２０１，
０７０５０５，０８０１０２，０８０５０１，０７０３０４）的无糖型热淋清颗
粒样品及１０个不同批号（０７０１０５，０７０９０６，０６１２０８，
０６０８０４，０７０６０５，０７０７０５，０７０３０６，０８０２０８，０６０９０５，
０６０９０２）的含糖型热淋清颗粒样品，按上述方法测
定（ｎ＝３），结果样品中槲皮苷分别为每袋 ２７２，
２２６，２６７，４０６，３１１，２１８，３９３，２９２，２０７，
３５２；３４５，３２８，３９０，３３１，３２３，３１３，３６４，
２２４，３５０，２９９ｍｇ。
３　讨论
３．１　检测波长的选择
取槲皮苷对照品溶液进行紫外扫描，结果在
２５８ｎｍ及３５５ｎｍ处均有最大吸收，但２５８ｎｍ处灵
敏度较高，故选择２５８ｎｍ作为检测波长。
３．２　流动相的选择
实验过程中分别以甲醇０１％磷酸（７０∶３０）、甲
醇０５％醋酸四氢呋喃（２０∶６５∶１５）、甲醇１％醋酸
四氢呋喃（２０∶６５∶１５）为流动相进行了比较，结果以
甲醇１％醋酸四氢呋喃（２０∶６５∶１５）为流动相所得
峰形较好，故选之。
３．３　方法的选择
实验过程中还对供试品溶液的提取方法进行了
考察，最终确定了前述提取方法。
［参考文献］
［１］　贵州省中药材、民族药材质量标准［Ｓ］．２００３：１４７．
［２］　中华人民共和国中药成方制剂第１７册［Ｓ］．１９９８：２１９．
［３］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：附录Ⅵ Ｄ．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎｉｎＰｏｌｙｇｏｎｕｍｃａｐｉｔａｔｕｍａｎｄＲｅｌｉｎｑｉｎｇｇｒａｎｕｌｅｓ
ｂｙＨＰＬＣ
ＸＩＥＹｕ１，ＺＨＡＮＧＬｉｙａｎ１，ＬＩＡＮＧＢｉｎ２，ＬＩＭｅｎｇｌｉｎ２，ＴＡＮＧＪｉｎｇｗｅｎ２
（１．ＧｕｉｙａｎｇＣｏｌｅｇｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧＵＩＺｈｏｕＷａｒｍｅｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００１８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎｉｎＰｏｌｙｇｏｎｕｍｃａｐｉｔａｔｕｍａｎｄ
Ｒｅｌｉｎｑｉｎｇｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｏｎａＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｎｍ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏ
ｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ１％ＨＡｃＴＨＦ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２５８ｎｍａｎｄ
ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ００８１６４０４０８４μｇ（ｒ＝０９９９９７）．
ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｏｆｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎｉｎＰｃａｐｉｔａｔｕｍｗａｓ１０２３％ （ＲＳＤ０．９９％），ａｎｄｗａｓ１０２７％ （ＲＳＤ２．２％）ｉｎＲｅｌｉｎｑｉｎｇ
ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＰｃａｐｉｔａ
ｔｕｍａｎｄＲｅｌｉｎｑｉｎｇｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｉｔｃａｎｐｒｏｖｉｄｅａｓｃｉｅｎｃｅｂａｓｅｓｆｏｒｔｈｅｐｌａｎｔｉｎｇｏｆｐｏｌｙｇｏｎｕｍｃａｐｉｔａｔｕｍ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｃａｐｉｔａｔｕｍ；Ｒｅｌｉｎｑｉｎｇｇｒａｎｕｌｅｓ；ｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ；ＨＰＬＣ；ａｓｓａｙ ［责任编辑　周　驰］
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第３４卷第８期
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