全 文 ：安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱含量测定研究
马群，艾路，刘勇，刘永刚
（北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］ 目的：建立安宫牛黄丸中同时测定栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的 ＨＰＬＣ方法。方法：色谱柱 ＺｏｒｂａｘＣ１８（４６
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相０５％磷酸水溶液乙睛，采用线性梯度洗脱时间程序；检测波长２５４ｎｍ；柱温３５℃。结果：栀子
苷、黄芩苷和盐酸小檗碱平均回收率分别为９８０％，１０２％，１０１％。结论：该方法简便、快速、灵敏、准确，在同一色谱检测条件
下实现多指标成分同时定量，为安宫牛黄丸的质量评价和控制提供新的方法。
［关键词］ 安宫牛黄丸；栀子苷；黄芩苷；盐酸小檗碱；高效液相色谱法
［收稿日期］ ２００９００００
［基金项目］ 北京市科技发展项目（Ｈ０４０２３０１３０７１０）
［通信作者］ 艾路，副研究员。Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６５９，Ｅｍａｉｌ：
ａｉ９ｌｕ２９＠１６３．ｃｏｍ
安宫牛黄丸是我国传统药物中最负盛名的急症
用药。它源于清代温病学家吴鞠通的《温病条辨》，
是中医治疗高热症的“温病三宝”之一。安宫牛黄
丸［１］由牛黄、麝香、黄连、黄芩、栀子等药味组成。
主治温病高热、神昏、中风、口眼歪斜、痰痫壅盛。该
方疗效独特、临床应用广泛，为中医抢救急重病的高
效首选药［２］。经查阅文献，未发现对安宫牛黄丸中
栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱等多组分成分进行
质量控制的报道，本文采用高效液相色谱法同时
测定栀子、黄芩和黄连中指标性成分含量以控制
制剂质量。
１ 材料
岛津公司 ＬＣ１０ＡＴｖｐ高效液相色谱仪，ＳＨＩ
ＭＡＤＺＵＬＣ１０Ａ液相色谱工作站，ＳＰＤＭ１０Ａ检测
器。
甲醇、乙腈：色谱纯（天津四友生物医学技术开
发公司）；水为纯净水；其余试剂均为分析纯；栀子
苷（批号 １１０７４９２００５１１）、黄芩苷（批号 １１０７１５
２００５１４）、盐酸小檗碱（批号１１０７１３２００２０８）以上均
购自中国药品生物制品检定所。安宫牛黄丸（同仁
堂股份公司制药厂）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８柱（４６
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；检测波长２５４ｎｍ；柱温３５℃；
流动相Ａ为０５％磷酸水溶液，Ｂ为乙腈，线性梯度
洗脱时间程序见表１。
表１ 线性梯度洗脱时间程序
Ｎｏ． 时间／ｍｉｎ 流速／ｍＬ·ｍｉｎ－１ Ａ／％ Ｂ／％
１ ００１ １００ ９１０ ９０
２ １６００ １００ ９１０ ９０
３ １８００ ０９０ ８２０ １８０
４ ５０００ ０９０ ８２０ １８０
５ ５２００ １００ ６００ ４００
６ ６０００ １００ ６００ ４００
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷、黄芩苷
和盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成对照品溶液，
浓度分别为００２０１，００８６８，００２５２ｇ·Ｌ－１，用微
孔滤膜（０４５μｍ）滤过，即得，见图１。
１．栀子苷；２．黄芩苷；３．盐酸小檗碱。
图１ 栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱对照品色谱图
２．３ 供试品溶液的制备 取本品约０２５ｇ，剪碎，
研匀，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入７０％乙
醇２５ｍＬ，称重，超声处理（功率 ２５０Ｗ，频率 ５０
ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，放冷，再称重，用７０％乙醇补足减失的
质量，摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取续滤液，
作为供试品溶液，见图２。
２．４ 空白试验 按处方中药味的比例，自配不含栀
子、黄连和黄芩的群药，按其工艺制成空白制剂，以
９１
第３４卷第１９期
２００９年１０月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １９
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００９
１．栀子苷；２．黄芩苷；３．盐酸小檗碱。
图２ 安宫牛黄丸样品栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱
色谱图
样品溶液制备方法制成空白对照溶液并测定，见图
３，与样品溶液色谱图比较可以发现，在待测组分的
相应位置无干扰。
图３ 安宫牛黄丸空白样品色谱图
２．５ 线性关系考察 精密吸取栀子苷、黄芩苷和盐
酸小檗碱对照品溶液（００５９９，００８６８，００２５２ｇ·
Ｌ－１）１０，３０，５０，７０，９０ｍＬ，分别置１０ｍＬ量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀，注入液相色谱仪，按上述色
谱条件测定峰面积，计算得回归方程：栀子苷回归
方程Ｙ＝１１３×１０６Ｘ＋１６８×１０２，ｒ＝０９９９９；黄芩
苷回归方程Ｙ＝１１４×１０７Ｘ＋２５１×１０４，ｒ＝０９９９
９；盐酸小檗碱回归方程 Ｙ＝４０９×１０７Ｘ＋１８５×
１０４，ｒ＝０９９９９。结果表明，栀子苷、黄芩苷和盐酸
小檗碱分别在 ００５９９～０５９８５，００８６８～１７３６
４，００２５２～０５０４８μｇ内线性良好。
２．６ 精密度试验 精密吸取安宫牛黄丸同一批号
（５０１４９９９）供试品溶液５μＬ，重复进样５次，求得样
品中样品中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的ＲＳＤ分
别为０９１％，０６８％，０８７％（ｎ＝５）。
２．７ 稳定性试验 精密吸取安宫牛黄丸同一批号
（５０１４９９９）供试品溶液５μＬ，于０，２，４，８，１６，２４ｈ测
定，观察供试品溶液稳定性，样品中栀子苷、黄芩苷
和盐酸小檗碱的ＲＳＤ分别为１１％，０５８％，０３４％
（ｎ＝６），说明供试品溶液２４ｈ内基本稳定。
２．８ 重复性试验 按上述色谱条件对同一批样品
（５０１４９９９）６份，进行测定，求得栀子苷、黄芩苷和盐
酸小檗碱平均含量分别为１５００，６５９２，３５０５ｍｇ·
ｇ－１，ＲＳＤ分别为１１％，０６８％，１９％（ｎ＝６）。
２．９ 回收率试验 采用加样回收法，精密称取已知
含量的同一批号（批号５０１４９９９）的样品０１２５ｇ，平
行６份。分别精密加入栀子苷对照品溶液（０１９２ｇ
·Ｌ－１）、黄芩苷对照品溶液（０７１０ｇ·Ｌ－１）和盐酸
小檗碱对照品溶液（０３９５ｇ·Ｌ－１）各 １０ｍＬ，测
定。栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱平均回收率分别
为９８０％，１０２％，１０１％，ＲＳＤ分别为１４％，１０％，
１０％（ｎ＝６）。
２．１０ 样品测定结果 分别取３批样品，依上述色
谱条件进行测定，见表２。
表２ 样品测定 ｍｇ·ｇ－１
批号 栀子苷 黄芩苷 盐酸小檗碱
５０１００７７ １３５１ ６４４３ ３７１７
４０１０２２８ １９５２ ６５２３ ３６１１
４０１０２７４ ２０２１ ７３０８ ３７７３
３ 讨论
在流动相的选择上，由于黄芩、栀子和盐酸小檗
碱极性差异较大，在同一色谱条件下进行分析难度
较大，本实验比较了多种流动相系统，最后选择了文
中的梯度，虽然有一定的漂移，但是经过与空白对照
的色谱图比较和方法学验证，证明对以上３个化合
物的准确定量无影响，并且出峰时间适当；本实验同
时考察了不同浓度的磷酸水溶液对黄芩苷、盐酸小
檗碱峰形的影响，发现当磷酸浓度为０５％时，以上
２个化合物色谱峰脱尾的现象得到改善。
本实验对提取溶剂、提取方法、提取时间分别进
行了系统考察。提取溶剂的考察方法为，分别选取
甲醇、７０％乙醇、９５％乙醇为溶剂，对同一样品超声
提取３０ｍｉｎ，比较待测化合物的峰面积，发现采用
７０％乙醇和甲醇做提取溶剂对色谱峰峰面积的影响
差别不大，考虑到乙醇无毒，因此选择７０％乙醇作
为提取溶剂；本实验比较了超声提取、加热回流和冷
浸过夜３种提取方法，发现加热回流提取的色谱峰
面积与超声提取的色谱峰面积差别不大，冷浸提取
的色谱峰面积较小，考虑到超声提取简单省事，因此
选择超声提取作为样品溶液的制备方法；本实验考
察了超声 ３０，６０，９０ｍｉｎ３个时间点，发现超声 ３０
ｍｉｎ就可以把待测组分提取完全，因此确定超声时
０２
第３４卷第１９期
２００９年１０月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １９
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００９
间为３０ｍｉｎ。综上，样品溶液的制备条件为７０％乙
醇超声提取３０ｍｉｎ。
本实验应用ＤＡＤ检测器对测定波长进行了考
察，发现栀子苷、黄芩苷的最大吸收不在２５４ｎｍ，但
是由于其在制剂中含量比较高并且含量范围比较稳
定，采用２５４ｎｍ作为测定波长能够达到方法学考察
的要求，同时，对３个化合物在同一波长下测定使
得方法更加简单，增加了普适性，有利于推广普
及。
中药丸剂组成复杂，单一指标评价则很难反映
药品的内在质量，必须对其中的多种有效指标成分
进行定量，以全面地反映出复方的整体质量。作为
一个复杂成分的蜜丸，进行含量测定时，一般一种处
理方法、一个色谱条件只能检测一种化学成分，本文
用同一处理方法，在同一色谱检测条件下同时实现
栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱多指标成分定量，为安
宫牛黄丸的质量控制和评价提供新的方法。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２４７．
［２］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典临床用药须知．中药卷
［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００５：４６７．
［责任编辑 周 驰］
１２
第３４卷第１９期
２００９年１０月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １９
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００９