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HPLC法同时测定小儿导赤片中栀子苷和大黄酚含量
常 丽(天津市宁河区药品检验所 天津 301500)
摘要:目的 建立测定小儿导赤片中栀子苷和大黄酚的含量。方法 采用高效液相色谱法，以乙腈为流动相 A，0. 1%磷酸溶液为流动相 B，梯
度洗脱;检测波长为 238nm(栀子苷)，254nm(大黄酚)，柱温:40℃;流速:1. 0mL·min －1;进样量:10μL。结果 栀子苷在 6. 01μg ～ 120. 20μg范
围内线性良好(r = 0. 9999，n = 5)，大黄酚在 1. 234μg ～ 24. 68μg范围内线性良好(r = 0. 9999，n = 5)，平均回收率分别为99. 7%和99. 7%，ＲSD分
别为 0. 8%和 1. 0%。结论 本方法可用于测定小儿导赤片中栀子苷和大黄酚含量。
关键词:高效液相色谱法;小儿导赤片;栀子苷;大黄酚
中图分类号:Ｒ927 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2016)-08-03220-0093-02
作者简介:常 丽，女(1978. 9 －)。毕业于天津市中医药大学。职
称:主管中药师。从事中药检验专业。
小儿导赤片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第二十
册，该制剂由大黄、栀子、地黄、甘草等七味药组成，具有清热
利便的功效。用于胃肠积热，口舌生疮，咽喉肿痛，牙根出血，
腮颊肿痛，暴发火眼，大便不利，小便赤黄等症。栀子和大黄
是该处方中的主要组分，其主要有效成分分别为栀子苷和大
黄酚，两者都具有保肝利胆，抗菌消炎之功〔1，2〕。该药现有质
量标准无含量测定项，不能有效控制其质量。现在原有质量
标准基础上，采用双波长 HPLC 同时测定小儿导赤片中栀子
苷和大黄酚双组分的含量，该方法操作简便，结果可靠，可用
于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 日本 SHIMADZU LC-2010AHT 高效液相色谱仪，
LC solution工作站。色谱柱:DiamonsilTM C18(250 × 4. 6mm，
5μm);岛津 UV2600 紫外-可见分光光度计。
1. 2 试剂 甲醇、乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯)、水为纯化
水。
1. 3 对照品 栀子苷(中国药品生物制品检定所，批号:
110749-200714)。大黄酚(中国药品生物制品检定所，批号:
110796-201017)。
1. 4 样品 天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
提供 (批号:CD28100、CJ28102、DA28103;规格:每片重
0. 3g)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件〔3，4〕 流动相:以乙腈为流动相 A，以 0. 1%磷
酸溶液为流动相 B，按表 1 中的规定进行梯度洗脱;检测波长
为 238nm(栀子苷)，254nm(大黄酚)，柱温为 40℃，流速为
1. 0mL·min －1，进样量 10μL。理论板数按栀子苷峰计算应不
低于 1500。
表 1 梯度洗脱系统
时间(min) 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0 ～ 6 15 85
6 ～ 8 15→80 85→20
8 ～ 22 80 20
22 ～ 27 15 85
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液:分别称取栀子苷对照品和大黄酚对照品
各适量，精密称定，加甲醇分别制成每 1mL 含栀子苷约 30μg
·mL －1和大黄酚约 6μg·mL －1的混合对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液:取重量差异项下样品，研细，混匀，取约
0. 3g，精密称定，精密加入甲醇 25mL，称定重量，超声处理
30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得。
2. 2. 3 阴性样品溶液:取按处方比例及制法制成不含栀子和
大黄的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法，制得阴性样品
溶液。
2. 3 方法学考查
2. 3. 1 系统适用性试验:取混合对照品溶液适量，按上述色
谱条件分析，以 238nm和 254nm为检测波长，进样分析，结果
表明，栀子苷与大黄酚与相邻杂质峰均能有效分离，且阴性样
品无干扰。实验结果均符合药典要求。结果(见图 1 ～ 3)。
2. 3. 2 标准曲线的制备:取栀子苷与大黄酚对照品各适量，
精密称定，加甲醇制成每 1mL 中分别含栀子苷 6. 01μg、
18. 03μg、30. 05μg、60. 10μg、120. 20μg 和含大黄酚 1. 234μg、
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 28 No. 8 2016
3. 702μg、6. 17μg、12. 34μg、24. 68μg的混合溶液，按上述色谱
条件分析，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，
峰面积值为纵坐标，求得栀子苷回归方程:Y = 14005. 6X －
910. 9，r = 0. 9999(n = 5);求得大黄酚回归方程 Y = 50865. 3X
+ 2242. 6，r = 0. 9999(n = 5)。结果表明栀子苷在 6. 01μg ～
120. 20μg范围内线性良好，大黄酚在 1. 234μg ～ 24. 68μg 范
围内线性良好。
2. 3. 3 进样重复性试验:取上述对照品溶液，连续进样 6 次，
测定栀子苷和大黄酚峰面积，测得栀子苷峰面积 ＲSD 为
0. 7%，测得大黄酚峰面积 ＲSD为 0. 2%，结果符合要求。
图 1 HPLC图
A为栀子苷对照品;B为大黄酚对照品
图 2 HPLC图
A为栀子苷样品;B为大黄酚样品
图 3 HPLC图
A为栀子苷阴性样品;B为大黄酚阴性样品
2. 3. 4 重现性试验:取同一批号(CD28100)样品 6 份，按
“2. 2. 2”供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱
条件分析，测定每份样品中栀子苷和大黄酚含量。结果每片
样品中栀子苷平均含量为 0. 679mg，ＲSD 为 0. 8%，大黄酚平
均含量为 0. 137mg，ＲSD为 0. 9%，结果均符合要求。
2. 3. 5 稳定性试验:取已知含量供试品，分别在 0、2、4、6、8、
10h，测定样品中栀子苷和大黄酚峰面积，测得峰面积值的
ＲSD分别为 0. 16%和 0. 20%，说明样品溶液稳定性良好。
2. 3. 6 回收率试验:取栀子苷和大黄酚对照品适量，精密称
定，加甲醇制成浓度为含栀子苷 0. 1202mg·mL －1、大黄酚
0. 02468mg·mL －1的混合对照品溶液;另取已知含量的样品
(CD28100)，研细，取约 0. 15g，共 9 份，精密称定，分别精密加
入上述混合对照品溶液 2. 4mL、3. 0mL、3. 6mL各 3 份，再加甲
醇分别至 25mL，制得供回收率用供试品溶液，按上述色谱条
件分析，计算回收率，结果栀子苷平均回收率为 99. 7%，ＲSD
为 0. 8%;大黄酚平均回收率 99. 7%，ＲSD 为 1. 0%。符合试
验要求。结果(见表 2)。
表 2 回收率试验测定结果
序号 取样量(g)
栀子苷(mg) 大黄酚(mg) 测得量(mg) 回收率(%)
含量 加入量 含量 加入量 栀子苷 大黄酚 栀子苷 大黄酚
1 0. 1523 0. 3447 0. 2885 0. 0696 0. 0593 0. 6323 0. 1276 99. 9 99. 0
2 0. 1563 0. 3538 0. 2885 0. 0714 0. 0593 0. 6399 0. 1298 99. 6 99. 3
3 0. 1506 0. 3409 0. 2885 0. 0688 0. 0593 0. 6326 0. 1288 100. 5 100. 5
4 0. 1549 0. 3506 0. 3606 0. 0707 0. 0741 0. 7055 0. 1437 99. 2 99. 2
5 0. 1561 0. 3533 0. 3606 0. 0713 0. 0741 0. 7046 0. 1430 98. 7 98. 3
6 0. 1578 0. 3572 0. 3606 0. 0721 0. 0741 0. 7076 0. 1440 98. 6 98. 5
7 0. 1503 0. 3402 0. 4327 0. 0686 0. 0889 0. 7801 0. 1596 100. 9 101. 3
8 0. 1543 0. 3492 0. 4327 0. 0705 0. 0889 0. 7821 0. 1602 100. 0 100. 5
9 0. 1529 0. 3461 0. 4327 0. 0698 0. 0889 0. 7800 0. 1595 100. 2 100. 5
2. 3. 7 样品测定:取 3 个批号的样品，每批各平行制备 2 份
供试品溶液，测定栀子苷和大黄酚含量。结果(见表 3)。
表 3 3 批样品含量测定结果
批号 栀子苷(mg /片)ＲAD(%)大黄酚(mg /片)ＲSD(%)
CD28100 0. 679 0. 3 0. 137 0. 6
CJ28102 0. 766 0. 5 0. 150 0. 6
DA28103 0. 702 0. 7 0. 126 0. 5
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 经紫外光谱扫描，栀子苷在 238nm
波长处有最大吸收，大黄酚在 254nm 有最大吸收，为了能够
更确切地反映各成分实际含量，故采用双波长测定两种成分
的含量。
3. 2 流动相的选择 选择流动相时，比较了 0. 1%磷酸溶液-
乙腈不同比例的流动相系统，经试验采用梯度洗脱，各个组分
可以有效分离，主成分峰与相邻杂质峰分离度符合要求。
3. 3 提取方法和提取溶剂的比较 试验中分别采取不同比
例的甲醇作为提取溶剂，当使用含水甲醇提取时，杂质较纯甲
醇提取出的量多，主成分无明显变化，故将甲醇作为提取溶
剂。试验中对提取方式和提取时间进行了比较，结果显示，超
声提取 30min，可将主成分提取完全，提取方式简便，故将超
声提取定为该制剂的提取方法。
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海峡药学 2016 年 第 28 卷 第 8 期