全 文 ：［收稿日期］ 20121014(002)
［基金项目］ 广西千亿元重大科技攻关工程项目(桂科攻
11107009-2-6)
［第一作者］ 杜成智，讲师，硕士，从事药物分析研究，Tel:0771-
2219877，E-mail:276561774@ qq． com
［通讯作者］ * 谭建宁，研究生，高级实验师，从事中药化学成
分及质量标准研究，Tel:0771-2219877，E-mail:
648545814@ qq． com
HPLC测定复方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素甲醚
杜成智，谭建宁* ，马雯芳
( 广西中医药大学，南宁 530001)
［摘要］ 目的:建立复方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素甲醚的测定方法。方法:采用 Waters Symmetry C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，流动相分别为乙腈-水(15∶ 85)、甲醇-水(95∶ 5) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长分别为 238，254 nm，柱温
25 ℃。结果:栀子苷、大黄素甲醚分别在 0. 493 2 ～ 2. 959 2 μg (r = 0. 999 5)和 0. 063 4 ～ 0. 380 4 μg (r = 1. 000 0)线性关系良
好，平均加样回收率分别为 100. 4%，101. 3%，ＲSD分别为 1. 9%，1. 7%。结论:方法简便可行，结果准确，重复性好，可用于复
方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素甲醚的含量测定。
［关键词］ 复方龙脷胶囊;高效液相色谱;栀子苷;大黄素甲醚
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)14-0135-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013140135
Determination of Geniposide and Physcion in
Compound Longli Capsule by HPLC
DU Cheng-zhi，TAN Jian-ning* ，MA Wen-fang
(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for the determination of Geniposide and Physcion in
Compound Longli Capsule． Method:Waters Symmetry C18 analytical column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)was
used． The mobile phase was consisted of acetonitrile-water (15∶ 85)and methanol-water (95∶ 5)respectively;the
flow rate was 1. 0 mL·min －1，UV detection wavelength was set at 238，254 nm respectively． The column
temperature was maintained at 25 ℃ ． Ｒesult:Under the chromatographic conditions used，the calibration curve of
geniposide and physcion was linear in the range of 0. 493 2-2. 959 2 μg (r = 0. 999 5)and 0. 063 4-0. 380 4 μg
(r = 1. 000 0)respectively． The average recoveries was 100. 4% and 101. 3% with ＲSD 1. 9% and 1. 7%
respectively． Conclusion:The method is accurate，effective and feasible． It can be used for the determination of
the content of geniposide and physcion contained in Compound Longli capsule．
［Key words］ Compound Longli capsule;HPLC;geniposide;physcion
龙脷叶［1］是广西特有的壮族药用资源，在壮医
临床上作为方药广为使用。壮药复方龙脷胶囊组方
来源于壮药经验方，其由壮药龙脷叶(壮药名:蒙凛
垄)、栀子、麦冬、白芍、大黄共 5 味药材组成，具有
清热润肺、疏肝除烦、养阴通便的功效，经多年临床
使用，对精神病障碍引起的阴虚火旺证，症见烦躁、
便秘等有很好的疗效。为了对该品种进行更加全面
的现代研究，按照国家中药新药六类的技术要求进
行全面研究。栀子［2］为方中的君药，主心烦懊恼不
眠、除心神颠倒欲绝、利五淋、通小便、去胸中之热
甚，大黄为使药，能迅速泻火通便排毒，又助君药滋
阴养血、血盈津丰、火不自生［3-4］。为有效控制复方
龙脷胶囊的质量，本研究参考相关文献［5-10］建立了
复方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素甲醚两种成分的含
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量测定方法。
1 材料
美国 Agilent 1260 Series高效液相色谱仪［四元
泵，在线脱气机，自动进样器(G1329B) ，柱温箱］，
KQ3200B型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公
司) ，LG16-WA型台式高速离心机(北京京立离心机
有限公司) ，超纯水系统(MILLIPOＲE) ，CP224S 型电
子分析天平(Sartorius 德国)。乙腈、甲醇为色谱纯，
其余试剂均为分析纯，水为高纯水。栀子苷对照品
(批号 110749-200714) ，大黄素甲醚对照品(批号
110758-201013)由中国药品生物制品检定所提供。
复方龙脷胶囊(批号 120601，120602，120603，120604，
120605，120606)由广西鸿博药业有限公司提供。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
2. 1. 1 栀子苷色谱条件 Waters Symmetry C18色谱
柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，柱温 25 ℃，流动相乙
腈-水(15∶ 85) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 238
nm，进样量 10 μL。在此色谱条件下，栀子苷峰与其
他成分分离良好。
2. 1. 2 大黄素甲醚色谱条件 Waters Symmetry C18
色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，柱温 25 ℃，流动
相甲醇-水(95 ∶ 5) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长
254 nm，进样量 10 μL。在此色谱条件下，大黄素甲
醚峰与其他成分分离良好。
2. 2 溶液配制
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取栀子苷对照品
12. 33 mg，加甲醇制成每 1 mL含栀子苷 0. 493 2 mg
的溶液，即得栀子苷储备液。
精密称取大黄素甲醚对照品 3. 17 mg，加甲醇
制成每 1 mL 含大黄素甲醚 0. 063 4 mg 的溶液，即
得大黄素甲醚储备液。
2. 2. 2 供试品溶液 取复方龙脷胶囊内容物(批
号 120602)约 1. 0 g，精密称定后置具塞三角瓶中，精
密加入甲醇 25 mL，精密称定后超声处理 20 min，放
冷，补足减失质量。滤过后取续滤液离心 10 min，静
置，用 0. 45 μm滤膜滤过，即得测栀子苷供试品溶液。
取复方龙脷胶囊内容物(批号 120602)约
0. 7 g，精密称定后置具塞三角瓶中，精密加入甲醇
25 mL，精密称定后超声处理 30 min，放冷，补足减失
质量。滤过后取续滤液离心 10 min，静置，用0. 45 μm
滤膜滤过，即得测大黄素甲醚供试品溶液。
2. 2. 3 阴性样品溶液 按处方比例及工艺配制缺
栀子以及缺大黄的复方龙脷胶囊，按供试品溶液的
制备方法，制备阴性样品溶液，按 2. 1 项色谱条件下
吸取 10 μL进样。结果表明，阴性样品在栀子苷及
大黄素甲醚相应位置处无吸收峰，表明无阴性干扰。
对照品，样品及阴性样品色谱图见图 1，2。
A．对照品;B．样品;C．阴性样品;1. 栀子苷
图 1 栀子苷对照，复方龙脷胶囊样品
及缺栀子阴性样品 HPLC
A．对照品;B．样品;C．阴性样品;1. 大黄素甲醚
图 2 大黄素甲醚对照，复方龙脷胶囊样品
及缺大黄阴性样品 HPLC
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2. 3 系统适应性试验
2. 3. 1 栀子苷 分别吸取栀子苷对照品溶液和供
试品溶液及阴性样品溶液各 10 μL注入高效液相色
谱仪，按 2. 1. 1 项下色谱条件记录色谱图，结果栀子
苷的保留时间为 7 min 左右，阴性对照样品对测定
无干扰，色谱图见图 1，栀子苷峰与邻近峰达到基线
分离，分离度良好(Ｒ ＞ 1. 5)。
2. 3. 2 大黄素甲醚 分别吸取大黄素甲醚对照品
溶液和供试品溶液及阴性样品溶液各 10 μL注入高
效液相色谱仪，按 2. 1. 2 项下色谱条件记录色谱图，
结果大黄素甲醚的保留时间为 9 min 左右，阴性对
照样品对测定无干扰，色谱图见图 2，大黄素甲醚峰
与邻近峰达到基线分离，分离度良好(Ｒ ＞ 1. 5)。
2. 4 栀子苷方法学考察
2. 4. 1 线性试验 精密吸取 2. 2. 1 项下栀子苷对
照品储备液适量，加甲醇定容，配制栀子苷系列对照
品溶液，分别吸取 10 μL 注入高效液相色谱仪，按
2. 1. 1 项下色谱条件测定峰面积。以对照品的进样
量(μg)对峰面积进行线性回归，求得回归方程为
Y = 1 530X － 52. 92 (r = 0. 999 5) ，其线性范围为
0. 493 2 ～ 2. 959 2 μg。
2. 4. 2 精密度试验 精密吸取栀子苷对照品溶液
10 μL，重复进样 6 次，测得峰面积，峰面积积分值
ＲSD 0. 21%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取供试品溶液按上述色谱条
件分别于 0，2，4，6，8，12 h 进样测定，测定其峰面积
的 ＲSD 1. 4%(n = 6)。结果表明样品溶液在 12 h
内稳定。
2. 4. 4 重复性试验 取同一批号龙脷胶囊样品
(批号 120602)6 份，分别按 2. 2. 2 项下供试品溶液
的制备方法制备供试品溶液，并依法测定，计算得平
均含量为 1. 889 mg /粒，ＲSD 2. 2%(n = 6) ，说明该
法重复性较好。
2. 4. 5 加样回收率试验 取已知栀子苷含量的样
品(批号 120602)6 份，取约 0. 5 g，精密称定，分别精
密加入栀子苷对照品溶液(2. 496 g·L －1)1 mL，其
余操作按 2. 2. 2 项下的方法制备，测定，计算，结果
平均加样回收率为 100. 4%，ＲSD 1. 9%(n = 6) ，说
明本方法准确度较好。结果见表 1。
2. 4. 6 样品含量测定 复方龙脷胶囊装样规格约
为 0. 36 g /粒，取 6 个批号样品，按 2. 2. 2 项制备供
试品溶液，在 2. 1 项色谱条件测定，结果见表 2。
2. 5 大黄素甲醚方法学考察
2. 5. 1 线性试验 精密吸取 2. 2. 1 项下大黄素甲
表 1 栀子苷加样回收率试验(n = 6)
原有量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
2. 498 9 2. 496 5. 001 9 100. 3
2. 524 2 2. 496 4. 977 6 98. 29
2. 517 8 2. 496 5. 023 5 100. 4
100. 4 1. 9
2. 524 8 2. 496 5. 021 5 100. 0
2. 512 8 2. 496 5. 106 9 103. 9
2. 507 8 2. 496 4. 996 7 99. 71
表 2 样品中栀子苷的测定(n = 3)
批号 栀子苷 /(mg /粒) ＲSD /%
120601 2. 07 1. 7
120602 1. 93 1. 8
120603 2. 00 0. 3
120604 2. 00 0. 5
120605 1. 99 1. 6
120606 1. 96 1. 5
醚对照品储备液适量，加甲醇定容，配制大黄素甲醚
系列对照品溶液，分别吸取 10 μL 注入高效液相色
谱仪，按 2. 1. 2 项下色谱条件测定峰面积。以对照
品的进样量(μg)对峰面积进行线性回归，求得回归
方程为 Y = 3 759X + 1. 986(r = 1. 000 0) ，其线性范
围为 0. 063 4 ～ 0. 380 4 μg。
2. 5. 2 精密度试验 精密吸取大黄素甲醚对照品
溶液 10 μL，重复进样 6 次，测得峰面积，峰面积积
分值 ＲSD 0. 06%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。
2. 5. 3 稳定性试验 取供试品溶液按上述色谱条件
分别于 0，2，4，6，8，12 h 进样测定，测定其峰面积的
ＲSD 0. 23%(n =6)，结果表明样品溶液在12 h内稳定。
2. 5. 4 重复性试验 取同一批号龙脷胶囊样品(批
号 120602)6 份，分别按 2. 2. 2 项下方法制备供试品
溶液，并依法测定，计算得平均含量为 0. 225 mg /粒，
ＲSD 1. 2%(n = 6) ，说明该法重复性较好。
2. 5. 5 加样回收率试验 取已知大黄素甲醚含量
的样品(批号 120602)6 份，取约 0. 16 g，精密称定，
分别精密加入大黄素甲醚对照品溶液(0. 063 4 g·
L －1)1 mL，其余操作按 2. 2. 2 项下方法，测定，计
算，结果平均加样回收率为 101. 3%，ＲSD 1. 7%(n
= 6) ，说明本方法准确度较好。结果见表 3。
2. 5. 6 样品含量测定 复方龙脷胶囊装样规格约
为 0. 36 g /粒，取 6 个批号样品，按 2. 2. 2 项制备供
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杜成智，等:HPLC测定复方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素甲醚
表 3 大黄素甲醚加样回收率试验(n = 6)
原有量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
0. 099 7 0. 063 4 0. 163 1 99. 96
0. 095 0 0. 063 4 0. 158 4 99. 93
0. 097 5 0. 063 4 0. 162 1 101. 9
101. 3 1. 7
0. 094 7 0. 063 4 0. 158 8 101. 1
0. 096 6 0. 063 4 0. 162 7 104. 3
0. 098 7 0. 063 4 0. 162 3 100. 4
表 4 样品中大黄素甲醚的测定(n = 3)
批号 大黄素甲醚 /(mg /粒) ＲSD /%
120601 0. 23 1. 3
120602 0. 23 1. 4
120603 0. 23 0. 8
120604 0. 28 1. 5
120605 0. 29 1. 6
120606 0. 28 0. 9
试品溶液，在 2. 1 项色谱条件测定，结果见表 4。
3 讨论
该制剂用于治疗精神病障碍引起的烦躁和便秘
等症，由于大黄素甲醚可通过血脑屏障［11］，且具有
很强的抗炎和泻下作用，是该制剂的主要有效成分;
故选择测定大黄素甲醚的含量作为该制剂质控指标
之一。
中药材和中药复方成分种类复杂，研究中常会
碰到同时测定多个成分且各成分的紫外吸收不同的
问题，本实验采用 238 nm［12］测定栀子苷，采用 254
nm［12］测定大黄素甲醚可避免杂质影响又可满足灵
敏度要求。
曾分别采用不同比例的乙醇、甲醇超声提取和
回流考察提取率，结果显示 100%甲醇超声提取即
可较好去除干扰杂质又可提取完全效果最佳。但对
超声时间进行考察时发现 100%甲醇超声 20 min提
取栀子苷完全，而 100%甲醇超声 30 min 提取大黄
素甲醚才能提取完全。故确定 100%甲醇超声提取
20 min为栀子苷提取方案，而 100%甲醇超声提取
30 min为大黄素甲醚提取方案，提取省时完全，操作
简单，重复性好。
在流动相的选择中，分别考察了甲醇-水
(95∶ 5)、甲醇-水(85∶ 15)、甲醇-水(60∶ 40)、乙腈-水
(85∶ 15)、乙腈-水(50∶ 50)、乙腈-水(20∶ 80)、乙腈-
水(15∶ 85)等多种流动相的分离效果，经过实验分
析，综合考虑了分离效果、基线平稳、操作方便性等
情况，最终确定乙腈-水(15∶ 85)、甲醇-水(95∶ 5)为
测定栀子苷及大黄素甲醚最佳流动相，该条件下测
定物质出峰快，与杂质峰的分离度均 ＞ 1. 5。
比较了 Agilent、月旭、Waters 不同色谱柱的分
离效能，结果发现 Waters 色谱柱分离效果、峰型均
较好，而另两种色谱柱所得峰型有拖尾，且峰型不
佳，因此采用 Waters色谱柱。
本实验通过 6 个不同批次的样品的含量测定，
摸索出 HPLC测定复方龙脷胶囊中栀子苷和大黄素
甲醚的含量，可作为复方龙脷胶囊含量测定的质量
控制标准。
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［责任编辑 顾雪竹］
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