全 文 ：安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱含量测定研究
马群，艾路，刘勇，刘永刚
（北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］ 目的：建立安宫牛黄丸中同时测定栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的 ＨＰＬＣ方法。方法：色谱柱 ＺｏｒｂａｘＣ１８（４６
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相０５％磷酸水溶液乙睛，采用线性梯度洗脱时间程序；检测波长２５４ｎｍ；柱温３５℃。结果：栀子
苷、黄芩苷和盐酸小檗碱平均回收率分别为９８０％，１０２％，１０１％。结论：该方法简便、快速、灵敏、准确，在同一色谱检测条件
下实现多指标成分同时定量，为安宫牛黄丸的质量评价和控制提供新的方法。
［关键词］ 安宫牛黄丸；栀子苷；黄芩苷；盐酸小檗碱；高效液相色谱法
［收稿日期］ ２００９０３２６
［基金项目］ 北京市科技发展项目（Ｈ０４０２３０１３０７１０）
［通信作者］ 艾路，副研究员。Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６５９，Ｅｍａｉｌ：
ａｉ９ｌｕ２９＠１６３．ｃｏｍ
安宫牛黄丸是我国传统药物中最负盛名的急症
用药，源于清代温病学家吴鞠通的《温病条辨》，是中
医治疗高热症的“温病三宝”之一。安宫牛黄丸［１］由
牛黄、麝香、黄连、黄芩、栀子等药味组成。主治温病
高热、神昏、中风、口眼歪斜、痰痫壅盛。该方疗效独
特、临床应用广泛，为中医抢救急重病的高效首选
药［２］。经查阅文献，未发现对安宫牛黄丸中栀子苷、
黄芩苷和盐酸小檗碱等多组分成分进行质量控制的
报道，本文采用高效液相色谱法同时测定栀子、黄芩
和黄连中指标性成分含量以控制制剂质量。
１ 材料
岛津公司ＬＣ１０ＡＴｖｐ高效液相色谱仪，ＳＨＩＭＡＤ
ＺＵＬＣ１０Ａ液相色谱工作站，ＳＰＤＭ１０Ａ检测器。
甲醇、乙腈（天津四友生物医学技术开发公司色
谱纯）；水为纯净水；其余试剂均为分析纯；栀子苷（批
号１１０７４９２００５１１）、黄芩苷（批号１１０７１５２００５１４）、盐
酸小檗碱（批号１１０７１３２００２０８）以上对照品均购自中
国药品生物制品检定所。安宫牛黄丸（同仁堂股份公
司制药厂，批号５０１０７７，４０１０２２８，４０１０２７４）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８柱（４６ｍｍ×１５０
ｍｍ，５μｍ）；检测波长２５４ｎｍ；柱温３５℃；流动相Ａ
为０５％磷酸水溶液，Ｂ为乙腈，线性梯度洗脱时间
程序见表１。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷、黄芩苷
表１ 线性梯度洗脱时间程序
Ｎｏ． ｔ／ｍｉｎ 流速／ｍＬ·ｍｉｎ－１ Ａ／％ Ｂ／％
１ ００１ １００ ９１０ ９０
２ １６００ １００ ９１０ ９０
３ １８００ ０９０ ８２０ １８０
４ ５０００ ０９０ ８２０ １８０
５ ５２００ １００ ６００ ４００
６ ６０００ １００ ６００ ４００
和盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成对照品溶液，
质量浓度分别为００２０１，００８６８，００２５２ｇ·Ｌ－１，
微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，即得，见图１。
１．栀子苷；２．黄芩苷；３．盐酸小檗碱。
图１ 栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱对照品ＨＰＬＣ图
２．３ 供试品溶液的制备 取本品约０２５ｇ，剪碎，
研匀，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入７０％乙
醇２５ｍＬ，称重，超声处理（功率 ２５０Ｗ，频率 ５０
ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，放冷，再称重，用７０％乙醇补足减失的
质量，摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取续滤液，
作为供试品溶液，见图２。
２．４ 空白试验 按处方中药味的比例，自配不含栀
子、黄连和黄芩的群药，按其工艺制成空白制剂，以
样品溶液制备方法制成空白对照溶液并测定，见图
３，与样品溶液色谱图比较可以发现，在待测组分的
相应位置无干扰。
２．５ 线性关系考察 精密吸取栀子苷、黄芩苷和盐
酸小檗碱对照品溶液（００５９９，００８６８，００２５２
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第３４卷第２０期
２００９年１０月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００９
１．栀子苷；２．黄芩苷；３．盐酸小檗碱。
图２ 安宫牛黄丸样品栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱
ＨＰＬＣ图
图３ 安宫牛黄丸空白样品ＨＰＬＣ图
ｇ·Ｌ－１）１０，３０，５０，７０，９０ｍＬ，分别置１０ｍＬ量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，注入液相色谱仪，按上述
色谱条件测定峰面积，计算得回归方程：栀子苷回
归方程Ｙ＝１１３×１０６Ｘ＋１６８×１０２，ｒ＝０９９９９；黄
芩苷回归方程 Ｙ＝１１４×１０７Ｘ＋２５１×１０４，ｒ＝
０９９９９；盐酸小檗碱回归方程 Ｙ＝４０９×１０７Ｘ＋
１８５×１０４，ｒ＝０９９９９。结果表明，栀子苷、黄芩苷
和盐酸小檗碱分别在００５９９～０５９８５，００８６８～
１７３６４，００２５２～０５０４８μｇ线性良好。
２．６ 精密度试验 精密吸取安宫牛黄丸同一批号
（５０１４９９９）供试品溶液５μＬ，重复进样５次，求得样
品中样品中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的ＲＳＤ分
别为０９１％，０６８％，０８７％（ｎ＝５）。
２．７ 稳定性试验 精密吸取安宫牛黄丸同一批号
（５０１４９９９）供试品溶液５μＬ，于０，２，４，８，１６，２４ｈ测
定，观察供试品溶液稳定性，样品中栀子苷、黄芩苷
和盐酸小檗碱的ＲＳＤ分别为１１％，０５８％，０３４％
（ｎ＝６），说明供试品溶液２４ｈ内基本稳定。
２．８ 重复性试验 按上述色谱条件对同一批样品
（５０１４９９９）６份，进行测定，求得栀子苷、黄芩苷和盐
酸小檗碱含量分别为１５００，６５９２，３５０５ｍｇ·ｇ－１，
ＲＳＤ分别为１１％，０６８％，１９％（ｎ＝６）。
２．９ 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取
已知含量的同一批号（批号５０１４９９９）的样品０１２５
ｇ，平行 ６份。分别精密加入栀子苷对照品溶液
（０１９２ｇ·Ｌ－１）、黄芩苷对照品溶液（０７１０ｇ·
Ｌ－１）和盐酸小檗碱对照品溶液（０３９５ｇ·Ｌ－１）各
１０ｍＬ，测定。栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱平均
回收率分别为 ９８０％，１０２％，１０１％，ＲＳＤ分别为
１４％，１０％，１０％（ｎ＝６）。
２．１０ 样品测定结果 分别取３批样品，依上述色
谱条件进行测定，见表２。
表２ 安宫牛黄丸样品测定 ｍｇ·ｇ－１
批号 栀子苷 黄芩苷 盐酸小檗碱
５０１００７７ １３５１ ６４４３ ３７１７
４０１０２２８ １９５２ ６５２３ ３６１１
４０１０２７４ ２０２１ ７３０８ ３７７３
３ 讨论
本实验提取溶剂的考察方法为，分别选取甲醇、
７０％乙醇、９５％乙醇为溶剂，对同一样品超声提取
３０ｍｉｎ，比较待测化合物的峰面积，发现采用７０％乙
醇和甲醇做提取溶剂对色谱峰峰面积的影响差别不
大，考虑到乙醇无毒，因此选择７０％乙醇作为提取
溶剂；本实验比较了超声提取、加热回流和冷浸过夜
３种提取方法，发现加热回流提取的色谱峰面积与
超声提取的色谱峰面积差别不大，冷浸提取的色谱
峰面积较小，考虑到超声提取简单省事，因此选择超
声提取作为样品溶液的制备方法；本实验考察了超
声３０，６０，９０ｍｉｎ３个时间点，发现超声３０ｍｉｎ可以
把待测组分提取完全，因此确定超声时间为３０ｍｉｎ。
综上，样品溶液的制备条件为 ７０％乙醇超声提
取３０ｍｉｎ。
本实验应用 ＰＤＡ检测器对测定波长进行了考
察，发现栀子苷、黄芩苷的最大吸收不在２５４ｎｍ，但
是由于其在制剂中含量比较高并且含量范围比较稳
定，采用２５４ｎｍ作为测定波长能够达到方法学考察
的要求。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２４７．
［２］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典临床用药须知．中药卷
［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００５：４６７．
［责任编辑 周驰］
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