目的:观察黄连解毒汤对肺炎衣原体(Cpn)感染后高胆固醇饮食兔血液流变学和动脉粥样硬化的影响。方法:造模前60只新西兰兔经采血检测Cpn IgG均为阴性。随机选取8只兔作正常组,其余52只以含25 g·kg-1胆固醇的饲料喂养并接种Cpn。经检测血清Cpn IgG阳性者随机分为4组:黄连解毒汤高、低剂量(334 ,167 g·kg-1·d-1)组、阳性药阿奇霉素(20 mg·kg-1·d-1)组和模型组(生理盐水),每组11只,灌胃给药6周;Cpn IgG阴性者作高胆固醇组,不予药物干预。治疗结束后采血测定高、中、低全血黏度、血浆黏度和红细胞压积,并计算RBC聚集指数、变形指数和刚性指数;取主动脉弓近左颈总动脉分叉处血管,测定和计算最大血管内膜厚度(MIT)、动脉粥样硬化病变占管周百分比(PLCI)、动脉粥样硬化斑块面积指数(IPA)。结果:高胆固醇组和模型组血液流变学均显著紊乱,主动脉均有典型的动脉粥样硬化病理变化,后者最大MIT(2365±819 vs 1276±406)μm、动脉粥样硬化病变PLCI(4108±1251 vs 2243±945)%、动脉粥样硬化斑块IPA(957±182 vs 284±025)%显著较前者高(均P<001);黄连解毒汤高、低剂量组、阿奇霉素组血液流变学紊乱和动脉粥样硬化病理变化与模型组比较显著改善,其中黄连汤高剂量组MIT(645±127 vs 2365±819),(P<001),PLCI(2239±674 vs 4108±1251),(P<005);IPA(144±033 vs 957±182),(P<001)显著降低。结论:Cpn感染加重高胆固醇饮食兔血液流变学紊乱和动脉粥样硬化损害,黄连解毒汤可减轻Cpn感染所致高胆固醇饮食兔的血液流变学紊乱和动脉粥样硬化损害。
Objective: To study the influence of Chlamydia pneumonia(Cpn) infection on haemorheology and atherosclerosis and the intervention of Huanglian Jiedu decoction (HJT). Method: At the beginning of the experiment, all the sixty New Zealand rabbits were token blood to test Cpn IgG and all the results were negative. Eight New Zealand rabbits were randomized into normal group F, and all other rabbits were fed with forage containing 25 g·kg-1 cholesterol and infected with Cpn via nasophrynx for three times during 6 weeks. At the end of the sixth week, forty four rabbits with serum Cpn IgG positive were randomized into four groups: Group A treat with HJD 2 g·kg-1·d-1 by gastric gavage, group B with HJT 1 g·kg-1·d-1, group C with azithromycin 20 mg·kg-1·d-1, model group D with normal saline for six weeks. Group E was set up in eight rabbits with serum Cpn IgG negative and served as the control. At the end of 18th week, blood was token from middle ear artery to test haemorheology such as whole blood viscosity, plasma viscosity, haeatocrit, erythrocyte aggregation index (EAI), erythrocyte rigidity index (IRI) , and erythrocyte deformablity index (EDI). After that, all the rabbits were executed and the pathological features of aorta tissue were observe under microscope. Result: Haemorheological disorder and atherosclerotic changes were obvious in both group D and E. while maximum intimal thickness (MIT) (2365±819 vs 1276±406), atherosclerotic damage percentage (PLCI) (4108±1251 vs 2243±945), plaque area index (IPA) (957±182 vs 284±025) in group D was much higher than that in group E (all P<001). Compare with group D, haemorheological disorder and atherosclerotic changes were much improved in group A, B and C. MIT (645±127 vs 2365±819), (P<001), PLCI (2239±674 vs 4108±1251), (P<005) and IPA (144±033 vs 957±182), (P<001) in gruoup A was much lower than that in group D. And MIT (1265±363 vs 2365±819), (P<001) and IPA (443±117 vs 957±182), (P<005) in gruoup B was much lower than that in group D too. Conclusion: Cpn infection could aggravate the haemorheology disorder in cholesterol supplemented diet rabbits, and both antidotal decoction of Coptis and azithromycin can alleviate it.
全 文 :黄连解毒汤对高胆固醇兔血液流变学
和动脉粥样硬化干预作用
刘煜德,吴 辉,吴 伟,李 荣,黄衍寿
(广州中医药大学 第一附属医院 心内科,广东 广州 510405)
[收稿日期] 20080822
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30070938)
[通信作者] 刘煜德,Tel:(020)36591593,Email:liuyude@126.
com
[摘要] 目的:观察黄连解毒汤对肺炎衣原体(Cpn)感染后高胆固醇饮食兔血液流变学和动脉粥样硬化的影响。方法:
造模前60只新西兰兔经采血检测CpnIgG均为阴性。随机选取8只兔作正常组,其余52只以含25g·kg-1胆固醇的饲料喂
养并接种Cpn。经检测血清CpnIgG阳性者随机分为4组:黄连解毒汤高、低剂量(334,167g·kg-1·d-1)组、阳性药阿奇
霉素(20mg·kg-1·d-1)组和模型组(生理盐水),每组11只,灌胃给药6周;CpnIgG阴性者作高胆固醇组,不予药物干预。
治疗结束后采血测定高、中、低全血黏度、血浆黏度和红细胞压积,并计算RBC聚集指数、变形指数和刚性指数;取主动脉弓近
左颈总动脉分叉处血管,测定和计算最大血管内膜厚度(MIT)、动脉粥样硬化病变占管周百分比(PLCI)、动脉粥样硬化斑块面
积指数(IPA)。结果:高胆固醇组和模型组血液流变学均显著紊乱,主动脉均有典型的动脉粥样硬化病理变化,后者最大 MIT
(2365±819vs1276±406)μm、动脉粥样硬化病变PLCI(4108±1251vs2243±945)%、动脉粥样硬化斑块IPA(957±
182vs284±025)%显著较前者高(均P<001);黄连解毒汤高、低剂量组、阿奇霉素组血液流变学紊乱和动脉粥样硬化病
理变化与模型组比较显著改善,其中黄连汤高剂量组 MIT(645±127vs2365±819),(P<001),PLCI(2239±674vs
4108±1251),(P<005);IPA(144±033vs957±182),(P<001)显著降低。结论:Cpn感染加重高胆固醇饮食兔血液
流变学紊乱和动脉粥样硬化损害,黄连解毒汤可减轻Cpn感染所致高胆固醇饮食兔的血液流变学紊乱和动脉粥样硬化损害。
[关键词] 肺炎衣原体;感染;动脉粥样硬化;黄连解毒汤;血液流变学
近年已完成的多项大型临床试验结果表明,抗
生素不能有效减少心脏事件的发生率[1],但这只能
说明抗生素治疗不能逆转已形成的动脉粥样硬化损
害,不能否定感染在动脉粥样硬化发病过程中的可
能作用。新近的临床研究表明,Cpn感染与动脉粥
样硬化有关[23]。笔者的前期研究结果显示,Cpn感
染可使高脂饮食小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF
α)、白细胞介素6(IL6)、白细胞介素10(IL
10)[4]、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM1)、可溶
性血管细胞间黏附分子1(sVCAM1)、可溶性 E选
择素(sEslectin)[5]水平升高,早期给予黄芩苷或阿
奇霉素治疗可不同程度地调节这些指标的水平;黄
连解毒汤可使高胆固醇饮食兔感染Cpn后异常升高
的血清超敏C反应蛋白(hsCRP)水平显著下降[6]。
研究显示动脉粥样硬化患者血液流变学指标有
明显改变,改善血液的黏稠度,可降低脑卒中、心梗
的发生[89]。为探讨Cpn感染致动脉粥样硬化的可
能机制及清热解毒法的干预作用,本研究就 Cpn感
染对高胆固醇饮食兔血液流变学和动脉粥样硬化指
数的影响及黄连解毒汤干预作用进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物 健康雄性 1月龄普通级新西兰兔 60
只,体重20~25kg,广州中医药大学实验动物中
心提供,合格证号 粤检证字2003A001。
1.2 药物 黄连解毒汤水煎剂由黄连、桅子、黄芩、
黄柏组成(3∶3∶2∶2),广州中医药大学第一附属医
院药剂科煎制;阿奇霉素(批号98000623,浙江亚太
药业股份有限公司),使用时以蒸馏水配制成20g
·L-1的混悬液。根据体型系数公式折算生药用量,
兔的高、低剂量为1,2g·kg-1·d-1,阿奇霉素用
量为20mg·kg-1·d-1。
1.3 试剂和细胞株 CpnIgG检测试剂盒购自晶美
生物工程深圳有限公司,批号040329;肺炎衣原体
AR39购自美国华盛顿大学。
1.4 主要仪器 LBYN6A自清洗旋转式黏度计,
LBYNW1血浆黏度计(北京普利升);LeicaRM
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2025切片机,LeicaEG1140H包埋机,LeicaTP1020
脱水机(德国);OlympusBX50显微镜(日本);ZMN
-6802漂烘处理仪;北航图像中心病理图文管理系
统40。
2 方法
2.1 模型制作和分组 造模前所有动物经采血检
测CpnIgG均为阴性。随机选取8只兔作正常组,
其余52只以含25g·kg-1胆固醇的饲料喂养并接
种Cpn,具体方法见文献[4]。经检测血清CpnIgG,
阳性者(44只)随机分为4组:黄连解毒汤高、低剂
量组、阿奇霉素组和模型组,每组11只,分别予高、
低剂量黄连解毒汤、阿奇霉素、生理盐水灌胃6周;
阴性者(8只)作高胆固醇组,不予药物干预。实验
在清洁级动物房完成。
2.2 血液流变学检测 治疗6周末,禁食8h后取
耳中动脉血3mL,全血快速流入事先用肝素包被的
抗凝试管中,轻轻摇动,2h内测定高、中、低全血黏
度、血浆黏度和红细胞压积,并计算RBC聚集指数、
变形指数和刚性指数。
2.3 组织病理学观察 麻醉状态下取主动脉弓近
左颈总动脉分叉处血管,以10%甲醛固定、石腊切
片、HE染色,以北航图像中心病理图文管理系统
40进行图像分析,测定和计算最大血管内膜厚度
(MIT)、动脉粥样硬化病变占管周百分比(PLCI)、动
脉粥样硬化斑块面积指数(IPA=MIT·PLCI)。
2.4 统计学处理 以 PEMS31统计软件进行统
计分析,计量资料以 珋x±s表示,方差齐性检验标准
α1=005,方差分析检验水准 α2=005,组间两两
比较采用SNKq检验。
3 结果
实验过程中共4只动物死亡:高胆固醇组和黄
连解毒汤低剂量组各1只由于抓取不慎死于脊髓损
伤,阿奇霉素组1只死于灌药不慎,模型组1只死于
腹泻。
3.1 各组全血黏度、血浆黏度、红细胞压积变化
与高胆固醇组比较,模型组低、中、高切全血黏度、血
浆黏度、红细胞压积均不同程度升高;与模型组比
较,黄连解毒汤高、低剂组和阿奇霉素组低、中、高切
全血黏度、血浆黏度、红细胞压积均不同程度下降
(表1)。
表1 各组兔全血黏度、血浆黏度、红细胞压积比较(珋x±s)
组别
剂量
/g·kg-1·d-1
n
全血黏度/mPa·s
低切 中切 高切
血浆黏度
/mPa·s
红细胞压积
/%
黄连解毒汤 2 11 1035±1772,4) 685±1522,4) 343±081 130±0154) 366±282)
1 10 1070±1752,4) 665±1532) 382±0804) 136±0153) 384±32
阿奇霉素 002 10 1061±1832,4) 621±1411) 345±0692) 128±0122,3) 363±332)
模型 - 10 1268±2113) 837±1753,5) 419±0863) 142±0173,5) 396±364)
高胆固醇 - 7 1064±1662,4) 662±1452,4) 377±0584) 126±0122,4) 375±33
正常 - 8 863±114 537±084 306±062 112±010 362±29
注:与模型组比较1)P<001,2)P<005;与正常组比较3)P<001,4)P<005;与高胆固醇组比较5)P<005(表2同)。
3.2 各组RBC聚集指数、变形指数和刚性指数变
化 与高胆固醇组比较,模型组红细胞聚集指数、刚
性指数显著升高,变形指数显著降低;与模型组比
较,黄连解毒汤高、低剂组和阿奇霉素组红细胞聚集
指数、刚性指数不同程度降低,变形指数均显著升高
(表2)。
表2 各组兔RBC聚集指数、RBC变形指数、RBC刚性指数比较(珋x±s)
组别 剂量/g·kg-1·d-1 n RBC聚集指数 RBC变形指数 RBC刚性指数
黄连解毒汤 2 11 235±0461) 096±0242) 468±0781)
1 10 249±0582) 092±0202) 516±104
阿奇霉素 002 10 223±0481) 102±0211) 451±0861)
模型 - 10 308±0663,5) 071±0173) 588±0973,5)
高胆固醇 - 7 231±0552) 092±0252) 483±0892)
正常 - 8 216±045 108±022 433±081
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3.3 组织病理学改变 高胆固醇组内膜增厚,管
腔变窄,斑块内主要为泡沫细胞及梭形细胞;模型
组斑块较高胆固醇组大,甚则融合成片环绕管腔分
布,管腔明显狭窄,光镜下见内膜增厚明显,内皮
细胞欠连续,内膜下弹力纤维断裂,平滑肌细胞排
列紊乱,并向内膜下迁移,斑块内主要成分为泡沫
细胞,部分斑块周围见纤维母细胞增生;黄连解毒
汤高剂量组除一例斑块融合成片外,其余仅见散在
局限性脂肪条纹或脂斑形成,表面为薄层泡沫细胞
覆盖,大部分内膜结构清晰,表面光滑,内皮细胞
连续;黄连解毒汤低剂量组局限性脂斑形成较高剂
量组明显且斑块较大,泡沫细胞较多,管腔轻度受
损;阿奇霉素组与黄连解毒汤高剂量组相似;正常
组未见斑块形成(图1)。
图1 各组兔主动脉的病理变化(HE染色,20×20)
3.4 各组动脉粥样硬化指数变化 与高胆固醇组
比较,模型组MIT,PLCI,IPA均显著升高;与模型组比
较,黄连解毒汤高、低剂组和阿奇霉素组 MIT,PLCI,
IPA均不同程度降低(表3)。
表3 各组动脉粥样硬化指数比较(珋x±s)
组别 剂量/g·kg-1·d-1 n MIT/μm PLCI/% IPA/%
黄连解毒汤 2 11 645±1271,5) 2239±6742) 144±0331)
1 10 1265±3631,3,4) 3472±8293) 443±1172)
阿奇霉素 002 10 572±1011) 2058±6382) 130±0361)
模型 - 10 2365±8194,6) 4108±12516) 957±1826)
高胆固醇 - 7 1276±4061,4) 2243±9451) 284±0251)
正常 - 8 503±081 - -
注:与模型组比较1)P<001,2)P<005;与阿奇霉素组比较3)P<001;与正常组比较4)P<001,5)P<005;与高胆固醇组比较6)P<
001。
4 讨论
目前动脉粥样硬化、冠心病的治疗多用活血化
瘀、痰、通阳等治法,鲜见用清热解毒法。黄连解
毒汤出自《外台秘要》,由黄连、黄芩、黄柏、栀子组
成,是清热解毒法的代表方剂,主要用于热毒炽盛型
感染性疾病的治疗,近年来有学者将其用于心血管
疾病的治疗取得一定的疗效[10]。范氏等提出“毒”
与动脉粥样硬化的发展密切相关[11],为清热解毒法
用于动脉粥样硬化的治疗提供了理论依据。
本研究结果显示,模型组低、中、高切全血黏度、
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血浆黏度、RBC压积、聚集指数、刚性指数均较正常
组显著升高(P<001),提示高胆固醇饮食合并
Cpn感染增加血液黏稠度,并使 RBC聚集性和刚性
增加,利于微血管血栓的形成,从而促进动脉粥样硬
化的形成和加重;模型组 MIT,PLCI,IPA均较正常组
显著升高(P<001),提示高胆固醇饮食合并 Cpn
感染促进动脉粥样硬化的形成,对血液流变学的可
能是其促进动脉粥样硬化形成的因素之一。黄连解
毒汤高、低剂量组、阿奇霉素组血液流变学各项指标
和动脉粥样硬化指数均有不同程度的改善,表明黄
连解毒汤和阿奇霉素对高胆固醇饮食合并Cpn感染
所致的动脉粥样硬化有治疗作用;通过改善血液流
变学是其作用机制之一。3个治疗组对血液流变学
各指标的改善作用无显著性差异,但黄连解毒汤低
剂量组MIT和PLCI显著高于阿奇霉素组,提示阿奇
霉素和黄连解毒汤治疗高胆固醇饮食合并Cpn感染
所致的动脉粥样硬化除通过改善血液流变学外,还
通过其他途径发挥作用,而黄连解毒汤低剂量的这
种作用弱于阿奇霉素。3个治疗组血液流变学和动
脉粥样硬化指数虽有显著改善,但低切全血黏度、血
浆黏度、PLCI,IPA仍显著高于正常组,而且黄连解毒
汤高、低剂量组 MIT也显著高于正常组,说明黄连
解毒汤和阿奇霉素并不能使高胆固醇饮食合并 Cpn
感染所致的动脉粥样硬化和血液流变学紊乱完全恢
复正常。与单纯高胆固醇饮食比较,高胆固醇饮食
合并Cpn感染的模型组中切全血黏度、血浆黏度、
RBC聚集指数、刚性指数、MIT,PLCI和 IPA显著升高
(P<001或P<005),其余各项指标的差异虽无
统计学意义,但有进一步紊乱的趋势,提示Cpn感染
加重了高胆固醇饮食所致的血液流变学紊乱和动脉
粥样硬化程度。本研究从动物实验的角度验证了黄
连解毒汤对高胆固醇饮食合并Cpn感染所致的动脉
粥样硬化有较好的疗效,为清热解毒法用于CAD和
动脉粥样硬化的治疗提供了实验依据。
[参考文献]
[1] EliV,ChristopherP.Antibioticsforsecondarypreventionofcor
onaryarterydisease:AnACEShypothesisbutweneedto
PROVEIT[J].AmericanHeartJ,2004,147(2):202.
[2] KimDK,KimHJ,HanSH,etal.Chlamydiapneumoniaeac
companiedbyinflammationisassociatedwiththeprogressionof
atherosclerosisinCAPDpatients:Aprospectivestudyfor3years
[J].NephrolDialTransplant,2008,23(3):1011.
[3] YavuzMT,YavuzO,YaziciM,etal.Interactionbetween
Chlamydiapneumoniaeseropositivity,inflammationandriskfac
torsforatherosclerosisinpatientswithseverecoronarystenosis
[J].ScandJClinLabInvest,2006,66(6):523.
[4] 刘煜德,吴 伟,王 嵩,等.黄芩苷对 Cpn感染高胆固醇饮
食小鼠血清 TNFα,IL6,IL10的调节作用[J].四川中医,
2006,24(9):19.
[5] 刘煜德,吴 伟,王 嵩,等.黄芩苷对 Cpn感染小鼠血清 sI
CAM1,sVCAM1,sEslectin的调节作用[J].中西医结合心
脑血管病杂志,2006,4(10):874.
[6] 吴 辉,刘煜德,吴 伟,等.清热解毒法对肺炎衣原体感染
致兔动脉粥样硬化的干预作用[J].广州中医药大学学报,
2006,23(2):151.
[7] JosephB,MuhlesteinM D,JefreyL,etal.Infectionwith
Chlamydiapneumoniaeacceleratesthedevelopmentofatheroscle
rosisandtreatmentwithazithromycinpreventsitinarabbitmodel
[J].Circulation,1998,97(7):633.
[8] 王玉萍,路 浩,徐 岷.动脉粥样硬化性缺血性脑卒中血液
流变学及相关危险因素[J].中国实用神经疾病杂志,2007,
10(3):75.
[9] 朱丽凤,张学军,包广宇.冠心病、缺血性脑血管疾病患者的
血液流变学改变[J].中国血液流变学杂志,2007,17(3):
487.
[10] 卢笑晖.黄连解毒胶囊治疗不稳定型心绞痛临床疗效及作用
机制研究[J].山东中医药大学学报,2005,29(6):457.
[11] 范砚超,张国平,唐 明.从毒论治动脉粥样硬化初探[J].山
东中医杂志,2004,23(5):261.
InterventionofHuanglianJiedudecoctiononhaemorheologyand
atherosclerosisinrabbitwithcholesterolsupplementeddiet
LIUYude,WUHui,WUWei,LIRong,HUANGYanshou
(FirstAfiliatedHospitalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510405,China)
[Abstract] Objective:TostudytheinfluenceofChlamydiapneumonia(Cpn)infectiononhaemorheologyandatherosclerosis
andtheinterventionofHuanglianJiedudecoction(HJT).Method:Atthebeginningoftheexperiment,althesixtyNewZealandrab
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bitsweretokenbloodtotestCpnIgGandaltheresultswerenegative.EightNewZealandrabbitswererandomizedintonormalgroup
F,andalotherrabbitswerefedwithforagecontaining25g·kg-1cholesterolandinfectedwithCpnvianasophrynxforthreetimes
during6weeks.Attheendofthesixthweek,fortyfourrabbitswithserumCpnIgGpositivewererandomizedintofourgroups:Group
AtreatwithHJD2g·kg-1·d-1bygastricgavage,groupBwithHJT1g·kg-1·d-1,groupCwithazithromycin20mg·kg-1·
d-1,modelgroupDwithnormalsalineforsixweeks.GroupEwassetupineightrabbitswithserumCpnIgGnegativeandservedas
thecontrol.Attheendof18thweek,bloodwastokenfrommiddleeararterytotesthaemorheologysuchaswholebloodviscosity,plas
maviscosity,haeatocrit,erythrocyteaggregationindex(EAI),erythrocyterigidityindex(IRI),anderythrocytedeformablityindex
(EDI).Afterthat,altherabbitswereexecutedandthepathologicalfeaturesofaortatissuewereobserveundermicroscope.Result:
HaemorheologicaldisorderandatheroscleroticchangeswereobviousinbothgroupDandE.whilemaximumintimalthickness(MIT)
(2365±819vs1276±406),atheroscleroticdamagepercentage(PLCI)(4108±1251vs2243±945),plaqueareaindex
(IPA)(957±182vs284±025)ingroupDwasmuchhigherthanthatingroupE(alP<001).ComparewithgroupD,hae
morheologicaldisorderandatheroscleroticchangesweremuchimprovedingroupA,BandC.MIT(645±127vs2365±819),
(P<001),PLCI(2239±674vs4108±1251),(P<005)andIPA(144±033vs957±182),(P<001)ingruoupA
wasmuchlowerthanthatingroupD.AndMIT(1265±363vs2365±819),(P<001)andIPA(443±117vs957±
182),(P<005)ingruoupBwasmuchlowerthanthatingroupDtoo.Conclusion:Cpninfectioncouldaggravatethehaemorheol
ogydisorderincholesterolsupplementeddietrabbits,andbothantidotaldecoctionofCoptisandazithromycincanaleviateit.
[Keywords] Chlamydiapneumonia;infection;atherosclerosis;antidotaldecoctionofCoptis;haemorheology
[责任编辑 古云侠]
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