全 文 ：气相色谱内标法测定斑蝥中斑蝥素的含量
王正，安中原，王东，尹永芹，赵越
（广东药学院，广东 广州 ５１０００６）
［摘要］ 目的：建立气相色谱法测定斑蝥中斑蝥素的含量的方法。方法：以正十四醇为内标物，采用ＲＴＸ１７０１毛细管气相
色谱柱（１５ｍ×０３２ｍｍ，０２５μｍ），分析了２种不同处理方法得到的样品。结果：以正十四醇做内标物，斑蝥素对照品线性范围
００５１８８～０６２２５６μｇ（ｒ＝０９９９３），精密度ＲＳＤ２０％。以酸水解后超声提取方法处理的样品中斑蝥素含量约是采用药典方法
处理的样品含量的１５倍。结论：该测定方法简便，省时，结果准确，可作斑蝥及斑蝥素制品中斑蝥素的含量测定方法。
［关键词］ 斑蝥素；含量测定；毛细管气相色谱
［收稿日期］ ２００９０３３０
［基金项目］ 西南大学博士基金项目（２４０４３２１１０）
［通信作者］ 赵越，Ｔｅｌ：（０２０）３９３５２１７３，Ｅｍａｉｌ：ｚｙｂｍｂｙｌｋ６８８＠１６３．ｃｏｍ
［作者简介］ 王正，在读硕士研究生，主要从事中药新剂型新技术
研究工作。Ｅｍａｉｌ：ｗｚａｌｓｈ＠１６３．ｃｏｍ
斑蝥又称龙尾、花罗虫、章瓦，为芜青科昆虫南
方大斑蝥ＭｙｌａｂｒｉｓｐｈａｌｅｒａｔＰａｌａｓ或黄黑小斑蝥 Ｍｙ
ｌａｂｒｉｓｃｉｃｈｏｒｉＬｉｎｎａｅｕｓ的干燥虫体，具有攻毒、逐瘀、
散结、抗肿瘤等功效［１］。现代药理研究报道，斑蝥
中有效抗癌成分是斑蝥素，其在抑制肿瘤细胞的同
时不降低周围血中的白细胞数量，而且对机体没有
明显的免疫抑制作用［２］，这在抗癌药物中是少见
的。随着斑蝥对治疗肝癌疗效明显优于手术治疗或
放疗的发现，人们对于斑蝥的需求量大大地增加了。
然而斑蝥素毒性强烈，时常有关于斑蝥中毒的报道，
在临床应用中也只能采用中、小剂量。因此要充分
有效的利用斑蝥资源，解决斑蝥的毒性问题就得严
格控制斑蝥的质量与用药量，本研究建立了以正十
四醇为内标物的毛细管气相色谱法测定斑蝥体内的
斑蝥素含量，用以监控斑蝥质量、指导临床用药。
１ 仪器与试药
日本岛津ＧＣ２０１０型气相色谱仪，ＦＩＤ检测器；
ＢＰ２１１０电子天平，德国 ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司生产；ＫＱ３２００
超声清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产。
斑蝥素对照品（批号１１０７８３２００５０３）由中国药
品生物制品生物鉴定所提供，其余试药均为分析纯。
斑蝥药材购于广东广弘药材有限公司，经本院赵越
教授鉴定为南方大斑蝥Ｍ．ｐｈａｌｅｒａｔ的干燥虫体。
２ 方法与结果
２．１ 气相色谱条件 ＲＴＸ１７０１毛细管柱（１５ｍ×
０３２ｍｍ，０２５μｍ）；柱温１６５℃；进样口温度２１０
℃；检测器（ＦＩＤ）温度２６０℃；载气为 Ｎ２，流速１２０
ｍＬ·ｍｉｎ－１；尾吹气 Ｎ２，流速３０ｍＬ·ｍｉｎ
－１；进样
量１μＬ；分流进样，分流比５∶１。
２．２ 标准溶液与内标溶液的配制 精密称取
００２５９４ｇ斑蝥素对照品，置５０ｍＬ量瓶中，加三氯
甲烷溶解并定容，制成质量浓度为０５１８８ｇ·Ｌ－１
的斑蝥素对照品溶液。精密称取０１０７４１ｇ正十四
醇，置５０ｍＬ量瓶中，加三氯甲烷溶解并定容，制成
质量浓度为２１４８２ｍｇ·ｍＬ－１的内标液。
２．３ 药材前处理及供试品的制备 取斑蝥虫体适
量，于５０℃干燥６ｈ，碾碎，于干燥器中保存备用［３］。
本实验采用２种方法制备实验样品。①参照药典方
法［４］，精密称取０５１１ｇ斑蝥粉末，置５０ｍＬ具塞锥
型瓶中，加入１０ｍＬ三氯甲烷，震摇１５ｍｉｎ，放置６
ｈ，过滤，用三氯甲烷洗涤残渣与滤纸，合并滤液与洗
液，浓缩，浓缩液中加１ｍＬ内标液，用三氯甲烷定容
至１０ｍＬ，并用０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液为
测定样品。②参考文献［５］方法，将原文献静置提
取改为超声提取。精密称取０５１２ｇ斑蝥粉末，置
５０ｍＬ具塞锥型瓶中，加入 ｐＨ１的盐酸水溶液１０
ｍＬ，再加入 １０ｍＬ三氯甲烷，超声提取 ３０ｍｉｎ，分
液，取三氯甲烷层，加入无水 Ｎａ２ＳＯ４脱水，过滤，并
用三氯甲烷洗涤，合并滤液和洗液，浓缩，浓缩液中
加入１ｍＬ内标液，用三氯甲烷定容至１０ｍＬ，并用
０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液为测定样品。
２．４ 定量方法 定量采用内标法。内标物为正十
四醇。正十四醇不仅出峰时间在被分离物峰之前，
达到完全分离，而且样品在内标出峰时间没有干扰。
２．５ 线性范围考察 精密吸取上述标准溶液０５，
·８０１２·
第３４卷第１６期
２００９年８月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００９
１，２，３，４，５，６ｍＬ分别置１０ｍＬ量瓶中，各加内标液
１ｍＬ，用三氯甲烷稀释至刻度，此序列每毫升含斑
蝥素为００５～０６ｍｇ，各吸１μＬ进样３次。以测得
的斑蝥素平均峰面积（Ａｉ）／内标正十四醇平均峰面
积（Ａｓ）—斑蝥素浓度绘制标准曲线，计算回归方程
得Ａ＝２１５７Ｃ－００１３７，ｒ＝０９９９３。
２．６ 方法的精密度 精密移取２ｍＬ斑蝥素标准溶
液，加入１ｍＬ内标液，定容至１０ｍＬ，混匀，进样１
μＬ，连续重复６次，分别求出斑蝥素峰面积与内标
正十四醇峰面积之比值，结果分别是 ０４２３８６６，
０４４６６５８，０４３２４０２，０４４１２７４，０４３７３７６，
０４４７１０５，标准偏差为０００８９，ＲＳＤ２１％，这说明
正十四醇作为内标有非常好的测定精密度。
２．７ 重复性试验 精密称取斑蝥素药材粉末约
０５ｇ，置５０ｍＬ具塞锥型瓶中，按２．３项下方法制
备供试品，以上样品各制备５份，每份进样５次，每
次进样１μＬ，计算含量，其中方法１的 ＲＳＤ１７％，
方法２的ＲＳＤ１８％，方法重复性良好。
２．８ 回收率试验 精密称取斑蝥素药材粉末约
０５ｇ，置５０ｍＬ具塞锥型瓶中，加斑蝥素标准液１５
ｍＬ，按２．３项下方法制备供试样品，以上样品各制
备５份，每份进样５次，每次进样１μＬ，方法１的平
均回收率为１００９％，ＲＳＤ２１％，方法２的平均回
收率为９９７％，ＲＳＤ２０％。
２．９ 稳定性试验 取２．３项下方法１、方法２处理
的样品，每隔１ｄ进样一次，连续５ｄ得到蝥素峰面
积与内标正十四醇峰面积之比值，其 ＲＳＤ分别为
２０％，１９％说明测定样品溶液在５ｄ内基本稳定。
２．１０ 样品分析 取２．３项下样品各３份，平行进
样３次，用回归方程计算样品的斑蝥素含量。药材
采用酸水解后的斑蝥素含量约是采用药典提取法的
１５倍，其结果见表１。
表１ 药材中斑蝥素（ｎ＝３） ％
批次 方法１ 方法２
２００７１０１３ ０４５９ ０６８８
２００８１１０１ ０４７３ ０６９９
２００９０３２２ ０４５５ ０６６５
３ 讨论
目前已有的文献记载斑蝥素含量测定方法都是
使用非极性色谱柱来作分析，笔者首次使用了中等极
性毛细管色谱柱对斑蝥中的斑蝥素含量测定进行了
研究。试验中尝试了 ３种气相色谱柱，非极性的
ＲＴＸ１石英毛细管色谱柱（０２５ｍｍ×３０ｍ，０２５
μｍ）和ＤＢ２１７石英毛细管色谱柱（０２５ｍｍ×３０ｍ，
０２５μｍ），中等极性的ＲＴＸ１７０１石英毛细管色谱柱
（０３２ｍｍ×３０ｍ，０２５μｍ），其中ＲＴＸ１石英毛细管色
谱柱和ＤＢ２１７石英毛细管色谱柱对十五烷和香兰素
分离效果较好，但其分析时间较长，而ＲＴＸ１７０１色谱
柱分离较好，分析时间适中，因此选ＲＴＸ０７０１色谱柱。
分别用微量进样器抽取１～２μＬ的样品三氯甲
烷提取液分别与香兰素［６］、正十六烷和正十六
烷［７］、正十四醇的三氯甲烷溶液的混合液，进行气
相色谱测定。香兰素、正十五烷、正十六烷的峰没有
回到基线，且都有杂质峰干扰，与斑蝥素峰出峰相差
时间也较长，而正十四醇的分离度高，且出峰时间也
与斑蝥素接近，对斑蝥素的分离度也没影响，因此在
本试验色谱条件下，选择正十四醇做内标。
在本实验条件下正十四醇与斑蝥素的分离十分
理想（分离度 ＞３）；用正十四醇做内标物的气相色
谱法的线性（ｒ＝０９９９３）和精密度（ＲＳＤ２０４％，
ｎ＝６）较好；且样品组分对测定无干扰。
用方法２处理的样品中斑蝥素的含量约是用方
法１处理的样品中含量的１５倍，可见经过酸水解后
再用氯仿提取的提取效率明显优于不经过酸水解直
接用氯仿提取的效率，此结果与文献报道［５］基本一
致。在以往记载的测定斑蝥素含量的文献中以及
２００５年版《中国药典》中，大多选用直接浸提法来处
理样品，所测定的含量偏低，不能真正的反映斑蝥药
材的质量，不能指导临床合理用药，造成了一些中毒
事件，也造成了药材资源的浪费，因此有必要出台斑
蝥素含量测定的新标准来规范斑蝥药材的质量。
［参考文献］
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中成药，２００５，７７（１）：４．
［２］ 刘键，高建辉，刘晓秋．斑蝥素及其衍生物的研究进展［Ｊ］．中
药材，２００３，２６（６）：４５３．
［３］ 李晓飞，陈祥盛，国兴明．芫菁科昆虫体内斑蝥素的气相色谱
法测定［Ｊ］．昆虫知识２００７，４４（３）：４５９．
［４］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２３３．
［５］ 李晓飞，陈样盛，国兴明．斑蝥样品制备方法的改进及其成效
比较［Ｊ］．中成药，２００７，２９（１）：１２９．
［６］ 陈运久，刘传华，陈沪宁．气相色谱法测定斑蝥体内的斑蝥素
含量［Ｊ］．山东中医杂志，２００１，２０（４）：２３９．
［７］ 国兴明，陈样盛，李晓飞．新内标法在斑蝥素测定中的应用研究
［Ｊ］．山地农业生物学报，２００７，２６（１）：４８．
［责任编辑 王亚君］
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第３４卷第１６期
２００９年８月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００９