全 文 ：雷公藤内酯醇上调纤维肉瘤 ＨＴ１０８０细胞
基质金属蛋白酶９基因甲基化水平
杨盛波１，２，文海泉１，张桂英１，赵　莎１，罗勇奇１，陆前进１
（１．中南大学 湘雅二医院 皮肤性病科，湖南 长沙 ４１００１１；
２．中南大学 湘雅三医院 皮肤性病科，湖南 长沙 ４１００１３）
［摘要］　目的：研究雷公藤内酯醇（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ＴＬ）抑制纤维肉瘤 ＨＴ１０８０细胞基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，
ＭＭＰ９）表达的机制。方法：用终浓度分别为６，１２，１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１的ＴＬ处理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ，对照组不加药物处理，甲基化
特异性ＰＣＲ检测ＴＬ对ＭＭＰ９基因启动子甲基化水平的影响，ＲＴＰＣＲ检测ＴＬ对基质金属蛋白酶组织抑制物（ＴＩＭＰ１，２，３
和４ｍＲＮＡ表达的影响。结果：与对照组比较，３个 ＴＬ处理组中仅１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１处理组 ＭＭＰ９基因甲基化指数明显上调
（０３９±０１０ｖｓ０６１±０１０，Ｐ＜００５）；所有 ＴＬ处理组 ＴＩＭＰ１，２，３和４的 ｍＲＮＡ表达均无明显变化。结论：ＴＬ上调 ＨＴ
１０８０细胞ＭＭＰ９基因甲基化水平，这可能是ＴＬ抑制肿瘤ＭＭＰ９表达的一种新机制。
［关键词］　雷公藤内酯醇；基质金属蛋白酶；纤维肉瘤；ＤＮＡ甲基化
［收稿日期］　２００８０８２４
［通信作者］　文海泉，Ｔｅｌ：（０７３１）５２９５０１３，Ｅｍａｉｌ：ｗｅｎｈａｉｑｕａｎ＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　雷公藤内酯醇（ＴＬ，亦称雷公藤甲素）是雷公
藤提取物中最主要的单体活性成分之一，具有抗炎、
免疫抑制、抗移植排斥、抗肿瘤和抗生育等活性，其
作用机制尚未完全明了［１２］。作者在前期研究中发
现，ＴＬ抑制纤维肉瘤ＨＴ１０８０细胞基质金属蛋白酶
（ＭＭＰ９）的表达及活性［３］。本研究主要从 ＤＮＡ甲
基化的角度探讨ＴＬ抑制ＭＭＰ９表达的机制。
１　材料
１．１　药物与试剂　ＴＬ（美国 Ｓｉｇｍａ公司，纯度≥
９８％，批号０４８ｋ１１８６），极限必需培养基（ＭＥＭ）、新
生小牛血清、ＴＲＩｚｏｌ试剂和引物合成（美国 Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ公司），逆转录试剂盒（立陶宛 Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司，
批号０００１６４０６），ＤＮＡ抽提试剂盒（批号 Ｇ５４０２）、
ＰＣＲ试剂和ＤＮＡ标准参照物（中国Ｔｉａｎｇｅｎ公司），
ＤＮＡ甲基化试剂盒 ＥＺＤＮＡＭｅｔｈｙｌａｔｉｏｎＧｏｌｄＫｉｔＴＭ
（美国ＺＹＭＯＲｅｓｅａｒｃｈ公司，批号Ｍ０６０６０１４２ＺＦ）。
１．２　细胞　ＨＴ１０８０细胞购自武汉大学中国典型
物收藏中心。
１．３　仪器　３１１１型 ＣＯ２细胞培养箱（美国 Ｆｏｒｍａ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司），Ｔｇｒａｄｉｅｎｔ型 ＰＣＲ扩增仪（德国
ＷｈａｔｍａｎＢｉｏｍｅｔｒａ公司），ＧｅｌＤｏｃＸＲ型凝胶成像分
析系统（美国ＢＩＯＲＡＤ公司）。
２　方法
２．１　细胞培养　ＨＴ１０８０细胞采用含１０％小牛血
清、１００Ｕ·ｍＬ－１青霉素和链霉素的 ＭＥＭ培养基，
３７℃，５％ＣＯ２培养箱中常规培养及传代。传代 ４
次后做实验。
２．２　药物处理　ＴＬ以二甲亚砜配制成１ｇ·Ｌ－１的
储存液，－２０℃保存，使用时以培养基稀释并直接
加入培养瓶中。噻唑蓝比色法检测结果显示，ＴＬ处
理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ，半数抑制浓度约为２５ｎｍｏｌ·
Ｌ－１。ＨＴ１０８０细胞按５×１０５个／瓶接种４瓶，２４ｈ
后，换液并加入终浓度分别为６，１２，１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１的
ＴＬ作用７２ｈ，对照组不加药物处理；期间每２４ｈ换
液１次，并加入新的ＴＬ，使用的培养基仅含１％的新
生小牛血清。二甲亚砜在培养基的终浓度不超过
０００１％。
２．３　总 ＲＮＡ和 ＤＮＡ的提取　用 ＴＲＩｚｏｌ提取细胞
总ＲＮＡ，试剂盒提取ＤＮＡ，按各自说明进行；紫外分
光光度计测定浓度及纯度，－７０℃储存备用。
２．４　甲基化特异性 ＰＣＲ　（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ
ＰＣＲ，ＭＳＰ）检测 ＭＭＰ９基因启动子甲基化水平
ＤＮＡ的重亚硫酸氢盐修饰根据试剂盒说明进行，自
行设计３对引物即甲基化引物（Ｍ）、非甲基化引物
（Ｕ）及与甲基化无关的引物（ＢＳ），序列如下：ＭＭＰ
９Ｍ 上 游 ５′ＧＡＡＧＴＴＣＧＡＡＡＴＴＡＧＴＴＴＧＧＴＴＡＡＣ
３′，下游 ５′ＴＣＣＣＧＡＡＴＡＡＣＴＡＡＴＡＴＴＡＴＡＡＡＣＧＴＡ
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３′；ＭＭＰ９Ｕ上游５′ＡＧＴＴＴＧＡＡＡＴＴＡＧＴＴＴＧＧＴＴＡ
ＡＴＧＴ３′，下游５′ＣＣＴＣＣＣＡＡＡＴＡＡＣＴＡＡＴＡＴＴＡＴＡ
ＡＡＣＡＴＡ３′；ＭＭＰ９ＢＳ上游 ５′ＧＧＧＡＧＧＴＴＡＧＧＴ
ＧＧＧＴＡＧＡＴＴＡＴＴ３′， 下 游 ５′ＴＣＡＣＴＣＴＡＴＣＡＣ
ＣＣＡＡＡＣＴＡＡＡＡＴＡＣＡ３′。反应体系２５μＬ：２×Ｈｏｔ
ＳｔａｒｔＴａｑＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ１２５μＬ，灭菌双蒸水７５
μＬ，上游引物 １０μＬ，下游引物 １０μＬ，ＤＮＡ３０
μＬ。反应条件均为９４℃ ３０ｓ，５５℃ ３０ｓ，７２℃ ３０
ｓ，共４０个循环。循环开始前的初始变性过程为９４
℃５ｍｉｎ，循环结束后７２℃再延伸８ｍｉｎ。所得甲基
化产物（Ｍ）和非甲基化产物（Ｕ）用与甲基化无关的
ＢＳ产物标准化后，计算甲基化指数 Ｍ／（Ｍ＋Ｕ），代
表基因甲基化水平。
２．５　ＲＴＰＣＲ检测基质金属蛋白酶组织抑制物　
（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＴＩＭＰｓ）的
ｍＲＮＡ表达 逆转录反应体系２０μＬ：总 ＲＮＡ３μｇ，
随机引物１μＬ，逆转录５×缓冲液４μＬ，逆转录酶１
μＬ，ｄＮＴＰ混合物２μＬ，ＲＮＡ酶抑制剂１μＬ，按试剂
盒说明进行。ＰＣＲ反应体系２５μＬ：２×ＰＣＲＭａｓｔｅｒ
Ｍｉｘ１２５μＬ、灭菌双蒸水９５μＬ、上下游引物各１
μＬ以及 ｃＤＮＡ１μＬ。引物自行设计或参考文
献［４５］，并核对Ｇｅｎｂａｎｋ中的原始序列。引物序列、
反应条件及扩增片段见表１。扩增产物于１５％的
琼脂糖凝胶中电泳，凝胶影像分析系统观察、拍照和
半定量分析，以目的基因与内对照 β肌动蛋白的灰
度比代表其ｍＲＮＡ表达水平。
表１　ＲＴＰＣＲ所用引物序列、ＰＣＲ反应条件及产物大小
基因 引物序列 反应条件 产物／ｂｐ
ＴＩＭＰ１ 正义链 ５′ＣＴＧＧＣＡＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＧＣＴＧ３′ ９４℃３０ｓ，５５℃５０ｓ ５５２
　 反义链 ５′ＧＧＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＣＡＧＡＧＣＣＴ３′ ７２℃６０ｓ，３０个循环 　
ＴＩＭＰ２ 正义链 ５′ＧＧＣＧＴＴＴＴＧＣＡＡＴＧＣＡＧＡＴＧＴＡＧ３′ ９４℃３０ｓ，５５℃５０ｓ ４９７
　 反义链 ５′ＣＡＣＡＧＧＡＧＣＣＧＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＴＧ３′ 　 　
ＴＩＭＰ３ 正义链 ５′ＧＣＣＴＴＣＴＧＣＡＡＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣ３′ ９４℃３０ｓ，５６℃６０ｓ ２４６
　 反义链 ５′ＣＧＴＧＴＡＣＡＴＣＴＴＧＣＣＡＴＣＡＴＡ３′ ７２℃６０ｓ，３０个循环 　
ＴＩＭＰ４ 正义链 ５′ＴＣＴＧＧＡＣＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＴＴＧ３′ ９４℃３０ｓ，５５℃５０ｓ １７６
　 反义链 ５′ＴＴＧＡＡＧＧＧＡＴＧＴＧＡＴＧＧＴＣＡ３′ 　 　
β肌动蛋白 正义链 ５′ＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴ３′ ９４℃３０ｓ，５５℃５０ｓ ５５０
　 反义链 ５′ＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧ３′ 　 　
２．６　统计学分析　上述每个实验独立重复３次。
实验数据用 珋ｘ±ｓ表示，采用 ＳＰＳＳ１５０统计软件进
行ＯｎｅＷａｙＡＮＯＶＡ分析，Ｐ＜００５有统计学意义。
３　结果
３．１　ＴＬ对ＭＭＰ９基因甲基化水平的影响　ＴＬ处
理ＨＴ１０８０细胞 ７２ｈ，随药物浓度的增加，ＭＭＰ９
基因甲基化水平呈上调趋势；与对照组比较，１８
ｎｍｏｌ·Ｌ－１处理组ＭＭＰ９基因甲基化水平明显上调
（Ｐ＜００５），见图１，表２。
Ｓ．１００ｂｐＤＮＡ标准参照物；Ｃｏｎｔｒｏｌ．未处理的对照组；
Ｍ．甲基化产物；Ｕ．非甲基化产物；
ＢＳ．与甲基化无关的ＰＣＲ产物；ＭＳＰ．甲基化特异性ＰＣＲ。
图１　雷公藤内酯醇处理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ对ＭＭＰ９
基因甲基化水平的影响
表２　ＴＬ处理７２ｈ后，各组细胞ＭＭＰ９基因甲基化
水平（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｎｍｏｌ·Ｌ－１
Ｍ Ｕ Ｍ／（Ｍ＋Ｕ）
对照 － １７３±０１０ ２７６±０３９ ０３９±０１０
ＴＬ处理 ６ ２０９±０３４ ３１５±１００ ０４０±０１５
　 １２ ３１６±０７２ ３７７±０８２ ０４６±０２０
　 １８ ２１３±０１０ １４８±０２４ ０６１±０１０１）
　　注：①Ｍ代表甲基化，Ｕ代表非甲基化，Ｍ／（Ｍ＋Ｕ）为甲基化指
数；②与对照组相比１）Ｐ＜００５
３．２　ＴＬ对 ＴＩＭＰｓｍＲＮＡ表达的影响　不同浓度
ＴＬ处理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ，ＴＩＭＰ１，２，３和４ｍＲ
ＮＡ的表达均无明显变化，见图２，表３。
４　讨论
文献报道 ＴＬ抑制 ＭＭＰ１，２，３，９和１３在成
纤维细胞、关节软骨细胞、大鼠肺组织以及肿瘤细胞
等的表达［３，６１０］。Ｌｉｎ等认为 ＴＬ通过上调 ＴＩＭＰ１
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Ｍ．１００ｂｐＤＮＡ标准参照物；Ｃｔｒｌ．未处理的对照组
图２　雷公藤内酯醇处理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ对
ＴＩＭＰｓｍＲＮＡ表达的影响
和２的表达抑制 ＭＭＰ１和３在 ＩＬ１α预处理的人
滑膜成纤维细胞的表达［６］。Ｓｙｌｖｅｓｔｒｅｒ等报道雷公
藤提取物通过抑制核转录因子 ＮＦκＢ及 ＡＰ１和靶
ＤＮＡ的结合下调 ＭＭＰ３和１３在关节软骨细胞的
表达［９］。
新近研究显示，肿瘤是否表达 ＭＭＰ９与 ＤＮＡ
甲基化有关。Ｃｈｉｃｏｉｎｅ等研究了多种淋巴瘤细胞系
ＭＭＰ９的表达与其基因启动子甲基化水平的关系，
发现二者呈负相关；同时发现，ＤＮＡ甲基转移酶抑
　　
表３　ＴＬ处理７２ｈ后，各组细胞ＴＩＭＰｓｍＲＮＡ的相对含量（珋ｘ±ｓ）
组别 剂量／ｎｍｏｌ·Ｌ－１ ＴＩＭＰ１ ＴＩＭＰ２ ＴＩＭＰ３ ＴＩＭＰ４
对照 － １３５±０６１ １３４±０２６ ０４０±００７ ０５１±０２０
ＴＬ处理 ６ １３２±０７１ １４４±０４４ ０３７±０１１ ０４８±０１７
　 １２ １４４±０６９ １２２±０３７ ０３７±００７ ０５２±０２３
　 １８ １６０±０８３ １４８±０２４ ０３４±００９ ０５０±０２０
制剂５ａｚａ２′ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（５ａｚａＣｄＲ）可诱导多个
淋巴瘤细胞系中原本沉默的 ＭＭＰ９重新表达［１１］。
Ｓａｔｏ等在胰腺癌细胞系的研究中也得到类似结
果［１２］。本研究采用ＤＮＡ甲基化特异性分析技术中
常用的一种，甲基化特异性 ＰＣＲ即 ＭＳＰ，观察了 ＴＬ
对纤维肉瘤 ＨＴ１０８０细胞 ＭＭＰ９基因启动子甲基
化水平的影响，结果显示：ＴＬ作用７２ｈ，随药物浓度
的增加，ＭＭＰ９基因甲基化水平逐渐上调；其中１８
ｎｍｏｌ·Ｌ－１ＴＬ处理组该基因甲基化水平明显高于对
照组（Ｐ＜００５）。结合作者前期的研究结果［３］，提
示ＴＬ可通过上调 ＤＮＡ甲基化水平抑制基因的表
达。
ＭＭＰｓ的表达和生物活性受基因转录、酶原活
化、酶抑制物（ＴＩＭＰｓ）等多个水平的调控。因此，作
者同时检测了ＴＬ对ＴＩＭＰｓｍＲＮＡ表达的影响，发现
不同浓度ＴＬ处理ＨＴ１０８０细胞７２ｈ，ＴＩＭＰ１，２，３
和４ｍＲＮＡ的表达均无明显变化。此外，作者既往
发现ＴＬ上调ＤＮＡ甲基转移酶１和３ＡｍＲＮＡ的表
达，但不影响ＤＮＡ甲基转移酶３Ｂ的表达［１３］。上述
研究结果从另一个侧面表明 ＴＬ对 ＨＴ１０８０细胞
ＭＭＰ９表达和活性的抑制可能发生在基因转录水
平，ＴＬ可能影响ＤＮＡ甲基化。
值得注意的是，傅海英等应用甲基化敏感的限
制性内切酶ＰＣＲ法检测了ＴＬ处理前后急性Ｔ淋巴
细胞白血病 Ｍｏｌｔ４细胞系的 ｐ１５基因甲基化水平，
认为ＴＬ可能通过诱导Ｍｏｌｔ４细胞异常甲基化的ｐ１５
基因去甲基化，从而使 ｐ１５基因恢复表达；并推测
ＴＬ可能通过选择性地与巯基作用导致ＤＮＡ甲基转
移酶的活性减低［１４］。为什么会出现完全相反的结
果，是否与研究方法或细胞不同有关，有待进一步研
究。
根据结果推测，ＴＬ通过上调ＤＮＡ甲基转移酶１
和３Ａ的表达及活性，进而上调 ＭＭＰ９基因的甲基
化水平并因此抑制其表达。这可能是 ＴＬ抑制肿瘤
浸润、转移的一种新机制。
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９ｇｅｎｅｉｎｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａＨＴ１０８０ｃｅｌｓ
ＹＡＮＧＳｈｅｎｇｂｏ１，２，ＷＥＮＨａｉｑｕａｎ１，ＺＨＡＮＧＧｕｉｙｉｎｇ１，ＺＨＡＯＳｈａ１，ＬＵＯＹｏｎｇｑｉ１，ＬＵＱｉａｎｊｉｎ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＶｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ，ＳｅｃｏｎｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＶｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ，ＴｈｉｒｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｏｎｔｈｅＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＭＭＰ９ｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＴＩＭＰｓ）ｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｉｎｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａＨＴ１０８０ｃｅｌｓｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅａｎｔｉｃａｎｃｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ．Ｍｅｔｈｏｄ　：ＨＴ１０８０ｃｅｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎＭＥＭｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１０％ ｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｆｓｅｒｕｍ
ａｎｄ１％ ｐｅｎｉｃｉｌｉｎｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ．Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｗａｓｄｉｓｓｏｌｖｅｄｉｎｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）ａｔａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ１ｇｏＬ１ａｎｄｓｔｏｒｅｄａｔ
－２０℃．Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｗａｓｆｒｅｓｈｌｙｄｉｌｕｔｅｄｗｉｔｈｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｐｅｒｉｏｒｔｏｕｓｅａｎｄｄｉｒｅｃｔｌｙａｄｄｅｄｔｏｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓａｔｔｈｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎ，ａｎｄｉｎｃｕｂａｔｅｄｆｏｒ７２ｈｏｕｒｓａｔ３７℃ ｉｎａｈｕｍｉｄｉｆｉｅｄａｔｍｏｓｐｈｅｒｅｗｉｔｈ５％ ＣＯ２，ｗｉｔｈｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅａｇｅｎｔｓｅｖｅｒｙ２４ｈｏｕｒｓ．Ｍｅｔｈｙｌａ
ｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃＰＣＲ（ＭＳＰ）ｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｔａｔｕｓｏｆＭＭＰ９ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒ，ａｎｄｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ
ｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴＰＣＲ）ｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ
（ＴＩＭＰｓ）ｉｎｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａＨＴ１０８０ｃｅｌｓａｆｔｅｒ７２ｈｏｕｒｓｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ６ｎｍｏｌ·Ｌ－１，１２ｎｍｏｌ·Ｌ－１ｏｒ１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１ｔｒｉｐｔｏｌ
ｉｄｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｄｅｘｏｆＭＭＰ９ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｙｅｌｅｖａｔｅｄｉｎＨＴ１０８０ｃｅｌｓａｆｔｅｒ７２ｈｏｕｒｓｏｆ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ（０．６１±０．１０ｖｓ０．３９±０．１０，Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｎｏｔｅｄｂｅｔｗｅｅｎ６ｎｍｏｌ·Ｌ－１ｏｒ１２ｎｍｏｌ·Ｌ－１ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｔｒｅａｔｅｄＨＴ１０８０ｃｅｌｓａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｓ（０．４０±０．１５ｖｓ０．３９±
０．１０，０．４６±０．２０ｖｓ０．３９±０．１０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｂｏｔｈＰ＞０．０５）．ＴｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＩＭＰ１，２，３ｏｒ４ｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｙｃｈａｎｇｅｄｉｎＨＴ１０８０ｃｅｌｓａｆｔｅｒ７２ｈｏｕｒｓｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅ
ｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ（ａｌＰ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＭＭＰ９ｇｅｎｅｉｎ
ＨＴ１０８０ｃｅｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ；ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ；ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ；ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ
［责任编辑　古云侠］
·４１６·
第３４卷第５期
２００９年３月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　５
　Ｍａｒｃｈ，２００９