全 文 ：基于报告基因的化学预防剂细胞筛选模型的建立
徐海荣，卜平，李湘鸣
（扬州大学 医学院 中西医结合研究所，江苏 扬州 ２２５００１）
［摘要］ 目的：建立基于报告基因和抗氧化反应元件（ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ，ＡＲＥ）的药物筛选细胞模型，为化学
预防剂的筛选奠定基础。方法：构建重组报告基因表达载体 ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ，并将其转入 ＨｅｐＧ２细胞中，利用已知化学预
防剂检测该细胞模型，并观察白藜芦醇、原儿茶醛、熊果酸和齐墩果酸４种中药单体不同浓度（０，１２５，２５，５０，１００，２００μｍｏｌ·
Ｌ－１）对ＧＦＰ报告基因表达活性的影响。结果：表达载体ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ中 ＧＦＰ的表达受 ＡＲＥ的调控，其表达水平高于
对照载体且在一定范围内与化学预防剂的浓度呈剂量效应关系。４种中药单体中白藜芦醇有较好的诱导效果。结论：利用此
模型通过测定ＧＦＰ报告基因的诱导表达水平可筛选得到新结构的化学预防剂。
［关键词］ 抗氧化反应元件；报告基因；化学预防剂；中药；药物筛选模型
［收稿日期］ ２００８１２１０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０８７３３４３）；江苏省研究生培
养创新工程项目（ＣＸ０７Ｓ０４２ｚ）
［通信作者］ 卜平，Ｔｅｌ：（０５１４）８７９７８８０１，Ｆａｘ：（０５１４）８７３４１７３３，
Ｅｍａｉｌ：ｂｏｐｉｎｇ＠ｙｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
肿瘤的化学预防是指应用天然或人工合成的化
合物，去阻断、逆转或防止侵袭性肿瘤的发生，在这
一过程中发现或甄别新的预防肿瘤的化合物非常重
要，这对于减少癌症发生率具有十分重要的意义。
目前认为９０％的肿瘤的发生与化学致癌物氧
化损伤有关。致癌物进入体内后，会受到Ⅰ相酶和
Ⅱ相酶的代谢［１］。Ⅰ相代谢酶可使多数致癌物活
化，通过氧化损害生物大分子物质而引起肿瘤；Ⅱ相
代谢酶又称为解毒酶，它可使多数致癌物失活并促
进其在体内的代谢，因此在阻断或抑制肿蝊的发展
进程中起着至关重要的作用［２４］。在Ⅱ相代谢酶基
因上游启动区有一非常保守的基因调控序列，称为
抗氧化反应元件（ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ，
ＡＲＥ），药物中许多活性成分可直接或间接地与
ＡＲＥ特异结合，顺式激活Ⅱ相酶的表达，且其表达
量往往与这些活性成分的作用程度有剂量效应关
系［５８］。因此，作者将 ＡＲＥ与绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）
报告基因相串联，构建转基因细胞模型，为从中药中
筛选化学预防剂奠定了基础。
１ 材料
１．１ 质粒、菌种与细胞株 ＤＨ５α、质粒 ｐＴＫＧＦＰ
由本实验室保存；ｐＥＧＦＰＮ１表达质粒（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公
司）；ＨｅｐＧ２细胞（中国科学院上海细胞研究所）。
１．２ 工具酶与主要试剂 Ｔ４多聚核苷酸激酶
（Ｔ４ＰＮＫ）、各种限制性内切酶、Ｔａｑ酶、Ｔ４连接酶、
ＤＮＡ胶回收试剂盒和核酸共沉剂（ＴａＫａＲａ公司）；
ＤＭＥＭ（批号 １３４２８７８）、脂质体转染试剂盒 Ｌｉｐｏ
ｆｅｃｔａｍｉｎｅ（批 号 ５０４８０）和 ＰＬＵＳＲｅａｇｅｎｔ（批 号
１２７６８５２，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；胎牛血清（批号０７０３０３５０，
杭州四季青公司）；ＡＲＥ序列和引物由上海生物工程
公司合成；吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（ｐｙｒｏｌｉｄｉｎｅｄｉ
ｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｅ，ＰＤＴＣ，批号Ｌ０７３９９）和叔丁基对苯二酚
（ｔｅｒｔｉａｒｙｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ，ｔＢＨＱ，批号 １２５４９９２，Ｓｉｇ
ｍａ公司）；中药单体白藜芦醇（纯度≥９８％，批号
ＴＣＭ０３８０７０６２８）、熊果酸（纯度≥９８％，批号ＴＣＭ０３６
０７１０１６）、原儿茶醛（纯度≥９９％，批号 ＴＣＭ０１８
０７０８２１）和齐墩果酸（纯度≥９８％，批号 ＴＣＭ０３０
０７０７２８，南京替斯艾么中药研究所）。
１．３ 主要仪器 ＰＴＣ１００型 ＰＣＲ仪（ＭＪ．ＲＥ
ＳＥＡＲＣＨ公司），ＧＥＮＥＧＥＮＩＶＳ全自动凝胶成像分
析仪（Ｓｙｎｇｅｎｅ公司），１６４５０７０型水平电泳仪（ＢＩＯ
ＲＡＤ公司）；ＴＧＬ１８ＧＣ型离心机（上海安亭科学仪
器厂），ＢＸ５１型倒置荧光显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ公司）；
ＨＥＲＡｃｅｌ１５０型 ＣＯ２孵箱（ＨＥＲＡＥＵＳ公司），ＧＥＮ
ＩＯＳＰＬＵＳ荧光酶标仪（ＴＥＣＡＮ公司）。
２ 方法
２．１ ＡＲＥ序列设计 分别合成４对 ＡＲＥ序列，并
在５′端和３′端引入不同的酶切位点（表１），以便于
酶切鉴定和各段 ＡＲＥ序列的正确插入。将各单链
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ＡＲＥ溶于ＳＴＥ缓冲液使其终浓度为５０μｍｏｌ·Ｌ－１，
于９４℃保温５ｍｉｎ退火形成双链，用 Ｔ４ＰＮＫ酶对
其末端进行磷酸化，操作过程按说明书进行。然后
加０５ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ（ｐＨ８０）５μＬ，再用氯仿抽提
后用核酸共沉剂沉淀。
２．２ ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ表达载体的构建 以质粒ｐＴＫ
表１ 人工合成的４对ＡＲＥ序列
序列（５′３′）
Ｐ１ ＴＣＧＡＣＴＡＧＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＴＴＴＧＡＧＣＴＳａｌⅠ ＳａｃⅠ
Ｐ２ ＣＡＡＡＧＴＴＧＣＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＣＴＡＧ
Ｐ３ ＴＡＡＴＧＴＡＡＡＧＣＴＴＴＡＧＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＴＴＴＧＶｓｐⅠ ＨｉｎｄⅢ ＳａｌⅠ
Ｐ４ ＴＣＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＣＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＣＴＡＡＡＧＣＴＴＴＡＣＡＴ
Ｐ５ ＴＡＡＴＧＴＡＣＴＣＧＡＧＴＡＧＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＴＴＴＡＶｓｐⅠ ＸｈｏⅠ ＨｉｎｄⅢ
Ｐ６ ＡＧＣＴＴＡＡＡＧＴＴＧＣＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＣＴＡＣＴＣＧＡＧＴＡＣＡＴ
Ｐ７ ＴＡＡＴＧＴＧＣＡＣＴＡＧＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＴＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＴＴＴＣＶｓｐⅠ ＡｐａＬⅠ ＸｈｏⅠ
Ｐ８ ＴＣＧＡＧＡＡＡＧＴＴＧＣＴＴＴＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＧＴＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＣＴＡＧＴＧＣＡＣＡＴ
ＧＦＰ为模板，用ＰＣＲ扩增ＴＫ基本启动子，上游引物
为５′ＣＣＡＴＴＡＡＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＧＡＣ３′，下游
为５′ＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＴＴＴＡＡＧＣＧＧＧＴＣＧＣＴＧＣＡ３′，引
物的５′端分别引入 ＡｓｅⅠ和 ＢａｍＨⅠ酶切位点，并
增加２个保护碱基。ＰＣＲ产物经 ＤＮＡ胶回收试剂
盒回收后，用ＡｓｅⅠ和ＢａｍＨⅠ酶双切，电泳切胶回
收１５０ｂｐ的 ＴＫ目的片段，同时对载体 ｐＥＧＦＰＮ１
用该酶进行线性化，用Ｔ４连接酶将 ＴＫ基本启动子
与ｐＥＧＦＰＮ１载体相连，以驱动 ＥＧＦＰ基因的表达。
连接产物转化于感受态细胞 ＤＨ５α，经 Ｋａｎａ抗性平
板筛选阳性克隆，常规挑斑提取质粒，酶切鉴定，并
送测序，测序正确的载体命名为ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ。
２．３ ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体的构建 用ＳａｌⅠ和
ＳａｃⅠ对ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ双酶切，酶切产物经１％琼脂
糖电泳回收纯化，用 Ｔ４连接酶将第一段 ＡＲＥ与
ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体相连，构建成ＡＲＥ调控的ＧＦＰ表
达载体 ｐＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ。按相同的分子生物学
技术方法，分别将余 ＡＲＥ片段依次插入到 ｐＡＲＥ
ＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体，构建成４个 ＡＲＥ重复序列调控
的ＧＦＰ真核载体，将其命名为ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ。
２．４ 细胞模型的建立 将 ＨｅｐＧ２细胞接种于含
１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ液中扩增培养，取对数生长
期细胞接种入 ２４孔板中，使细胞在转染时贴壁
８０％左右，用脂质体转染试剂盒（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ和
ＰＬＵＳＲｅａｇｅｎｔ），将载体ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ（对照载体）和
ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ分别转染于 ＨｅｐＧ２细胞，转染
步骤参照说明书进行。转染后２４ｈ，于倒置荧光显
微镜下观察细胞荧光，用终浓度为６００ｍｇ·Ｌ－１的
Ｇ４１８进行筛选２周。挑选阳性克隆，扩增传代，将
所选细胞克隆分别命名为 ＨｅｐＧ２ＴＫＧＦＰ和
ＨｅｐＧ２４ＡＲＥＴＫＧＦＰ。
２．５ 细胞相对荧光发光度测定 由于 ＧＦＰ的荧光
强度不仅与诱导物的诱导有关，还与细胞的数量有
关，而细胞数在５×１０４～２０×１０４时ＧＦＰ与ＥＢ荧光
强度呈线性关系［９］，故可用 ＥＢ荧光强度代表细胞
的数量，校正每孔的 ＧＦＰ荧光强度，即得相对发光
强度。故采用不同的激发和发射波长测得 ＧＦＰ和
ＥＢ荧光强度，其激发波长／发射波长分别为 ４８５
ｎｍ／５３０ｎｍ（ＧＦＰ）和４８５ｎｍ／６１２ｎｍ（ＥＢ）。
２．６ 细胞模型的实验验证 ＰＤＴＣ和ｔＢＨＱ是已知
的化学预防剂，可以通过ＡＲＥ特异地诱导Ⅱ相酶的
表达，故用此２种化学物对所构建的细胞模型进行
实验验证。将转ＧＦＰ基因细胞扩增后，接种入黑色
９６孔板，每孔细胞数为５×１０４个，培养２４ｈ后加入
用培养基稀释的不同浓度的受试物。受试物用ＤＭ
ＳＯ助溶，加入ＤＭＳＯ终浓度不超过细胞培养液总体
积的１％。受试物浓度设计为：０（空白对照），１２５，
２５，５０，１００，２００μｍｏｌ·Ｌ－１，每一浓度组有 ５个重
复，于３７℃培养作用 ２４ｈ，用 ＰＢＳ洗涤后加入含
１００ｍｇ·Ｌ－１ＥＢ的 ＰＢＳ２００μＬ，于室温下染色 ２０
ｍｉｎ，再用ＰＢＳ洗涤１次后每孔加入ＰＢＳ２００μＬ，用
多功能荧光酶标仪检测细胞的 ＧＦＰ荧光强度和 ＥＢ
荧光强度，求其相对发光度。
２．７ ４种中药单体对 ＧＦＤ表达的诱导作用 将
ＨｅｐＧ２４ＡＲＥＴＫＧＦＰ接种入黑色９６孔板，每孔细
胞数为 ５×１０４个，培养 ２４ｈ后加入不同浓度（０，
１２５，２５，５０，１００，２００μｍｏｌ·Ｌ－１）的中药单体，求
ＧＦＰ相对发光度。
２．８ 统计分析 本实验的计量数据均以 珋ｘ±ｓ表
示，２组以上均数比较采用单因素方差分析，Ｐ＜
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００５表示差异有显著性，应用 ＳＰＳＳ１１０统计软件
进行分析。
３ 结果
３．１ 重组表达载体 ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ的构建
由Ｔ４连接酶将４段ＡＲＥ逐一插入ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载
体ＴＫ启动子上游，构建重组表达载体 ｐ４ＡＲＥＴＫ
ＧＦＰ／ｎｅｏ。每次的连接产物都转化 ＤＨ５α并进行扩
增，小规模提取质粒 ＤＮＡ，用插入 ＡＲＥ时引入的特
异酶切位点进行酶切鉴定（图１）。
３．２ 阳性克隆筛选结果 两载体ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ和
Ｍ．４５００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．ｐＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＡｐａｌⅠ，ＢａｍＨⅠ双酶切；２．ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＡｐａｌⅠ，ＢａｍＨⅠ双酶切；
３．ｐ２ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＳｐｈⅠ酶切；４．ｐ３ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＳｐｈⅠ酶切；５．ｐ３ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＸｈｏⅠ酶切；
６．ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ载体ＡｐａｌⅠ酶切。
图１ 重组表达载体ｐＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ，ｐＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ（Ａ），ｐ２ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ（Ｂ），ｐ３ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ（Ｃ），
ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ（Ｄ）酶切鉴定
ｐ４ＡＲＥＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ转染 ＨｅｐＧ２细胞后分别用６００
ｍｇ·Ｌ－１Ｇ４１８筛选出阳性克隆，２～３周后挑取阳性
克隆进行扩大培养（图 ２）。图示为 ＨｅｐＧ２４ＡＲＥ
ＴＫＧＦＰ细胞的筛选过程，ＨｅｐＧ２ＴＫＧＦＰ细胞的筛
选过程相同。从图中可看出所筛出的克隆细胞ＧＦＰ
荧光较均匀，且进一步的筛选实验表明２～３代后荧
光未明显减弱。
３．３ 细胞模型的实验验证 ＰＤＴＣ和 ｔＢＨＱ是已知
的人工合成的化学预防剂，可诱导Ⅱ相酶的表达，用
来检测该筛选系统的效果。图３，４分别表明ＰＤＴＣ，
ｔＢＨＱ对ＡＲＥ调控的转基因细胞 ＨｅｐＧ２４ＡＲＥＴＫ
ＧＦＰ中的ＧＦＰ的良好诱导效果及剂量依赖关系，从
结果可见，这２种化学物对有ＡＲＥ调控的ＧＦＰ荧光
诱导效果都很明显，相对于无ＡＲＥ调控的ＧＦＰ的
Ａ．克隆筛选１周（×２００）；Ｂ．克隆筛选２周（×２００）；Ｃ．挑取的克隆扩大培养（×４００）
图２ ＨｅｐＧ２４ＡＲＥＴＫＧＦＰ细胞的筛选
基础水平有较大提高（Ｐ＜００５）。在细胞 ＨｅｐＧ２
４ＡＲＥＴＫＧＦＰ中，ＰＤＴＣ浓度为５０μｍｏｌ·Ｌ－１时，诱
导效果最好，与空白组比较差异有显著性（Ｐ＜
００５）；ｔＢＨＱ诱导效果随浓度升高持续上升，各组
（１２５，２５，５０，１００，２００μｍｏｌ·Ｌ－１）与空白组比较差
异都有显著性（Ｐ＜００５）。
３．４ ４种中药单体对 ＧＦＰ表达的诱导作用 图５
表明了４种中药单体对 ＨｅｐＧ２４ＡＲＥＴＫＧＦＰ中的
ＧＦＰ的诱导效果。白藜芦醇有较好诱导效果，随着
浓度升高，荧光强度持续上升，在５０μｍｏｌ·Ｌ－１时
与空白组比较差异即具有显著性（Ｐ＜００５）。熊果
酸虽有一定诱导效果，但无显著性差异。原儿茶醛、
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图３ ＰＤＴＣ对ＧＦＰ诱导表达的量效关系
图４ ｔＢＨＱ对ＧＦＰ诱导表达的量效关系
图５ ４种中药单体对ＧＦＰ表达的诱导作用
齐墩果酸对ＧＦＰ诱导表达无影响。
４ 讨论
在正常情况下，机体只有３０％的Ⅱ相酶被诱导
而发挥作用，这就为肿瘤的化学预防提供了可能。
Ｗａｔｅｎｂｅｒｇ等人证实化学预防剂的作用机制在于可
长期有效地诱导编码Ⅱ相解毒酶基因的表达，从而
起到显著降低癌症发生率的作用，但在此基础上从
分子和细胞水平上对化学预防剂的有效鉴别还相当
缺乏［５］。本研究构建了一个真核表达载体 ｐ４ＡＲＥ
ＴＫＧＦＰ／ｎｅｏ，所插入的 ＴＫ基本启动子是目前在基
因工程研究中应用最为广泛，进展最快的１个基因，
而ＡＲＥ的调控作用在于当细胞中加入各种不同浓
度的化学预防剂时，ＡＲＥ可与这些化学预防剂相结
合，调控下游ＧＦＰ的表达，从 ＧＦＰ荧光强度的变化
就能判断各种化学预防剂的预防效果。
目前，ＧＦＰ在蛋白质标记、基因表达水平指示等
方面正得到越来越广泛的应用，成为活细胞分子水
平研究的工具。本实验用 ＧＦＰ作为报告基因，具有
许多显著的优点，如活体、原位、实时表达，不需裂解
细胞，可直接比色测定；荧光高度稳定，无需另外添
加底物或辅助因子等协助指示；检测方便，只需要紫
外光或蓝色激发；灵敏度高、速度快，可在较短的时
间内（约２４ｈ内）得出结果等。
本研究选取了白藜芦醇、熊果酸、原儿茶醛和齐
墩果酸４种中药单体为研究对象，观察其对ＡＲＥ调
控ＧＦＰ的诱导作用，结果表明白藜芦醇对 ＡＲＥ调
控的ＧＦＰ荧光有较强的诱导作用，可见某些天然的
化学预防剂的效果并不比目前已知的一些人工合成
的化学预防剂差，而其副作用却可能小得多，应更有
应用前景。
总之，本实验从细胞和分子生物学水平成功构建
了一个可用来筛选各种天然或人工合成的化学预防
剂的细胞模型，为从中药中筛选化学预防剂提供了一
个很好的技术手段，为其新药开发利用奠定基础。
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Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｂａｓｅｄｃｅｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｏｄｅｌｆｏｒ
ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｎｇｎｅｗｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｇｅｎｔｓ
ＸＵＨａｉｒｏｎｇ，ＢＵＰｉｎｇ，ＬＩＸｉａｎｇｍｉｎｇ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ２２５００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｄｉｓｃｏｖｅｒｎｅｗｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｇｅｎｔｓ，ａｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃｅｌｍｏｄｅｌｂａｓｅｄｏｎｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅａｎｄａｎｔｉ
ｏｘｉｄａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ（ＡＲＥ）ｈａｓｂｅｅｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＦｏｕｒｒｅｐｅａｓｏｆＡＲＥＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｃｏｎｓｅｒｖｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｚｅｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏａＧＦＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｉｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｗａｓｓｔａｂｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅｃｅｌｍｏｄｅｌｗａｓ
ｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈｋｎｏｗｎｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｇｅｎｔｓａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ，ｕｒｓｏｌｉｃａｃｉｄａｎｄｏｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄａｔｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（０，１２５，２５，５０，１００，２００μｍｏｌ·Ｌ－１）ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅＧＦＰａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＡＲＥ；ｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅ；ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｇｅｎｔ；Ｃｈｉｎｅｓｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ；ｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｏｄｅｌ
［责任编辑 古云侠］
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第３４卷第１４期
２００９年７月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １４
Ｊｕｌｙ，２００９