全 文 ：基于雌激素应答元件转录调节的
药物筛选模型的建立
王玲巧t o吕秋军u o牛建昭t o王继峰t o曲艳燕u o温利青u o
郑龙太u o陈媛媛u o张 敏u
kt q北京中医药大学 细胞与生化实验室 o北京 tsssu| ~
u q军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xsl
≈摘要  目的 }建立靶向雌激素应答元件k∞• ∞l的药物筛选模型 o为筛选雌激素受体k∞• l配体奠定基础 ∀方
法 }构建重组报告基因载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„° o与对照载体 ³≤  ∂Β瞬时共转染表达人 ∞• Α或 ∞• Β的 ‹¨¯¤细胞株 o
观察化合物对 ≥∞„°报告基因表达活性的影响 ∀结果 }雌二醇k∞ul诱导表达人 ∞• Α或 ∞• Β的 ‹¨¯¤细胞株 ≥∞„°
的表达 o∞≤xs分别为k{s qx{ ? { qxtl ³°²¯#p t和ktsv q|s ? x qu|l ³°²¯#p t o最大效应浓度为 ts ±°²¯#p t ~金雀黄
素 kŠ ±¨l 也诱导表达人 ∞• Α和 ∞• Β ‹¨¯¤细胞株 ≥∞„° 的表达 o∞≤xs分别为kv| qv{ ? u quyl ±°²¯#p t和kts q{y ?
s qzxl ±°²¯#p t ~最大效应浓度为 t Λ°²¯#p t ~∞u 和 Š ±¨诱导 ≥∞„°表达的最大水平较对照孔细胞高 z ∗ tw倍 ∀
∞• 拮抗剂 Œ≤Œt{u oz{s可完全抑制 ∞u和 Š ±¨对 ≥∞„°的诱导作用 ∀结论 }利用此模型检测化合物诱导报告基因的
表达水平可筛选和发现 ∞• 配体 ∀
≈关键词  ∞• ∞ ~∞• ~药物筛选 ~报告基因
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsy2sxvy2sx
绝经后随着体内雌激素的减少 ows h妇女出现
绝经期综合征 o同时骨质疏松 !心血管疾病 !神经退
行性疾病的发病率也随之增高 ∀雌激素替代治疗可
降低上述疾病的发病率 o但长期应用雌激素有诱发
子宫内膜癌 !乳腺癌的危险≈t  ∀t|||年 o美国 ‘Œ‹
宣布将人工合成雌激素列入致癌/黑名单0后 o从中
药中提取的天然雌激素成为最热门的需求 ∀
雌激素主要通过与雌激素受体 k∞• l结合而发
挥作用 ∀ ∞• 为核受体 o分为 ∞• Α和 ∞• Β两种亚型 ∀
一旦配体与 ∞• 结合 o∞• 即形成二聚体 o并与靶基
因启动子序列内的增强子序列 ) ) ) 雌激素应答元件
k ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¶³²±¶¬√¨¨¯¨° ±¨·o∞• ∞l结合而诱导靶基
因表达≈u  ∀依据此信号途径 o我们构建了以 ≥∞„°
为报告基因 !∞• ∞为靶序列的细胞水平药物筛选模
型 o为从中药中筛选 ∞• 配体奠定了基础 ∀
≈收稿日期  ussu2ts2ut
≈基金项目  北京市自然科学基金项目kzsvusuwl ~国家中医药
管理局中医药科学技术基金项目kst2sv°szl
≈通讯作者  吕秋军 ר¯ }kstsl yy|vuust ƒ¤¬}kstsl
y{utwyxv ∞2°¤¬¯}¯∏´­ƒ ±¬¦q¥°¬q¤¦q¦±
1 材料
1 q1 细胞株 !质粒与菌株
‹¨¯¤细胞株购自中国医学科学院细胞中心 ~稳
定转染人 ∞• Α或 ∞• Β的 ‹¨¯¤细胞株由本实验室建
立 !保存 ~≥∞„° 报告基因载体 ³× „2≥∞„° 购自
≤’‘×∞≤ ‹ 公司 ~Β2半乳糖苷酶kΒ2ª¤¯¤¦·²¶¬§¤¶¨ oΒ2
ª¤¯l内对照质粒 ³≤  ∂Β由军事医学科学院生物工
程研究所叶棋浓博士惠赠 ~大肠杆菌 ⁄‹xΑ由本实
验室保存 ∀
1 q2 工具酶及其他试剂
 ∏¯´ o…ª¯ µ限制性内切酶 o×w ⁄‘„ 连接酶 o
• ° Œ tyws培养基 o无酚红 • ° Œ tyws培养基购自
°µ²° ª¨¤公司 ~≥∞„°荧光检测试剂盒购自 ≤’‘2
×∞≤ ‹ 公司 ~脂质体 Œ°’ƒ∞≤ × „ Œ‘∞×  usss
• ¤¨ª¨ ±·oŠ2wt{ 购自 Š¬¥¦² Œ±√¬·µ²ª¨ ± ≤²µ³²µ¤·¬²±~
邻2硝基苯2Β2⁄2半乳吡喃糖苷k ’‘°Šl和 Œ≤Œt{u o
z{s由军事医学科学院生物工程研究所叶棋浓博士
惠赠 ~质粒提取试剂盒购自 ±Œ„Š∞‘公司 ~胰蛋白
胨 !酵母粉购自 ˜‘Œ°„× ‹ 公司 ~新生牛血清购自杭
州江滨生物技术有限公司 ~tzΒ2雌二醇ktzΒ2 ¶¨·µ²§¬2
²¯ o∞ul !• • uzutk氨丙基氨乙基硫代硫酸酯l由军事
#yvx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ y
∏±¨ oussv
医学科学院放射医学研究所李庶新副研究员惠赠 ~
Š ±¨k纯度 || qz h l由北京中医药大学生物化学教研
室提纯 ~其余试剂均为国产分析纯 ∀
1 q3 主要仪器
二氧化碳培养箱k‘˜„Œ• ∞l o台式恒温振荡培
养箱k ÷≥2⁄× ‹2|x 型l o倒置生物显微镜 k ÷≥2
⁄ul o台式高速冷冻离心机 k ⁄2vzxus ’¶·¨µ²§¨ o
¤¥²©∏ª¨ wss• l o核酸蛋白分析仪k˜⁄2ywsl o微孔板
荧光读数仪 k°’„•¶·¤µŠ¤¯¤¬¼l ∀
2 方法
2 q1 调控序列的设计与合成
根据雌激素特异性 ∞• ∞ 序列为 ³∏ŠŠ×2
≤ „±±±× Š„≤≤³¼≈v  o本研究设计的重组报告基因载
体的调控序列为 x 个串联排列的 ∞• ∞片段kx ≅
∞• ∞o由北京赛百盛公司合成l ∀根据 ³× „2≥∞„°
载体启动子上游多克隆位点酶切图谱 o在 x ≅ ∞• ∞
片段的 xj末端和 vj末端分别设计了  ∏¯´和 …ª¯ µ
酶切位点 o以便于和载体连接 ∀其序列为 }
正义链 }kxj2vjl
≤ Š„≤ Š≤ Š× „ŠŠ× ≤ „„„„× Š„≤≤ × „ŠŠ× ≤ „„„„
× Š„≤≤ × „ŠŠ× ≤ „„„„× Š„≤≤ × „ŠŠ× ≤ „„„„× Š
„≤≤ × „ŠŠ× ≤ „„„„× Š„≤≤ × „Š„× ≤ × × ≤
xj末端的 ≤ Š为  ∏¯´酶切位点的保护碱基 ovj
末端的 × ≤ 为 …ª¯ µ酶切位点的保护碱基 ∀
2 q2 片段的回收和纯化
报告基因载体 ³× „2≥∞„° 和 x ≅ ∞• ∞ 正义
链 !反义链经退火处理形成的双链 ⁄‘„分别用  ∏¯
´和 …ª¯ µ双酶切 o然后用酚2氯仿抽提纯化 ∀
2 q3 重组报告基因载体的构建 !筛选和鉴定
纯化后的双链 x ≅ ∞• ∞片段和 ³× „2≥∞„°载
体由 ×w2⁄‘„ 连接酶催化 o于 ty ε 反应 w «ox ≅
∞• ∞与载体的摩尔比为 |Βt ∀将连接反应混合物转
化 ⁄‹xΑ菌株 ∀挑取 us个单菌落 o小量扩增 !提取
质粒 ⁄‘„ o ∏¯´和 …ª¯ µ双酶切后 o用 t q{ h琼脂
糖电泳鉴定以筛选阳性克隆 ∀重组报告基因载体
³∞• ∞2× „2≥∞„°构建流程如图 t ∀
2 q4 细胞培养及重组载体的转染
在含 ts h 新生牛血清 !uss °ª#pt Šwt{ 的
• ° Œ tyws培养基 ovz ε ox h ≤ ’u 条件下培养稳定
转染 ∞• Α和 ∞• Β的 ‹¨¯¤细胞株 ∀转染前 t §用
°…≥清洗细胞 o将细胞接种于 uw孔板 o每孔细胞数
为 { ≅ tsw o用无抗生素 !无酚红的 • ° Œ tyws培养
基培养 uw «o细胞达 |s h融合 o用脂质体法转染质
粒 ∀每孔加入 ³∞• ∞2× „2≥∞„°质粒 ⁄‘„ s q{ Λªo
³≤  ∂Β质粒 ⁄‘„ s qt Λª!脂质体 u ˏ∀转染 y «
后每孔补充 s qx °完全培养基 o同时加入不同浓度
的 ∞u oŠ ±¨或 Œ≤Œt{u oz{s o每个浓度 v个重复孔 o同
时设置溶媒对照孔kzs h乙醇l ∀w{ «后收集上清液
用于 ≥∞„°活性检测 !制备细胞裂解液用于 Β2ª¤¯ 活
性检测 ∀
图 t 重组报告基因载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„°构建流程
2 q5 报告基因表达活性检测
用 ≥∞„°荧光检测试剂盒检测上清液 ≥∞„°荧
光强度 o激发波 Κ€ vys ±° o发射波 Κ€ ww| ±° ∀用
分光光度法检测细胞裂解液 Β2ª¤¯ 活性 o以 Κ€ wus
±°处 „值表示 ∀用 Β2ª¤¯ „值校正 ≥∞„°活性 ∀
2 q6 统计学方法
用 ¬¦µ²≤¤¯ ’µ¬ª¬± u q|w 软件统计处理数据 !计
算半数有效浓度k∞≤xsl ∀
3 结果
3 q1 重组报告基因载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„°的构建
由 ×w2⁄‘„连接酶催化将双链 x ≅ ∞• ∞片段插
入到 ³× „2≥∞„°载体启动子上游的  ∏¯´ o…ª¯ µ
酶切位点 ∀将连接产物转化 ⁄‹xΑ并进行扩增 o小
规模提取质粒 ⁄‘„ o经  ∏¯´ o…ª¯ µ双酶切鉴定重
组载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„° o酶切鉴定如图 u ∀
3 q2 细胞模型特异性和灵敏性
∞u可通过 ∞• Α和 ∞• Β诱导 ≥∞„°的表达 o∞≤xs
分别为k{s qx{ ? { qxtl oktsv q|s ? x qu|l³°²¯#pt o
最大效应浓度为 ts ±°²¯ #pt ~植物雌激素 Š ±¨也
#zvx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ y
∏±¨ oussv
可通过 ∞•Α和 ∞• Β诱导 ≥∞„°的表达 o∞≤xs分别为
kv| qv{ ? u quyl okts q{y ? s qzxl ±°²¯ #pt o最大效
应浓度为 t Λ°²¯#p t ~∞u和 Š ±¨诱导 ≥∞„°的最大
表达水平较对照孔可升高 z ∗ tw倍 o结果见图 v ow ∀
∞• 拮抗剂 Œ≤Œt{u oz{skt Λ°²¯ #ptl可完全抑制
tz2雌二醇和金雀异黄素对 ≥∞„°的诱导作用 o结果
见图 x oy ∀无关化合物 • • uzut不影响 ≥∞„°的表
达 ∀
图 u 重组报告基因载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„°酶切鉴定
„ q³× „2≥∞„° 载体 …q³× „2≥∞„°载体  ∏¯´ o…ª¯ µ双酶切
≤ q³∞• ∞2× „2≥∞„°载体 ⁄q³∞• ∞2× „2≥∞„°载体
 ∏¯´ o…ª¯ µ双酶切  qtss¥³ ⁄‘„ ¤µ®¨ µ
图 v ∞u对 ≥∞„°表达的诱导作用
图 w Š ±¨对 ≥∞„°表达的诱导作用
图 x Œ≤Œt{u oz{s对 ∞ukts ±°²¯#p tl诱导
≥∞„°表达的抑制作用
图 y Œ≤Œt{u oz{s对 Š ±¨kts ±°²¯#p tl
诱导 ≥∞„°表达的抑制作用
4 讨论
药物筛选是药物发现最基本的环节 o筛药模型
是药物筛选的基础 ∀灵敏 !特异 !高通量筛药模型的
建立对药物筛选具有重要意义 ∀其中靶向受体的药
物筛选方法研究较多 ∀核受体配体筛选模型主要有
非细胞模型和细胞模型两种 ∀非细胞模型即配体结
合试验 o主要有放射性检测 !光学测定和富集试验 ∀
配体结合试验可大规模 !高通量筛选受体的配体 o但
不能确定配体的作用性质以及受体配体结合后的作
用机制 o而且需要对配体进行同位素或荧光标记 o操
作步骤多 !成本高 ∀细胞模型主要有全长共转染 !
Š¤¯w2…⁄嵌合体和哺乳动物细胞双杂交检测≈w  ∀
细胞模型不同于高度复杂的动物体系和器官培养 o
也不同于过于简单的分子组织k亚细胞结构 !器官和
细胞匀浆l ∀细胞体系既有活细胞的结构及其复杂
功能 o而且易于操作 ∀利用细胞体系易于推断实验
结果 o并且能阐明那些以前难以研究的关键的细胞
功能 ∀不同细胞模型的序贯 !联合使用 o不仅增强了
筛选活性化合物的能力 o而且能更好的反映其可能
的作用机制 ∀细胞模型结合简单 !灵敏 !可在微孔板
中操作的荧光检测 o尤其适用于高通量药物筛选≈x  ∀
我们基于经典的雌激素信号途径 o构建了全长
共转染模型 ∀将全长人 ∞•Α¦⁄‘„和 ∞• Β¦⁄‘„分
别转染 ‹¨¯¤细胞 o建立了稳定转染 ∞•Α和 ∞• Β的
‹¨¯¤细胞株 ∀有文献报道 o大多数雌激素高效应答
基因 o如卵黄蛋白原和孕酮受体在其调控区有多个
∞• ∞∀≥¤·«¼¤等将 t ≅ ∞• ∞ou ≅ ∞• ∞ov ≅ ∞• ∞和 w
≅ ∞• ∞分别插入到氯霉素乙酰转移酶k≤ „×l报告
基因的上游 o发现随着 ∞• ∞数量的增加 o≤ „× 的表
达也增强 o证实 ∞• ∞可协同激活靶基因的表达≈y  ∀
我们将 x ≅ ∞• ∞ 插入到启动子型报告基因载体
³× „2≥∞„°启动子上游的多克隆位点 o构建了重组
报告基因载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„° o其启动子下游有
≥∞„°报告基因 ∀当配体与 ∞• 结合后 o∞• 形成二
#{vx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ y
∏±¨ oussv
聚体 o再结合于 ∞• ∞o在辅助因子的共同作用下激
活 ≥∞„°的表达 ∀
既往 o我们的实验室构建了基于检测报告基因
≤ „× 的 ∞• 配体筛选模型≈z  o但 ≤ „× 半衰期长 o易
于积累 o因此灵敏度低 ~而且检测 ≤ „× 需要裂解细
胞 o操作复杂 ∀ ≥∞„°为外分泌酶 o只需收集培养细
胞的上清液 o即可进行酶活性的检测 o便于进行时效
反应试验 o同时可避免细胞裂解程度不同造成的误
差 ∀我们的研究表明 o葛根及大豆异黄酮具有轻度
雌激素样作用≈{ o|  ∀文献报道大豆异黄酮主要成分
金雀黄素kŠ ±¨l o具有雌激素的治疗作用而无雌激素
的副作用 o因此倍受关注≈ts  ∀我们将重组报告基因
载体 ³∞• ∞2× „2≥∞„°瞬时转染表达 ∞• Α或 ∞• Β
的 ‹¨¯¤细胞株 ∀结果显示 o∞u和 Š ±¨均可通过 ∞•Α
和 ∞• Β诱导 ≥∞„°的表达 o∞• 拮抗剂 Œ≤Œt{u oz{s
可完全抑制 ∞u和 Š ±¨诱导的 ≥∞„°的表达 o无关化
合物对 ≥∞„°的表达无影响 ∀ ∞u 通过 ∞•Α和 ∞• Β
诱导 ≥∞„° 表达的 ∞≤xs分别为k{s qx{ ? { qxtl o
ktsv q|s ? x qu|l ³°²¯ #pt o提示 ∞u对 ∞• Α的作用
较 ∞• Β强 ~植物雌激素 Š ±¨通过 ∞• Α和 ∞• Β诱导
≥∞„°表达的 ∞≤xs分别为kv| qv{ ? u quyl okts q{y ?
s qzxl±°²¯#pt o提示 Š ±¨与 ∞• Β的亲和力较 ∞•Α
强 ~Š ±¨通过 ∞•Α和 ∞• Β诱导 ≥∞„°的表达的 ∞≤xs
分别为 ∞u的 w{{和 tsw倍 oŠ ±¨最大效应浓度为 ∞u
的 tss倍 o说明 Š ±¨与 ∞• 的结合能力远低于 ∞u o结
果与文献报道相似 ∀ ∞u 和 Š ±¨诱导 ≥∞„°的最大
表达水平较对照孔可升高 z ∗ tw倍 ∀可见此模型特
异性强 o灵敏度也较高 ∀我室目前正用此模型筛选
具有雌激素样作用的中药 ∀
此模型不仅可以用于 ∞• 亚型配体的高通量筛
选 o而且为研究具有雌激素活性的化合物的信号转
导途径和比较化合物的雌激素活性大小提供了细胞
模型 ∀目前我们正在筛选稳定转染 ³∞• ∞2× „2
≥∞„°的 ∞• Α阳性和 ∞• Β阳性 ‹¨¯¤细胞株 ∀
≈致谢  军事医学科学院生物工程研究所叶棋浓博士
为本实验无偿提供质粒并给予技术指导 ∀
≈参考文献 
≈t   ∏¨¯¯ µ¨≥ ’ o Ž²µ¤¦« ≥ Žq ∞¶·µ²ª¨ ± • ¦¨¨³·²µ¶¤±§ ∞±§²¦µ¬±¨
⁄¬¶¨¤¶¨¶}¨¶¶²±¶©µ²° ∞¶·µ²ª¨ ± • ¦¨¨³·²µŽ±²¦«²∏·¬¦¨ q≤∏µµ
’³¬± °«¤µ°¤¦²¯ ousst otkyl }ytv q
≈u  Š²√¬±§ „ ° o׫¤°³¤± • ∂ q°µ²·¨¬±¶Œ±·¨µ¤¦·¬²± º¬·«·«¨ ¤°2
°¤¯¬¤± ∞¶·µ²ª¨ ± • ¦¨¨³·²µ}°µ²³²¶¤¯ ©²µ„± Œ±·¨ªµ¤·¨§ ²§¨¯©²µ
∞¶·µ²ª¨ ± • ¦¨¨³·²µ  §¨¬¤·¨§ • ª¨∏¯¤·¬²± ²© ×µ¤±¶¦µ¬³·¬²± q ≤¨¯¯
…¬²¦«¨ ° ousst o{s }xzt q
≈v  • «¬·¨  ‹ o ¦≤∏¤¯ª Ž„ o ¤§¨µ≥ o ·¨¤¯ q „ ≥¬°³¯¨¤±§≥ ±¨¶¬2
·¬√¨ ‹¬ª«2·«µ²∏ª«³∏·„¶¶¤¼ ©²µ≥·¨µ²¬§ „ª²±¬¶·¶¤±§ „± × „ª²2
±¬¶·¶q…¬²·¨¦«±²¯²ª¼ ot||w otuktsl }tssv q
≈w  ‹¤µµ¬¶²± • Žo¬± ≥ o≥ ¬¨§¨¯ ‹  o ·¨¤¯ q≤¨¯ 2¯©µ¨¨¤±§≤¨¯ 2¯¥¤¶¨§
 ·¨«²§¶©²µ≤«¤µ¤¦·¨µ¬½¬±ª ‘∏¦¯ ¤¨µ• ¦¨¨³·²µ¬ª¤±§¶q≤∏µµ §¨
≤«¨ ° Œ°∏± o∞±§²¦ i  ר „¥ „ª¨ ±·¶oussu ouktl }uv q
≈x  刘卫京 o吕秋军 o温利青 o等 q基于 ≥× „×v转录调节的筛药模
型的建立 q中国药理学通报 oussu ot{ktl }tsv q
≈y  ≥¤·«¼¤ Š o¬• o Ž¯¬±ª¨ ≤  o ·¨¤¯ q∞©©¨ ¦·¶²©  ∏¯·¬³¯¨∞¶·µ²ª¨ ±
• ¶¨³²±¶¬√¨ ∞¯¨° ±¨·¶o ׫¨¬µ≥³¤¦¬±ª ¤±§ ²¦¤·¬²± ²± ∞¶·µ²ª¨ ±
• ¶¨³²±¶¨ ²© • ³¨²µ·¨µª¨ ±¨ ¶q  ²¯ ¦¨∏¯¤µ∞±§²¦µ¬±²¯²ª¼ ot||z ott
ktvl }t||w q
≈z  孙 哲 o吕秋军 o温利青 o等 q基于报告基因的雌激素受体 Α亚
型配体筛选模型的建立和应用 q药学学报 o usss o vxktsl }
zwz q
≈{  王继峰 o李 华 o牛建昭 o等 q大豆提取物对去卵巢大鼠能量平
衡的作用 q中国中药杂志 oussu ouzkul }tvx q
≈|  王继峰 o牛建昭 o李 华 o等 q大豆提取物对去卵巢大鼠脂代谢
的作用 q中国中药杂志 oussu ouzkwl }u{x q
≈ts  ≥«¤²   o≥«¨ ±   oƒ²±× „±¤ „ o ·¨¤¯ q Š ±¨¬¶¨¬±j¶0 ∞•2⁄¨ 2
³¨ ±§¨ ±·¤±§ Œ±§¨ ³¨ ±§¨ ±·0 „¦·¬²±¶¤µ¨  §¨¬¤·¨§ ׫µ²∏ª« ∞•
°¤·«º¤¼¶¬± ∞•2³²¶¬·¬√¨…µ¨¤¶·≤¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯ ¬±¨ ¶q„±·¬¦¤±¦¨µ
• ¶¨ousss ous }usw| q
Εσταβλισηµεντ οφ ∆ρυγ Σχρεενινε Μοδελ Βασεδ ον
Τρανσχριπτιοναλ Ρεγυλατιον οφ Εστρογεν Ρεσπονσιϖε Ελεµεντ
• „‘Š ¬±ª2 ¬´¤²o˜ ±¬∏2­∏±o o ‘Œ˜ ¬¤±2½«¤²o • „‘Š ¬±ª2©¨ ±ªo ± ˜ ≠¤±2¼¤± o • ∞‘¬2 ¬´±ªo
 ‹∞‘Š ²±ª2·¤¬o≤ ‹∞‘ ≠∏¤±2¼∏¤± o ‹ „‘Š ¬±ª
k t …¨ ¬­¬±ª ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ ¤±§°«¤µ°¤¦²¯²ª¼ o …¨ ¬­¬±ª tsssu| o≤«¬±¤~
u …¨ ¬­¬±ªŒ±¶·¬·∏·¨ ²© • ¤§¬¤·¬²±  §¨¬¦¬±¨ o …¨ ¬­¬±ª tss{xs o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: „Œ ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤§µ∏ª¶¦µ¨ ±¨¬±ª °²§¨¯¥¤¶¨§²±·µ¤±¶¦µ¬³·¬²±¤¯ µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¶³²±¶¬√¨¨¯ 2¨
° ±¨·k∞• ∞l ¤±§∏¶¨ ¬··²¶¦µ¨ ±¨ ¦²°³²∏±§¶©²µ§¬¶¦²√ µ¨¬±ª±¨ º ¬¯ª¤±§¶²© ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¦¨³·²µk∞• l ¶∏¥·¼³¨¶q Μετηοδ :„ µ¨¦²°¥¬±¤±·
#|vx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ y
∏±¨ oussv
µ¨³²µ·¨µ√ ¦¨·²µ³∞• ∞2× „2≥∞„° º¤¶¦²±¶·µ∏¦·¨§¥¼¬±¶¨µ·¬±ª¤¶¼±·«¨·¬¦¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ¦²°³²¶¨§²©©¬√¨·¤±§¨ ° ¦²³¬¨¶²©∞• ∞¶∏³¶·µ¨¤°
²©³µ²°²·¨µ²©·«¨ µ¨³²µ·¨µ√ ¦¨·²µ³× „2≥∞„° q × «¨ ³∞• ∞2× „2≥∞„° ¤±§·«¨ ¬±·¨µ±¤¯ ¦²±·µ²¯ ³¯¤¶°¬§³≤  ∂ º µ¨¨ ·µ¤±¶¬¨±·¯¼ ¦²2
·µ¤±¶©¨¦·¨§¬±·² ‹¨¯¤¦¨¯¯¶ ¬¨³µ¨¶¶¬±ª∞• ¶∏¥·¼³¨ ²µ∞• ¶∏¥·¼³¨ o¤±§·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²©³∏µ¨ ∞• ¤ª²±¬¶·¶tz ¶¨·µ¤§¬²¯ o³«¼·²¨ ¶·µ²ª¨ ± ª¨ ±¬¶2
·¨¬± ¤±§³∏µ¨ ∞• ¤±·¤ª²±¬¶·Œ≤Œt{u oz{s ²± µ¨³²µ·¨µª¨ ±¨ ≥∞„° ¬¨³µ¨¶¶¬²± º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨q Ρεσυλτ :Œ± ·«¨ ‹¨¯¤¦¨¯¯¶ ¬¨³µ¨¶¶¬±ª ∞• Α
²µ∞• Β¶∏¥·¼³¨ o·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©≥∞„° ª¨ ±¨ º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¬± ¤§²¶¨ §¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µ¥¼ tz2 ¶¨·µ²§¬²¯ º¬·«¤ °¤¬¬°¤¯ ©¨©¨ ¦·¤·¤³2
³µ²¬¬°¤·¨¯ ¼ ts ±°²¯#p t ¤±§ º¬·« ∞≤xs ²©k{s qx{ ? { qxtl ³°²¯#p t ¤±§ktsv q|s ? x qu|l ³°²¯#p t oµ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ o¶² §²±¨ ¥¼
³«¼·²¨ ¶·µ²ª¨ ± ª¨ ±¬¶·¨¬± º¬·«¤ °¤¬¬°¤¯ ©¨©¨ ¦·¤·tΛ°²¯#p t ¤±§ º¬·« ∞≤xs ²©kts q{y ? s qzxl ±°²¯#p t ¤±§kv| qv{ ? u quyl ±°²¯
#p t oµ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ q× «¨ °¤¬¬°¤¯ ¯¨ √¨¯ ¬±§∏¦¨§¥¼ ¶¨·µ²§¬²¯ ¤±§ª¨ ±¬¶·¨¬± º µ¨¨ ¤¥²∏·z ∗ tw ©²¯§«¬ª«¨µ·«¤±·«¤·²©√ «¨¬¦¯¨q× «¨ ³∏µ¨
¤±·¬¨¶·µ²ª¨ ± Œ≤Œt{u oz{s ¤·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©t Λ°²¯#p t ¦²°³¯ ·¨¯¨ ¼ ¥¯²¦®¨ §·«¨ ¬±§∏¦·¬²±¶²©tz2 ¶¨·µ²§¬²¯ ¤±§ª¨ ±¬¶·¨¬± qΧονχλυσιον :
× «¨ ¦¨¯¯∏¯¤µ§µ∏ª¶¦µ¨ ±¨¬±ª °²§¨¯¦¤± ¥¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §¥¼ ·µ¤±¶©¨¦·¬±ªµ¨³²µ·¨µ√ ¦¨·²µ³∞• ∞2× „2≥∞„° ¬± ‹¨¯¤ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶ ¬¨³µ¨¶¶¬±ª
∞• Α²µ∞• Βq × «¨ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²¶¦µ¨ ±¨ ¦²°³²∏±§¶º¬·« ¶¨·µ²ª¨ ±¬¦¬·¼ ¥¼ ·¨¶·¬±ª≥∞„° ¤¦·¬√¬·¼¬±·«¨ ¦∏¯·∏µ¨ ° §¨¬¤²©¦¨¯¯¶
ªµ²º¬±ª¬± °¬¦µ²·¬·¬¨µº¨¯ ¶¯q× «¨ ¶¼¶·¨° ¶«²∏¯§³µ²√¬§¨ ¤± ©¨©¬¦¬¨±·°²§¨¯©²µ¶¦µ¨ ±¨¬±ª¤±§¤±¤¯¼½¬±ª·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¤¯µª¨ ±∏°¥¨µ¶²©
¬¯ª¤±§¶²© ∞• q
[ Κεψ ωορδσ] ∞• ∞ ~∞• ~µ¨³²µ·¨µª¨ ±¨ ~§µ∏ª¶¦µ¨ ±¨¬±ª
≈责任编辑 方文贤 
鼻舒滴丸抗过敏作用及机理分析
张 曼 o任 映 o宋崇顺 o赵凤志 o胡定邦 o
郭 菁 o严长文 o戴 欣 o杨金铎 o孙海芸
k北京中医药大学 东直门医院 临床药理学实验室 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }研究中药鼻舒滴丸k…≥⁄• l对 u qw2二异氰酸甲苯酯k× ⁄Œl和组织胺造型豚鼠的影响及其作用
机理 ∀方法 }采用 ts h × ⁄Œ橄榄油溶液为致敏剂造成豚鼠变应性鼻炎模型 o观察 …≥⁄• 对豚鼠变应性鼻炎模型鼻
部症状 !病理组织学及对血和鼻粘膜中组织胺含量及血清 Œª∞含量的影响 ∀采用组织胺造成豚鼠休克模型 o观察
…≥⁄• 对组织胺造型豚鼠的症状影响 ∀结果 }…≥⁄• 可显著减轻变应性鼻炎模型豚鼠鼻粘膜病理改变 o与造型对
照组相比可使鼻粘膜柱状上皮和固有层腺体增生显著减轻 o固有层嗜酸性细胞 !嗜中性白细胞 !单核细胞浸润明显
减少 o纤毛明显修复 ∀还可明显降低变应性鼻炎模型豚鼠血清 Œª∞的水平 o减少血清及鼻粘膜中组胺的含量 o可显
著延长变应性鼻炎模型和组织胺造型豚鼠喘息和惊厥出现的时间 o明显减少豚鼠哮喘的次数及延长组织胺造型豚
鼠休克死亡时间 ∀结论 }鼻舒滴丸有明显的抗过敏作用 o其抗过敏作用的机理可能与其能降低血清 Œª∞的含量 !抑
制全血和鼻粘膜中组织胺的释放密切相关 ∀
≈关键词  鼻舒滴丸 ~变应性鼻炎 ~Œª∞~组织胺
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsy2sxws2sx
变应性鼻炎属于 Œª∞介导的 ´型变态反应 o以
发作性鼻痒 o鼻塞 o喷嚏 o流清水样鼻涕为主要症状 o
是危害人们健康的常见病 !多发病 ∀鼻舒滴丸是由
从中药中提取的有效成分组成 o具有清热解毒 o疏散
风邪温肺化痰之功效 ∀本实验研究了鼻舒滴丸的
≈收稿日期  ussu2ts2s{
≈通讯作者  ר¯ }kstsl{wstvt|x ∞°¤¬¯}°¤±§¼2½«ƒ tyv q¦²°
抗过敏作用 o并对其抗过敏的机理进行了探讨 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 实验动物 清洁级 y月龄豚鼠 o雌雄各半 o
雄性体重kwxs ? uxl ªo雌性体重kvus ? txl ªo由中
国药品生物制品检定所动物室提供 o合格证号 }京动
许字kusssl第 ssw号 ∀豚鼠饲养和实验均在清洁级
动物实验室内进行 o许可证号 }≥≠ ÷ ŽŒŒ2ss2ssu| ∀
#swx#
第 u{卷第 y期
ussv年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ y
∏±¨ oussv