全 文 ：荭叶心通软胶囊中主要活性成分的大孔吸附树脂
分离纯化工艺研究
马 琳，王永林，王爱民，兰燕宇，李勇军，何 迅，黄 勇
（贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４）
［摘要］ 目的：采用大孔吸附树脂法，探讨荭叶心通软胶囊中荭草、山楂叶活性成分的提取纯化工艺条件。方
法：以荭草素、异荭草素和金丝桃苷为指标，对５种树脂进行了筛选，并对选定的 Ｄ１０１大孔树脂富集纯化荭草素、异
荭草素及金丝桃苷的工艺条件进行考察。结果：Ｄ１０１型树脂对荭草、山楂叶中荭草素、异荭草素及金丝桃苷的吸附
性能良好，在所确定的工艺条件下，荭草素、异荭草素和金丝桃苷转移率均大于９１％，总固体物较树脂处理前减少
６０％以上。结论：Ｄ１０１大孔吸附树脂能有效富集纯化荭草、山楂叶中的活性成分。
［关键词］ 荭草；山楂叶；荭草素、异荭草素；金丝桃苷；大孔吸附树脂
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０５０５０５０４
［收稿日期］ ２００７０６１５
［基金项目］ 国家科技部科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０６Ａ０１０３）；
贵州省中药现代化科技产业项目［黔科合中药专字（２００３）１２号］
［通讯作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗｙｌ＠
ｇｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
荭叶心通软胶囊是由荭草、山楂叶等药材经提
取加工制成的中药，具有活血化瘀，通脉止痛功能，
临床上用于治疗冠心病心绞痛心血瘀阻证。荭草
素、异荭草素和金丝桃苷是荭草和山楂叶中主要活
性成分［１，２］。作者采用大孔吸附树脂对荭草，山楂
叶有效成分的精制纯化工艺进行了研究，对影响大
孔吸附树脂精制纯化工艺的主要因素：树脂型号、上
柱药液浓度、药液 ｐＨ及洗脱液种类、用量、流速等
进行考察，并以比上柱量、比吸附量、比洗脱量、转移
率以及大鼠冠脉结扎所致心肌缺血试验对提取纯化
工艺的合理性进行评价。
１ 仪器与试药
ＬＣ－１０ＡＴｖｐ高效液相色谱仪输液泵、ＳＰＤ－
１０Ａｖｐ紫外检测器（日本岛津），７７２５ｉ手动进样阀；
ＷＭＬ色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）；超
声波清洗器（北京医疗设备二厂）。
大孔吸附树脂（Ｄ３５２０，ＡＢ－８，南开大学化工
厂；ＤＢ３０１，ＤＡ２０１，Ｄ１０１，天津市海光化工有限公
司）；荭草采自贵州省惠水县，山楂叶采自贵州省镇
宁县，经贵阳医学院龙庆德副教授鉴定为蓼科植物
荭草ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｏｒｉｅｎｔａｌｅＬ．和蔷薇科植物山楂 Ｇｒａ
ｔａｅｇｕｓｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａＢｇｅ．的干燥叶；乙腈为色谱纯，其
余试剂均为分析纯，水为重蒸水。
２ 方法与结果
２．１ 含量测定方法
荭草素、异荭草素含量按文献方法测定［３］，金
丝桃苷含量按文献方法测定［４］。
２．２ 样品溶液的制备
取处方比例量荭草和山楂叶适量，加药材质量
１０倍水，煎煮３次，每次１ｈ，滤过，合并滤液，加乙
醇使含醇量为 ６５％，静置 １２ｈ，滤过，滤液回收乙
醇，试验时加适量蒸馏水配制不同的浓度备用。
２．３ 大孔吸附树脂型号的选择
２．３．１ 静态吸附量考察
精密称取经预处理的树脂 Ｄ３５２０，ＤＢ３０１，
ＤＡ２０１，Ｄ１０１，ＡＢ－８各２５０ｇ，置具塞锥形瓶中，精
密加入已测定含量的样品溶液５０ｍＬ，每隔３０ｍｉｎ
振摇１次，持续６ｈ，然后静置２４ｈ，使其达到饱和吸
附，滤过，滤液测定荭草素、异荭草素、金丝桃苷含
量。试验前测定树脂含水量，按下式计算树脂静态
比吸附量：静态比吸附量＝［（初始浓度 －吸附后浓
度）×５０］／干树脂量（ｍｇ·ｇ－１）。５种树脂对荭草
素、异荭草素、金丝桃苷的比吸附总量分别为２１９，
３０７，４２１，４６７，３８５ｍｇ·ｇ－１，提示 Ｄ１０１，ＤＡ２０１
对荭草、异荭草素的吸附较好，故选择 Ｄ１０１，ＤＡ２０１
２种树脂进一步试验。
２．３．２ 静态解吸附考察
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称取经预处理的 Ｄ１０１，ＤＡ２０１树脂各７５０ｇ，
分别置具塞锥形瓶中，精密加入样品溶液１５０ｍＬ，
按上述静态吸附量考察实验方法吸附，滤过，依法测
定并计算吸附量。树脂用滤纸吸干表面水分，均分
为３份，分别准确加入５０％，７０％，９０％乙醇２５ｍＬ，
每隔３０ｍｉｎ振摇１次，持续６ｈ，滤过，滤液测定荭
草素、异荭草素、金丝桃苷含量，按下式计算解吸附
率：解吸附率％ ＝（洗脱液浓度 ×２５）／饱和吸附
量×１００％。试验结果表明，Ｄ１０１树脂的吸附量和解
吸量均高于 ＤＡ２０１，在 Ｄ１０１树脂中７０％乙醇对异
荭草素、荭草素和金丝桃苷解吸率最高，分别达
９２０６％和９１８４％。表明Ｄ１０１树脂对各指标成分
的吸附解吸效果较好，故选用 Ｄ１０１树脂进行分离
纯化。
２．４ 大孔吸附树脂工艺优化［５，６］
２．４．１吸附工艺选择
２．４．１．１ 正交试验设计 大孔树脂的吸附性能与
药液上样流速（吸附流速）、药液浓度、药液 ｐＨ、径
高比、吸附温度等有关，根据预试验结果，径高比在
１∶５～１∶１５、吸附温度在１０～６０℃时对吸附无明显
影响，药液浓度、药液吸附流速和 ｐＨ３个因素对本
品的吸附分离效率影响较大，因此，采用 Ｌ９（３
４）正
交表安排试验见表１，对上述吸附流速、药液浓度和
ｐＨ３个主要影响因素的不同水平进行考察，筛选最
佳上柱工艺条件。取 Ｄ１０１吸附树脂６６ｇ（干树脂
１８２ｇ、湿柱体积１００ｍＬ），湿法装柱（径高比１∶８）。
按表１试验，测定上柱液、流穿液及水洗液中荭草素
（Ｈ）、异荭草素（Ｙ）浓度之和及金丝桃苷的浓度，以
转移率为评价指标，转移率（％）＝［１－（流穿液浓
度×流穿液体积＋水洗液浓度 ×水洗液体积）／（上
柱液浓度×上柱液体积）］×１００％，（Ｈ＋Ｙ）转移率
是将荭草素（Ｈ）、异荭草素（Ｙ）浓度之和带入上式
计算，结果见表２，３。
表１ 因素水平
水平
Ａ
ｐＨ
Ｂ
药液浓度／ｇ·ｍＬ－１
Ｃ
吸附流速／ＢＶ·ｈ－１
１ ４８０ ０１２５∶１ １
２ ５８０ ０２５０∶１ ２
３ ６８０ ０５００∶１ ３
注：原药液ｐＨ５８０
从表２，３中的结果分析，各因素对异荭草素、荭
草素吸附均有显著性影响，最佳工艺条件为 Ａ２Ｂ２
表２ 正交试验结果
Ｎｏ．
转移率／％
Ｈ＋Ｙ 金丝桃苷
Ｎｏ．
转移率／％
Ｈ＋Ｙ 金丝桃苷
１ ７０１１ ９１９４ ６ ７９１８ ９０６５
２ ９５２２ ９３８５ ７ ４８７１ ６４３３
３ ６９８３ ７８１７ ８ ８１３２ ８３６９
４ ７６４０ ８９７５ ９ ６６８７ ７８９５
５ ８６０４ ８２５６
表３ 方差分析
组分
方差
来源
离均差
平方和
自由
度
均方 Ｆ Ｐ
Ｈ＋Ｙ Ａ ３８９４９ ２ １９４７４ ８６９４ ＜００５
Ｂ ７９３９０ ２ ３９６９５ １７７２１ ＜００１
Ｃ ２０９９５ ２ １０４９８ ４６８７ ＜００５
Ｄ（误差） ４４７ ２ ２２４
金丝桃苷 Ａ ２９６０６ ２ １４８０３ ８２２４ ＜００５
Ｂ ３９２６ ２ １９６３ １０９１
Ｃ ３４６５０ ２ １７３２５ ９６２５ ＜００５
Ｄ（误差） ３６１ ２ １８０
注：Ｆ００５（２，２）＝１９００；Ｆ００１（２，２）＝９９００
Ｃ２。吸附流速和上样药液 ｐＨ是影响金丝桃苷吸附
的主要因素，最佳工艺条件为 Ａ１Ｂ２Ｃ１，在 Ａ、Ｃ因素
中最佳工艺和次佳工艺的极差较小，从省工、省时的
角度考虑，可选择次佳工艺Ａ２Ｂ２Ｃ２条件。以Ａ２Ｂ２Ｃ２
工艺进行重复试验，结果荭草素、异荭草素平均转移
率 ９５１４％，ＲＳＤ１７８％，金丝桃苷平均转移率
９３７２％，ＲＳＤ２５４％。
２．４．１．２ 吸附泄漏点的确定 取已处理好的Ｄ１０１
吸附树脂６６ｇ，湿法装柱，上样，分段收集流出液，每
份５０ｍＬ，测定荭草素、异荭草素、金丝桃苷含量。
试验结果表明，异荭草素、荭草素与金丝桃苷分别于
３，５５ＢＶ时开始泄漏。当异荭草素、荭草素达泄漏
点时（００１２ｍｇ·ｍＬ－１），金丝桃苷还未达到吸附饱
和（０００９ｍｇ·ｍＬ－１），可以异荭草素、荭草素为指
标判断泄漏点。
２．４．１．３ 树脂柱水洗用量的确定 药液上柱吸附
以后，一部分水溶性杂质成分仍保留在树脂柱中，影
响纯化效果，有必要对树脂柱进行处理。取吸附饱
和的树脂柱，以水进行洗脱，流速２ＢＶ·ｈ－１，收集
洗脱液，测定异荭草素、荭草素、金丝桃苷和总固体
物量。当水洗用量达１ＢＶ后，总固体物变化较小，
指标成分未出现明显的泄漏，故确定水洗用量为１
ＢＶ。
２．４．２ 洗脱条件的选择
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２．４．２．１ 洗脱溶剂的选择 参考有关文献资料［７］
及静态吸附解吸试验结果，选用不同体积分数乙醇
为洗脱溶剂进行动态解吸试验。取已吸附药液的树
脂柱，依次用水、５０％，７０％，９０％乙醇梯度洗脱，收
集各洗脱液，测定洗脱液中异荭草素、荭草素、金丝
桃苷含量和总固体物重。试验结果表明，７０％的乙
醇异洗脱效果最好，占全部洗脱液中异荭草素、荭草
素的６９８９％，金丝桃苷的６５５２％，故确定用７０％
乙醇洗脱。
２．４．２．２ 洗脱溶剂用量和洗脱终点的判定［８］ 取
已预处理的 Ｄ１０１吸附树脂按上述试验条件依法上
柱吸附，用７０％乙醇洗脱（２ＢＶ·ｈ－１）。分段收集
醇洗脱液，测定异荭草素、荭草素、金丝桃苷含量。
结果表明，当用醇量达到３ＢＶ时，异荭草素、荭草素
解吸累积量达到９６３８％，金丝桃达９５８０％，可认
为洗脱已到终点，故选用３ＢＶ７０％乙醇洗脱。
２．４．２．３ 洗脱流速 取已预处理的Ｄ１０１吸附树脂
按上述试验条件依法上柱吸附、洗脱，洗脱流速分别
为１，２，３，４，５ＢＶ·ｈ－１，收集洗脱液，测定异荭草素、
荭草素和金丝桃苷含量。试验结果表明，洗脱流速大
于３ＢＶ·ｈ－１时，荭草素、荭草素和金丝桃苷转移率
已低于９０％，１，２ＢＶ·ｈ－１洗脱流速的解吸量无明显
差异，为提高生产效率，使用２ＢＶ·ｈ－１的解吸速度。
２．５ 比上柱量、比吸附量和比洗脱量测定［９］
为评价Ｄ１０１吸附树脂吸附承载能力和洗脱效
果，对比上柱量［（Ｍ上 －Ｍ流穿液）／Ｗ］、比吸附量
［（Ｍ上 －Ｍ流穿液 －Ｍ水洗液）／Ｗ］和比洗脱量（Ｍ洗脱／
Ｗ干树脂质量）进行了测定。结果异荭草素、荭草素平均
比上柱量为３３７ｍｇ·ｇ－１，平均比吸附量３２５ｍｇ
·ｇ－１，平均比洗脱量３１３ｍｇ·ｇ－１；金丝桃苷平均
比上柱量为０６６ｍｇ·ｇ－１，平均比吸附量０６４ｍｇ
·ｇ－１，平均比洗脱量０６０ｍｇ·ｇ－１。
２．６ 不同提取方法提取物的药效学试验比较
为考察大孔树脂精制纯化工艺的合理性，以荭
草和山楂叶水煮液、水煮醇沉液、大孔树脂精制纯化
物进行大鼠冠脉结扎所致心肌缺血试验比较。
２．６．１ 受试药物
荭草和山楂叶水煮液（ＴＦ１）、水煮醇沉液（ＴＦ２）、
大孔树脂精制纯化物（ＴＦ３）。阳性药为复方丹参片。
临用前以生理盐水配制成所需浓度的药液。
２．６．２ 试验方法与结果
取ＳＤ大鼠６０只，雌雄兼用，体重２４０～２８０ｇ，
随机分６组，每组１０只，为假手术组、模型组、阳性
药物组和３个给药组，灌胃给药，给药容积１０ｍＬ·
ｋｇ－１。每天灌胃１次，连续给药３ｄ，假手术组和模
型组给于等量生理盐水。第３天给药后３０ｍｉｎ，参
照文献方法［９，１０］，结扎大鼠左冠状动脉前降支。记
录结扎前、结扎后１５，３０，６０，９０，１２０，１８０ｍｉｎ的Ⅱ
导联心电图，读取Ｊ点位移值；结扎后１８０ｍｉｎ股动
脉取血，测心肌酶 ＬＤＨ，ＣＫ；取心脏以 ＴＴＣ溶液染
色，计算心肌缺血梗死区百分率。
药效学试验表明，各给药组均能不同程度改善
缺血性心肌心电图（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１），减轻缺血
心肌酶学改变（Ｐ＜００５），使心肌缺血区百分率降
低（Ｐ＜００５），对急性心肌缺血具有明显保护作用，
组间比较无显著性差异。说明荭草、山楂叶采用大
孔树脂精制纯化后能保持药物疗效，工艺合理。结
果见表４，５。
表４ 对大鼠结扎左冠状动脉后ＥＣＧ的影响（Ｊ点位移值）（珋ｘ±ｓ） ｍＶ
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ｎ 结扎前
结扎后
１５ｍｉｎ ３０ｍｉｎ ６０ｍｉｎ ９０ｍｉｎ １２０ｍｉｎ １８０ｍｉｎ
假手术 － １０ ００８±００２ ０１０±００４ ０１１±００４ ０１１±００４ ００９±００４ ００９±００３ ０１２±００４
模型 － ９ ０１０±００３ ０５１±０１５ ０４６±０１５ ０５０±０１３ ０４８±０１４ ０４５±０１４ ０５１±０１３
阳性药 １５ １０ ００９±００３ ０４５±０１２ ０３１±０１４１） ０３５±０１６１） ０３５±００９１） ０４２±００９ ０３７±０１８
ＴＦ１ ５０ ８ ０１０±００４ ０５９±０１０ ０３２±０１０１） ０３４±０１０１） ０３２±０１５１） ０３１±０１１１） ０４１±０２０
ＴＦ２ ５０ ９ ０１０±００３ ０４４±０１２ ０２９±０１２１） ０３６±０１２１） ０３１±０１５１） ０３５±０１６ ０４４±０１７
ＴＦ３ ５０ １０ ００９±００２ ０４８±０１５ ０２９±０１７１） ０３０±０１４２） ０３５±０１３１） ０３５±０２０ ０４４±０１２
注：与模型组相比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
３ 讨论
３．１ 上样药液浓度的确定
文献资料报道大孔树脂吸附的上样药液浓度对
吸附行为有显著影响［１０］，上样药液浓度多以生药含
量计算［１１］。试验结果表明，上样药液浓度对吸附行
为影响较大，若上样药液浓度以生药计算，则药材含
量的客观差异将影响试验结果，故工艺上柱药液以
指标成分浓度计算，可以消除药材不同产地、不同季
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表５ 对大鼠结扎左冠状动脉后酶学指标及心脏梗死范围的影响（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ｎ
ＬＤＨ
／Ｕ·Ｌ－１
ＣＫ
／Ｕ·Ｌ－１
心室重
／ｇ
梗塞区重
／ｇ
梗塞区∶心室
／％
假手术 － １０ ２２７８±６０９ ９０２±２６７ ０７９６±０１９５ ００００±００００ ０００±０００
模型 － ９ ３８７１±１０８９ １６４６±５７１ ０７９５±０１６３ ０１６３±００５７ ２００８±３２４
阳性药 １５ １０ ３１９３±７７９ １４９６±６３５ ０８２１±０１１０ ０１２０±００３４ １４８８±５０８１）
ＴＦ１ ５０ ８ ３２７１±８４９ １０５６±４１２１） ０８０３±０１８１ ０１２３±００５９ １５１６±５２３１）
ＴＦ２ ５０ ９ ２６２６±１００９１） １１６３±３６２１） ０７８０±０１１５ ０１１２±００４５ １４５２±５５３１）
ＴＦ３ ５０ １０ ２７６３±９８４１） １１７９±３１２１） ０７９８±０１３９ ０１１８±００４１ １４９９±５２０１）
注：与模型组相比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
节造成含量差异的影响。上柱药液加水稀释至异荭
草素、荭草素 ０１５～０２５ｍｇ·ｍＬ－１，金丝桃苷
００３～００５ｍｇ·ｍＬ－１时即可。同时，金丝桃苷质
量浓度对吸附行为影响相对较小，实际生产中主要
控制荭草药材含量，山楂叶药材含量选择范围较大，
能满足实际生产中的需要。
３．２ 工艺验证
工艺验证试验结果表明，荭草素、异荭草素上柱
平均转移率为９２８３％，金丝桃苷上柱平均转移率
为９１６７％，总固体物上柱平均转移率为３９８５％。
总固体物较树脂处理前减少６０％以上，有效成分得
到充分富集，减少了成品服用量，所得干浸膏松散，
不吸潮，制剂质量稳定性高，中药制剂“粗”、“大”、
“黑”问题得到有效改善。
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Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｍａｉｎ
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ｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＤ１０１ｒｅｓｉｎｓｅｌｅｃｔｅｄｏｕｔｏｆａｂｏｖｅｗｅｒｅａｌｒｏｕｎｄｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＤ１０１ｗａｓｆｉｔｆｏｒａｄｓｏｒｂｉｎｇｏｒｉｅｎｔｍ，ｉｓｏｒｉｅｎｔｍａｎｄｈｙ
ｐｅｒｏｓｉｄｅ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｒａｔｅｏｆｏｒｉｅｎｔｍ，ｉｓｏｒｉｅｎｔｍａｎｄｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅｗａｓａｂｏｖｅ９１％，ａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌｓｏｌｉｄｗａｓ
ｃｕｔｄｏｗｎｂｙｍｏｒｅｔｈａｎ６０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＤ１０１ｉｓｇｒｅａｔｌｙｅｆｅｃｔｉｖｅｆｏｒｔｈｅｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆ
ＰｏｒｉｅｎｔａｌｅａｎｄＣｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａＢｇｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｏｒｉｅｎｔａｌｅ；Ｃｒａｔａｅｇｕｓｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；ｏｒｉｅｎｔｍ；ｉｓｏｒｉｅｎｔｍ；ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ；ｍａｒｃｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ
［责任编辑 鲍 雷］
·８０５·
第３３卷第５期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３３，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００８