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江西地方药材野山楂叶质量标准研究
★ 邓茂芝1* 胡荣1 彭雪芬2 (1．宜春市食品药品检验所 江西 宜春 336000;2．宜春市第六人民医院
江西 宜春 336000)
摘要:目的:建立江西地方药材野山楂叶的质量标准。方法:建立药材的性状、显微特征和熊果酸 TLC鉴别方法;采用 HPLC方
法测定熊果酸含量，色谱柱为 Thermo BDS HYPEＲSIL C18(250 mm ×4． 6mm，5μm)，以甲醇 － 0． 05%磷酸(87∶ 13)为流动相，流
速为 1． 0 mL /min，检测波长为 210nm。结果:山楂叶的显微特征性强;熊果酸 TLC 色谱斑点清晰;熊果酸在 0． 01984 ～ 0．
1984mg范围内呈良好线性关系，r = 0． 9991，回收率为 98． 71%，ＲSD为 0． 64%(n = 3)。结论:方法简便，准确，重复性好，适用
于江西地方药材野山楂叶的质量控制。
关键词:野山楂叶;熊果酸;薄层色谱法;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A
Study on the Quality Standard of Jiangxi Local Herb of Hawthorn Leaves
DENG Mao － zhi1，HU Ｒong1，PENG Xue － fen2
1． Yichun Institute for food and drug control，Yichun 336000，China;
2． The Sixth People＇s Hospital of Yichun，Yichun 336000，China．
Abstract:Objective:To establish the quality standard for wild hawthorn leaves． Methods:To establish properties，microscopic charac-
teristics，and ursolic acid TLC identification of traditional Chinese herbs;Content determination of ursolic acid by the method of HPLC，
the column was Thermo BDS HYPEＲSIL C18(250mm × 4． 6mm，5μm)，using methanol － 0． 05% phosphate (87 ∶ 13)as mobile
phase，the flow rate was 1． 0 mL / min，the detection wavelength was 210 nm． Ｒesults:The wild hawthorn leaf microstructure had
strong characteristics;ursolic acid TLC chromatographic spots were clear;ursolic acid ranged in 0． 01984 ～ 0． 1984 mg showed good
linear relationship in the range，the correlation coefficient was 0． 9991． The recovery rate was 98． 71% with ＲSD being 0． 64% ． (n =
9)． Conclusion:The method is simple，accurate，reproducible，and suitable for the quality control of wild hawthorn leaves．
Key words:Wild Hawthorn Leaves;Ursolic Acid;TLC;HPLC;Content Determination
江西地方习用药材山楂叶，收载于 1996 年版
《江西省中药材标准》，为蔷薇科野山楂的干燥叶，
夏秋二季采收。具有清热解暑、降血压的功效，主要
用于感受暑邪、高血压等肝热阳亢之症。原标准仅
有性状、显微鉴别两项，难以适应复杂的市场要求，
不能有效控制其质量。因此为达到江西省新版中药
材标准的要求，对药材山楂叶的质量标准进行提高
研究。
1 仪器、试药与药材来源
Agilent1200 高效液相色谱仪;BP211D 电子天
平;KH － 250DB 型数控超声波清洗器(昆山禾创超
声仪器有限公司);熊果酸对照品(中国药品生物制
品检定所，批号 110742 － 200517);甲醇、磷酸为色
谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。薄层板为
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江 西中医药大学学报2014年12月第26卷第6期
JOUＲNAL OF JIANGXI UNIVEＲSITY OF TCM 2014 Vol. 26 No. 6
* 作者简介:邓茂芝，学士，主管中药师。Tel:13576162030，E － mail:16548237@ qq． com。
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自制板。
野山楂叶供试品来源 20130801(明月山)、
20130802(金瑞)、20130803(飞剑潭)、20130804(寨
下)，均为辖区内深山采集，经鉴定为真品。
2 药材性状
叶片多完整。稍卷皱缩，展平后叶片呈宽倒卵
形至卵状矩圆形，长 2 ～ 6cm，宽 1 ～ 4． 5cm，顶端常
有 3 ～ 7 浅裂片，基部楔形，下延于叶柄，边缘有刻缺
或不规则锯齿，上表面黄绿色，无毛;下表面浅绿色
或淡黄绿色，无毛或仅于叶脉有短柔毛，叶脉略突出
于下表面，侧脉伸至裂片先端。质脆，易碎。气微，
味微涩。
3 药材鉴别
3． 1 显微鉴别 本品粉末浅绿色。上表皮细胞多
角形，垂周壁略增厚，较平直，表面有角质状线纹，无
气孔和非腺毛;下表皮细胞垂周壁波状弯曲，有气孔
和非腺毛;气孔不定式，副卫细胞 3 ～ 7 个;单细胞非
腺毛长 150 ～ 620μm，直径 10 ～ 28μm，壁厚 4 ～
13μm。
3． 2 薄层鉴别［1 － 4］ 取本品粉末 1g，加乙醚 30mL
超声处理 20min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇
－三氯甲烷(3∶ 2)混合溶液 2mL 使溶解，作为供试
品溶液。另取取熊果酸对照品适量加乙酸乙酯制成
每 1mL含熊果酸 1mg的溶液，作为对照品溶液。照
薄层色谱法(中国药典 2010 年版一部附录Ⅵ)试
验，吸取上述对照品各 5μL，分别点于同 － 0． 3%羧
甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上，以环己
烷 －三氯甲烷 －乙酸乙酯 －甲酸(25∶ 15∶ 3∶ 3)为展
开剂，展开，取出，晾干，喷 10% 硫酸乙醇溶液，
105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照
品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点斑
点，见图 1。
1．熊果酸对照品;2 ～ 5．供试品溶液
图 1 野山楂叶薄层色谱图
4 含量测定
4． 1 色谱条件［5 － 8］ 色谱柱:Thermo BDS HYPEＲ-
SIL C18(250mm × 4． 6mm，5μm);流动相:甲醇 －
0. 05%磷酸溶液(87 ∶ 13);检测波长:210nm;柱温:
25℃;流速为 1． 0 mL /min，进样量 10μL。在此条件
下熊果酸峰与杂质峰能得到较好分离，见图 2。
A．对照品色谱图;B．供试品色谱图;1．熊果酸
图 2 HPLC色谱图
4． 2 溶液的制备
4． 2． 1 对照品溶液制备 精密称取熊果酸对照品
9． 92mg，置 50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为储备液(0． 1984mg /mL)。
4． 2． 2 供试品溶液制备 取本品粉末(过二号筛)
约 0． 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
25mL，称定重量，加热回流 30min，取出，放冷，用甲
醇补足重量，摇匀，滤过，即得。
4． 3 线性关系考察 精密吸取熊果酸对照品储备
液(0． 1984 mg /mL)1，2，3，5，6，7，10 mL，分别置 10
mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取上述溶液
各 10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量
为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方
程为:Y = 5251． 8X － 9． 8937(r = 0． 9991)。结果在
0． 01984 ～ 0． 1984mg范围内呈良好的线性关系。
4． 4 精密度试验 ． 取供试品溶液，按上述色谱条
件重复进样 6 次，测定峰面积，结果 ＲSD 为 0． 81%
(n = 6)，表明精密度良好。
4． 5 稳定性试验 取供试品溶液，按上述色谱条
件，间隔 0，2，4，6，8，12h，测定峰面积，结果 ＲSD 为
1． 71%(n = 6)，显示供试品溶液至少在 12h 内稳
定。
4． 6 重复性试验 精密称取同一批号(20130801)
样品 6 份，按 4． 2． 2 项下方法操作，测定峰面积并计
算熊果酸含量，平均含量为 10． 38mg /g，ＲSD =
1. 20%(n = 6)。
4． 7 回收率试验 精密称取已知含量样品 9 份，精
密加入熊果酸对照品适量，按 4． 2． 2 项下方法操作，
测得峰面积并计算含量。回收率为 98． 71%，ＲSD
分别为 0． 64%。见表 1。
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江西中医药大学学报 2014 年 12 月第 26 卷第 6 期
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表 1 回收率试验结果(n = 9)
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
0． 5045 0． 4960 0． 9903 97． 95
0． 4921 0． 4960 0． 9809 98． 55
0． 4988 0． 4960 0． 9906 99． 16
0． 5064 0． 4960 0． 9946 98． 44
0． 4836 0． 4960 0． 9756 99． 20
0． 4959 0． 4960 0． 9809 97． 78
0． 4855 0． 4960 0． 9736 98． 42
0． 5187 0． 4960 1． 0129 99． 63
0． 5111 0． 4960 1． 0033 99． 23
98． 71 0． 64
4． 8 样品测定 取本品 4 批，按 4． 2． 2 项下方法操
作，并按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10μL，注入液相色谱仪，测定含量，结果见
表 2。
表 2 供试品含量测定结果(/mg·g －1，n = 4)
批号 样品含量
20130801 10． 38
20130802 27． 14
20130803 38． 62
20130804 23． 83
5 讨论
山楂叶收载于《江西省中药材标准》1996 年版。
在编纂新版江西省中药材标准实地考察中发现，我
省地方药材山楂叶除了有野山楂外，还发现一种与
其特征相似的品种 －湖北山楂。野山楂叶原植物特
点是叶柄有翅，叶缘锯齿呈锐角，3 ～ 7 对深裂。而
湖北山楂叶柄无翅，叶缘锯齿钝圆，2 ～ 4 对浅裂。
熊果酸采用 TLC 鉴别及 HPLC 法专属性强，因
此，文中建立了熊果酸 TLC 定性及 HPLC 定量的方
法，以进一步完善野山楂叶的质量标准。在 DAD图
谱上查看熊果酸对照品的光谱扫图，205nm 处有最
大吸收，因 205nm 接近末端吸收，且溶剂甲醇截止
吸收波长为 205nm，为了减小溶剂的短波吸收干扰，
选择 210nm 为检测波长。在此检测波长下对照品
和样品都能得到较好的光谱图。
在供试品溶液制备过程中，由于熊果酸为非极
性成分，依据其溶解性能，对甲醇、无水乙醇，乙醚等
不同的提取溶媒进行优选，根据提取效果选择了甲
醇作为提取溶媒。考察超声、回流等不同提取方法
后，发现超声提取法提取效果低于热回流提取，故选
择加热回流提取法且熊果酸的提取比较完全，杂质
较少。
供试品测定结果表明，因山楂叶生长地域环境
等因素的不同，熊果酸含量差异较大(近 4 倍)，可
能影响用药的疗效。因此，有必要建立有效的质量
标准以控制质量。
参考文献
［1］江西省卫生厅．江西省中药材标准［M］． 南昌:江西科学技术出
版社，1996:18．
［2］钟方丽，王晓林，张俭．山玫片的薄层鉴别研究［J］．吉林化工学
院学报，2007，24(4):6 － 8．
［3］王维礼，程晓英，付凌燕，等．薄层扫描法测定山楂丸中熊果酸含
量［J］．中国药业，2007，19(16):18．
［4］万义，宋晓宁．薄层扫描法测定小儿山楂咀嚼片中熊果酸的含量
［J］．贵州医药，2005，9(29):839 － 840．
［5］卢文胜，危华玲．高效液相色谱法测定山楂叶提取物中熊果酸的
含量［J］．中国实验方剂学杂志，2008，14(6):15 － 16．
［6］张妍，李厚伟，张永春，等．山楂中总黄酮几种提取分离方法的考
察及含量测定［J］． 哈尔滨医科大学学报，2001，35(3):183 －
184．
［7］梁恕坤，付庆霞，冯尚彩． HPLC法同时测定山楂叶提取物中的 7
种主要成分［J］．齐鲁药事，2009，28(1):20 － 22．
［8］王领弟，李艳荣，潘海峰，等．山楂叶的研究近况［J］．承德医学院
学报，2011，28(3):313 － 315．
(收稿日期:2014-03-19)编辑:
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曾文雪
(上接第 48 页)
其中，四川泸州所产的枳实柚皮苷含量最高，达到
13． 25%;其次为重庆江津、江西新干和清江产地的
枳实，柚皮苷含量分别为 12． 03%、11． 51%和 10．
79%。柚皮苷含量最低为福建漳州所产枳实(3．
82%)，与福建闽清产地枳实柚皮苷含量(9． 63%)
形成鲜明对比;两者从性状上看，本次实验所采集的
福建闽清枳实个头较大。上述结果表明，枳实中柚
皮苷的含量与药材产地有关。现行版《中国药典》
只规定了枳实中辛弗林的含量，本文所建立的含量
测定方法，可以提高了枳实的质量控制水平。
参考文献
［1］国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版(一部)［S］．
北京:中国医药科技出版社，2010:230 － 231．
［2］卫生部药政管理局，中国药品生物检定所． 现代实用本草(中
册)［M］．北京:人民卫生出版社，2000:182 － 185．
［3］梁远园，冯彪，祝晨蔯，等． HPLC法测定枳实药材中橙皮苷与柚
皮苷的含量［J］．中药新药与临床药理，2006，17(9):359 － 361．
［4］谢贞建，焦士蓉，李恺，等． ＲP － HPLC法测定不同产地枳实中的
柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷［J］． 西华大学学报(自然科学版)，
2009，28(2) :65 － 67．
(收稿日期:2014-03-19)编辑:曾文雪
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邓茂芝等:江西地方药材野山楂叶质量标准研究