全 文 ：鲜肿节风挥发油亚微乳的制备工艺研究
吴素香１，吕圭源１，陈素红２，张胜娜１，赵丽珊１，周日鹤３，周华康３
（１浙江中医药大学，浙江 杭州 ３１００５３；２温州医学院，浙江 温州 ３２５０３５；
３浙江国镜药业有限公司，浙江 龙泉 ３２３７００）
［摘要］ 目的：制备静脉给药肿节风挥发油亚微乳。方法：采用高压乳匀法制备肿节风挥发油亚微乳，以离心稳定性参
数、外观、ｐＨ作为评价指标，通过单因素考察和正交设计试验对处方和工艺进行了优化。结果：在优化处方及工艺条件下，所
制备的肿节风挥发油亚微乳的平均粒径为１６４～１６９ｎｍ，分散系数 ００８４～０１０７，Ｚｅｔａ电位为 －４０ｍＶ，稳定性良好。结论：
该处方及工艺可行。
［关键词］ 鲜肿节风挥发油；亚微乳；高压乳匀
［收稿日期］ ２００８１２０８
［基金项目］ 浙江省重大科技攻关（２００４Ｃ１３００９）
［通信作者］ 吕圭源，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０５７１）８６６１３６０１，Ｅｍａｉｌ：ｌｖｇｙ＠
２６３ｎｅｔ
鲜肿节风挥发油由金粟兰科植物草珊瑚 Ｓａｒ
ｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｎａｋａｉ的新鲜全草经水蒸气
蒸馏而得，药理试验表明肿节风挥发油具有抗癌作
用，目前尚无制剂生产。亚微乳乳滴粒径介于乳剂
和微乳之间，由于分散度很大，有利于药物吸收，并
具有一定淋巴定向输送和靶向定位作用。将肿节风
挥发油制成水包油型静脉给药乳剂，既能增加挥发
油的稳定性，又可减轻刺激性，掩盖不良气味。为
此，笔者研究制备了可供静脉给药的肿节风挥发油
亚微乳，旨在为进一步开发安全有效的抗癌中药新
药奠定基础。
１ 材料
ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯＡＧ１３５电子天平（瑞士），
Ｍｉｌｉｐｏｒｅ超纯水系统（法国），ＭＡＬＶＥＲＮＺｅｔａｓｉｚｅｒ
ＮａｎｏＺＳ粒径电位仪（英国马尔文仪器公司），Ｅｍｕｌ
ｓｉＦｌｅｘＣ５高压乳匀机（加拿大 Ａｖｅｓｔｉｎ公司），ＦＪ
２００型高速分散匀质机（上海标本模型厂），电热手
提式高压消毒锅（上海医用核子仪器厂），ＮＤＪ１旋
转黏度计（上海昌吉地质仪器有限公司），Ｂｉｏｆｕｇｅ
Ｓｔｒａｔｏｓ全能台式高速冷冻离心机（美国 ＫＥＮＤＲＯ），
ＰＢ１０标准型酸度计（德国 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ），ＢＳ８８冰点渗
透压测定仪（上海尉诚仪器设备有限公司），Ｗａｔｅｒｓ
２６９５型高效液相色谱仪，２９９６ＤＡＤ检测器（美国
Ｗａｔｅｒｓ公司）。
微孔滤膜（０８μｍ上海亚东核级树脂有限公
司），注射用大豆油（铁岭北亚药用油有限公司，批
号 ０６０３０３），精制蛋磷脂 Ｅ８０（德国 Ｌｉｐｏｉｄ公司，批
号 １０３１５１５３／９０３），油酸（德国 Ｌｉｐｏｉｄ公司），泊洛
沙姆（Ｆ６８）（德国巴斯夫公司，批号 ＷＰＷＡ５４４Ｃ），
甘油（浙江遂昌惠康药业有限公司），乙腈、甲醇为
色谱纯，其他试药均为药用或分析纯，水（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ
Ｑ级），肿节风挥发油和肿节风挥发油亚微乳（自
制）。
２ 方法与结果
２１ 亚微乳的处方筛选
２１１ 乳化剂的选择
在静脉给药亚微乳中，乳化剂的选择是个关键
问题［１］，目前常用的有蛋黄磷脂、大豆磷脂（包括氢
化豆磷脂）及泊洛沙姆（Ｆ６８）等。本文固定其他组
成及用量，选择精制蛋磷脂 Ｅ８０（以下简称 Ｅ８０）与
Ｆ６８不同比例的混合物分别作为乳化剂制备初乳。
取粗乳１０ｍＬ在半径１０ｃｍ处以２０００ｒ·ｍｉｎ－１（１８
℃）离心５ｍｉｎ，取离心管底部的乳液 ２ｍＬ，摇匀。
取２５μＬ置１０ｍＬ量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇
匀，在５００ｎｍ下测定其吸光度 Ａ，同法直接测定不
经离心粗乳的吸光度Ａ０，按下式计算离心稳定常数
Ｋｅ［２］（以下简称 Ｋｅ）：Ｋｅ＝｛｜（Ａ０ －Ａ）｜／Ａ０｝×
１００％。以Ｋｅ为指标，考察不同乳化剂对粗乳质量
的影响，结果见表１。
由于每种植物油或挥发油都有自己最适合的
ＨＬＢ值，从表 １可见，本亚微乳系统当乳化剂的
ＨＬＢ值为１０７时，即蛋黄磷脂和泊洛沙姆的比例
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第３４卷第２４期
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表１ 不同乳化剂对粗乳质量的影响
乳化剂 ＨＬＢ Ｋｅ／％ 评价
Ｅ８０ ８．０ ２５．３ 较稳定
Ｅ８０Ｆ６８（２∶１） １０．７ ２３．６ 最稳定
Ｅ８０Ｆ６８（１∶１） １２．０ ２８．０ 较稳定
Ｅ８０Ｆ６８（１∶２） １３．３ ３５．４ 不稳定
为２∶１时，乳剂的Ｋｅ最小，乳剂最稳定。
２１２ 稳定剂的选择
油酸是亚微乳中常用的稳定剂，本文对处方中
加与不加油酸进行了考察，见表２。结果表明加与
不加油酸两者外观均为乳白色，无油滴，但加了油酸
稳定效果不明显，因此，本处方不加稳定剂。
表２ 加与不加稳定剂亚微乳稳定性的比较
方法
黏度
／ｍＰａ·ｓ
Ｋｅ
／％
平均粒径
／ｎｍ
分散
系数
不加油酸 ２．５５ ２．８５ １６９ ０．０９９
加油酸（质量浓度２．４ｇ·Ｌ－１） ２．７５ ２．８２ １６２ ０．０８１
注：该Ｋｅ值为在半径１０ｃｍ处以４０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ所
测得。
２２ 亚微乳制备工艺条件的筛选
２２１ 正交试验优化亚微乳工艺
在单因素考察和预试验的基础上，初步确定亚微
乳的处方组成为肿节风挥发油为０２％，注射用大豆
油质量浓度为１００ｇ·Ｌ－１，蛋黄磷脂泊洛沙姆（２∶
１），甘油质量浓度为２２５ｇ·Ｌ－１，采用正交试验法，
考察复合乳化剂用量、剪切乳化温度和搅拌时间各因
素对粗乳质量的影响，见表３。
表３ 正交设计因素水平
水平
Ａ
乳化温度
／℃
Ｂ
搅拌时间
／ｍｉｎ
Ｃ
乳化剂质量浓度
／ｇ·Ｌ－１
１ ４５ ５ １２
２ ６０ １０ １８
３ ７５ １５ ２４
２２１１ 正交试验 采用 Ｌ９（３
４）正交表安排试
验，以离心稳定性参数Ｋｅ（２０００ｒ·ｍｉｎ－１，５ｍｉｎ）为
评价指标，结果见表４，５。
由表５的方差分析可以得出结论，Ｂ因素对 Ｋｅ
值的影响最小，Ａ和 Ｃ二因素对肿节风挥发油亚微
乳的影响都有显著性，其中 Ｃ影响最大，Ａ３Ｂ２Ｃ２为
最佳粗乳制备工艺条件，即乳化温度为７５℃、搅拌
表４ 正交试验结果
Ｎｏ． Ｋｅ／％
１ ７５．２
２ ３４．２
３ ５６．２
４ ２５．７
５ ４６．１
６ ６２．９
７ ３８．３
８ ５６．４
９ ２４．３
表５ 正交试验方差分析
方差来源 离均差平方和 方差 Ｆ Ｐ
Ａ ３７４．７６ １８７．３８ ２０．３５ ＜０．０５
Ｂ ７．６４ ３．８２ ０．４２
Ｃ ２０２８．０３ １０１４．０１ １１０．１３ ＜０．０１
Ｄ １８．４２ ９．２１
注：ｆ＝２；Ｆ０．０５（２，２）＝１９．００，Ｆ０．０１（２，２）＝９９．００。
时间１０ｍｉｎ、乳化剂质量浓度为１８ｇ·Ｌ－１。
２２１２ 验证试验 按照选定的最佳粗乳制备条
件和乳化剂用量，制备所得粗乳的 Ｋｅ为 ２６７％。
制成亚微乳后外观呈乳白色，不挂壁，表面几乎没有
油滴。表明该粗乳制备工艺可行。
２２２ 磷脂溶解方法的选择
磷脂的溶解和分散是亚微乳制备的重要环节之
一。本文考察了同一条件下磷脂加入水相和加入油
相溶解所制备的亚微乳。
结果为２种磷脂溶解方法所制备的亚微乳粒径
大小及分布、黏度、外观性状及稳定性基本无差别。
考虑到磷脂在水相中更容易溶解分散均匀，故选择
磷脂加入水相的方法。
２２３ 不同压力和乳匀次数对乳剂的影响
按照基本处方制备成初乳后，分成３批，３批分
别在４８，６９，１０３ＭＰａ压力下用高压乳匀机乳化，并
分别在乳化３次、４次、５次时留样，测定样品的粒径
并观察样品性状。结果样品均为白色乳状液体，无
油花，粒径测定结果见表６。由表６可以看出，乳匀
压力越大，乳剂粒径越小；随着乳匀次数的增加，粒
径逐渐减小，但粒径分布峰宽可能增大。因此，选择
乳匀压力为１０３ＭＰａ，乳匀次数为４次。
２２４ 灭菌温度的考察
以１１５℃，３０ｍｉｎ和１２１℃，１５ｍｉｎ２种常用的
高压灭菌方法对按基本处方制备的亚微乳的耐热性
进行了考察，灭菌前后的考察结果见表７。
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表６ 不同压力和乳匀次数对乳剂粒径及分布的影响
压力／ＭＰａ
３次 ４次 ５次
平均粒径／ｎｍ 分散系数 平均粒径／ｎｍ 分散系数 平均粒径／ｎｍ 分散系数
４８ ３００．７ ０．７２３ ２８３．４ ０．２４１ ２７１．５ ０．１４４
６９ ２８５．２ ０．３８５ ２６４．８ ０．１６５ ２５８．７ ０．２１６
１０３ ２５５．１ ０．１５７ ２４５．０ ０．０８０ ２３７．０ ０．２６８
表７ ２种方法灭菌前后的比较
灭菌方法
平均
粒径／ｎｍ
分散
系数
黏度
／ｍＰａ·ｓ－１
１１５℃，３０ｍｉｎ灭菌前 １７０ ０．０９２ ２．６５
灭菌后 １６８ ０．０９４ ２．６４
１２１℃，１５ｍｉｎ灭菌前 １７０ ０．０９２ ２．６５
灭菌后 １７４ ０．０９８ ２．６７
由表７中结果可以看出，２种灭菌方式对肿节
风挥发油亚微乳的外观性状及粒径、分布改变不大。
因此，选择１１５℃，３０ｍｉｎ进行灭菌。
２２５ 充氮的影响
本亚微乳中有磷脂成分及挥发油，易被氧化，应
在处方中加入抗氧剂。但由于本制剂用药方式为静
脉给药，应尽量不加或少加附加剂。本研究在不加
抗氧剂的条件下，以 ｐＨ为指标，考察了有、无氮气
保护２种情况亚微乳在灭菌和贮存过程中的稳定
性。在亚微乳制备、灭菌和贮存过程中充氮保护可
以有效防止氧化。
２２６ 优化后的处方和工艺
经上述试验，所得的优化处方为：肿节风挥发油
２ｍＬ，注射用大豆油１００ｇ，乳化剂 Ｅ８０Ｆ６８（２∶１）１８
ｇ，甘油２２５ｇ，加注射用水至１０００ｍＬ。制备方法为
取肿节风挥发油和大豆油置烧杯中，搅拌使混合均
匀，为油相。取Ｅ８０，Ｆ６８和甘油置烧杯中，加注射用
水６００ｍＬ，搅拌使Ｅ８０，Ｆ６８溶解均匀，为水相。将水
浴加热至７５℃的油相、水相混合，用组织均质机搅拌
１０ｍｉｎ，得初乳，加注射用水至１０００ｍＬ，用高压乳匀
机乳匀４次，乳匀压力为１０３ＭＰａ，用氢氧化钠溶液调
节ｐＨ为７５，０８μｍ的微孔滤膜过滤，质检，罐装，充
氮，封口，于１１５℃高压灭菌３０ｍｉｎ，制备过程在氮吹
保护下进行。
２３ 亚微乳制剂的检测
２３１ ｐＨ测定
按《中国药典》２００５年版一部附录ⅦＧ测定３
批样品的ｐＨ，每批测定３次，取平均值，３批样品的
ｐＨ分别为７０３，７０９，６９７。均符合静脉给药乳剂
对ｐＨ的要求。
２３２ 粒度及其分布 、Ｚｅｔａ电位测定
吸取本品０１ｍＬ，加无微粒杂质的纯净水１００
ｍＬ，混匀。用马尔文粒径电位仪测定粒经及其分
布、Ｚｅｔａ电位，结果见表８。３批样品粒径小且分布
均匀，电位绝对值较高，进一步验证了所筛选的最佳
处方工艺，说明所制备的亚微乳有较好的物理稳
定性。
表８ ３批亚微乳粒径、分布及Ｚｅｔａ电位测定
批号
平均粒径
／ｎｍ
分散系数
Ｚｅｔａ电位
／ｍＶ
０６１２１１１ １６４ ０．０９４ －３６．５
０６１２１１２ １６７ ０．０８４ －３９．１
０６１２１１３ １６９ ０．１０７ －４２．１
２３３ 黏度测定
外相的黏度对亚微乳的稳定性和生物相容性很
重要，黏度过低，会影响亚微乳的稳定性；为了减少
静脉给药可能引起的副作用，乳剂的黏度要接近血
浆的黏度。３批样品黏度分别为 ２６４，２７３，２５８
ｍＰａ·ｓ。
２３４ 渗透压测定
照渗透压摩尔浓度测定法（《中国药典》２００５年
版附录ⅨＧ）测定，３批亚微乳样品的渗透压分别为
３１２，３２０，３１６ｍＯｓｍ·Ｌ－１。０９％氯化钠注射液的
渗透压为２８６ｍＯｓｍ·Ｌ－１，人血浆渗透压为２８０～
３１０ｍＯｓｍ·Ｌ－１。因此３批样品略偏高渗。
２３５ 亚微乳中β榄香烯含量测定［３］
２３５１ 对照品贮备液的制备 取 β榄香烯对照
品约４５ｍｇ，精密称定，置１００ｍＬ量瓶中，用无水乙
醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液（每 ｍＬ含
β榄香烯４４２９５μｇ）。
２３５２ 供试品溶液的制备 取肿节风挥发油亚
微乳３ｍＬ，置１０ｍＬ离心管中，加入１５ｇ无水硫酸
钠，摇匀，放入５０℃水浴中加热破乳，待分层后，于
８℃下以５０００ｒ·ｍｉｎ－１离心３０ｍｉｎ，吸取全部上层
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油层置一１０ｍＬ离心管中，加入３ｍＬ无水乙醇，在
涡旋混合器上涡旋１ｍｉｎ后，于８℃下以５０００ｒ·
ｍｉｎ－１，离心２０ｍｉｎ，取上清液（无水乙醇层）置一５
ｍＬ量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀。过０２２
μｍ微孔滤膜，即得。
２３５３ 色谱条件 Ｗａｔｅｒｓ５Ｃ１８ＡＲⅡ色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇（Ａ）乙腈
（Ｂ）水（Ｃ）；梯度洗脱：０～２５ｍｉｎ，３８％Ａ，３５％ ～
４０％Ｂ，２７％ ～２２％Ｃ；２５～５９ｍｉｎ，３８％Ａ，４０％ ～
４４％Ｂ，２２％ ～１８％Ｃ；５９～７５ｍｉｎ，３８％Ａ，４４％Ｂ，
１８％Ｃ；柱温３０℃；测定波长２１０ｎｍ；流速１ｍＬ·
ｍｉｎ－１；进样量１０μＬ。在该试验条件下，亚微乳中
β榄香烯与其他组分均能达到基线分离，空白乳没
有干扰。
２３５４ 线性关系考察 分别精密量取对照品贮
备液０１，０３，０５，０７，０９和１０ｍＬ置２ｍＬ量瓶
中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取
１０μＬ注入液相色谱仪，以峰面积 Ｙ对进样量 Ｘ
（μｇ）进行回归，得回归方程 Ｙ＝ ６７６１３０Ｘ－
８７９６１，ｒ＝０９９９９，即 β榄香烯在 ０２２１５～
２２１４８μｇ呈良好的线性关系。
２３５５ 含量测定 取亚微乳样品，按２３５２项
下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，３批
样品β榄香烯质量浓度分别为 ０１１６８，０１２０５，
０１１３７ｇ·Ｌ－１（ｎ＝３）。
３ 讨论
水包油型乳剂中乳化剂的 ＨＬＢ值在８～１６，每
种植物油或挥发油都有自己最适合的 ＨＬＢ值，为确
保静脉给药亚微乳的稳定性，首先应该确定适宜的
亲水亲油平衡值，本文以 Ｋｅ为指标确定了最佳的
ＨＬＢ值约为１１，由此确定了处方中Ｅ８０和Ｆ６８的比
例为２∶１。
本文选用的乳化剂是 ＬｉｐｏｉｄＥ８０与 Ｆ６８，据文
献报道，脂肪乳剂大多以磷脂与非离子或阴离子型
的表面活性剂作为混合乳化剂。
离心稳定性试验、低温和冻融试验、光照和高温
试验等影响因素试验表明，肿节风挥发油亚微乳在
冷冻、高温和光照下不稳定，因此确定该品在包装、
运输和贮存过程中应避免冷冻、高温和光照。加速
试验和室温留样考察３个月，质量无明显变化，初步
认为本品质量稳定，处方和工艺合理。
体外溶血试验表明，肿节风挥发油亚微乳无溶
血作用。
［参考文献］
［１］ 郭涛，储晓琴，颜鸣，等大蒜油亚微乳的安全性及体外抗真
菌作用［Ｊ］沈阳药科大学学报，２００５，２２（６）：４５８
［２］ 韩继红，苏德森抗癌药物ＦＴ２０７脂肪乳物理化学性质的研
究［Ｊ］沈阳药学院学报，１９９１，８（１）：１４
［３］ 宋笑丹，王学军，杜霞，等ＨＰＬＣ法测定 β榄香烯脂质体药
物含量及包封率［Ｊ］药物分析杂志，２００７，２７（８）：１２２２
ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｓｕｂｍｉｃｒｏｎｅｍｕｌｓｉｏｎｏｆｆｒｅｓｈＺｈｏｎｇｊｉｅｆｅｎｇｖｏｌａｔｉｌｅｏｉｌ
ＷＵＳｕｘｉａｎｇ１，ＬＶＧｕｉｙｕａｎ１，ＣＨＥＮＳｕｈｏｎｇ２，ＺＨＡＮＧＳｈｅｎｇｎａ１，ＺＨＡＯＬｉｓｈａｎ１，
ＺＨＯＵＲｉｈｅ３，ＺＨＯＵＨｕａｋａｎｇ３
（１ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；
２ＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ；
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第３４卷第２４期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２４
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９