全 文 :thenweobservetherestainingrateofpregnancy.Atthesametime,wedeterminetheprogesteronelevelinbloodseruminthewaysof
radioimmunoassay.Result:720g·kg-1enolicaidsfromA.euchromacanmarkedlyincreasetherestainingrateofpregnancy(P<
005)thanthatonlymifepristonedose(80g·kg-1).Inaddition,thenumberofeveragestilbithincrease,however,tothepogest
eronelevelinbloodserum.Ithaslitleefect.Conclusion:TheefectofphenolicacidsfromA.euchromaassistmifepristoneinanti
earlypregnancyofSDrtusnorvegicusisclear,anditdosen′tworkinthewaysofdecreasingthepogesteronelevel.
[Keywords] phenolicacidsfromArnebiaeuchroma;pregnancySDratusnorvegicus;antiearlypregnancy
[责任编辑 古云侠]
[收稿日期] 20080820
[通讯作者] 徐斌,Email:ceogift@gmailcom
前列安通片对 BPH大鼠前列腺组织中
VEGF,bFGF表达的影响
徐 斌
(上海交通大学 医学院 附属瑞金医院 药剂科,上海 200025)
[摘要] 目的:观察前列安通片对前列腺增生(BPH)大鼠增生前列腺组织的影响,并探讨其作用机制。方法:
采用SD大鼠去势后皮下注射丙酸睾丸酮法复制BPH模型,用形态计量学方法研究各组前列腺组织的形态改变;
用免疫组化法研究实验各组前列腺组织的血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。
结果:前列安通片高、中、低各剂量组(624,312,156g·kg-1)及阳性药保列治组(167g·kg-1)与模型组比较,
前列腺质量、前列腺体积、前列腺指数均明显降低(P<001);腺体平均面积、平均周长降低,相同面积内腺体总数
目增加(P<001);前列安通片各剂量组bFGF表达显著低于模型组(P<001),高剂量组前列腺组织中 VEGF表
达明显低于模型组(P<005)。结论:前列安通片能缩小前列腺体积,对BPH有一定的治疗作用,作用机制与抑制
VEGF,bFGF的表达有关。
[关键词] 前列安通片;前列腺增生;血管内皮生长因子;碱性成纤维细胞生长因子
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)20238104
前列安通片是甘肃独一味生物制药股份有限公
司生产的纯中药制剂,具有清热利湿、活血化瘀的作
用,临床上主要用于慢性前列腺炎和良性前列腺增
生症的治疗。良性前列腺增生(BPH)是引起中老
年男性排尿障碍原因中最为常见的一种疾病,其发
生的具体机制尚不明确,可能是由于上皮和间质细
胞的增殖和细胞凋亡的平衡性破坏引起。相关因素
有雄激素与雌激素的相互作用、前列腺间质腺上皮
细胞的相互作用、生长因子、炎症细胞、神经递质及
遗传因素等[1]。
为了进一步探讨前列安通片对增生前列腺组织
形态学的影响,并研究其对前列腺组织中血管内皮
生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bF
GF)表达的影响。
1 材料
1.1 动物
雄性SD大鼠100只,8周龄,体重200~250g。
由华西医科大学动物实验中心提供,合格证号
00063510。
1.2 药品与试剂
前列安通片(甘肃独一味生物制药股份有限公
司提供,批号 070307),每片含原生药104g;阳性
对照药非那雄胺(商品名:保列治),每片含4氮甾
体激素化合物 5mg,(美国默沙东公司生产,批号
254177);丙酸睾丸酮注射液(上海第九制药厂生
产,批号070504)。
免疫组化试剂:bFGF兔多克隆抗体(克隆系:
147)、VEGF兔多克隆抗体(克隆系:165);相应二抗
及试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。
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1.3 仪器
电子天平(赛多利斯 BP-61);MIAS-2000型
图形图像分析系统,由四川大学图形图像研究所提
供;Olympus光学显微镜(日本)。
2 方法
2.1 造模及给药
参照文献方法[2],大鼠适应性喂养1周后,随机
分为睾酮组68只,正常组20只,去势组12只。其
中,睾酮组及去势组大鼠用戊巴比妥钠麻醉后,无菌
切除双侧睾丸,经1周自然恢复后,睾酮组每日经皮
下注射丙酸睾丸酮05mg造模,去势组给予皮下注
射用水01mL;空白组大鼠麻醉后,无菌手术切开
下腹部,游离睾丸,但不切除睾丸,经1周自然恢复
后,也给予皮下注射用水01mL。10d后,正常组
及睾酮组分别随机取8只大鼠处死,摘除前列腺,计
算前列腺指数,正常组为(019±004)%,睾酮组
为(031±006)%(P<005),表明造模成功。随
后,将睾酮组大鼠随机分为5组,即前列安通片高、
中、低剂量组(624,312,156g·kg-1),保列治组
(167g·kg-1)和模型组。连续给药30d(中间每
周称重1次以调整给药剂量),末次给药24h后,称
大鼠体重后,经股动脉放血处死,摘除前列腺。
2.2 检测指标
2.2.1 前列腺质量、体积及指数的测定 用电子天
平称大鼠前列腺质量,并计算前列腺指数;用水取代
法测量前列腺体积(单位:mL)。
前列腺指数=前列腺质量/大鼠体重×100%
2.2.2 前列腺组织结构的观察 取相同部位前列
腺组织,FAA液固定48h,逐级乙醇脱水、浸蜡,石
蜡包埋,连续切片5张,切片厚度4μm,其中第1张
切片作常规HE染色,第2~5张切片作免疫组化染
色,镜下(4×10)观察HE染色片前列腺组织结构的
变化。
2.2.3 免疫组化染色 SP(生物素辣根过氧化酶)
法,DAB(3,3二氨基联苯胺)显色,以试剂盒中提供
的阳性片为阳性对照,以PBS液(磷酸盐缓冲液)替
代一抗、二抗作阴性对照。VEGF,bFGF均以血管内
皮及间质细胞中出现棕黄色颗粒为其阳性细胞。
bFGF,VEGF:每张切片中取具有阳性颗粒数目
最多的5个间质区视野(400×),用图像分析系统
定量检测积分吸光度(IA)来表示其在组织中表达
量的多少。
2.3 统计学方法
各项指标结果均以珋x±s表示,实验数据用SPSS
100软件包进行处理,各组间比较采用单因素方差
分析,方差检验齐者用 LSD法,方差不齐者用
GamesHowel法检验。
3 结果与分析
3.1 对前列腺质量、体积及指数的影响
各组大鼠体重无显著性差异,各组间具有可比
性。模型组大鼠前列腺质量、体积、前列腺指数明显
高于正常组(P<001),去势组大鼠前列腺质量、体
积、前列腺指数明显低于模型组及正常组(P<
001)。前列安通片各剂量组及保列治组与模型组
比较,前列腺质量、前列腺体积、前列腺指数均明显
降低(P<001)。结果表明:模型组前列腺体积、质
量显著增大,造模成功。前列安通片可明显缩小
BPH大鼠前列腺体积(表1)。
表1 各组大鼠前列腺质量、体积、前列腺指数比较(珋x±s)
组别 n 剂量/g·kg-1 体重/g 前列腺质量/g 前列腺体积/mL 前列腺指数/%
正常 8 - 30400±2807 084±025 073±017 027±007
模型 8 - 32375±2669 157±0281) 139±0251) 049±0081)
去势 7 - 29813±4971 028±0111,2) 030±0121,2) 009±0031,2)
前列安通片 8 624 30686±3116 102±0282) 088±0182) 034±0122)
8 312 29063±3448 091±0192) 079±0162) 032±0062)
8 156 29125±1959 103±0232) 089±0212) 035±0072)
保列治 8 000167 31263±3375 095±0272) 082±0202) 033±0132)
注:与正常组相比1)P<001;与模型组相比2)P<001(表2,3同)
3.2 对大鼠前列腺组织结构的影响
正常组腺体排列清楚,腺体间可见明显的间
质,腺腔无扩张,腺上皮单层柱状,可见少许基底
细胞及明显基底膜.模型组腺体排列密集,腺腔变
大,部分腺体扩张,腔内分泌物增多,上皮细胞呈
单层柱状,腺上皮变厚,部分区域呈假复层,部分
腺体呈乳头状突向腔内,可见较多基底细胞,间质
小血管扩张充血;间质平滑肌增多。去势组可见腺
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腔直径及腺上皮厚度均较模型组及正常组明显减
小,小血管未见扩张,间质组织疏松。前列安通片
各剂量组及保列治组以上各种改变均有不同程度的
改善。
由表2可见,模型组平均腺体周长、平均腺体面
积均较正常组明显增大(P<001),相同面积内腺
体数目较正常组明显减少(P<001)。去势组大鼠
腺体平均周长、腺体平均面积均较正常组及模型组
明显降低(P<001),相同面积内腺体数目较正常
组及模型组明显增加(P<001)。前列安通片各剂
量及保列治组与模型组比较,腺体平均面积、平均周
长降低,相同面积内腺体总数目增加(P<001)。
结果表明:模型组腺体增生,前列安通片可降低
BPH大鼠前列腺腺体增生。
表2 各组大鼠间腺体数目、平均周长、平均面积比较(珋x±s)
组别 剂量/g·kg-1 n 腺体数目/个 周长/μm 面积/μm2
正常 - 8 2175±483 63731±2534 2762249±497895
模型 - 8 1313±1811) 86646±82671) 4819979±5001631)
去势 - 7 16338±31941,2) 17785±27381,2) 216753±558941,2)
前列安通片 624 8 2563±3992) 64031±61772) 2646284±5401592)
312 8 2413±3272) 65983±45012) 2711297±2797952)
156 8 2313±2642) 64935±52042) 2739064±3676222)
保列治 000167 8 2688±3832) 64641±29512) 2581295±3913872)
3.3 对大鼠前列腺组织bFGF,VEGF的表达
bFGF,VEGF在前列腺血管内皮细胞、间质细
胞及腺上皮细胞中都有表达。正常组大鼠前列腺组
织阳性着色分布较均匀,染色较淡;在模型组大鼠
前列腺组织中染色普遍较深,尤其在微血管成簇聚
集部位的血管内皮细胞及血管周围间质细胞中强表
达;在前列安通片各剂量组及保列治组阳性着色主
要位于间质细胞中,染色较浅,明显低于模型组。
各组前列腺组织中 bFGF,VEGF蛋白表达情况见
表3。
表3 各组大鼠间前列腺组织VEGF,bFGF阳性颗粒(IA)比较(珋x±s)
组别 剂量/g·kg-1 n VEGF bFGF
正常 - 8 145395275±26882559 26880225±11805962
模型 - 8 381936463±1016718531) 71476725±159691291)
去势 - 7 115793175±273876222) 23613750±65692542)
前列安通片 624 8 230795675±377298161,3) 32374838±72787412)
312 8 245505088±455736291) 35958338±68815992)
156 8 387715388±174192262 38936388±98141512)
保列治 000167 8 244708238±79973980 24714900±72296252)
注:与模型组相比3)P<005
由表3可见,模型组 bFGF,VEGF阳性颗粒均
显著高于正常组(P<001);去势组上述两项指标
均显著低于模型组(P<001),与正常组无显著差
异;前列安通片各剂量 bFGF表达显著低于模型组
(P<001),高剂量组前列腺组织中 VEGF表达明
显低于模型组(P<005)。
4 讨论
前列安通片具有活血祛瘀、清利湿热之功效,由
黄柏、赤芍、白芷、桃仁、丹参、泽兰、乌药、王不留行
等8味中药组成,临床用治疗前列腺增生取得了较
好的疗效。本研究表明,前列安通片可缩小前列腺
体积,降低前列腺重量及指数。镜下观察及形态计
量学研究显示:睾酮皮下注射所致的大鼠前列腺增
生,腺体及间质组织均出现增生而以腺体增生为主;
前列安通片可缩小腺体面积、腺体周长及腺上皮面
积。
研究表明,血管新生活跃是BPH发生发展过程
中的重要因素,BPH是血管新生依赖性疾病。bFGF
是有较强的促细胞生长作用的多肽,具有广泛的生
物学作用,其中诱导血管新生是一个很重要的作用,
主要通过对内皮细胞的趋化作用和促有丝分裂作用
来加强其分化功能。研究发现 bFGF在正常人前列
腺组织腺上皮细胞、间质细胞、血管内皮细胞及细胞
外基质胞浆、胞核中都有表达,BPH组织中表达显
著升高[34]。bFGF表达水平与间质血管数目正相
关[4]。VEGF又称血管通透因子(vascularpermea
bilityfactor,VPF),是最重要的血管生成因子,广泛
参与多种生理病理性血管形成与新生。具有促进内
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皮细胞增殖、增强血管通透性的作用,还可以促进纤
维蛋白酶及基质金属蛋白酶的合成以利于新血管形
成。在生理或病理状态下血管新生的过程中,VEGF
是一个主要调节因子[56]。本研究表明,前列安通片
对VEGF,bFGF等血管新生促进因子的表达有显著
抑制作用,通过抑制前列腺组织血管新生,进而抑制
前列腺增生。
[参考文献]
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giogenesisandgrowthofhumanprostatecarcinomamicrotumorsin
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InfluenceofQianlieAntongtabletsonexpresstionofVEGFandbFGFin
protatictissuesofBHPrats
XUBin
(PharmacyDept.,RuijinHospital,AfiliatedtoMedicalColegeofShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200025,China)
[Abstract] Objective:ToevaluatetheefectofQianlieAntongtablet(QLAT)onthetissuesofbenignprostatichyperplasia
(BPH)ofexperimentalrats,andseekitsmechanism.Method:TheanimalmodelofBPHwasmadewithratsbysubcutaneouslyin
jectingmethylaceticacidtestosteroneafteremasculated.Thechangesofprostatictissuesofeverygrouparestudiedwithmorphometry
combiningtheimmunohistochemistrymethod,theexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andbasicfibroblastgrowth
factor(bFGF)inprostatetissuewereexamine.Result:QLATcandiminishtheglandweight,volumeandindexofprostate,compared
withcontrolgroup,andalsecandecreaseaverageareaandcircumferenceofgland,andincreasetheamountoftotalglandsinequalar
ea.Meanwhile,theexpresstionofbFGFandVEGFinprostatictissuesweredecreasedinGANTgroups,comparedwithcontrolgroup.
Conclusion:QLATcandiminishtheprostateglandvolume,whichmaybeatainedbyinhibitingtheexpressionofVEGFandbFGFin
prostatictissue.
[Keywords] QianlieAntongtablet;benignprostatichyperplasia;VEGF;bFGF
[责任编辑 古云侠
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