全 文 ：藜芦中藜芦胺的 ＨＰＬＣＥＬＳＤ测定方法研究
王隶书１，赵大庆１，陶华明３，刘永宏２
（１．长春中医药大学，吉林 吉林 １３００２１；２．中国科学院 南海海洋研究所，广东 广州 ５１０３０１；
３．吉林大学，吉林 长春 １３００２１）
［摘要］ 目的：建立藜芦中藜芦胺的ＨＰＬＣＥＬＳＤ测定方法。方法：采用岛津 ＯＤＳＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，４
μｍ），以乙腈０１％三乙胺水溶液（５０∶５０）为流动相，ＥＬＳＤ为检测器，测定了１０种不同来源藜芦中藜芦胺含量。结
果：藜芦胺在０３６～３６μｇ与峰面积呈良好线性关系，ｒ＝０９９９８，平均回收率为１００９％（ＲＳＤ２３％，ｎ＝６）。结
论：ＨＰＬＣＥＬＳＤ测定藜芦胺方法简便、准确、重复性好，建立了藜芦药材含量测定项目。
［关键词］ 藜芦；藜芦胺；高效液相色谱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０７９１０２
［收稿日期］ ２００７０７１６
［基金项目］ 国家“十五”科技攻关项目（９９９２９０１３０）；吉林
省科技厅２００２年科技发展计划项目（２００２０６４）
［通讯作者］ 刘永宏，Ｅｍａｉｌ：ｗｌｓ６８５６＠１６３．ｃｏｍ
藜芦属为百合科植物，为有毒中药，世界上约有
４０种，据《中国植物志》记载，我国有其中１３种和１
个变种，以百合科植物藜芦 ＶｅｒａｔｒｕｍｎｉｇｒｕｍＬ．的干
燥根及根茎为正品，民间用于中风痰壅、癫痫、喉痹
不通、疥癣和恶疮，主产于吉林、辽宁、山西、河北等
省。由于藜芦药材缺少法定标准，各地药材质量差
异较大，所以为更好地控制其质量，使有毒的藜芦发
挥其治疗危象型高血压、肿瘤疾病的药理作用，本研
究从藜芦Ｖ．ｎｉｇｒｕｍ中分离鉴定其降压及抗肿瘤有
效成分藜芦胺作为藜芦药材的标准品，建立了
ＨＰＬＣＥＬＳＤ法测定藜芦胺的含量测定方法。由于
藜芦生物碱为甾体生物碱，缺少发色团，本实验采用
蒸发光散射检测器进行检测，克服了常用紫外吸收
检测器测定时干扰大、重复性差的弊病。
１ 材料
日本岛津ＬＣ－１０Ａ高效液相色谱泵，美国 Ａｌ
ｔｅｃｈＥＬＳＤ２０００检测器，空气泵（天津市达因仪器
厂）；氯仿为分析纯；乙腈（色谱纯）；水为超纯水。
藜芦胺对照品为自制（经 ＴＬＣ与 ＨＰＬＣ鉴定纯度在
９９０％以上，并经中国药品生物制品检定所复核）；
藜芦Ｖ．ｎｉｇｒｕｍ由吉林省中医中药研究院严仲铠教
授鉴定。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱为岛津 ＯＤＳ－Ｃ１８柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，４μｍ）；柱温 ３０℃；流动相乙腈
０１％三乙胺水溶液（５０∶５０）；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１。
漂移管温度 ９０℃，灵敏度 １，气体流速 ２５Ｌ·
ｍｉｎ－１，不分流模式。在以上条件下，藜芦胺和药材
中其他组分可以完全分离，见图１。
图１ 藜芦胺及藜芦药材色谱图
Ａ．对照品；Ｂ．藜芦药材；１．藜芦胺
２．２ 溶液制备 对照品溶液：精密称取减压干燥至
恒重的藜芦胺对照品３６ｍｇ，置１０ｍＬ量瓶中，加
甲醇至刻度，摇匀，作为对照品储备液（０３６ｍｇ·
ｍＬ－１）。供试品溶液：精密称取药材粉末０３ｇ，置
５０ｍＬ圆底烧瓶中，加三氯甲烷２５ｍＬ、浓氨试液４
ｍＬ回流提取２次，每次３０ｍｉｎ，滤过，药渣及容器用
三氯甲烷洗２次，每次１０ｍＬ，合并滤液及洗液，蒸
干，残渣加甲醇适量使溶解并定量转移置２ｍＬ量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（０４５
μｍ）滤过，即得。
２．３ 线性关系的考察 精密吸取对照品储备液０２，
０４，０８，１２，１６，２０ｍＬ于２ｍＬ量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，各进样１０μＬ，按２．１项下色谱条件
测定峰面积，以藜芦胺的进样量（μｇ）的自然对数（Ｘ）
·１９７·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
为横坐标，色谱峰面积的自然对数值（Ｙ）为纵坐标，
绘制标准曲线，计算，回归方程为 Ｙ＝１４１６Ｘ＋
１１８３９，ｒ＝０９９９８，线性范围０３６～３６μｇ。
２．４ 精密度及稳定性试验 对同一样品供试液，间
隔１ｈ进样１次，重复进样测定６次，ＲＳＤ０８１％
（ｎ＝６），因测定试验在８ｈ完成，即在８ｈ内稳定性
良好，精密度亦良好。
２．５ 重复性试验 分别称取同一批号样品粉末６
份，依２．２项下方法制备６份供试品溶液，按２１项
下色谱条件测定，ＲＳＤ１５％（ｎ＝６），说明本方法重
复性良好。
２．６ 回收率实验 在已知含量的样品粉末中，定量
加入一定量的藜芦胺对照品溶液（０３２ｍｇ·
ｍＬ－１），依法操作，进样测定，结果本方法平均回收
率１００９％，ＲＳＤ２３％，结果见表１。
表１ 藜芦胺回收率测定结果
称样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０３３６８ ０３５３ ０６７７ １０１３
０３３８９ ０３５５ ０６６５ ９６９
０３２８７ ０３４４ ０６７１ ０１９
１００９ ２３０３３９８ ０３５６ ０６８７ １０３４
０３３４５ ０３５０ ０６７７ １０２２
０３４０１ ０３５６ ０６７５ ９９７
注：加入量为０３２ｍｇ
２．７ 样品测定 取对照品溶液５，１０μＬ，供试品溶
液５μＬ，按２．１项下色谱条件测定，计算含量，结果
（不同收集地）见表２。
３ 讨论
表２ 不同来源藜芦中藜芦胺的测定结果 ％
产地 质量分数 产地 质量分数
河北安果 ０３０９ 内蒙古赤峰 ０１８３
辽宁沈阳 ０３９４ 黑龙江牡丹江 ０２６４
山东济南 ０２４０ 吉林安图 ０１５０
吉林长春 ０１０６ 北京 ０２３０
天津 ０３４１ 山西太原 ００７４
藜芦有毒，中医临床门诊处方汤剂中很少入药，
藜芦药材的质量标准是一个空白，没有任何含量测
定项目，但藜芦生物碱具有非常显著的药理活性，本
采用简单快速的制备工艺从藜芦中分离制备藜芦胺
单体，药理实验证明，藜芦胺单体是藜芦生物碱中主
要有效成分之一。
经过多次比较，本品采用三氯甲烷及浓氨试液
加热回流提取率最高，因此提取方法确定加热回流
提取。分别对提取次数及提取时间进行考察。取本
品粉末０３ｇ３份，精密称定，加三氯甲烷２５ｍＬ、浓
氨试液４ｍＬ，分别加热提取１，２，３次，结果２，３次
基本一致，故选择提取２次。另取本品粉末３份，加
热提取２次，每次提取时间分别为３０，４０，６０ｍｉｎ，结
果藜芦胺含量基本一致，故选择每次加热提取 ３０
ｍｉｎ。
［参考文献］
［１］ 李 萍，曾令杰，李松林，等．ＨＰＬＣＥＬＳＤ法测定贝母中异甾类
生物碱及糖苷类成分的含量［Ｊ］．药学学报，２００４，３９（１）：５６．
［２］ 张 彬，王 晔，鲁 静，等．紫菀中有效成分的分离鉴定及紫
菀酮的ＨＰＬＣＥＬＳＤ测定［Ｊ］．药物分析杂志，２００３，２３（４）：
２９６．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｅｔａｔｒａｍｉｎｅｉｎＶｅｒａｔｒｕｍｎｉｇｒｕｍｂｙＨＰＬＣＥＬＳＤ
ＷＡＮＧＬｉｓｈｕ１，ＺＨＡＯＤａｑｉｎｇ１，ＴＡＯＨｕａｍｉｎｇ３，ＬＩＵＹｏｎｇｈｏｎｇ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈａｎｇｃｈｕｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３０１１７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭａｒｉｎｅＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＳｅａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＯｃｅａｎｏｌｏｇｙ，
ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０３０１，Ｃｈｉｎａ；３．ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣＥＬＳＤｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｅｔａｔｒａｍｉｎｅ．ｉｎＶｅｒａｔｒｕｍｎｉｇｒｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ａｎａｌｙｆｉｃａｌｃｏｌｕｍｎｗａｓＳｈｉｍｐａｃｋＯＤＳ－Ｃ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，４μｍ）ｃｏｌｕｍｎ，ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗａｔｅｒ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
０１％ ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）（５０∶５０），ａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ０８ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｄｒｉｆｔｔｕｂｅｗａｓ９０℃ ａｎｄｔｈｅｇａｓｆｌｏｗｗａｓａｔｔｈｅ
ｒａｔｅｏｆ２５Ｌ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０３６３６μｇ（ｒ＝０９９９８）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ
１００９％ （ＲＳＤ２３％，ｎ＝６）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｖｅｒａｔｒａｍｉｎｅｉｎＶｅｒａｔｒｕｍｎｉｇｒｕｍ．ｆｒｏｍｔｈｅｔｅｎｄｉｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｃｏｎ
ｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｍａｙｂｅｕｓｅｄａｓａａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅｗａｙｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｖｅｒａｔｒａｍｉｎｅｉｎＶｎｉｇｒｕｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｖｅｒａｔｒｕｍｎｉｇｒｕｍ；ｖｅｒａｔｒａｍｉｎｅ；ＨＰＬＣＥＬＳＤ ［责任编辑 王亚君］
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第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８