全 文 ：延胡索抗心肌缺血活性部位指纹图谱中
化学成分分析
程星烨，石 钺
（中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所，北京 １０００９４）
［摘要］ 目的：运用ＬＣＭＳ２技术对延胡索抗心肌缺血活性部位指纹图谱中化学成分进行分析，初步了解其主
要活性成分。方法：采用迪马公司ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈水（含０８％冰醋酸和
０２％三乙胺 ２３∶７７），流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长３３５ｎｍ，柱温３０℃。结果：建立了延胡索抗心肌缺血活性部位
的ＨＰＬＣ指纹图谱，确立了指纹图谱中的１２个共有峰，根据所检测到化合物的色谱保留时间及多级质谱信息，与对
照品比较，对其中８个色谱峰进行了指认。结论：本方法为延胡索抗心肌缺血活性部位的质量控制提供了依据。
［关键词］ 延胡索；活性部位；ＬＣＭＳ２；心肌缺血；季铵碱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１４１７１７０３
［收稿日期］ ２００８０１２４
［基金项目］ 中央级公益型科研院所基本科研业务专项资助
项目（ＹＺ１２８）
［通讯作者］ 石钺，Ｔｅｌ：（０１０）６２８９５０８６，Ｅｍａｉｌ：ｙｓｈｉ＠ｉｍｐ
ｌａｄ．ａｃ．ｃｎ
延胡索，别名有元胡、玄胡索、元胡索。药典载
其正品来源为罂粟科 Ｐａｐａｖｅｒａｅｅａｅ紫堇属 Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ
植物延胡索 Ｃ．ｙａｎｈｕｓｕｏＷＴｗａｎｇ的干燥块茎。
延胡索是传统的镇痛药和活血化瘀药，其化学成分
主要是生物碱，其中叔胺碱多有镇痛、镇静及安定作
用，以延胡索乙素为代表，目前对延胡索的研究也多
集中于这一方面，《中国药典》２００５年版延胡索项下
也是以延胡索乙素作为质量评价的定量标准，而对
延胡索中季铵碱成分研究则相对较少。为进一步了
解延胡索治疗心血管疾病的主要有效成分，本研究
采用ＨＰＬＣＵＶ对已筛选出的延胡索抗心肌缺血活
性部位进行了研究，建立了活性部位的指纹图谱，并
利用对照品比对和 ＬＣＭＳ２技术对其部分色谱峰进
行了指认。该研究不仅为延胡索质量的全面控制提
供了可靠的方法，同时也为更深入的药理及制剂研
究提供了依据和参考。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ６００型高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ２４８７
Ｄｕａｌλ紫外检测器、四元梯度泵、在线脱气装置），
Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２化学工作站；Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱
仪和ＡＰＩ３０００质谱检测器，Ａｎａｌｙｓｔ１１数据处理系
统；中药色谱指纹图谱相似度评价系统（国家药典
委员会，２００４Ａ版）。
延胡索抗心肌缺血活性部位，自制。盐酸巴马
汀、盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检验
所；其他对照品为作者从活性部位中分离得到，经
ＭＳ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＨＭＢＣ谱分析鉴定为黄连
碱、非洲防己碱和脱氢延胡索碱；ＨＰＬＣ检测３个对
照品纯度均在９６％以上。乙腈为色谱纯，水为娃哈
哈纯净水，其余试剂为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件及质谱条件 色谱条件：色谱柱迪马
公司ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流
动相乙腈水（含０８％冰醋酸和０２％三乙胺）２３∶
７７恒组成洗脱；体积流量１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长
３３５ｎｍ；柱温３０℃；进样量１０μＬ。质谱条件：ＥＳＩ
源，正离子扫描，扫描范围 ｍ／ｚ１００～７００；ＮＥＢ
８００；ＣＵＲ１２；ＣＡＤ６；源电压 ４５０００Ｖ；毛细管温
度 ４００℃。
２．２ 对照品溶液制备 精密称取黄连碱、非洲防己
碱和脱氢延胡索碱各适量，分别置１ｍＬ量瓶中，甲
醇溶解并定容至刻度，ＨＰＬＣ分析前用０４５μｍ微
孔滤膜滤过，作为对照品溶液。
２．３ 供试品溶液制备 精密称取延胡索活性部位
２０ｍｇ，用８０％甲醇定容于１０ｍＬ量瓶中，ＨＰＬＣ分
析前用０４５μｍ微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
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第３３卷第１４期
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中 国 中 药 杂 志
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２．４ 指纹图谱建立 按照上述色谱条件，对９批供
试品进行了测定，通过比较不同批次样品色谱峰，确
定共有峰１２个，见图１。经与对照品比对，确认了
样品图谱中的５个峰，结果见表１。５种季铵碱峰面
积共占总峰面积的８０４７％。
图１ ９批供试品的ＨＰＬＣ指纹图谱
表１ 延胡索活性部位ＨＰＬＣ指纹图谱中化学成分鉴定
Ｎｏ． ｔＲ／ｍｉｎ 化合物 占总峰面积／％
３ １０１２ 非洲防己碱 ９８８
５ １１８１ 黄连碱 １８９
１０ １７６８ 巴马汀 １６２３
１１ １９８４ 小檗碱 ２６５
１２ ２２７２ 脱氢延胡索碱 ４９８１
２．５ 精密度试验 取同一批次供试品溶液，连续进
样６次，每次１０μＬ，记录指纹图谱。以第１２号峰
为参照峰，计算１２个共有峰的相对保留时间和相对
峰面积的ＲＳＤ分别在００２％ ～０３８％和０１３％ ～
２６７％，说明仪器精密度良好。
２．６ 重复性试验 精密称取同一批提取物，按２．３
项下分别制备供试品溶液６份，进样检测。结果显
示，１２个共有峰相对保留时间和相对峰面积的 ＲＳＤ
值分别在００５％ ～０２５％和０５％ ～２５０％，表明
重复性良好。
２．７ 稳定性试验 取同一批次供试品，分别于制备
后０，１，２，４，１２，２４ｈ各吸取１０μＬ进样分析，记录
色谱图，计算１２个共有峰相对保留时间和相对峰面
积ＲＳＤ分别在０１１％～０５０％和０１５％～２１９％，
表明样品溶液在２４ｈ内基本稳定。
２．８ 模式图谱生成及相似度计算 用中药指纹图
谱相似度计算软件，生成模式图谱，如图２。计算不
同批次供试品指纹图谱与模式图谱的相似度均在
０９９以上，见表２。
２．９ ＬＣＭＳ２分析及各指纹峰的化学指认 为了尽
可能多的了解 ＨＰＬＣ指纹图谱中各成分的结构信
１１～１２为共有峰
图２ 模式图谱
表２ ９批供试品指纹图谱与参照图谱的相似度
Ｎｏ． 相似度 Ｎｏ． 相似度 Ｎｏ． 相似度
１ ０９９９ ４ ０９９９ ７ ０９９７
２ ０９９９ ５ ０９９８ ８ ０９９７
３ ０９９９ ６ ０９９７ ９ ０９９７
息，对延胡索抗心肌缺血活性部位进行了 ＬＣＭＳ
ＭＳ分析。依据正离子扫描方式下的质谱数据，参考
已有文献报道及对照品比对，对色谱图中的部分色
谱峰进行了指认，结果见表３。
３ 讨论
对于生物碱类成分的ＨＰＬＣ分离，文献中多采用
磷酸盐缓冲系统或离子对色谱法，但由于它们都不适
于ＬＣＭＳ分析，因此在流动相条件优化时，尝试加入
醋酸和三乙胺来建立延胡索活性部位指纹图谱的分
析方法。结果表明，乙腈水（含０８％醋酸和０２％三
乙胺）２３∶７７作为流动相，各个色谱峰的峰形和分离度
都较好，因此选定该系统为指纹图谱检测的流动相。
实验中根据供试品紫外吸收谱图，选择２７５ｎｍ
和３３５ｎｍ作为吸收波长进行测定，结果在两个波长
下，供试品ＨＰＬＣ图谱相似，而延胡索中含有的季铵
碱类成分在３３５ｎｍ时有较强吸收，且基线平稳，峰
形良好，故选择３３５ｎｍ作为指纹图谱的检测波长。
同时也考察了不同柱温（２５，３０，３５，４０，４５℃）及不
同流速（０８，０９，１０ｍＬ·ｍｉｎ－１），最后选定柱温
３０℃和流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１。
实验结果显示，延胡索有效部位中主要为季铵
类生物碱（占总峰面积的８０％以上），曾采用乙腈
水（含 ０８％ 醋酸和 ０２％ 三乙胺）梯度洗脱
（５∶９５～１００∶０），发现无论紫外检测（２７５，３３５ｎｍ）
还是质谱正负离子扫描，１２号峰以后均未检测到任
何响应，初步认为延胡索抗心肌缺血活性部位中的
化学成分主要集中在前３０ｍｉｎ。
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表３ 指纹峰的化学指认
Ｎｏ． ｔＲ／ｍｉｎ 分子离子峰 碎片峰 可能化合物
１ ３７６ ４７０ ３３６，３２１，２９２ 未知
３０７ １４５，１１７，７２
２ ９３７ ３７０ ２０６，１８８ α别隐品碱［１，２］
３ １０１２ ３３８ ３２３，３２２，３０８，３０７，２９４，２８０，２７９，２６５，２６２，２５０，２３７ 非洲防己碱
４ １１０２ ３７０ ３５４，２０６，１９０ 蓝堇辛［３，４］
５ １１８１ ３２０ ２９２，２９０，２７７，２６２，２４９，２３４，２１９，２０４ 黄连碱
６ １２７５ ３５２ ３３７，３３６，３２２，３２１ 未知
７ １３９３ ３５２ ３３６，３２１，３２０，３０８，２９４，２７９ 未知
８ １６０６ ３３４ ３３４，３０６，３０４，２９１，２７６，２６３，２４８ 刻叶紫堇碱［５，６］
９ １６７８ ３５２ ３３６，３２０，３０８，２９２，２７８ 未知
１０ １７６８ ３５２ ３３６，３２０，３０８，２９４，２９２，２７８ 巴马汀
１１ １９８４ ３３６ ３２０，３１８，３０６，２９３，２９２，２７８ 小檗碱
１２ ２２７２ ３６６ ３５０，３３６，３３４，３２２，３０８，３０６，２９２，２７８ 脱氢紫堇碱
目前从延胡索药材中已发现的季铵碱类成分只
有５个［７］，本实验通过ＬＣＭＳＭＳ分析，首次从中发
现了４个季铵碱成分，其中１个为刻叶紫堇碱（８号
峰），另３个（６，７，９号峰）与巴马汀具有相同的分子
量，碎片离子也基本一致，可能为新的原小檗碱类母
核的季铵碱，其化学分离及结构测定尚在进行之中。
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Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆａｎｔｉｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＣｏｒｙｄａｌｉｓｙａｎｈｕｓｕｏ，ａｎｄｔｏｉｎ
ｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｔｓｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｂｙＬＣＭＳＭＳ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｔ３０℃ ｏｎａＤｉｋｍａＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ
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ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｂｅｈａｖｉｏｒａｎｄｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃｄａｔａｂｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｏｓｅｏｆａｕｔｈｅｎｔｉｃｓｔａｎｄａｒｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓ
ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ，ｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆａｎｔｉｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＣ．ｙａｎｈｕｓｕｏ
ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｑｕａｌｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓｙａｎｈｕｓｕｏ；ｅｆｅｃｔｉｖｅｆｒａｃｔｉｏｎ；ＬＣＭＳＭＳ；ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ；ｑｕａｔｅｒｎａｒｙａｌｋａｌｏｉｄｓ
［责任编辑 王亚君］
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