全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ同时测定莲心总碱中的３种生物碱含量
赵立波，金 悠，王嘉陵
（华中科技大学 同济医学院 基础医学院 药理系，湖北 武汉 ４３００３０）
［摘要］ 目的：建立同时测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的反相高效液相色谱法。方法：以
ＨｙｐｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）为固定相，甲醇磷酸盐缓冲液（７３∶２７，ｐＨ９０）为流动相，检测波长为２８６ｎｍ
及２３０ｎｍ，流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１。结果：３种生物碱分离良好，在２０～７００μｇ·ｍＬ－１线性关系良好，日内、日间ＲＳＤ在
０２４％～４８３％，３种生物碱的加样回收率分别为９７９％，９８４％，９８１％。利用该方法测定了不同批次不同方法
提取的莲心总碱中３种生物碱含量，结果显示莲心总碱的甲醇提取方法优于乙醇提取方法。结论：本法简单、快
捷、适合于测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量。
［关键词］ 莲子心；总碱；莲心碱；异莲心碱；甲基莲心碱；含量测定；ＲＰＨＰＬＣ
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１７１７６８０３
［收稿日期］ ２００６１２１０
［通讯作者］ 王嘉陵，Ｔｅｌ：（０２７）８３６５７７３６，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｉａｌｉｎｇｔｊｍｕ
＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
莲心总碱是从中药莲子心中提取的双苄基异奎
啉类生物碱，主要有莲心碱（ｌｉｅｎｓｉｎｉｎｅ）、异莲心碱
（ｉｓｏｌｉｅｎｓｉｎｉｎｅ）、甲基莲心碱（ｎｅｆｅｒｉｎｅ）等成分［１］，具有
广泛的抗心律失常作用［２］。华中科技大学同济医学
院欲将莲心总碱作为有效部位其开发为新药，进行了
中试提取（总碱得量为公斤级）。为对其质量进行控
制，需要建立一种快速、灵敏、准确的测定方法。莲心
碱含量检测方法主要有双波长薄层扫描法、紫外分光
光度法及高效液相色谱法［２４］。本研究在参考有关文
献的基础上，作出了改进，采用ＲＰＨＰＬＣ同时测定莲
心总碱中的３种生物碱的含量。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ６００高效液相色谱仪配有６００溶剂输送
泵，６００控制器，２９９６二极管阵列检测器，Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ
３２处理软件。
莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱对照品由本系植
化组提供，经熔点法、薄层法、ＨＰＬＣ和质谱法认定
其纯度大于９５％［６］。待测样品为甲醇法提取的莲
心总 碱 （批 号 ２００２０２０１，２００２０２０２，２００２０２０３，
２００４０１０１，２００４０１０２），乙醇法取的莲心总碱（批号
２００４０２０１，２００４０２０２，２００４０２０３）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ，大连依利特有限公司），柱温为２５℃；流动相
甲醇磷酸盐缓冲液（７３∶２７），三乙胺调节 ｐＨ９，流
速１ｍＬ·ｍｉｎ－１检测波长为２８６ｎｍ及２３０ｎｍ。在
上述条件下，莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的保留
时间分别为５０，６２，８１ｍｉｎ，无杂质干扰，三者分
离良好（图１）。
图１ 莲心总碱中３种生物碱的高效液相色谱图
Ａ莲心碱对照品；Ｂ异莲心碱对照品；Ｃ甲基莲心碱对照品；
Ｄ３种生物碱对照品混合；Ｅ待测提取样品；
１莲心碱；２异莲心碱；３甲基莲心碱
２．２ 溶液配制 对照品溶液：精密称取莲心碱、异
莲心碱、甲基莲心碱对照品适量，用６０％的甲醇水
溶液配制对照品母液，用时再稀释为系列浓度。
待测样品溶液：莲心总碱 Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３（批号
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第３２卷第１７期
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２００２０２０１，２００２０２０２，２００２０２０３）及 Ｓ４，Ｓ５，Ｓ６（批号
２００４０２０１，２００４０２０２，２００４０２０３），Ｓ７，Ｓ８（批 号
２００４０１０１，２００４０１０２），干燥至恒重后分别称取
００１０４０，０００９８０，０００９９０ｇ，用６０％的甲醇水溶液
定容为２５ｍＬ。
２．３ 线性试验 取莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱
标准品母液，用６０％的甲醇水溶液依次稀释配制系
列浓度，使莲心碱质量浓度分别为 １９２，３８４，９６，
１９２，３８４μｇ·ｍＬ－１，异莲心碱分别为１９，３８，９５，１９０，
３８０μｇ·ｍＬ－１，甲基莲心碱分别为２０２，４０４，１０１，
２０２，４０４μｇ·ｍＬ－１。重复进样３次，以对照品质量浓
度Ｘ（μｇ·ｍＬ－１）对色谱峰高的平均值 ｒ作线性回
归，得标准曲线。在２０～７００μｇ·ｍＬ－１线性关系良
好。测定波长为２３０ｎｍ时，回归方程分别为莲心碱
Ｙ＝００００８４４Ｘ＋０８６，ｒ＝０９９９７；异莲心碱 Ｙ＝
００００８４６Ｘ＋３５７，ｒ＝０９９８６；甲基莲心碱Ｙ＝０００１
１５Ｘ＋５３８，ｒ＝０９９８０。测定波长为２８６ｎｍ时，回归
方程分别为莲心碱Ｙ＝０００２３７Ｘ＋６５９，ｒ＝０９９６４；
异莲心碱Ｙ＝０００２４Ｘ＋７５８，ｒ＝０９９６８；甲基莲心
碱Ｙ＝０００３４Ｘ＋１１４６，ｒ＝０９９５４。
２．４ 精密度试验 配制高、中、低３种质量浓度的
对照品溶液各５份，在２８６ｎｍ于同一天连续进样测
定或分５ｄ测定，由回归方程算出相应浓度，计算日
内变异及日间变异。结果见表１。
表１ 精密度试验结果（ｎ＝５）
质量浓度
／μｇ·ｍＬ－１
日内变异ＲＳＤ／％
莲心
碱
异莲
心碱
甲基
莲心碱
日间变异ＲＳＤ／％
莲心
碱
异莲
心碱
甲基
莲心碱
２０ ３４８ ３１４ ３７１ ４７３ ４０３ ４８３
１００ ０３８ ０２４ ０４８ ３０７ ３２６ ３３５
２００ ０９５ ０８７ ０９１ １８３ １５９ １９６
２．５ 加样回收试验 称取已知含量的供试品５份，
分别加入混合对照品溶液，按待测样品的制备方法
操作，测定结果见表２。
表２ 莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的加样回收率（ｎ＝５）
生物碱
样品含量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
连心碱 １７５ １９２ ３６３ ９７９ ２１
异连心碱 １４１ １９０ ３２８ ９８４ １６４
甲基连心碱 ６０４ ４０４ １０００ ９８１ １８５
２．６ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于０，
２，４，６，８，１２，２４ｈ进样测定，其相对保留时间稳定，
测定莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的峰面积，其
ＲＳＤ分别为１０１％，０９８％，１２３％，表明样品在２４
ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 取同一批号样品５分，按照２．２
项下配置供试品溶液，平行进行５次测定，结果莲心
碱、异莲心碱、甲基莲心碱的 ＲＳＤ分别为 １９５％，
１０８％，１２１％，表明重复性良好。
２．８ 不同批次提取的生物碱样品测定结果 将不
同批次提取的生物碱样品分别进样３次，分别在波
长２８６ｎｍ和２３０ｎｍ记录色谱峰高，根据标准曲线
计算浓度，取其平均值，结果显示：２个波长条件下
测得３种生物碱的含量相近。在波长２８６ｎｍ的含
量测定结果见表３。
表３ ２８６ｎｍ处样品生物碱含量 μｇ·ｍＬ－１
样品批号 莲心碱 异莲心碱 甲基莲心碱
２００２２０１ ７００６ ５６２６ ２４１７２
２００２２０２ ６７３３ ５１７８ ２５９８０
２００２２０３ ６２８３ ４９８８ ２２１５１
２００４２０１ ２３５０ ２１７９ ９３２０
２００４２０２ ２４１２ ２２２５ ９０２４
２００４２０３ ２４７７ ２３７０ ８７８３
２００４１０１ ３０２９ ３０２２ １１４２７
２００４１０２ ３０９４ ２９９６ １１５３１
３ 讨论
在色谱柱选择方面，张先洲等［４］采用了正相硅
胶柱，寿国香等［５］采用日本 ＴＯＳＯＨＴＳＫＧＥＬＯＤＳ
８０ＴＭ，与之相比，本法中选择的 ＯＤＳ柱通用性更
强。在流动相选择方面，张先洲等［４］采用的流动相
中二氯甲烷占７０％；而寿国香等［５］采用的流动相除
含甲醇外，还含有冰醋酸、辛烷磺酸钠、乙酸钠等；与
之相比，本法中流动相组分毒性较小，组成更简单。
本研究建立的反相高效液相色谱法能够同时测定莲
子心中三种双苄异奎啉类生物碱，流动相组成较简
单，便于操作，３种生物碱分离完全，重复性好，结果
可靠。本实验采用二极管阵列检测器，可以方便的
进行紫外扫描，采用２个波长做线性范围和测定含
量，可以互相印证，更加准确地得出莲心总碱的含
量。在进行结果计算时，曾分别使用峰高和峰面积
定量对浓度进行线性回归，计算回归方程。结果发
现，使用峰高得出的方程相关系数更好，所以采用峰
高定量。
本实验中用到的莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱
对照品由本系植化组提供，经熔点法、薄层法、ＨＰＬＣ
和质谱法认定其纯度大于９５％。其中，采用 ＨＰＬＣ
法进行实验时，曾选择了３种不同比例的流动相，结
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果表明：在不同的流动相条件下，莲心碱、异莲心碱、
甲基莲心碱对照品的主峰均为单一峰，经面积归一
化法计算，３种生物碱对照品的纯度均大于９５％。
采用本法测得２００２年甲醇提取的３批总生物
碱质量分数分别为９２９４％，９１０８％和８５２６％（平
均值为８９７４％），２００４年甲醇提取的二批总生物碱
质量分数分别为 ８７４０％和 ８９６１％，５批平均为
（８９２６±２３）％；同时，测得２００４年乙醇提取的３
批总生物碱质量分数分别为 ６９２４％，６８３０％和
６８１５％，平均值为６８５６％，２种溶剂提取的总生物
碱碱含量相差约２０％，提示莲心总碱的甲醇提取法
较乙醇提取法优。
［参考文献］
［１］ 许 磊，姚崇舜，陈济民．莲心碱的研究概况［Ｊ］．中草药，
２０００，１２：９５６．
［２］ 胡学明．双波长薄层扫描法测定莲心碱注射液含量［Ｊ］．中成
药，１９９２，９：１８．
［３］ 张先洲．紫外分光光度法测定莲心碱的含量［Ｊ］．药物分析杂
志，１９９１，３：１８３．
［４］ 张先洲，胡学明，罗顺德，等．高效液相色谱法测定莲子心中３
种生物碱的含量［Ｊ］．药物分析杂志，１９９７，１７（２）：１１０．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｅｘｆｒａｃｔｓｆｒｏｍ
ＬｏｔｕｓｐｌｕｍｕｌｅｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＺＨＡＯＬｉｂｏ，ＪＩＮＹｏｕ，ＷＡＮＧＪｉａｌｉｎｇ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，ＨｕａｎｇｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｅｘｆｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＬｏ
ｔｕｓｐｌｕｍｕｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ（７３∶２７，ｐＨ９０）ａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２３０ａｎｄ２８６ｎｍ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｗａｓ２０７００μｇ·ｍＬ－１，ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆ
ｔｈｒｅｅａｌｋａｌｏｉｄｓｗｅｒｅ９７９％，９８４％ ａｎｄ９８１％．ＴｈｅＲＳＤｏｆｉｎｔｒａｄａｙａｎｄｉｎｔｅｒｄａｙｗａｓ０２４％４８３％．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆｓａｍ
ｐｌｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌｗａｓｐｒｉｏｒｔｏｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ
ｗｉｔｈａｌｃｏｈｏｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｅｘｆｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍＬｐｌｕｍｕｌｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｌｏｔｕｓｐｌｕｍｕｌｅ；ｔｏｔａｌａｌｄａｌｏｉｄｅｘｔｒａｃｔｓ；ｌｉｅｎｓｉｎｉｎｅ；ｉｓｏｔｉｅｎｓｉｎｉｎｅ；ｎｅｆｅｒｉｎｅ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＲＰＨＰＬＣ
［责任编辑 牛泽宇］
首部中药资源生态学研究专著问世
由中国生态学会中药资源生态专业委员会组织编写的《中药资源生态学研究》一书日前由上海科学技术出版社正式出
版，主编黄璐琦、郭兰萍。
该书为第一部关于中药资源生态学研究的学术专著，全面展示了该领域的最新代表性成果，分为中药资源生态学理论与
方法、中药资源品质形成的生态学研究、中药资源生产的生态学研究及中药资源保护与生态修复４个部分，涉及到当今生态学
研究的诸多热点和难点问题，如环境胁迫、植物自毒、光合生理、菌根问题、空间分析、３Ｓ技术、生态恢复、野生抚育、无土培养、
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术出版社读者服务部联系。
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