全 文 ：多数从晚上２２：００开始一直持续到晚上 ２４：００左
右；第２次产卵一般在０：００～７：００。雌蛾产卵次数
ｌ～５次不等，多数卵集中在第１次和第２次产出，产
卵量一般产第２次时即可产出全部卵的８０％左右。
雌蛾在产卵过程中不断移动身躯，使产出的卵粒分
散在草丛中或掉落在土缝里，雌蛾平均产卵４５０粒
左右，产卵最多可达８００余粒。但多数雌蛾腹内卵
粒不能产尽，死后腹内留有１０～３０粒余卵。
同其他产地一样，小金成虫也无趋光性、趋化
性，不需补充营养。雄蛾交配、雌蛾产卵后大都体力
衰弱、气息奄奄；雌蛾平均寿命８０ｈ，最长达１２０ｈ，
最短为２４ｈ；雄蛾平均寿命７２ｈ，最长１３０ｈ，最短为
３８ｈ。这和四川贡嘎蝠蛾 Ｈ．ｇｏｎｇｇａｅｎｓｉｓ［７１０］相似，
而与云南［１］、西藏［５，６］和甘肃［２４］的研究结果不同。
虫草蝙蝠蛾成虫的寿命是短暂的，然而也是它的生
活史中最紧张、最繁忙的时期。
［参考文献］
［１］　 杨大荣，沈发荣，杨跃雄，等．云南蝠蛾属一新种及生物学特
性研究［Ｊ］．昆虫学报，１９９１，３４（２）：２１８．
［２］　 王　忠，马启龙，马福全，等．玉树蝠蛾生物学特性研究［Ｊ］．
甘肃农业科技，１９９５，（１２）：３８．
［３］　 马启龙，王　忠，马福全．甘肃虫草主要寄主蝠蛾生物学特性
研究［Ｊ］．甘肃农业科技，１９９５，（１２）：３６．
［４］　 王　忠，马启龙，马福全，等．虫草寄主昆虫门源蝠蛾的生物
学特性研究［Ｊ］．甘肃农业科技，２００１，（７）：３８．
［５］　 尹定华，仕江陈，李　黎，等．西藏冬虫夏草寄主比如蝠蛾生
物学特性的研究［Ｊ］．特产研究，２００４，２６（２）：１．
［６］　 陈仕江，尹定华，丹　增，等．中国西藏那曲冬虫夏草的生态
调查［Ｊ］．西南农业大学学报，２００１，２３（４）：２８９．
［７］　 尹定华，付善全，李泉森．贡嘎蝠蛾蛹的生物学特性［Ｊ］．特产
研究，１９９３，（１）：３．
［８］　 尹定华，付善全，罗庆明．虫草蝠蛾羽化、交配和产卵的观察
［Ｊ］．四川动物，１９９２，１１（２）：２１．
［９］　 尹定华，付善全，李泉森．贡嘎蝠蛾幼虫生物学特性的观察
［Ｊ］．昆虫知识，１９９５，３２（５）：２８９．
［１０］　黄天福，博善全，罗庆明．康定贡嘎蝠蛾的生物学特性［Ｊ］．昆
虫学报，１９９２，３５（２）：２５０．
［责任编辑　张宁宁］
［收稿日期］　２００６０１１２
［基金项目］　天津市科委科技攻关项目（０４３１８０９１１）
［通讯作者］　高文远，Ｔｅｌ：（０２２）８７４０１８９５，Ｅｍａｉｌ：ｐｈａｒｍｇａｏ
＠ｔｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
田口试验设计法优选积雪草提取工艺
陈　怡，高文远，于泉林，陈海霞
（天津大学 药物科学与技术学院，天津 ３０００７２）
　　积雪草为伞形科药用植物积雪草Ｃｅｎｔｅｌａａｓｉａｔ
ｉｃａ（Ｌ．）Ｕｒｂａｎ的干燥全草，具有清热解毒、消肿利
湿之功效。临床用于治疗炎症、溃疡、皮肤病、促进
伤口愈合，静脉功能不全等［１，２］。最近的研究表明
其提取物具有抗肿瘤、抗氧化及免疫调节的活
性［３５］。积雪草含有丰富的五环三萜类化合物［６］，
如积雪草苷、羟基积雪草苷等，其中积雪草苷被认为
具有很强的药理活性并作为评价积雪草质量的指
标［７９］。陈瑶等［１０］以积雪草总苷为考察指标对积雪
草的提取工艺进行研究，该指标不能较好地反应其
活性成分积雪草苷的含量。作者采用田口试验设计
优选积雪草乙醇提取工艺，以积雪草苷含量及积雪
草苷转移率为考察指标，综合评分优选提取工艺，为
工业生产提供依据。
１　仪器与材料
ＳＨＩＭＡＤＺＵ高效液相色谱仪（ＳＰＤ－１０Ａｖｐ检
测器，ＬＣ－１０ＡＴｖｐ泵），ＳａｒｔｏｒｉｕｓＢＰ２１１Ｄ型电子分
析天平（００１ｍｇ），ＫＱ１００－Ｂ超声波清洗器（昆山
市超声仪器有限公司）。
积雪草药材购自河北霸州药材公司，经天津大
学中药学系高文远教授鉴定；积雪草苷对照品（批
号１１０８９２２００４０３）购自天津市药品检验所；乙醇为
食用级，乙酸为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯；水为超
纯水。
２　方法与结果
２．１　试验因素水平
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田口试验设计是利用正交表挑选试验条件、安
排试验的方法。其设计过程分３个阶段，即：系统设
计、参数设计和容差设计。其中重点是参数设计，而
参数设计的重点是稳定性设计。常采用信噪比（Ｓ／
Ｎ）作为衡量稳定性好坏的指标。该试验设计方法
的优点是成功地运用内正交表和外正交表相结合的
方法进行试验或计算，并以信噪比作为质量评价指
标，以寻求最优的稳定性好的参数组合［１１］。
根据积雪草的理化性质与预试验结果，提取次
数以２次为佳，另外设定乙醇浓度、提取方法、提取
时间３因素３水平表，见表１。以积雪草苷含量及
积雪草苷转移率为考察指标，将积雪草苷转移率的
信噪比值作为质量评价指标，计算公式为 η＝－
１０ｌｏｇσ２，其中η为信噪比（Ｓ／Ｎ），本实验取望大值，
即数值越大越好；σ２为方差。
转移 率 ＝药材量×浸膏收率×浸膏积雪草苷含量药材量×药材中积雪草苷含量 ×
１００％
表１　因素水平
水平
Ａ
乙醇体积分数／％
Ｂ
提取方法
Ｃ
提取时间／ｈ
１ ６０ 超声 １＋１
２ ７５ 回流 ３＋３
３ ９５ 浸泡 ５＋５
２．２　积雪草苷含量测定
２．２．１　色谱条件　ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８分析柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈水（２８∶７２），柱温２５℃，
流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２０５ｎｍ，进样量２０μＬ。
在此条件下，供试品中积雪草苷峰与其他峰能达到基
线分离，积雪草苷色谱峰的保留时间约为９ｍｉｎ。
２．２．２　线性关系考察　精密称取积雪草苷对照品
７７２ｍｇ，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，得
对照品贮备液；以此为母液，分别精密吸取 ０２，
０４，０６，０８，１０，１２ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，甲醇稀
释至刻度，混匀。用微量进样器吸取上述对照品溶
液各２０μＬ，注入液相色谱仪，测定，以质量浓度为
横坐标（Ｃ），峰面积（Ａ）为纵坐标，得回归程 Ｙ＝
２２０３９６５１８Ｘ－９３０５７８８７，ｒ＝０９９９６，表明积雪
草苷在１４４４～９２６４μｇ·ｍＬ－１线性关系良好。
２．２．３　精密度试验　取积雪草苷对照品溶液，连续
进样５次，每次进样２０μＬ，测定积雪草苷色谱峰面
积积分值，结果ＲＳＤ０７％（ｎ＝５）。
２．２．４　重复性试验　取同一批供试品溶液５份，按
上述色谱条件平行测定５次积雪草苷峰面积积分
值，ＲＳＤ３７％（ｎ＝５）。
２．２．５　回收率试验　精密称取已知含量（１２９ｍｇ
·ｇ－１）的积雪草药材约１ｇ，平行５份，分别精密加
入２．２．２项下的积雪草苷对照品溶液（０７７２ｍｇ·
ｍＬ－１）１５ｍＬ，按含量测定方法操作，计算，结果平
均回收率为１０１２％，ＲＳＤ为２４％，见表２。
表２　积雪草苷加样回收率
取样量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
１２８ ２４１ ９８７ １０１２ ２４
１２５ ２３７ ９８４ 　 　
１３２ ２５５ １０２８ 　 　
１３１ ２５６ １０３５ 　 　
１２１ ２４３ １０２４ 　 　
　　注：加入量为１１６ｍｇ。
２．３　供试品溶液制备及含量测定
２．３．１　药材中积雪草苷含量　称取积雪草粉末２０
ｇ，用７５％乙醇４００ｍＬ，超声提取１ｈ，滤过，滤液经
０４５μｍ微孔滤膜过滤，按上述色谱条件测定含量，
结果积雪草苷质量分数１２９ｍｇ·ｇ－１。
２．３．２　积雪草浸膏收率及积雪草苷含量　积雪草
药材４０℃烘干，粉碎成粗粉，精密称取各约２０ｇ的
药材９份，每份用２００ｍＬ乙醇，按表１设计９种工
艺进行提取。提取液滤过，减压蒸干，置烘箱内１０５
℃干燥至恒重，取出置干燥器内冷却３０ｍｉｎ，迅速精
密称定质量。积雪草浸膏用甲醇溶解，置１００ｍＬ量
瓶中定容，ＲＰＨＰＬＣ进行含量测定。
２．４　田口试验设计与结果分析
称取积雪草粉末２０ｇ９份，每份用２００ｍＬ不同
含量乙醇，按表１设计９种工艺进行提取。分别测
定积雪草浸膏中积雪草苷含量及浸膏收率。计算积
雪草苷转移率，以其 Ｓ／Ｎ为评价指标，综合优选提
取工艺。结果见表３，４。
表３结果说明，Ｓ／Ｎ最大值的工艺参数组合为
Ａ２Ｂ２Ｃ３，即７５％乙醇回流提取３ｈ。
表４结果说明，各因素对提取效果的影响程度
依次为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，即提取溶剂浓度 ＞提取时间 ＞提
取方法。同时还说明，在所选因素水平范围内，最佳
提取参数组合为Ａ２Ｂ２Ｃ１，即７５％乙醇回流提取１ｈ。
由于已做实验中没有上述提取条件的数据结果，故
使用Ｍｉｎｉｔａｂ预测Ａ２Ｂ２Ｃ１提取条件下积雪草苷转移
率，理想最佳值为７６９％。
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表３　田口试验设计与结果
Ｎｏ． Ａ Ｂ Ｃ
积雪草苷
／ｍｇ·ｇ－１
积雪草浸膏
收率／％
积雪草苷
转移率／％
信噪比
１ １ １ １ ２８９ ２３５ ５２６ ３４４２
２ １ ２ ２ ２００ ２９６ ４５９ ３３２４
３ １ ３ ３ ２４３ ２７２ ５１２ ３４１９
４ ２ １ ２ ３１２ ２３１ ５５９ ３４９５
５ ２ ２ ３ ３３２ ２９４ ７５５ ３７５６
６ ２ ３ １ ３０６ ２５０ ５９３ ３５４６
７ ３ １ ３ ３３９ １５４ ４０５ ３２１５
８ ３ ２ １ ３８７ １９２ ５７６ ３５２１
９ ３ ３ ２ ３１０ １０１ ２４３ ２７７１
表４　因素水平信噪比结果
水平 Ａ Ｂ Ｃ
１ ３３９５ ３３８４ ３５０３
２ ３５９９ ３５３３ ３１９７
３ ３１６９ ３２４５ ３４６３
极差 ４３０ ２８８ ３０６
排序 １ ３ ２
２．５　工艺验证
对提取工艺条件 Ａ２Ｂ２Ｃ１，进行试验验证，得积
雪草苷转移率为７２３％（ｎ＝３）与预测值接近，优于
Ａ２Ｂ２Ｃ３，达到了验证的效果。
３　讨论
田口试验设计常应用于产品设计、工艺设计和
技术开发阶段，提高产品设计质量，降低成本，缩短
研制开发周期，适用于汽车、机械、航空航天、化工、
冶金、电子、光学、医药、生化、农业等领域。田口试
验设计是一种部分设计法，因而可以用较少的组合
评估较多的试验因素［１２］，减少试验次数，提高效率。
较之正交试验，田口试验设计需要对影响输出特性
的因素进行分类，按其在系统中所起的作用分为４
类：可控因素，标示因素，信号因素和误差因素。在
内正交表上安排可控因素和标示因素，而在外正交
表上安排信号因素和误差因素。稳定性设计首先考
虑的是改善系统的 Ｓ／Ｎ，使系统输出的波动减少到
最低程度，然后在目标给定时特性值调整到目标
值［１１］，使之既精密又准确。
本研究按照田口试验参数设计方法设计了 Ｌ９
实验矩阵，使用 Ｓ／Ｎ来衡量质量水平，考察提取溶
剂、提取方法、提取时间对积雪草苷提取工艺的影
响。本实验采用田口方法，以积雪草中主要活性成
分积雪草苷含量和转移率为考察指标，以积雪草苷
转移率信噪比值为评价指标，优选出的最佳提取工
艺条件为７５％乙醇回流提取１ｈ，积雪草苷转移率
为７２３％，优于已报道的研究结果。田口设计以正
交表为工具安排试验方案，将试验后的试验数据
（Ｓ／Ｎ或灵敏度）进行方差分析。通过统计分析可
以确定试验指标的最优参数组合条件。因此，由该
方法优选的积雪草提取工艺切实可行，可在工业生
产上加以应用。
［参考文献］
［１］　 ＢｒｉｎｋｈａｕｓＢ，ＬｉｎｄｎｅｒＭ，ＳｃｈｕｐｐａｎＤ，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ，ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｆｉｌｅｏｆｔｈｅＥａｓｔＡｓｉａｎｍｅｄｉｃａｌｐｌａｎｔ
Ｃｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０００，７（５）：４２７．
［２］　 ＣｈｅｎｇＣＬ，ＧｕｏＪＳ，ＬｕｋＪ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｈｅａｌｉｎｇｅｆｅｃｔｓｏｆＣｅｎｔｅｌ
ｌａｅｘｔｒａｃｔａｎｄａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅｏｎａｃｅｔｉｃａｃｉｄｉｎｄｕｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｕｌｃｅｒｓｉｎ
ｒａｔｓ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｃｉ，２００４，７４：２２３７．
［３］　 ＢｕｎｐｏＰ，ＫａｔａｏｋａＫ，ＡｒｉｍｏｃｈｉＨ，ｅｔａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆ
Ｃｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａｏｎａｚｏｘｙｍｅｔｈａｎｅｉｎｄｕｃｅｄａｂｅｒａｎｔｃｒｙｐｔｆｏｃｕｓ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｃａｒｅｉｎｏｇｅｎｓｉｓｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅｓｏｆＦ３４４ｒａｔｓ［Ｊ］．
ＦｏｏｄＣｈｅｍＴｏｘｉｃｏｌ，２００４，４２（１２）：１９８７．
［４］　 ＳｕｂａｔｈｒａＭ，ＳｈｉｌａＳ，ＤｅｖｉＭＡ，ｅｔａｌ．ＥｍｅｒｇｉｎｇｒｏｌｅｏｆＣｅｎｔｅｌａ
ａｓｉａｔｉｃａｉｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇａｇｅｒｅｌａｔｅｄｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓ
［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＧｅｒｏｎｔｏｌ，２００５，４０：７０７．
［５］　 ＪａｙａｔｈｉｒｔｈａＭＧ，ＭｉｓｈｒａＳＨ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙａｃ
ｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａａｎｄＣｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ
［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００４，１１（４）：３６１．
［６］　 ＫｕｒｏｄａＭ．ＦｉｖｅｎｅｗｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｆｒｏｍＣｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ
［Ｊ］．ＮａｔｕｒａｌＭｅｄ，２００ｌ，５５（３）：ｌ３４．
［７］　 ＧｎａｎｐｒａｇａｓａｍＡ，ＫｕｍａｒＥｂｅｎｅｚａｒＫ，ＳａｔｈｉｓｈＶ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｃ
ｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆＣｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｔｉｓｓｕｅｄｅｆｅｎｓｅｓｙｓｔｅｍ
ａｇａｉｎｓｔａｄｒｉａｍｙｃｉｎｉｎｄｕｃｅｄｃａｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｃｉ，
２００４，７６：５８５．
［８］　 ＪａｙａｓｈｒｅｅＧ，ＫｕｒｕｐＭｕｒａｌｅｅｄｈａｒａＧ，ＳｕｄａｒｓｌａｌＳ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉ
ｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａｏｎｌｙｍｐｈｏｍａｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅ
［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２００３，７４：４３１．
［９］　ＺａｉｎｏｌＭＫ，ＡｂｄＨａｍｉｄＡ，ＹｏｕｓｏｌＳ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉ
ｔｙａｎｄｔｏｔａｌｐｈｅｎｏｌｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓｏｆｌｅａｆ，ｒｏｏｔａｎｄｐｅｔｉｏｌｅｆｏｆｏｕｒ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓｏｆＣｅｎｔｅｌａａｓｉａｔｉｃａ（Ｌ．）Ｕｒｂａｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍ，
２００３，８１：５７５．
［１０］　陈　瑶，韩　婷，秦路平，等．正交设计法优选积雪草总苷的
提取工艺［Ｊ］．中药材，２００３，２６（３）：２０４．
［１１］　张公绪，孙　静．质量工程师手册［Ｍ］．２版．北京：企业管理
出版社，２００３：１９６．
［１２］　张　驰．六西格玛试验设计［Ｍ］．广州：广东经济出版社，
２００３：３１１．
［责任编辑　鲍　雷］
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