全 文 ：ＥｆｅｃｔｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｃｏｍｐｏｕｎｄｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｎｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆ
ｗｅｉｇｈｔｌｅｓｓｎｅｓｓｒａｔｓｓｉｍｕｌａｔｅｄｂｙｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ＴＯＮＧＨａｉｙｉｎｇ，ＨＵＳｕｍｉｎ，ＺＨＯＵＰｅｎｇ，ＦＵＱｉａｎ，ＹＡＮＧＪｉａ，ＧＡＯＸｕｅｍｉｎ，ＺＨＡＮＧＪｉａｎｊｕｎ，ＺＨＯＮＧＧａｎｓｈｅｎｇ
（ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｏｎｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｗｅｉｇｈｔｌｅｓｓｎｅｓｓｒａｔｓｓｉｍｕｌａｔｅｄ
ｂｙｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎＭｅｔｈｏｄ：ＦｉｆｔｙＷｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ５ｇｒｏｕｐｓｒａｎｄｏｍｌｙ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄｌｏｗｄｏｅｓ，ｍｅｄｉ
ｕｍｄｏｓｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｅｓｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｐｅｒｉｏｄｌａｓｔｅｄ２１ｄａｙｓＡｆｔｅｒｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｃｏｍｐｏｕｎｄｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｔｉｌｅｄｗａ
ｔｅｒｗｅｒｅｏｒａｌｙｇｉｖｅｎｔｏｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｆｏｒ７ｄａｙｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｐｅｒ
ｆｏｒｍｅｄｆｏｒｔｒｅａｔｅｄａｎｄｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅｃｏｍｐｏｕｎｄｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒｓｔｉｌｌａｓｔｅｄｕｎｔｉｌｔｈｅ
ｅｎｄｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔＢｌｏｏｄｓｅｒｕｍｗａｓｃｏｌｅｃｔｅｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＬＰ），ｂｏｎｅｇｌａｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＧＰ），ｔａｒｔｒａｔｅ
ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＴＲＡＰ），ｆｅｍｏｒａｌｂｏｎｅＨＯＰＴｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｂｏｎｅｍｉｎｅｒａｌｄｅｎｓｉｔｙ（ＢＭＤ）ｏｆｆｅｍｏｒａｌｂｏｎｅａｎｄｌｕｍｂａｒｖｅｒｔｅ
ｂｒａｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅＲｅｓｕｌｔ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＡＬＰｌｅｖｅｌｏｆｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｍａｒｋｅｄｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５），ｎｏｃｈａｎｇｅ
ｏｆＢＧＰ，ＴＲＡＰｗａｓｎｏｔｏｂｓｅｒｖｅｄ，ｔｈｅＢＭＤｏｆｆｅｍｏｒａｌｂｏｎｅａｎｄｌｕｍｂａｒｖｅｒｔｅｂｒａｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｒｅｍａｒｋａｂｌｙ（Ｐ＜００５），Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ
ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆＡＬＰｌｅｖｅｌｏｆｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｗａｓｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｆｏｒａｌｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅＢＧＰｌｅｖｅｌａｎｄＢＭＤｆｏｒｍｅｄｉｕｍ
ｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５），ｔｈｅＴＲＡＰｌｅｖｅｌｆｏｒｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｅｓｇｒｏｕｐｓｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５）
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＣｈｉｎｅｓｅｃｏｍｐｏｕｎｄｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｂｏｎｅｌｏｓｓｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｂｏｎｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ
ａｎｄｉｍｐｒｏｖｉｎｇｏｓｓｉｆｙ，ｂｏｎｅｍｉｎｅｒａｌｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｓｗｅｌａｓｉｎｃｒｅａｓｉｎｇＢＭＤ，ｗｈｉｃｈｌｅａｄｓｔｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ
ｂｏｎｅｌｏｓｓ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄ；ｗｅｉｇｈｔｌｅｓｓｎｅｓｓｓｉｍｕｌａｔｅｄｂｙｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ；ＡＬＰ；ＢＧＰ；ＴＲＡＰ；ＨＯＰ；ＢＭＤ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０８３０
［通讯作者］ 王岚，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９４８，Ｅｍａｉｌ：ｗｌｌｌ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的
保护作用及机制研究
叶锦霞，王 岚，梁日欣，杨 滨
（中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：观察没食子儿茶素没食子酸酯（ＧＣＧ）和表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）对体外培养大鼠乳
鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法：建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损
伤模型，倒置显微镜下观察加入各儿茶素单体（５０，２０，８μｇ·ｍＬ－１）后，各组缺氧再给氧前后细胞形态学和搏动频率
变化；以ＭＴＴ法检测各组细胞的存活率；测定细胞上清液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过
氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量；测定心肌细胞膜ＡＴＰ酶；分别给予蛋白激酶（ＰＫＣ）阻断剂十字孢碱
ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ｓｔａｕ，１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）和Ｇｉ／ｏ蛋白失活剂ｐｅｒｔｕｓｓｉｓｔｏｘｉｎ（ＰＴＸ，２００μｇ·ｍＬ－１），以探讨其作用机制。结果：
ＧＣＧ，ＥＧＣＧ均能够增加心肌细胞存活率，增加ＳＯＤ和ＡＴＰ酶活性，降低心肌细胞ＬＤＨ的释放，降低培养液中ＭＤＡ
的含量，给予ＰＫＣ阻断剂和Ｇｉ／ｏ蛋白失活剂后，与单纯ＧＣＧ组、ＥＧＣＧ组比较，心肌细胞搏动频率和存活率降低，同
时ＬＤＨ，ＭＤＡ释放量增加，ＳＯＤ活性下降。结论：ＧＣＧ和ＥＧＣＧ具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤
·１０８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
的作用，其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细胞Ｃａ２＋超载以及心肌细胞蛋白激酶Ｃ和Ｇ蛋白的介导有关。
［关键词］ 儿茶素单体；心肌细胞；缺氧再给氧；蛋白激酶；Ｇ蛋白
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０８０１０５
儿茶素是茶多酚类的主要成分，属黄烷醇类。
药理研究证明［１５］，儿茶素类化合物具有明显的清除
体内自由基、阻断 Ｎ亚硝基化合物形成、抑制脂氧
合酶活性和脂质过氧化物作用，并有防突变、防癌等
药理活性。本研究采用体外培养的心肌细胞缺氧再
给氧损伤模型，观察儿茶素的２种单体成分，没食子
儿茶素没食子酸酯（ＧＣＧ）、表没食子儿茶素没食子
酸酯（ＥＧＣＧ）对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再
给氧损伤的保护作用及机制。
１ 材料
１．１ 动物
出生１～３ｄ的 ＳＤ大鼠乳鼠，由北京维通利华
实验动物技术有限公司提供，动物饲养合格证号
ＳＣＸＫ２００４０００５。
１．２ 仪器
ＭＣＯ－１５ＡＣ型 ＣＯ２培养箱（日本 ＳＡＮＹＯ公
司）；超净工作台（北京半导体设备一厂）；ＭＫ型倒
置显微镜（澳大利亚 ＯＬＹＭＰＵＳ公司）；Ｈ２Ｓ－Ｈ型
恒温水浴振荡器（哈尔滨东联电子技术开发有限公
司）；ＬＤＺ４－０８型离心机（北京医用离心机厂）；
４５０型酶联免疫检测仪（日本ＢＩＯＲＡＤ产品）。
１．３ 试剂和药品
没食子儿茶素没食子酸酯［（－）ｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ
ｇａｌａｔｅ，ＧＣＧ，批号０１４Ｋ１２９７］，表没食子儿茶素没食
子酸酯［（－）ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌａｔｅ，ＥＧＣＧ，批号
０９３Ｋ１５２６］，蛋白激酶 Ｃ（ＰＫＣ）阻断剂 ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ
（ｓｔａｕ）（批号 ８０Ｋ１４９０），Ｇｉ／ｏ蛋白失活剂 ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ
ｔｏｘｉｎ（批号５０Ｋ４０２７），噻唑蓝（ＭＴＴ，批号ＭＴ２１２８），
５溴脱氧尿嘧啶（５Ｂｒｄｕ，批号０５３Ｋ１１２０），均为Ｓｉｇ
ｍａ公司产品；ＤＭＥＭ培养基、新生小牛血清（ＮＢＳ），
均为美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司产品；丙二醛（ＭＤＡ）、乳酸脱
氢酶（ＬＤＨ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）测定试剂盒，
均为南京建成生物工程研究所产品。
２ 方法
２．１ 大鼠乳鼠心肌细胞原代培养［６１０］
无菌取出生１～３ｄ的 ＳＤ乳鼠心尖部组织，将
心室肌剪成约 １ｍｍ３大小的碎块后，以适量不含
Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋的００６％胰蛋白酶消化制成细胞悬液，
１０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，洗３次。用含２０％（体
积分数）新生牛血清、１００Ｕ·ｍＬ－１青、链霉素的
ＤＭＥＭ培养基于３７℃，５％ＣＯ２饱和湿度条件下培
养２ｈ，以差速贴壁分离法纯化心肌细胞。以细胞密
度为１×１０６个／ｍＬ接种于２５ｍＬ培养瓶中。培养
４８ｈ后换液，加入含２０％新生牛血清的ＤＭＥＭ常规
培养基培养，培养第５天用于实验。
２．２ 缺氧复氧模型的建立
参照Ｌａｓｓｒｓｅ［１０］等的方法。取培养有心肌细胞
的培养瓶，去除培养基，加入事先用 ９５％Ｎ２＋５％
ＣＯ２饱和的无血清 ＤＭＥＭ培养基，置于一低氧小盒
中（以１Ｌ·ｍｉｎ－１的流量向盒内持续充入９５％Ｎ２＋
５％ＣＯ２，氧浓度小于０１％，３７℃），孵育３ｈ，再放
回９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２的二氧化碳培养箱中，孵育１ｈ。
２．３ 分组
２．３．１ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对心肌细胞搏动频率、存活率、心
肌酶学的影响 实验分为８组，每组６瓶，①正常组：
心肌细胞不做任何处理；②模型组：缺氧３ｈ，复氧１
ｈ；③药物组：缺氧３ｈ，复氧１ｈ，同时分别加 ＧＣＧ，
ＥＧＣＧ（５０，２０，８μｇ·ｍＬ－１）３个剂量组。观察指标：
镜下观察心肌细胞形态学变化、搏动频率及存活率，
收集上层培养液，备测ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＬＤＨ，ＧＳＨＰｘ。
２．３．２ 蛋白激酶（ＰＫＣ）和 Ｇｉ／ｏ蛋白介导对 ＧＣＧ，
ＥＧＣＧ保护心肌细胞缺氧再给氧损伤的影响 实验
分为８组，每组６瓶，①正常组：心肌细胞不做任何处
理；②模型组：缺氧３ｈ，复氧１ｈ；③ＧＣＧ组：缺氧３ｈ
及再给氧１ｈ中均给予ＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）；④ＥＧＣＧ
组：缺氧３ｈ及再给氧１ｈ中均给予ＥＧＣＧ（２０μｇ·
ｍＬ－１）；⑤ＧＣＧ＋ｓｔａｕ组：在给予ＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）
前以ＰＫＣ阻断剂 ｓｔａｕ（１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）处理细胞１０
ｍｉｎ，其余条件同③；⑥ＧＣＧ＋ＰＴＸ组：在给予ＧＣＧ（２０
μｇ·ｍＬ－１）前以 Ｇｉ／ｏ蛋白失活剂 ＰＴＸ（２００μｇ·
ｍＬ－１）处理细胞５ｈ，其余条件同③；⑦ＥＧＣＧ＋ｓｔａｕ
组：在给予 ＥＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）前以 ＰＫＣ阻断剂
ｓｔａｕ（１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）处理细胞１０ｍｉｎ，其余条件同④；
⑧ＥＧＣＧ＋ＰＴＸ组：在给予ＥＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）前以
Ｇｉ／ｏ蛋白失活剂ＰＴＸ（２００μｇ·ｍＬ－１）处理细胞５ｈ，
其余条件同④。观察指标：镜下观察心肌细胞形态学
·２０８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
变化、搏动频率及存活率，收集上层培养液，备测
ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＬＤＨ，ＧＳＨＰｘ。
２．３．３ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对缺氧再给氧损伤大鼠乳鼠心
肌细胞膜内ＡＴＰ酶的影响［１１］ 实验分为４组，每组
６瓶：①正常组：心肌细胞不做任何处理；②模型组：
缺氧３ｈ，复氧１ｈ；③ＧＣＧ组：缺氧３ｈ及再给氧１ｈ
中均给予 ＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）；④ＥＧＣＧ组：缺氧３
ｈ及再给氧１ｈ中均给予ＥＧＣＧ（２０μｇ·ｍＬ－１）。复
氧１ｈ后用ＰＢＳ液轻轻冲洗细胞２遍，加适量生理
盐水，用细胞刮取器刮取细胞样本，离心，弃上清，用
生理盐水稀释成细胞密度为０１～０５×１０５个／μＬ
的细胞悬液，置冰浴中超声破碎细胞。用处理好的
细胞悬液测定 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶与 Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＡＴＰ
酶，同时用考马斯亮蓝测定细胞悬液蛋白。
２．４ 统计方法
应用ＳＰＳＳ１１０统计软件，数据以珋ｘ±ｓ表示，多
组间比较使用单因素方差分析。
３ 结果
３．１ 心肌细胞一般形态学变化
显微镜下观察显示，模型组心肌细胞与正常组
比较发生了明显的形态改变，表现为胞浆空泡形成，
胞浆颗粒形成，细胞膜伪足收缩或消失，细胞折光率
下降，异形心肌细胞数目增加并有大量细胞死亡，搏
动幅度减弱，节律不齐，频率减慢；而ＧＣＧ，ＥＧＣＧ的
高、中、低各剂量组细胞形态变化均未及模型组明
显，且死亡细胞明显减少。
３．２ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对心肌细胞搏动频率和存活率的
影响
结果显示模型组心肌细胞搏动频率和存活率，
与正常对照组比较明显降低，有显著性差异（Ｐ＜
００１），ＧＣＧ，ＥＧＣＧ２种单体药物的高、中、低各剂
量组均能不同程度地提高细胞存活率，改善受损心
肌细胞的搏动情况，提高受损心肌细胞的搏动频率
并趋于正常搏动频率，与模型组比较具有显著性差
异（Ｐ＜００１）。见表１。
３．３ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对心肌细胞缺氧再给氧损伤时培
养基中ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＬＤＨ，ＧＳＨＰｘ的影响
研究结果显示，模型组与正常组比较，心肌细胞
在培养基中的 ＭＤＡ，ＬＤＨ释放明显增多，培养基中
ＳＯＤ，ＧＳＨＰｘ活性显著降低（Ｐ＜００１）；ＧＣＧ，ＥＧＣＧ
２种药物的高、中、低各个剂量组对缺氧再给氧引起
损伤的心肌细胞在培养基中ＭＤＡ，ＬＤＨ释放量具有
不同程度的降低作用，与模型组比较有显著性差异
（Ｐ＜００１）；且能不同程度地提高心肌细胞培养基
中ＳＯＤ，ＧＳＨＰｘ的活性，与模型组比较有显著性差
异（Ｐ＜００１）。见表２。
表１ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤时搏动频率和存活率（Ａ）的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／μｇ·ｍＬ－１
心肌细胞搏动频率／ｂｐｍ
缺氧前 再给氧后
细胞存活率
正常 － ９６１３±６２４ ９６８８±５４６２） ０３０７±００２３０２）
模型 － ９８６３±５８０ ５７３８±９９７ ０１７１±００１３４２）
ＧＣＧ ５０ ９７６３±５１３ ８８００±５０７２） ０２２４±０００９０２）
２０ ９８６３±４０３ ９０７５±５６５２） ０１９９±０００９６２）
８ ９７２５±５６５ ８０５０±１１３３２） ０１４９±００４３３
ＥＧＣＧ ５０ ９９１３±５３８ ８８３８±５７３２） ０３２２±００２００２）
２０ ９５５０±５６３ ９２６３±４２４２） ０２２２±００４０３２）
８ ９８１３±５１１ ８５１３±７５５２） ０２１９±００１５５２）
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５；２）Ｐ＜００１（表２同）
表２ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤时培养基中ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＬＤＨ，ＧＳＨＰｘ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 剂量／μｇ·ｍＬ－１ ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·ｍＬ－１ ＳＯＤ／Ｕ·ｍＬ－１ ＬＤＨ／Ｕ·Ｌ－１ ＧＳＨＰｘ／Ｕ·ｍＬ－１
正常 － ２２８±０８６２） ７５０±１２９２） １２６８８±２９８９２） １１２５０±２８５９２）
模型 － ８２４±１１６ ２７６±１５６ ２１６０１±１３３９ ６３７２±６３１
ＧＣＧ ５０ ３５１±０３１２） ９３６±０６０２） １７００１±２９５３２） ９１４２±６２７２）
２０ ２８２±０１８２） ７９９±０５１２） １６１９９±１６１０２） ８２８７±７３１２）
８ ３１５±０８３２） ５８５±１０１２） １１５１１±４７４２２） ８２２４±４３４２）
ＥＧＣＧ ５０ ２８７±０２９２） ８５３±０８７２） １４４２８±４４２２２） ８４７１±１４９０２）
２０ ２３９±０３９２） ７６４±０９３２） １３８４６±１７８３２） ８５４９±２２４６１）
８ ２６８±０９５２） ６２６±１３８２） １７８８３±２８８２２） ５９４９±９０４
３．４ 蛋白激酶（ＰＫＣ）和 Ｇｉ／ｏ蛋白介导对 ＧＣＧ， ＥＧＣＧ保护心肌细胞缺氧再给氧损伤的影响
·３０８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
心肌细胞经 ｓｔａｕ和 ＰＴＸ处理后，再用 ＧＣＧ，
ＥＧＣＧ处理，即ＧＣＧ＋ｓｔａｕ组、ＧＣＧ＋ＰＴＸ组、ＥＧＣＧ
＋ｓｔａｕ组、ＥＧＣＧ＋ＰＴＸ组与单纯 ＧＣＧ，ＥＧＣＧ处
理，即ＧＣＧ组、ＥＧＣＧ组比较，心肌细胞搏动频率和
存活率降低，同时 ＬＤＨ，ＭＤＡ释放量增加，ＳＯＤ活
性下降；但这４个组与模型组比较，细胞搏动频率和
存活率明显提高，ＬＤＨ，ＭＤＡ释放量减少，细胞 ＳＯＤ
活性提高，见表３，４。
表３ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ，ＰＴＸ和ｓｔａｕ对大鼠乳鼠心肌细胞搏动（ｂｐｍ）和存活率（Ａ）的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 剂量／μｇ·ｍＬ－１
心肌细胞搏动频率／ｂｐｍ
缺氧前 再给氧后
细胞存活率
正常 － ９３６７±５５７ ９６９２±５２１２） ０３３９±００８０２）
模型 － ９４６７±６２１ ５８３３±８２６ ０１８９±００１７
ＧＣＧ ２０ ９５４２±６９５ ８３００±３９８２） ０３２３±００２８２）
ＥＧＣＧ ２０ ９４５０±７３４ ８１２５±４９６２） ０３６４±００１９２）
ＧＣＧ＋ｓｔａｕ７） ２０＋１０ ９６００±６３２ ７６０８±７３３２，４） ０２９６±００３２２，３）
ＧＣＧ＋ＰＴＸ ２０＋２００ ９４００±６３１ ７８７５±４７７２，３） ０３３３±００１８２）
ＥＧＣＧ＋ｓｔａｕ７） ２０＋１０ ９４１７±４８６ ７８６７±４２５２） ０３０３±００１８２６）
ＥＧＣＧ＋ＰＴＸ ２０＋２００ ９５３３±４６４ ７５７５±４７５２，５） ０３３８±００３６２，５）
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１；与ＧＣＧ组比较３）Ｐ＜００５，４）Ｐ＜００１；与 ＥＧＣＧ组比较５）Ｐ＜００５，６）Ｐ＜００１；７）单位为 ｎｍｏｌ·
Ｌ－１（表４同）
表４ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ，ＰＴＸ和ｓｔａｕ对大鼠乳鼠心肌细胞培养基中ＭＤＡ，ＬＤＨ，ＳＯＤ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 剂量／μｇ·ｍＬ－１ ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·ｍＬ－１ ＬＤＨ／Ｕ·Ｌ－１ ＳＯＤ／Ｕ·ｍＬ－１
正常 － ２９７±０６６２） １４０４７±３５１３２） ６０７±０９６２）
模型 － ６７４±１８６ ２２７９６±３７７４ ２０５±０９６
ＧＣＧ ２０ ３８０±０４６２） １０１８９±４１８２２） ６３４±１３５２）
ＥＧＣＧ ２０ ３６３±０８５２） １５７４０±３２６０２） ８２９±０６６２）
ＧＣＧ＋ｓｔａｕ７） ２０＋１０ ４２５±０５４２，３） １７０８９±３９７８２，４） ４９８±０８４２，４）
ＧＣＧ＋ＰＴＸ ２０＋２００ ４０９±０４１２） １４５２２±４９３９２，３） ６４０±０６３２）
ＥＧＣＧ＋ｓｔａｕ７） ２０＋１０ ４２５±０４５２，５） １３０３０±３８４７２） ７４４±０９５２，５）
ＥＧＣＧ＋ＰＴＸ ２０＋２００ ４５３±０６３２，６） １８８１９±３２３８２，５） ６５２±０９４２，６）
３．５ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对缺氧再给氧损伤大鼠乳鼠心肌
细胞膜内ＡＴＰ酶的影响
模型组在缺氧３ｈ再给氧１ｈ后，心肌细胞膜上
的 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶与 Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性与正
常组比较明显降低（Ｐ＜００１），ＧＣＧ，ＥＧＣＧ可以明
显提高受损心肌细胞膜上 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶与 Ｃａ２＋
Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性。见表５。
表５ ＧＣＧ，ＥＧＣＧ对缺氧再给氧损伤心肌细胞
ＡＴＰ酶的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／μｇ·ｍＬ－１
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶
／μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１
Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶
／μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１
正常 － ０２７７±００３２２） ０４０３±００１４２）
模型 － ０１０５±００２０ ０２３４±００３３
ＧＣＧ ２０ ０２０３±００２１２） ０３２１±００３３２）
ＥＧＣＧ ２０ ０１７４±００５８１） ０３０８±００４２２）
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
４ 讨论
许多研究证实，心脏缺血再灌注可产生大量氧
自由基，导致细胞损伤。利用体外培养的心肌细胞
缺氧再给氧模型，可模拟在体心肌缺血再灌注损
伤，既可使心肌细胞不受邻近细胞的相互作用和生
理反馈机制等因素的影响，又可观察药物对心肌细
胞的直接作用，故选用此方法来观察２种儿茶素单
体对心肌细胞损伤的保护作用。
心肌细胞缺氧与缺氧／再给氧损伤在一定时间
内可引起心肌细胞膜结构和功能的损害，细胞膜通
透性增高，从而导致胞浆酶的释放。本研究观察
ＭＤＡ，ＬＤＨ释放量和培养基中 ＳＯＤ，ＧＳＨＰｘ的活
性，可以反映细胞氧化损伤程度。
正常情况下，心肌细胞膜上的 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶
与Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶等是维持细胞内离子浓度的
关键因素。缺氧再给氧损伤时，心肌细胞膜内 ＡＴＰ
酶活性降低，导致 Ｎａ＋，Ｋ＋，Ｃａ２＋等离子转运失常，
胞内钙超载，心肌细胞严重损伤。本研究结果显示，
儿茶素ＧＣＧ，ＥＧＣＧ能明显提高心肌细胞膜上 Ｎａ＋
Ｋ＋ＡＴＰ酶与 Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶的活性，与模型组
比较有显著性差异。可见儿茶素的这一作用，有效
地抑制了心肌细胞内Ｃａ２＋超载，保护了细胞的结构
和功能。
目前研究表明，许多抗 ＭＩＲＩ的药物发挥其药
理作用与蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和Ｇ蛋白介导的信号传
·４０８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
导途径有着密切的联系，尤其在心肌缺血预处理和
药物预处理中，心肌细胞ＰＫＣ和Ｇ蛋白介导起着关
键的作用。本研究结果显示，用ＰＫＣ阻断剂或Ｇ蛋
白失活剂后，ＥＧＣＧ，ＧＣＧ对心肌细胞缺氧再给氧损
伤的保护作用具有一定程度的减弱，说明儿茶素单
体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用，可能与
ＰＫＣ和Ｇ蛋白介导有关。
综上所述，没食子儿茶素没食子酸酯（ＧＣＧ）和
表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）两种儿茶素单
体具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损
伤的作用，其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细
胞Ｃａ２＋超载以及心肌细胞蛋白激酶 Ｃ（ＰＫＣ）和 Ｇ
蛋白的介导有关。
［参考文献］
［１］ 梁 钢，黄巨恩，张 肃，等．表没食子儿茶素没食子酸酯对
肾缺血再灌注损伤的保护作用［Ｊ］．中国药理学通报，２００３，
１９（１）：９７．
［２］ 胡宗礼，黄晓萍，袁学文．表没食子儿茶素没食子酸酯对心肌
缺血再灌注大鼠心肌酶及超微结构的影响［Ｊ］．中华实用中
西医杂志，２００４，１７（１４）：２０９６．
［３］ 方 芳，韩永晶，崔志清．茶儿茶素对大鼠脑缺血再灌注损伤
的保护作用［Ｊ］．中国中药杂志，２００１，２６（１１）：７７７．
［４］ 方 芳，崔志清，韩永晶．茶儿茶素抗大鼠脑缺血再灌注损伤
与对脑细胞内 Ｃａ２＋的作用［Ｊ］．中国药学杂志，２００３，３８
（１２）：９１７．
［５］ 工兴祥，周利龙，冯义柏，等．超氧阴离子自由基对心肌细胞
的损伤作用［Ｊ］．临床心血管病杂志，２００３，１９（７）：４１０．
［６］ 汪长华．心肌细胞的培养及注意事项［Ｊ］．中国心脏起搏与心
电生理杂志，２００３，１７（３）：２３０．
［７］ 王达理，曾爱萍，南柏松．红花水提物抗自由基保护心肌细胞
的作用［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００１，７（２）：３４．
［８］ 司徒镇强，吴军正．细胞培养［Ｍ］．西安：世界图书出版社西
安公司，２０００：１３８．
［９］ ＢｉｎＹａｎｇ，ＡｋｉｒａＫｔａｎｉ，ＫｅｎｓｕｋｅＡｒａｉ，ｅｔａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆ
ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｃａｔｅｃｈｉｎｓｏｎｔｈｅｉｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎｍｉｃｒｏｓｏｍａｌｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｈｅｍＰｈａｒｍＢｕｌ，２００１，
４９（６）：７４７．
［１０］ ＬａａｒｓｅＶＤＡ，ＨｏｌａａｒＬ，ＶａｌｋＶＤ，ｅｔａｌ．Ｒｅｌｅａｓｅｏｆａｌｐｈａ
ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅｆｒｏｍｎｅｏｎａｔａｌｒａｔｈｅａｒｔｃｕｌｔｕｒｅｓｅｘｐｏｓｅｄｔｏａｎｏｘｉａ
ａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ：ｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎｗｉｔｈｉｍｐａｉｒｅｎｅｎｔｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｄａｍａｇｅｄｃａｒｄｉａｃｃｅｌ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｖａｓＲｅｓ，１９７９，１３
（６）：３４５．
［１１］ 谷天祥，张显清，谷春久，等．心肌缺血再灌注损伤亚细胞
Ｃａ２＋反常与 ＡＴＰ酶泵功能抑制［Ｊ］．中华心血管病杂志，
２００１，２９（７）：４２０．
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃａｔｅｃｈｉｎｍｏｒｐｈｏｎｏｎ
ｈｙｐｏｘｉａｒｅｏｘｙｎａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｉｎｊｕｒｙｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｅｌｓ
ＹＥＪｉｎｘｉａ，ＷＡＮＧＬａｎ，ＬＩＡＮＧＲｉｘｉｎ，ＹＡＮＧＢｉｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｓｏｆｃａｔｅｃｈｉｎｍｏｒｐｈｏｎ（ＧＣＧａｎｄＥＧＣＧ）ｏｎｈｙｐｏｘｉａｒｅｏｘｙｎａｔｉｏｎｉｎ
ｄｕｃｅｄｉｎｊｕｒｙｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｅｌｓａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｎｅｏｎａｔａｌｒａｔｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ，ｗｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅ
ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙＧＣＧａｎｄＥＧＣＧｏｎｔｈｅｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｂｅａｔｉｎｇ，ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ，ｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨ，ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＧＳＨＰｘ
ａｎｄｔｈｅＡＴＰｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｃｅｌｕｌａｒｍｅｍｂｒａｎｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓｔｒｅａｔｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ１ｈｆｏｌ
ｌｏｗｉｎｇｈｙｐｏｘｉａ３ｈ．ＴｈｅｂｌｏｃｋｉｎｇａｇｅｎｔｏｆｐｒｏｔｉｅｎｋｉｎａｓｅＣｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）ｏｒｔｈｅｄｅａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆＧｉ／ｏｐｒｏｔｅｉｎｐｅｒｔｕｓｓｉｓ
ｔｏｘｉｎ（ＰＴＸ，２００μｇ·ｍＬ－１）ｗｅｒｅａｄｄｅｄｂｅｆｏｒｅｔｈｅｃａｔｅｃｈｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｂｙＧＣＧａｎｄＥＧＣＧｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅ
ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｂｅａｔｉｎｇａｎｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ，ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨａｎｄＭＤＡｗｉｔｈｔｈｅｒｉｓｅｏｆＳＯＤａｎｄＡＴＰｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ．
ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＰＫＣｂｙｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅａｎｄＧｉ／ｏｐｒｏｔｅｉｎｂｙＰＴＸａｂｏｌｉｓｈｅｄｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙｃａｔｅｃｈｉｎｗｉｔｈｔｈｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｅａｔｉｎｇ，ｓｕｒ
ｖｉｖａｌｒａｔｅａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤ，ａｎｄｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨａｎｄＭＤＡ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｆｒｏｍＰＫＣａｎｄＧｉ／ｏｐｒｏｔｅｉｎｓｅｅｍｅｄｔｏｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｂｙＧＣＧａｎｄＥＧＣＧ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙＧＣＧａｎｄＥＧＣＧｏｎｈｙｐｏｘｉａｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｎｅｏｎａｔａｌｒａｔｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓｉｓｆｏｕｎｄ，
ｗｈｉｃｈｉｓｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｏｆｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ，ａｎｄＰＫＣＧｉ／ｏｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃａｔｅｃｈｉｎｍｏｒｐｈｏｎ；ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ；ｈｙｐｏｘｉａｒｅｏｘｙｎａｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｉｅｎｋｉｎａｓｅＣ；Ｇｉ／ｏｐｒｏｔｅｉｎ
［责任编辑 古云侠］
·５０８·
第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８