全 文 ：黄芩炭炮制工艺及其 °≤指纹图谱研究
杨 云 t o闻永举 t o王俊敏 t o田润涛 u
ktq河南中医学院 药学院 o河南 郑州 wxsss{~ uq珠海科曼中药研究有限公司 o广东 珠海 xt|s{xl
≈摘要 目的 }对黄芩炭的炮制工艺及其指纹图谱进行研究 o为黄芩炭质量控制模式的建立奠定基础 ∀方法 }
正交试验及 °≤ 2∂指纹图谱 ∀色谱条件 } ¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{柱 kx1s °° ≅ uss °°ox Λ°lo流动相甲醇 2s1wh磷酸水溶
液 2乙腈线性梯度洗脱 ~流速 t1s °# °¬±pt ~检测波长 uzz ±°∀结果 }不同产地正品黄芩通过规范炮制加工后得到
的黄芩炭指纹图谱无明显差异 ∀结论 }通过正交试验确定的黄芩炭制工艺切实可行 o指纹图谱测定方法重现性好 o
可为黄芩炭的规范化炮制及质量控制提供可靠的科学依据 ∀
≈关键词 黄芩炭 ~正交试验 ~ °≤指纹图谱
≈中图分类号 u{wqt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszltx2txt{2sw
≈收稿日期 ussz2st2t{
≈基金项目 河南省重大科技攻关项目 kusswuusvszssl
≈通讯作者 3 杨云 oר¯}ksvztlyxy{sysxo∞2°¤¬¯}¼¼∏± ¦«¬2
±¤q¦²°q¦±
黄芩为中医常用的清热燥湿药 o性味苦寒 o具有
清热燥湿 !泻火解毒 !止血安胎之功效 ∀黄芩炮制品
有黄芩片 !酒黄芩 !黄芩炭等 o黄芩炒炭后可以增强
其止血作用 o临床常用于血热吐衄 o血崩等症 ≈t ∀
有关黄芩炭的炮制工艺报道极少 o其质量控制
和指纹图谱也未见相关研究 ∀因此 o本实验以黄芩
苷 !黄芩素为检测指标 o采用正交实验对其炮制工艺
进行了优选 o初步建立了黄芩炭 °≤指纹图谱并
对其进行了相似度计算和分析 o实验结果将为黄芩
炭的规范化炮制工艺及其质量控制提供科学依据 ∀
1 仪器与材料
≥«¬°¤§½∏≤usts高效液相色谱仪 o≥°⁄ pts
检测器 o≤ ¤¯¶¶∂ °u1v√色谱工作站 o≥×us激光扫描测
温仪 k美国雷诺 lo电加热炒药机 k常熟市机械制造
厂 l~黄芩苷 !黄芩素 !汉黄芩素对照品由中国药品
生物制品检定所提供 o批号分别为 kztx2ussstso
tttx|x2ussvstotxtw2ussstl~汉黄芩苷对照品自制
k面积归一化法测定 o含量 |z1uh l~甲醇 !乙腈为色
谱纯 o磷酸 !乙醇均为分析纯 o水为双蒸水 ∀
黄芩药材分别搜集于河南 !河北 !陕西 !甘肃等
地 o经河南中医学院陈随清教授鉴定为唇形科黄芩
属植物黄芩 Σχυτελλαρια βαιχαλενσισ ²¨µª¬的干燥根 o
具体来源见表 t∀
表 t 样品来源及编号
²1 样品来源 搜集时间
t 河南灵宝 ussw2s|
u 河南灵宝 ussw2s|
v 河南灵宝 ussw2s|
w 河南洛宁 ussw2s|
x 河南洛宁 ussw2s|
y 陕西 ussw2s|
z 陕西 ussw2s|
{ 河北安国 ussw2ts
| 河北安国 ussw2ts
ts 甘肃 ussw2ts
≤«µ²°¤©¬±ª¨µussx色谱指纹图谱系统解决方案
软件 k珠海科曼中药研究有限公司开发 l∀
2 方法与结果
2q1 炭制工艺的研究
2q1q1 正交试验 对黄芩中黄酮类成分热稳定性
的研究发现 o随着温度的增加黄芩苷分解速度加快 o
在 uux ε 加热 vs °¬±o含量下降为零 ≈u ∀而黄芩素
的热稳定较好 o在密闭的条件下升温到 uzs ε o含量
仍在 |xh以上 o此结果提示 o炒制温度和时间是影
响黄芩饮片质量的重要因素 ∀因此 o以黄芩苷和黄
芩素的含量以及饮片的外观性状为考察指标 o采用
正交试验进行工艺优选 o结果见表 u ∗ z∀
表 u 因素水平
水平 Α
炒制温度 rε
Β
炒制温度 r«
Χ
空白
∆
空白
t t{s us
u uss tx
v uus ts
从以上结果可以看出 }炒炭温度对黄芩苷 !黄芩
素含量有极其显著的影响 o加热使得黄芩苷分解并
转化为黄芩素 ∀传统经验认为黄芩炒炭应达到表面
#{txt#
第 vu卷第 tx期
ussz年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ tx
∏ª∏¶·o ussz
表 v 黄芩炭炮制工艺 | kvw l正交试验及结果
²1
结果 rh
黄芩苷 kψ¬l 黄芩素 kζ¬l
性状
t {1ww v1x{ 表面焦黄色 !内部黄色
u |1xu u1{s 表面焦黄色 !内部黄色
v |1{z u1yz 表面黄色 !内部黄色
w v1u| y1wz 表面焦黑色 !内部焦黄色
x w1{| x1uw 表面焦黑色 !内部焦黄色
y z1yw w1tu 表面焦黄色 !内部黄色
z s1{z {1ww 表面焦黑色 !内部黑色
{ t1vw |1vt 表面焦黑色 !内部黑色
| v1wx z1uv 表面焦黑色 !内部焦黄色
表 w 黄芩苷方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 Φ Π
Α {u1tt u wt1sy yz1u{ s1st
Β tt1{| u x1|w {1{z s1sx
误差 ¨ u1y| w s1yz
注 }查 Φ分布临界表得 Φs1sx kuowl y1|woΦ s1st kuowl t{1sso
表 x同
表 x 黄芩素方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 Φ Π
Α wu1yt u ut1vt wy1vs s1st
Β v1ys u t1{s v1|t
误差 ¨ t1{w w s1wy
表 y 炒炭对黄芩苷 !黄芩素含量的影响 h
²1 黄芩苷 黄芩素 总量
t {1ww v1x{ tu1su
u |1xu u1{s tu1vu
v |1{z u1yz tu1xw
w v1u| y1wz |1zy
x w1{| x1uw ts1tv
y z1yw w1tu tt1zy
z s1{z {1ww |1vt
{ t1vw |1vt ts1yx
| v1wx z1uv ts1y{
表 z 黄芩炭收率 h
²1 黄芩炭 ²1 黄芩炭
t |v1{ y {s1w
u |y1u z yv1x
v |{1x { y{1z
w y{1{ | zw1u
x zx1w
焦黑色内部焦黄色 ≈t o化学和药效学表明 o黄芩苷和
黄芩素均为黄芩中有效成分 ≈v o因此 o在外观性状符
合传统炮制标准的前提下 o应选择此 u种成分含量最
高的炮制条件 ∀表 v显示 o在试验 t ∗ v中 o采用 t{s
ε 加热 o虽然黄芩苷 !黄芩素总含量较高 o但是性状不
符合炭药的颜色标准 o说明 t{s ε 不易将黄芩炒制成
炭 ~而采用 uus ε 时加热 tx °¬±以上 o黄芩形成过炭 o
内外均呈焦黑色 ~只有 uus ε 时加热 ts °¬±ouss ε 加
热 tx °¬±和 us °¬±所得到的饮片性状符合传统要
求 o但 uus ε 过于接近黄芩苷的熔点 uuv ε o温度不
易控制 ∀因此 o最终确定黄芩炭炮制工艺参数为 }炒
炭温度 uss ε o炒制时间 ts ∗ tx °¬±∀
2q1q2 炮制工艺验证 取表 t中药材按药典法制
成黄芩片 o于 uss ε 炒制 tx °¬±o出锅 o放凉 ∀ ts批
次中试结果表明 o炒出的黄芩炭性状符合传统要求 o
黄芩苷和黄芩素总含量平均值 ts1tth o黄芩炭收
率 zx1|h ∀
2q2 黄芩炭指纹图谱研究
2q2q1 色谱条件 ¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{柱 k x1s °° ≅ uss
°°ox Λ°l~流动相甲醇 2s1wh磷酸水溶液 2乙腈梯
度洗脱 o见表 {~流速 t1s °# °¬±pt ~柱温 u{ ε ~进
样量 ts Λ~检测波长 uzz ±°∀
表 { 流动相梯度洗脱程序
τr°¬± 甲醇 rh s1wh磷酸 rh 乙腈 rh
s1st wz xv s
| wz xv s
ux uz xv us
ws uu xv ux
wt wz xv s
wx wz xv s
2q2q2 对照品溶液的制备 精密称取在 ys ε 减压
干燥 w «的黄芩苷 !汉黄芩苷 !黄芩素 !汉黄芩素对
照品适量 o用甲醇溶解 o分别制成 vuouvouxovs Λª
# °pt的溶液 ∀
2q2q3 供试品溶液的制备 取黄芩炭粉末 k2q1q2
项目 l约 s1v ªo精密称定 o置具塞三角瓶中 o加 tss
°zsh乙醇 o称重 o超声提取 vs °¬±o再称重 o补足
损失的重量 ∀吸取此液 ts °o以 v sss µ# °¬±pt离
心 ts °¬±o精密移取上清液 t1s °o置 ts °量瓶
中 o加甲醇至刻度 o摇匀 o临用前用 s1wx Λ°微孔滤
膜过滤 o作为供试品溶液 ∀
2q2q4 方法学考察 精密度试验 }精密吸取同一供
试品溶液 ts Λo连续进样 x次 o记录色谱图 ∀测得
各共有峰的相对峰面积 ≥⁄小于 vh o相对保留时
间 ≥⁄小于 th ∀表明仪器精密度良好 ∀重复性试
验 }取同一样品 x份 o按供试品溶液制备方法进行制
备 o分别进样 o记录色谱图 ∀测得各共有峰相对峰面
积的 ≥⁄小于 vh o相对保留时间的 ≥⁄小于 th ∀
结果表明实验重复性良好 ∀稳定性试验 }取同一供
#|txt#
第 vu卷第 tx期
ussz年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ tx
∏ª∏¶·o ussz
试品溶液 o分别于 souo{otyouw «测定 o记录色谱
图 ∀结果表明供试品溶液在 uw «内稳定 o ≥⁄小于
t1xh ∀
2q2q5 指纹图谱的测定及色谱峰归属 精密吸取
各供试品溶液 o依次进样 o在上述色谱条件下分离测
定 o记录色谱图 o见图 t∀结果发现其中 tt个峰是
ts批次黄芩炭的共有峰 ∀通过比较在线紫外吸收
光谱和加入对照品的方法进行色谱峰的归属 o其中
t号峰为黄芩苷 ow号峰为汉黄芩苷 oz号峰为黄芩
素 o{号峰为汉黄芩素 o考察 wx °¬±内的色谱峰 o黄
芩素的保留时间平均约为 ux1s °¬±o峰面积百分比
占 wsh以上 o因此选作参照峰 ∀
图 t ts批次黄芩炭的 °≤指纹图谱纵向叠加图
2q2q6 黄芩炭 °≤指纹图谱共有模式的建立
考察 ts批次黄芩炭的色谱图 o以中位数法筛选指纹
特征峰及色谱峰面积值 o共确认特征峰 tt个 o见表
|o建立的黄芩炭 °≤指纹图谱共有模式见图 u∀
表 | 黄芩炭 °≤指纹图谱共有模式特征峰
²1 近似保留时间 r°¬± 相对峰面积 成分名称
t {1zx s1vxu 黄芩苷
u tu1vv s1su|
v tv1yz s1st|
w ty1zx s1sxv 汉黄芩苷
x t|1wz s1ts{
y uu1uv s1sxz
zk l uw1{w t1sss 黄芩素
{ vx1sv s1wux 汉黄芩素
| vy1|x s1su|
ts v|1wx s1st|
tt wt1vs s1tty
2q2q7 指纹图谱相似度分析 将 ts批黄芩炭实验
数据导入色谱指纹图谱系统解决方案软件 o经选峰 o
设定匹配模式 o将谱峰自动匹配 o采用相关系数法 !
夹角余弦法对 ts批次黄芩炭的色谱图相对于黄芩
炭的 °≤指纹图谱共有模式进行相似度分析 o结
果见表 tso图 v∀
图 u 黄芩炭 °≤指纹图谱共有模式
表 ts 黄芩炭样本相似度结果
²1 相关系数法 夹角余弦法 匹配峰数目
t s1||w { s1||w t tz n s
u s1||x z s1||y u tz n s
v s1||z y s1||z x tz n t
w t1sss s t1sss s tz n s
x s1||| x s1||| t tz n t
y s1||u { s1||u v tz n t
z s1||s z s1||t u tz n s
{ s1||t x s1||t t tz n s
| s1||w z s1||w u tz n t
ts s1||y y s1||y s tz n s
图 v ts批黄芩炭相关系数法相似度散点图
从图 v可以看出 ots批黄芩炭具有极高的相似
度 o其中 w号样品相似度达到 t1so即使距离其他样品
较远的 z号也达到了 s1||以上 o这种高度相似性的
原因在于 o黄芩炭中几个主要成分峰面积之和占总峰
面积的 {sh o其中黄芩苷占总峰面积约 txh !黄芩素
占总峰面积约 wxh !汉黄芩素占总峰面积 ush o以上
数据说明少数成分占主导地位的特殊中药品种内 o指
纹图谱的数学相似度主要由占主导地位的化学成分
所决定 o小峰的缺失对相似度影响不大 ∀
3 讨论
3q1 采用正交试验对黄芩炭的炮制工艺进行了研
究 o确立了具体的工艺参数 o并采用 °≤建立了黄
芩炭的指纹图谱分析方法 o结果表明 o来自不同产地
的同一规格的炮制品其指纹图谱主要峰群的整体图
貌具有较高的相似性 o用相关系数法 !夹角余弦法进
行的相似度计算 o均在 s1||以上 o说明已经确定的
#suxt#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ tx
∏ª∏¶·o ussz
黄芩炭工艺稳定性良好 o饮片质量一致 ∀
3q2 关于黄芩的色谱条件 o文献报道较多 o曾借鉴
这些方法进行测试 o如甲醇 2s1wh磷酸水溶液 kwzΒ
xvlo乙腈 2水 2四氢呋喃 2磷酸 k{sΒtsΒs1ulo甲醇 2水 2
磷酸 kwzΒxvΒs1ul等 o均未获得良好的效果 o通过系
统探索和反复试验 o用乙腈 !甲醇 !s1wh磷酸水组成
的梯度洗脱系统可以得到分离度好 !出峰均匀 !以及
时间适宜的分离效果 o而且该系统溶剂也适合黄芩
药材及其各种炮制品的质量分析 ∀
≈参考文献
≈t 叶定江 o原思通 q中药炮制学辞典 ≈ q上海 }上海科学技术出
版社 oussx}vstq
≈u 朱振华 o闫红敏 o闻永举 o等 q密闭干热对黄芩苷 !黄芩素热稳
定性研究 ≈ q河南科学 oussyouwkyl}vxvq
≈v 黄泰康 q常用中药成分与药理手册 ≈ 1北京 }中国医药科技
出版社 ot||w}txzuq
Προχεσσινγ µ ετηοδ ανδ ΗΠΛΧ φινγερπριντ οφ Χηαρρεδ Ρ αδιξ Σχυτελλαριαε
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(t. Ηεναν Χολλεγε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Ηεναν, Ζηενγζηου wxsss{, Χηινα;
u. Χηροµ απ Ινστιτυτε οφ ΗερβαλΜεδιχινε, Ζηυηαι xt|s{x, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²¦¨¶¶¤±§°≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·²©≤«¤µµ¨§ ¤§¬¬≥¦∏·¨¯ ¤¯µ¬¤¨ o ¤±§ ¤¯¼ ¤©²∏±§¤·¬²± ²©
≤«¤µµ¨§ ¤§¬¬≥¦∏·¨¯ ¤¯µ¬¤¨ ∏´¤± ¬¯·¼ ¦²±·µ²¯ °²§¨ q Μετηοδ : ≥¨¯ ¦¨·°≤ 2∂ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·q ≤«µ²°¤·²ªµ¤° ¦²±§¬·¬²±} ¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{ ¦²¯2
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≥¦∏·¨¯ ¤¯µ¬¤¨ ·«¤·º µ¨¨ ±²µ°¤·¬√¨¯¼ °¤±∏©¤¦·∏µ¨§¤±§³µ²¦¨¶¶¨§q Χονχλυσιον: ׫¬¶·¨¶·³µ²√ ¶¨·«¨ ³µ²¦¨¶¶¬¶©¨¤¶¬¥¯ o¨ ·«¬¶° ·¨«²§ µ¨2
¦∏µ¶º¨¯¯¤±§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²³µ²√¬§¨ ¶¦¬¨¬·¬©¬¦¥¤¶¬¶©²µ·«¨ ±²µ°¤·¬√¨³µ²¦¨¶¶¤±§ ∏´¤± ¬¯·¼ ¦²±·µ²¯ °²§¨ ²©≤«¤µµ¨§ ¤§¬¬≥¦∏·¨¯ ¤¯µ¬¤¨ q
[ Κεψ ωορδσ] ≤«¤µµ¨§ ¤§¬¬≥¦∏·¨¯ ¤¯µ¬¤¨ ~ ²µ·«²ª²±¤¯ ·¨¶·~ °≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·
≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussy2sw2ux
≈基金项目 国家自然科学基金项目 kvsyzux{xl
≈通讯作者 3 张玉杰 oר¯}kstsl{wzv{yt{oפ¬}kstsl{wzv{ytto∞2°¤¬¯}½«¼xxuuz tuyq¦²°
黄连肉桂药对配伍对黄连总碱大鼠小肠吸收的影响
张玉杰 t3 o杨 洁 t o邹晓翠 t o刘丽梅 u o孙万晶 t
ktq北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu~
uq中国中医科学院 基础理论研究所 o北京 tsszssl
≈摘要 目的 }考察黄连总碱大鼠小肠吸收特性及黄连肉桂配伍对黄连总碱小肠吸收的影响 o探讨黄连肉桂
药对配伍规律 ∀方法 }采用大鼠体外小肠吸收模型 o考察时间 !浓度及转运方向对黄连总碱大鼠小肠摄取和转运的
影响 ~同时考察黄连与肉桂不同比例配伍后 o黄连总碱的小肠吸收和转运的变化规律 ~采用薄层色谱法对黄连肉桂
水煎液 !小肠浆膜液 !组织匀浆液中的总碱成分进行定性鉴别 ∀结果 }黄连水煎液中总碱成分具有与小檗碱类似的
°2糖蛋白底物转运特性 }总碱在大鼠小肠的摄取和转运具有浓度及时间依赖性 ~总生物碱的转运明显受到转运方
向的影响 o从浆膜面到黏膜面的转运明显大于从黏膜面到浆膜面 ∀黄连与肉桂在一定配比范围内 o黄连总碱的小
#tuxt#
第 vu卷第 tx期
ussz年 {月
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ tx
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