免费文献传递   相关文献

Studies on chemical constituents and antibacterial activity fromn-butanol extract of Sarcandra glabra

草珊瑚正丁醇部位化学成分及抑菌活性研究



全 文 :ternifloraDC.var.robustaTamura[J].ChemPharmBul,1998,
46(2):1891.
[11] HaruhisaK,HidekiS,TsuyoshiT.Studiesontheconstituentsof
ClematisspeciesⅥ.TheconstituentsofClematisstans[J].Chem
PharmBul,1995,43(12):2187.
StudiesonlignanconstituentsofClematisparviloba
YANLihua1,2,XULizhen1,LINJia1,ZOUZhongmei1,ZHAOBaohua1,YANGShilin3,4
(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege,
Beijing100094,China;
2.InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
3.NationalPharmaceuticalEngineeringCenterforSolidPreparationinChineseHerbalMedicine,Nanchang330006,China;
4.JiangxiColegeofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330006,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsofthestemsofClematisparviloba.Method:Thecompoundswereiso
latedandpurifiedbyrepeatedcolumnchromatographywithsilicagel,SephadexLH-20andHPLC.Theirstructureswereidentifiedby
spectroscopicdatatogetherwithphysicalandchemicalproperty.Result:TencompoundshavebeenisolatedfromthestemsofC.parvilo
ba,andidentifiedas:(+)pinoresionol(1),(+)pinoresionol4′OβDglucopyranoside(2),(+)pinoresionol4,4′ObisβD
glucopyranoside(3),(-)syringaresinol(4),(+)syringaresinol4′OβDglucopyranoside(5),(-)episyringaresinol(6),(+)
medioresinol4′OβDglucopyranoside(7),(+)lariciresinol4OβDglucopyranoside(8),(+)lariciresinol4′OβDglucopyrano
side(9),(+)lariciresinol4,4′ObisβDglucopyranoside(10),respectively.Conclusion:Compounds6,7wereisolatedfromthis
genusforthefirsttime,andtheotheroneswereisolatedfromthisplantforthefirsttime.
[Keywords] ClematisL.;Clematisparviloba;lignans
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20071201
[基金项目] 浙江省科技厅重点科技计划项目(2006C23008)
[通讯作者] 袁珂,Tel:(0571)63743607,Email:yuan_ke001@163.com
草珊瑚正丁醇部位化学成分及抑菌活性研究
袁 珂1,朱建鑫2,斯金平1,蔡海可1,丁晓丹1,潘远江3
(1.浙江林学院 天然药物研发中心,浙江 临安 311300;
2.河南中医学院 药学院,河南 郑州 450008;3.浙江大学 化学系,浙江 杭州 310027)
[摘要] 目的:研究草珊瑚Sarcandraglabra正丁醇部位的化学成分及抑菌活性。方法:采用 DiaionHP-20,
SephadexLH-20,MCICHP-20及硅胶等柱色谱法对草珊瑚正丁醇部位的化学成分进行分离纯化,根据理化性质
及现代波谱技术确定化合物的结构。采用滤纸片法,记录化合物对金葡菌株24h抑菌效果。结果:分离鉴定了7
个化合物:5,7,3′,4′四羟基6CβD葡萄糖二氢黄酮碳苷(1),山柰酚3OβD葡萄糖酸苷(2),嗪皮啶(3),异嗪
皮啶(4),异嗪皮啶7OβD葡萄糖苷(5),山柰酚(6),异美五松针二氢黄酮(7)。其中化合物2,5,6对金葡菌株
的抑菌环直径分别为:(1467±008),(1114±106),(826±126)mm,化合物4对金葡菌株无抑菌活性。结
论:化合物1~3,5为首次从该植物中分离得到。
·3481·
第33卷第15期
2008年8月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 15
August,2008
[关键词] 草珊瑚;化学成分;抑菌活性
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)15184304
  草珊瑚为金粟兰科草珊瑚属植物 Sarcandra
glabra(Thunb.)Nakai的干燥全草,又名肿节风、九
节茶、观音茶、接骨木、骨风消等,为多年生常绿草本
或亚灌木植物。本科植物有5属,约70种,分布于
热带和亚热带地区,我国有3属,约18种,主要分布
于浙江、江西、广西、安徽、湖北、湖南、云南、广东等
地[1],草珊瑚分布广泛,资源丰富,药理作用多样、
毒性小。
草珊瑚全草具有清热凉血、祛风通络、活血消炎
等功效,临床上主要用于治疗常见炎症性疾痛,也用
于治疗绦虫病、类风湿性关节炎及预防感冒等,对多
种恶性肿瘤如胰腺癌、胃癌、直肠癌、肝癌和食道癌
等效果也较显著[2]。有文献报道从草珊瑚中分离
鉴定的一系列化合物,但主要集中在较低极性部位
化学成分的研究[34]。本实验对草珊瑚正丁醇部位
进行了化学成分的系统研究,从中分离鉴定了7个
化合物,其中化合物1~3,5为首次从该植物中分离
得到,同时对部分化合物进行了抑菌活性实验。
1 材料
WRS-1B型数字熔点测定仪(上海精密科学仪
器有限公司,未校正);BrukerDaltonics质谱仪;Bruk
erDPX-400核磁共振仪(TMS为内标);真空薄膜浓
缩装置(自装)[5];MLS-3750三洋高压灭菌锅;YJ-
003迅数全自动抑菌圈测量仪;柱色谱填充剂Diaion
HP-20,MCI-GelCHP-20为日本三菱公司产品,
SephadexLH-20凝胶为 PharmaciaBioteck产品;柱
色谱硅胶(200~300目)、薄层色谱用硅胶 G和
GF254均系青岛海洋化工厂产品;营养琼脂(杭州微
生物试剂厂,批号20060303);实验试剂均为分析醇。
草珊瑚采自浙江龙泉市,由浙江林学院药用植
物分类学教研室楼炉焕教授鉴定为草珊瑚属植物
S.glabra,标本存于本实验室。
2 提取与分离
取草珊瑚药材5kg,干燥后粉碎成粗粉,用10
倍量的水煎煮提取。提取液用真空薄膜浓缩装置进
行减压浓缩,得到总浸膏620g。将浸膏超声分散于
水中,依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取。
将所得各萃取部位进行减压浓缩得到石油醚部位
(100g),醋酸乙酯部位(120g),正丁醇部位(140
g)和水部位(260g)。将所得正丁醇部位(140g)分
散于水中,通过大孔吸附树脂 DiaionHP-20柱,依
次用 H2O,10%甲醇,20%甲醇,30%甲醇,40%甲
醇,60%甲醇,70% Me2CO洗脱。其中 Diaion柱的
20%甲醇,30%甲醇洗脱部分通过SephadexLH-20
和MCI-GelCHP-20柱色谱,以甲醇水溶剂系统
反复分离纯化,从中分离得到化合物 1(18mg),2
(32mg),5(26mg)。Diaion柱的40%甲醇,60%甲
醇部位通过硅胶柱色谱,用醋酸乙酯甲醇溶剂系统
反复洗脱得到化合物 3(16mg),4(60mg),6(65
mg),7(38mg)。
3 结构鉴定
化合物1 淡黄色无定型粉末,溶于甲醇、丙酮,
难溶于石油醚、氯仿,UV254nm下显示紫色荧光,遇
FeCl3K3[Fe(CN)6]试剂显蓝色,盐酸镁粉反应显粉
红色,Molish反应显阳性。1HNMR(D2O,400MHz)δ:
531(1H,dd,J=26,123Hz,H2),308(1H,dd,
J=124,171Hz,H3a),275(1H,dd,J=171,
26Hz,H3b),596(1H,s,H8),689(1H,brs,H
2′),677(1H,d,J=82Hz,H5′),676(1H,d,J=
82Hz,H6′),477(1H,d,J=99Hz,H1″),408
(1H,brs,H2″),341(1H,d,J=88Hz,H3″),
365(1H,brs,H4″),344(1H,m,H5″),385(1H,
m,H6″a),370(1H,dd,J=56,121HzH6″b)。
13CNMR(D2O,100MHz)δ:786(C2),422(C3),
1963(C4),1625(C5),1042(C6),1655(C
7),945(C8),1624(C9),1015(C10),1299
(C1′),1129(C2′),1447(C3′),1451(C4′),
1145(C5′),1175(C6′),735(C1″),708(C
2″),808(C3″),752(C4″),781(C5″),619(C
6″)。以上波谱数据与文献[6]报道的基本一致,确
定该化合物结构为5,7,3′,4′四羟基6CβD葡萄
糖二氢黄酮碳苷。
化合物2 淡黄色粉末,溶于甲醇和水,UV254nm
下显示紫色荧光,遇 FeCl3K3[Fe(CN)6]试剂显蓝
色,盐酸镁粉反应显粉红色。EIMSm/z463
[M+1]+;1HNMR(D2O,400MHz)δ:582(1H,d,
J=22Hz,H6),586(1H,d,J=22Hz,H8),
743(2H,d,J=88Hz,H2′,6′),652(2H,d,J=
·4481·
第33卷第15期
2008年8月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 15
August,2008
88Hz,H3′,5′)),479(1H,d,J=78Hz,H1″),
339(1H,brs,H2″),349(1H,d,J=88Hz,H
3″),344(1H,brs,H4″),356(1H,d,J=88HzH
5″)。13CNMR(D2O,100MHz)δ:1558(C2),1334
(C3),1772(C4),1570(C5),959(C6),1629
(C7),944(C8),1596(C9),1025(C10),
1205(C1′),1308(C2′,6′),1596(C4′),1150
(C3′,5′),1040(C1″),717(C2″),756(C3″),
735(C4″),771(C5″),1752(C6″)。以上数据
与文献[7]数据对照基本一致,鉴定化合物为山柰
酚3OβD葡萄糖酸苷。
化合物3 淡黄色粉末,溶于甲醇、丙酮,难溶
于石油醚、氯仿,UV254nm下显示紫色荧光,遇 FeCl3
K3[Fe(CN)6]试剂显蓝色。
1HNMR(MeOD,400
MHz)δ:622(1H,d,J=96Hz,H3),784(1H,dd,
J=96,12Hz,H4),691(1H,d,J=12Hz,H
5),394(3H,s,6OCH3),394(3H,s,7OCH3)。
13CNMR(MeOD,100MHz)δ:1634(C2),1129
(C3),1465(C4),1050(C5),1361(C6),
1474(C7),1457(C8),1446(C9),1122(C
10),617(6OCH3),5697(7OCH3)。以上数据与
文献[8]报道基本一致,鉴定化合物为8羟基6,7
二甲氧基香豆素(嗪皮啶)。
化合物4 淡黄色粉末,溶于甲醇、丙酮,难溶
于石油醚、氯仿,UV254nm下显示紫色荧光,遇 FeCl3
K3[Fe(CN)6]试剂显蓝色。经与异嗪皮啶对照品
TLC检识对照Rf值相同,混合熔点测定不下降,鉴
定化合物为异嗪皮啶。
化合物 5 淡黄色粉末,溶于甲醇、丙酮,
UV254nm下显示紫色荧光,遇 FeCl3K3[Fe(CN)6]试
剂显蓝色,Molish反应显阳性。1HNMR(MeOD,400
MHz)δ:636(H3),789(H4),701(H5),389
(OCH3,H6),408(OCH3,H8),519(H1′),
348(H2′),341(H3′),338(H4′),323(H
5′),377(H6′a),364(H6′b)。13CNMR(MeOD,
100MHz)δ:1626(C1),1158(C3),1440(C4),
1062(C5),1515(C6),1435(C7),1424(C
8),1459(C9),1167(C10),1042(C1′),757
(C2′),778(C3′),716(C4′),785(C5′),624
(C6′)。以上波谱数据与文献[9]报道基本一致,
鉴定化合物为异嗪皮啶7OβD葡萄糖苷。
化合物 6 黄色针状结晶,溶于甲醇、丙酮,
UV254nm下显示紫色荧光,遇 FeCl3K3[Fe(CN)6]试
剂显蓝色。1HNMR(MeOD,400MHz)δ:810(2H,
dd,J=20,80Hz,H2′,6′),691(2H,dd,J=20,
80Hz,H3′,5′),641(1H,d,J=20Hz,H8),
619(1H,d,J=20Hz,H6)。13CNMR(MeOD,100
MHz)δ:1481(C2),1372(C3),1773(C4),
1582(C5),991(C6),1655(C7,943(C8),
1624(C9),1044(C10),1236(C1′),1304(C
2′,6′),1605(C4′),1154(C3′,5′)。以上波谱数
据与文献[10]报道的数据基本一致,鉴定化合物为
山柰酚。
化合物 7 白色结晶,易溶于氯仿,可溶于甲
醇、丙酮,mp236~238℃,UV254nm下显示紫色荧光,
遇FeCl3K3[Fe(CN)6]试剂显蓝色,盐酸镁粉反应
阳性。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:543(H2),308
(H3a),284(H3b),606(H6),608(H8),
739747(H2′,3′,4′,5′,6′),381(OCH3)。
13C
NMR(CDCl3,100MHz)δ:792(C2),434(C3),
1958(C4),1641(C5),951(C6),1680(C7),
942(C8),1628(C9),1031(C10),1383(C
1′),1289(C2′),1261(C3′),1289(C4′),
1261(C5′),1289(C6′),557(7OCH3)。以上
数据与文献[4]报道一致,鉴定该化合物为5羟基
7甲氧基二氢黄酮,即异美五松针二氢黄酮。
4 部分化合物的抑菌活性研究
4.1 溶液的配置 将分离得到的山柰酚3OβD
葡萄糖酸苷、山柰酚、异嗪皮啶、异嗪皮啶7OβD
葡萄糖苷4个单体化合物分别用水溶解配制成10
g·L-1的水溶液,备用。
4.2 应试菌种 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus
aureus由本实验室提供,使用前接种到 pH65的固
体培养基上,37℃恒温培养16~18h,备用。
4.3 抑菌活性测定 以金葡菌株为实验菌株,根据
抑菌环直径大小来判断抑菌能力。抑菌活性测定采
用平板滤纸片法,滤纸片直径60mm,灭菌干燥后备
用。每种化合物做 3次重复实验,数据采用 SPSS
100进行分析,组间比较采用t检验。固体培养基采
用肉汤培养基,配比如下:牛肉500g(浸液),蛋白胨
10g,NaCl5g,K2HPO4·12H2O1g,琼脂20g,加双
蒸水至1000mL,调pH至65,每个直径75cm的培
养皿加入12mL培养基,制成平板备用。细菌复苏培
养后,取培养至对数期细菌配成6×108个/mL菌液,
·5481·
第33卷第15期
2008年8月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 15
August,2008
涂于平板上,将滤纸片加7μL蜂胶溶液样品,37℃
培养24h后测量并记录抑菌环直径。
4.4 抑菌结果 4种化合物在相同浓度(10g·
L-1)下对金黄色葡萄球菌的抑菌效果见表1。
表1 化合物的抑菌环直径
化合物 抑菌环直径/mm
山柰酚3OβD葡萄糖酸苷 1467±008
山柰酚 826±126
异嗪皮啶7OβD葡萄糖苷 1114±106
异嗪皮啶 -
  通过对以上化合物进行抑菌活性实验,发现2
个苷元(山柰酚、异嗪皮啶)对金黄色葡萄球菌的抑
菌效果相对于相应的糖苷(山柰酚3OβD葡萄糖
酸苷、异嗪皮啶7OβD葡萄糖苷)效果较差,提示
糖苷键的形成有可能会增强化合物的抑菌活性。具
体结论还有待进一步深入研究。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S].2000:179.
[2] 江苏新医学院.中药大辞典.上册[M].上海:上海人民出版
社,1997:42.
[3] YoshioT,HiroyasuY,TakashiM,etal.ChloranthalactoneF,a
sesquiterpenoidfromtheleavesofChloranthusglaber[J].Phyto
chemistry,1993,33(3):713.
[4] TsuiW,BrownG.CycloeudesmanolidesfromSarcandraglabra
[J].Phytochemistry,1996,43(4):819.
[5] 袁 珂,俞 莉.真空薄膜浓缩装置的研制及应用研究[J].分
析化学,2005,33(9):1358.
[6] LorentefT,FereresF,TomasB,etal.6CGlucosylnaringenin
fromflowersofAcaciaretinoide[J].Phytochemistry,1982,21
(6):1461.
[7] PanizziL,CaponiC,CatalanoS,etal.Invitroantimicrobialac
tivityofextractsandisolatedconstituentsofRubusulmifolius[J].
JEthnopharmacol,2002,79(2):165.
[8] KwakJH,LeeKB.FournewcoumarinderivativesfromArtemisia
keiskeana[J].JNatProd,2001,64(8):1081.
[9] NarantuyaaAS,BatsurenD,BatirovEK,etal.Chemicalstudy
ofthefloraofMongolia.Lariside,anovelglycosideofscopoletin
from Salsolalaricifolia[J].KhimiyaPrirodnykhSoedineni,
1986,3:288.
[10] 李 宁,李 铣,杨世林,等.过山蕨总黄酮的化学成分研究
(1)[J].沈阳药科大学学报,2004,21(2):105.
Studiesonchemicalconstituentsandantibacterialactivityfrom
nbutanolextractofSarcandraglabra
YUANKe1,ZHUJianxin2,SIJinping1,CAIHaike1,DINGXiaodan1,PANYuanjiang3
(1.ResearchandDevelopmentCenterofNaturalMedicine,ZhejiangForestryUniversity,Linan311300,China;
2.ColegeofPharmacy,HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China;
3.DepartmentofChemistry,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsandtheantibacterialactivityfromnbutanolextractofSarcandragla
bra.Method:ThecompoundswereisolatedbyDiaionHP-20,SephadexLH-20,MCICHP-20andsilicagelcolumnchromato
graphicmethods.Theirstructureswereidentifiedonthebasisofphysicochemicalandspectroscopicanalysis.Theantibacterialefectof
thecompoundsweremeasuredagainstStaphylococcusaureusbyfilterpaperslicemethod,finalytheantibacterialringineachgroupwas
recordedafter24hours.Result:Sevenconstituentswereisolatedandelucidatedas5,7,3′,4′tetrahydroxy6CβDglucopyrano
sylflavanone(1),kaempferol3OβDglucuronide(2),fraxidin(3),isofraxidin(4),isofraxidin7OβDglucopyranoside(5),
kaempferol(6),pinostrobin(7).Diameters(inmm)ofantibacterialringinthecompounds2,5,6wereorderlyrecordedasfolows:
1467±008,1114±106,826±126andthecompound4isnotefective.Conclusion:Compounds13and5wereisolatedfrom
S.glabraforthefirsttime.
[Keywords] Sarcandraglabra;chemicalconstituents;antibacterialactivity
[责任编辑 王亚君]
·6481·
第33卷第15期
2008年8月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 15
August,2008