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Optimal technique of wine-processed gentian

酒制龙胆的最佳炮制工艺研究



全 文 :leaf,centralcompositedesignandresponsesurfacemethodologywereusedforoptimizationofextractionoflotusleaf.Result:Theopti
mumconditionsofextractionprocesswere75%80% ethanol,23hoursforreflux,2025foldsolventand2timesforextraction.Bias
betweenobservedandpredictedofratesofnuciferineandflavonevalueswere553%,-602%,respectively.Conclusion:Theval
uesobservedandpredictedwereclosetoeachother,whichprovedthattheoptimizationofofextractionoflotusleafbycentralcompos
itedesignandresponsesurfacemethodologywasreasonableandsuccessful.
[Keywords] lotusleaf;nuciferine;flavone;extraction;centralcompositedesign;responsesurfacemethodology;overalde
sirability
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080304
[基金 项 目]  国 家 “十 一 五”科 技 支 撑 计 划 项 目
(2006BAI09B06076)
[通讯作者] 王维皓,Tel:(010)84014128,Email:olive_wh@
126.com
酒制龙胆的最佳炮制工艺研究
王彩君1,2,王智民1,王维皓1,彭新君2,高慧敏1,冯伟红1,杨立新1
(1.中国中医科学院 中药研究所,北京 100700;
2.湖南中医药大学 药学院,湖南 长沙 410007)
[摘要] 目的:探讨酒炙龙胆的炮制工艺。方法:以水浸出物的含量及水浸出物中龙胆苦苷的量为指标,采用
正交设计筛选炮制工艺。结果:龙胆切短段(5~10mm)、加入药材质量1/5的白酒、闷润2h,文火炒制的炮制品中
水浸出物的含量及其中龙胆苦苷的量最高。结论:酒的种类、酒加入量、闷润时间能够影响龙胆苦苷的量,炮制火
候也是影响酒制龙胆中龙胆苦苷含量的非常重要的因素。
[关键词] 龙胆;正交试验;水浸出物;龙胆苦苷;炮制工艺
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)20233504
  龙胆为龙胆科植物条叶龙胆Gentianamanshuri
caKitag.、龙胆G.scabraBge.、三花龙胆 G.triflora
Pal.或坚龙胆 G.rigescensFranch.的干燥根及根
茎。龙胆在《神农本草经》中作为中品收载,具有清
热燥湿,泻肝胆火的功效,用于治疗湿热黄疸,阴肿
阴痒,带下,强中,湿疹瘙痒,目赤,耳聋,胁痛,口苦,
惊风抽搐等症。龙胆传统的炮制方法有酒炒、炒炭、
蜜炙等。中医认为,酒炒上行能矫其苦涩大寒的本
性,用于虚弱病人则酒炒炭。至今酒制龙胆在临床
上仍广为应用。目前酒制法多为经验操作,缺乏规
范工艺过程和质量标准。作者以水浸出物的含量及
水浸出物中龙胆苦苷的量为指标,采用正交设计,探
讨酒制龙胆的最佳炮制工艺。
1 材料
龙胆(购自辽宁省清原龙胆基地,经中国中医
科学院中药研究所何希荣老师鉴定为龙胆科龙胆
G.scabra干燥根和根茎)。龙胆苦苷 (批号
110700)、咖啡因对照品(批号9502)均购自中国药
品生物制品检定所;塔牌绍兴花雕酒(酒精度≥
165% ,浙江塔牌绍兴酒厂)、东北小烧(酒精度≥
38%,黑龙江省伊春市翠峦区翠光白酒厂)、黄酒
(酒精度≥24%,濮阳亚光制药厂);甲醇(色谱纯,
Tedia),水(娃哈哈饮用纯净水,杭州娃哈哈集团有
限公司),其余化学试剂均为分析纯。
Waters高效液相色谱仪(Waters1515isocratic
HPLCPump,Waters2487DualAbsorbanceDetector,
Waters717PlusAutosampler,Empower色谱工作
站);METTLERAE240电子天平;DGB/20-002台
式干燥箱(重庆试验设备厂制造);电子调温电热套
(型号98-1-B,规格100mL,天津市泰斯特仪器
有限公司);水浴锅(河南巩义市英峪予华仪器厂);
美的牌电磁炉(美的集团)。
2 方法与结果
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2.1 水浸出物的制备及测定[1]
取龙胆(制品或生品),粉碎过筛(40目),取粉
末约2g,精密称定,分别置100mL圆底烧瓶中,精
密加入蒸馏水50mL,密塞,称定质量,静置1h后,
连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1h。放
冷后,取下圆底烧瓶,密塞,再称定质量,用水补足减
失的质量,摇匀,用干燥滤器滤过,精密量取滤液25
mL,至己干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,
于105℃干燥3h,取出,至干燥器中冷却30min,精
密称定质量,以干燥品计算供试品中水浸出物的含
量(%)。所得干燥的水浸出物备用。
2.2 HPLC测定水浸出物中龙胆苦苷的量
2.2.1 色谱条件 YMCJ′sphereODSH80色谱柱
(46mm×150mm,4μm);流动相甲醇水(30∶
70);流速08mL·min-1;检测波长270nm;柱温为
室温;进样量10μL,理论塔板数按龙胆苦苷计不低
于5000。
2.2.2 对照品及内标溶液的制备 精密称取龙胆
苦苷对照品适量,加甲醇制成020g·L-1的龙胆苦
苷对照品溶液。精密称取咖啡因对照品适量,加甲
醇制成0040g·L-1的咖啡因内标溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取2.1项下的干燥水
浸出物,精密吸取25%甲醇20mL溶解,摇匀,精密
吸取1mL于10mL的量瓶中,以25%甲醇定容,摇
匀。精密吸取此溶液1mL于5mL量瓶中,再精密
加入1mL咖啡因内标液,用25%甲醇定容,摇匀,
过022μm的滤膜,取续滤液,即得。
2.2.4 线性关系的考察 分别精密吸取龙胆苦苷
对照品液10,20,25,30,35,40mL于10mL
的量瓶中,再分别精密加入咖啡因内标液2mL,用
甲醇分别定容,摇匀。按2.2.1项下色谱条件测定,
以浓度(X)为横坐标,龙胆苦苷与咖啡因峰面积的
比值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程 Y=
5199X-0052(r=09992),龙胆苦苷在 002~
008g·L-1线性关系良好。
2.2.5 精密度试验 精密吸取龙苷苦苷对照品溶
液10μL,连续进样 6次,计算龙胆苦苷峰面积的
RSD为09%。
2.2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10μL,
分别于0,4,8,12,18,24h按上述色谱条件进样测
定,经计算龙胆苦苷与咖啡因峰面积比值的 RSD
07%。
2.2.7 重复性试验 取同一份生品浸出物,精密吸
取25%甲醇20mL溶解,摇匀,得澄清溶液。精密
吸取1mL,平行6份,按2.2.3项下方法制备供试
品溶液,在2.2.1色谱条件下测定,测得水浸出物中
龙胆苦苷的平均质量分数 2679mg·g-1,RSD
09%。
2.2.8 加样回收率试验 取同一份已知含量的生
品浸出物,精密吸取25%甲醇20mL溶解,摇匀,得
澄清溶液。精密吸取05mL于10mL量瓶中,精密
加入066g·L-1的龙胆苦苷对照品溶液1mL,平
行6份,从“以25%甲醇定容”始按2.2.3项下操作
制备样品,在2.2.1色谱条件下测定,测得含量并计
算加样回收率,结果平均加样回收率 990%,RSD
27% 。结果见表1。
表1 龙胆苦苷加样回收率
测得量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/%
134 970    
138 1030    
134 970
990 27
134 970    
137 1015    
135 985    
  注:样品中含量均为070mg,加入量均为066mg
2.2.9 样品测定 按2.2.3供试品制备方法制备
供试品溶液,在2.2.1色谱条件下测定,根据2.2.4
项下的回归方程计算水浸出物中龙胆苦苷量。
2.3 炮制工艺条件的优选
2.3.1 试验设计 参照全国炮制规范中酒制龙胆
的方法[2],选取影响较大的因素,采用正交试验法,
进行工艺优选。选取酒的用量(A)、酒的种类(B)、
闷润时间(C)、药材切制(D),分别设3个水平,不
考虑交互作用,选用 L9(3
4)正交表安排试验,因素
水平安排见表2,按2.1和2.2项下方法分别测定
水浸出物的含量和龙胆苦苷的量,按加权平均法计
算其综合评分,其中水浸出物的含量、龙胆苦苷的量
权重各占05,作为提取工艺研究的考察指标。
表2 因素水平



酒的用量
(V/W)

种类

闷润时间
/h

切制长度
/mm
1 1/5 黄酒(酒精度>16%) 2 5~10(短段)
2 1/10 黄酒(酒精度>24%) 4 10~15(长段)
3 1/15 白酒(酒精度>38%) 8 10~15(长段)
2.3.2 试验方法 按正交表安排进行试验,每号试
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验重复2次,取不同长度段(D)的龙胆30g,均匀喷
洒不同量(A),不同的酒(B),充分拌匀,密闭闷润
不同的时间(C),取出,置于锅中用文火(电磁炉
120℃)炒制,炒干后取出,放冷。取样测定,并计算
考察指标的综合评分。正交试验测定数据和统计结
果见表3。方差分析结果见表4。
表3 L9(3
4)正交试验结果
组别
水浸出物
/%
试验1试验2
龙胆苦苷
/mg·g-1
试验1试验2
综合评分
y1 y2
合计

1 6152 6032 5155 4872 5654 5452 11106
2 5874 5820 4721 4650 5298 5235 10533
3 6167 6321 5084 5435 5626 5878 11504
4 5826 5723 4706 4405 5266 5064 10330
5 6021 5860 4868 4781 5444 5320 10764
6 5953 5899 4795 4808 5374 5354 10728
7 5891 5871 4596 4626 5244 5248 10492
8 5852 5986 4915 4849 5384 5418 10802
9 6138 5971 5161 5154 5650 5562 11212
  注:水浸出物中龙胆苦苷的量均已折算为每克药材粉末所制得
的水浸出物中的龙胆苦苷的量
表4 方差分析
考察指标 来源 离差平方和 自由度 均方 F P
综合指标 A 1455 2 728 751 <005
   B 2298 2 11491185 <001
   C 444 2 222 229 >005
   D 1525 2 762 786 <005
   E误差 869 9 097    
  注:F005(2,9)=426,F001(2,9)=802
2.3.3 实验结果及分析 表3和表4结果显示:因
素A和因素B对综合评分的结果有非常显著影响,
因素D对结果有显著影响,因素C对结果无显著影
响。极差分析认为各因素的主次顺序是 B>D>
A>C。
由于因素C对结果无显著性影响,且密闭闷润
2h和8h的统计量K值相差不大(32636,3276),
为了节约时间,最佳的工艺条件定为A1B3C1D1。
2.3.4 验证试验 取短段的龙胆30g,均匀喷洒6
g白酒,充分拌匀,密闭闷润2h,取出,置于锅中用
文火(电磁炉120℃)炒制,炒干后取出,放冷。测
定水浸出物的含量及水浸出物中龙胆苦苷的量,平
行3份。结果见表5。
2.4 比较试验
为了考察炮制中酒的作用、火候的影响,再做了
3个比较实验:水闷润炒制实验,焦品实验,生品实
验,操作如下:
2.4.1 水闷润炒制试验 取短段的龙胆30g,均匀
喷洒6g水,充分拌匀,密闭闷润2h,取出,置于锅
中用文火(电磁炉120℃)炒制,炒干后取出,放冷。
粉碎过筛(40目)备用。
2.4.2 焦品试验 取短段的龙胆30g,均匀喷洒6
g白酒,充分拌匀,密闭闷润2h,取出,置于锅中用
文火(电磁炉150℃)炒制,炒焦后取出,放冷。粉
碎过筛(40目)备用。
2.4.3 生品试验 取生品药材粉碎,过40目筛,备
用。水浸出物的含量及水浸出物中龙胆苦苷的量测
定方法同前,结果见表5。
表5 验证试验及比较试验结果
样品
水浸出
物/%
珋x±s
龙胆苦苷
/mg·g-1
珋x±s
验证试验1 5998 5982±016 5056 5042±013
验证试验2 5966   5030  
验证试验3 5982   5040  
水闷润炒制试验1 5934 5935±032 4739 4773±064
水闷润炒制试验2 5904   4734  
水闷润炒制试验3 5967   4847  
焦品试验1 5940 5858±073 3851 3779±074
焦品试验2 5836   3784  
焦品试验3 5799   3703  
生品试验1 4798 4752±042 2526 2504±035
生品试验2 4715   2464  
生品试验3 4745   2522  
3 讨论
3.1 指标的选择
龙胆苦苷是与龙胆药效作用密切相关的重要活
性物质[3],在进行正交试验时,作者以龙胆苦苷作
为考察酒炙工艺的指标。为了使考察的指标更为准
确,更贴近实际,作者采用传统的用药方法即煎
煮———将炮制品用水加热回流,然后对其水浸出物
的含量及水浸出物中龙胆苦苷的量进行测定,采用
水浸出物的含量及水浸出物中龙胆苦苷的量双重指
标来评价酒制工艺。
在正交分析中曾分别对水浸出物的含量、龙胆
苦苷的量进行方差分析,结果均为酒的种类影响最
显著,其次分别是段长短和酒用量,而闷润时间影响
最小。此结果与加权平均法结果一致。
3.2 炒制火候
本研究采用《全国炮制规范》中规定的文火进
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行炒制。由表5结果表明,酒制炒干品和酒制炒焦
品的水浸出物含量差别不大,但是水浸出物中龙胆
苦苷的量,酒制炒干品要明显高于酒制炒焦品,说明
火候对龙胆苦苷的影响较大。
3.3 炮制的作用
从比较实验来看,酒制品的水浸出物的含量及
其中的龙胆苦苷的量都明显高于生品,可能是因为
酒炙过程改变了药物的物理性状,有利于成分的浸
润、溶解、扩散等过程的进行,提高了有效成分的溶
出率。通过制备空白样品(用水代替酒对药材进行
炮制),并与酒制品及生品进行比较,空白制品的水
浸出物及其中的龙胆苦苷的量都明显高于生品;空
白制品中水浸出物的含量与酒制品相当,但其水浸
出物中龙胆苦苷的量低于酒制品;说明闷润炒制过
程有利于水溶性物质的浸出,且酒制比水制更有利
于龙胆苦苷的浸出。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S].2005:90,附录56.
[2] 中华人民共和国卫生部药政管理局.全国炮制规范[M].北
京:人民卫生出版社,1988:78.
[3] 张 勇龙胆苦甙药理研究进展[J].云南医药,1991,12(5):
304.
Optimaltechniqueofwineprocessedgentian
WANGCaijun1,2,WANGZhimin1,WANGWeihao1,PENGXinjun2,GAOHuimin1,FENGWeihong1,YANGLixin1
(1.InstituteofChineseMateria,MedicaChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
2.ColegeofPharmaceuticalSciencesofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China)
[Abstract] Objective:Tooptimizetechniqueofwineprocessedgentian(rootofGentianamanshurica,G.scabra,G.triflora
andG.rigescens.Method:OrthogonaldesignL9(3
4)wasusedtoselectthebestprocessingtechnicalparametersbyyieldsofthewater
extractsandamountsofgentiopicrosideintheprocessingproducts.Result:Theoptimalprocedurewassuggestedasfolows:Gentiana
Radixwascutinto510milimetres'long,addedonefifthamountsofwinebygentian'sweight,moistenedfortwohours,andthendried
byslowfire.Conclusion:Theamountsofgentiopicrosideinwineprocessedgentianwerecloselyrelatedtothetypesandamountsof
wine,moistenedtimeanddriedmethod.
[Keywords] gentian;orthogonaldesign;waterextracts;gentiopicroside;processingtechnics
[责任编辑 鲍 雷]
《中国中药杂志》被国内外数据库收录情况和引证数据
1 国外数据库收录
美国SciFinder数据库:进入医学索引MEDLINE;进入《化学文摘》(CA);荷兰 Elsevier公司 Scopus数据库;《国际药学文
摘》(IPA);《毒物学文摘》(ToxFile);俄罗斯《文摘杂志》(AJ);波兰《哥白尼索引》(IC);WHO西太平洋地区医学索引
(WPRIM)。
2 国内数据库收录
“中国科学引文数据库”来源期刊;“中国学术期刊综合评价数据库”来源期刊;中国自然科学核心期刊;中国中文核心期
刊;中国科技核心期刊;《中国学术期刊文摘》中、英文版。
3 主要引证数据或数据库统计结果
《中国中药杂志》在中国知网(CNKI)的2007年浏览量为37万,下载量为21万,国内外用户达到2000余家。
据中国学术期刊综合引证报告(2006):影响因子为0.959,总被引频次5726,基金论文比0.48,即年指标0.124,被引半衰
期6.4。
据中国科学技术信息研究所分析研究中心发布的中国科技期刊引证报告(2006):影响因子为0.634,总被引频次3260,
基金论文比0.48,即年指标0.087,被引半衰期5.9。
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