全 文 ：苦参汤黄酮类成分 ＨＰＬＣ指纹图谱及其与
组方药味黄芩和苦参的相关性研究
刘 斌，石任兵，朱丽君
（北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］ 目的：建立苦参汤黄酮类成分的ＨＰＬＣ指纹图谱，研究该指纹图谱与组方药味黄芩和苦参的相关性。
方法：采用ＨＰＬＣ方法，在检测波长２８０ｎｍ和３６５ｎｍ下，建立苦参汤黄酮类成分的指纹图谱；通过分析苦参汤不同
配伍的ＨＰＬＣ图谱，探讨全方指纹图谱共有指纹峰与处方药味的相关性；采用添加对照品分析方法对共有指纹峰
进行化学成分确认。结果：在检测波长２８０ｎｍ下，苦参汤黄酮类成分的 ＨＰＬＣ指纹图谱有１９个共有指纹峰，除２
个峰来源于苦参外，其余峰均来源于黄芩，其中８个峰分别为黄芩苷／三叶豆紫檀苷、汉黄芩苷、木犀草素、黄芩素、
千层纸素Ａ、５，８二羟基６，７二甲氧基黄酮、汉黄芩素和芒柄花素／白杨素。在检测波长３６５ｎｍ下，有２２个共有
指纹峰，１３个峰来源于黄芩，６个峰来源于苦参，其中１１个峰分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、千层纸素Ａ、５，８二
羟基６，７二甲氧基黄酮、汉黄芩素、白杨素／７甲氧基黄酮、２′，４二羟基４′，６′二甲氧基查耳酮、４，４′二甲氧基查耳
酮、黄腐醇和苦参啶。结论：在检测波长２８０ｎｍ和３６５ｎｍ下获得的苦参汤黄酮类成分的ＨＰＬＣ指纹图谱共有指纹
峰来源于组成药味黄芩和苦参，其中以３６５ｎｍ为检测波长，建立苦参汤黄酮类成分的ＨＰＬＣ指纹图谱，更具代表性
和全面性。
［关键词］ 苦参汤；黄酮；指纹图谱；黄芩；苦参
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６３１０４
［收稿日期］ ２００６１０２５
［基金项目］ 国家“十一五”科技支撑计划（２００６ＢＡ１０８Ｂ０３０４）
［通讯作者］ 刘斌，Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６２９，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｂｉｎｙｎ６７＠
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苦参汤始载于《千金方》，由“苦参三两、黄芩二
两、生地黄八两”组成，具有“清热燥湿、泄毒养阴”
的功能，主治“热病五六日以上，热交营分彻外壮
热”，用“苦参燥湿除热，搜逐肾家久伏之邪；黄芩泄
肌肤之热；生地黄清血脉之邪”［１］。目前临床主要
用于治疗阴道炎、尿道炎、淋病、慢性结肠炎、慢性肝
炎、病毒性心肌炎、心律失常、冠心病以及多种皮肤
病等［２４］。指纹图谱作为控制中药复方质量的重要
而有效的手段，与中药复方有效成分的复杂性、不确
知性，以及发挥作用时众多成分的协同性、多靶点性
特点相吻合。近年来，在中药复方质量控制方面的
应用日趋广泛和成熟［５７］。本实验采用拆方分析方
法，主要研究了苦参汤黄酮类成分 ＨＰＬＣ指纹图谱
及其与组方药味黄芩和苦参的相关性。为进一步阐
明苦参汤药效物质基础，合理控制苦参汤提取物质
量，深入探讨苦参汤配伍规律奠定基础，并为以苦参
汤为基础的新制剂和新剂型研究提供参考。
１ 仪器与试药
Ｗａｔｅｒｓ５１５高效液相色谱仪，２４８７紫外检测器，
Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２软件系统，２５μＬ可调进样器；ＭＥＴＴＬＥＲ
－ＡＥ２４０型电子分析天平（瑞士梅特勒公司），ＣＸ－
２５０型超声波清洗器（北京医疗设备二厂）。
苦参、生地黄、黄芩药材购自北京同仁堂医药集
团北城批发部，经鉴定分别为豆科植物苦参 Ｓｏｐｈｏｒａ
ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓＡｉｔ．的干燥根，玄参科植物地黄 Ｒｅｈｍａｎｎｉａ
ｇｌｕｔｉｎｏｓａＬｉｂｏｓｃｈ．的干燥块根和唇形科植物黄芩
ＳｃｕｔｅｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓＧｅｏｒｇｉ的干燥根。黄芩苷、黄芩
素、汉黄芩素对照品（供含量测定或鉴别用，批号分别
为１１０７１５２００２１２，１１１５９５２００３０１，１５１４２００００１）购自
中国药品生物制品检定所；汉黄芩苷等对照品，自
制，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＭＳ，ＵＶ等鉴定结构。
甲醇、乙腈（Ｆｉｓｈｅｒ公司，色谱纯）；纯净水。其
他试剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 样品制备 依苦参汤处方单味药比例［苦参
黄芩生地黄（３∶２∶８）］，称取苦参、黄芩、生地黄饮
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片，按苦参黄芩生地黄（Ｑ），苦参黄芩（ＫＨ），苦
参生地黄（ＫＤ），黄芩生地黄（ＨＤ），苦参（Ｋ），黄
芩（Ｈ），生地黄（Ｄ）配伍。取各组饮片，分别用７０％
乙醇回流提取２次（１０倍量，１５ｈ；８倍量，１５ｈ），
趁热过滤，合并２次提取液，回收溶剂，残留物减压
干燥，得提取物。取各提取物约１０ｍｇ，精密称定，
加甲醇５ｍＬ，超声溶解后用０４５μｍ微孔滤膜滤
过，取滤液作为样品溶液。
２．２ 指纹图谱建立
２．２．１ 色谱条件 ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相 Ａ磷酸水溶液
［水磷酸（５３０∶２）］Ｂ甲醇，０～４０ｍｉｎ，４５％ Ｂ；４０～
１００ｍｉｎ，４５％～１００％ Ｂ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测
波长２８０ｎｍ和３６５ｎｍ，柱温为室温，分析时间１００
ｍｉｎ，进样体积２０μＬ。
２．２．２ 指纹图谱 Ｑ样品 ＨＰＬＣ指纹图谱及其共
有指纹峰标定见图１。根据１０批 Ｑ样品 ＨＰＬＣ谱
给出的相关参数，在检测波长２８０ｎｍ下，有１９个峰
或峰组是共有的，因此确定其为共有指纹峰。其中，
峰组３由３个峰组成，后２个峰未完全分离；峰组４
由４个峰组成，后２个峰多以肩峰形式存在，柱效较
低时，合二为一；峰７前有１小峰，与其未完全分离；
峰组８由３个峰组成，呈山形；峰组９后有１小峰以
肩峰存在；峰１６拖尾较明显，柱效高时，可看到２个
小峰以肩峰形式存在；峰１８前有１小峰，与其未完
全分离。在检测波长３６５ｎｍ下，有２２个峰或峰组
是共有的，从而确定其为共有指纹峰。其中峰２前
有１或２个小峰，与其未完全分离；峰组４为１宽
峰，柱效高时，可分辨出是由２或３个峰组成的；峰
组８由３个峰组成，呈山形；峰９后有１小峰以肩峰
存在；峰１３前后各有１小峰，与其未完全分离，共同
组成１个峰组，呈山形；峰１４由２个未完全分离的
峰组成，在柱效降低时，呈宽单峰状；峰组１７由２或
３个峰组成；峰组１８由２个峰组成；峰２０后有１小
峰，与其未完全分离。
在检测波长２８０ｎｍ和３６５ｎｍ下，均以峰面积
较大、分离度好、保留时间近中间的色谱峰１１（汉黄
芩苷）为参照峰，以其保留时间和峰面积为１，分别
计算其它各共有指纹峰的相对保留时间和峰面积比
值。在检测波长２８０ｎｍ下，１９个共有指纹峰中，单
峰面积占总峰面积２％以上的色谱峰为１，６，８，１０，
１１，１４，１７等７个峰；在检测波长３６５ｎｍ下，２２个共
图１ Ｑ样品ＨＰＬＣ指纹图谱
有指纹峰中，单峰面积占总峰面积２％以上的色谱
峰为１，７，８，１０，１１，１２，１５，２２等８个峰。
方法学考察表明，上述共有峰的相对保留时间
和峰面积基本保持相对恒定，１０批样品测得各共有
峰的相对保留时间和峰面积大于２％的共有峰的峰
面积比值，ＲＳＤ均小于５％。故采用相对保留时间
标定共有指纹峰，各共有峰按其相对保留时间定性。
２．３ 全方指纹图谱共有指纹峰与处方药材相关性
测定各样品ＨＰＬＣ指纹图谱（图２～３），并与Ｑ样
品指纹图谱进行比较，根据对各色谱峰的保留时间、
峰形、峰貌等的考察，对全方指纹图谱共有指纹峰与
处方药材指纹图谱的相关性进行分析确认。结果见
表１。
图２ 检测波长２８０ｎｍ下各样品ＨＰＬＣ图谱
２．４ 全方指纹图谱共有指纹峰化学成分确认 取
黄芩苷等化合物适量，加甲醇适量溶解后配制成对
照品溶液。吸取对照品溶液一定量加到 Ｑ样品溶
液中，测定ＨＰＬＣ图谱。与未加对照品溶液的 Ｑ样
品指纹图谱进行比较，通过色谱峰峰高或峰面积的
增加，对全方指纹图谱共有指纹峰化学成分进行确
认，见表１。
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图３ 检测波长３６５ｎｍ下各样品ＨＰＬＣ图谱
３ 讨论
针对苦参汤黄酮类成分的光谱特征，在建立
ＨＰＬＣ指纹图谱时，选择２８０ｎｍ和３６５ｎｍ作为检测
波长，通过对苦参汤全方 ＨＰＬＣ指纹图谱与处方药
味的相关性研究，阐明了苦参汤全方主要共有指纹
峰的来源。在检测波长２８０ｎｍ下，除峰１９来源于
苦参，峰７主要源于苦参外，其他峰均来源或主要来
源于黄芩，未检测到来源于生地黄的色谱峰。在检
测波长３６５ｎｍ下，峰１７～２２来源于苦参，峰１，５～
１６来源于黄芩，未检测到来源于生地黄的色谱峰。
提示以３６５ｎｍ为检测波长，建立苦参汤黄酮类成分
的ＨＰＬＣ指纹图谱，更具代表性和全面性。
采用添加对照品指认的方法对苦参汤黄酮类成
分的ＨＰＬＣ指纹图谱共有指纹峰进行了化学成分的
归属和确定。在检测波长２８０ｎｍ下，确认了８个色
表１ 全方指纹图谱共有指纹峰与处方药味的相关性
药材
检测波长２８０ｎｍ
共有峰 化学成分
检测波长３６５ｎｍ
共有峰 化学成分
黄芩 １（主） １
２ ２
３ ３
４ ４
５ ５
６（主） 黄芩苷 ６
７（辅） ７ 黄芩苷
８ ８
９ ９
１０ １０
１１ 汉黄芩苷 １１ 汉黄芩苷
１２ 木犀草素 １２ 黄芩素
１３ １３ 千层纸素Ａ
１４ 黄芩素 １４ ５，８二羟基６，７二甲氧基黄酮
１５（主） 千层纸素Ａ １５ 汉黄芩素
１６ ５，８二羟基６，７二甲氧基黄酮 １６ 白杨素／７甲氧基黄酮
１７ 汉黄芩素
１８（主） 芒柄花素／白杨素
苦参 １（辅） ２
２ ３
３ ４
４ １７ ２′，４二羟基４′，６′二甲氧基查耳酮
６（辅） 三叶豆紫檀苷 １８ ４，４′二甲氧基查耳酮
７（主） １９
１５（辅） ２０
１８（辅） ２１ 黄腐醇
１９ ２２ 苦参啶
地黄 － － － －
谱峰：峰６（黄芩苷、三叶豆紫檀苷）、峰１１（汉黄芩
苷）、峰１２（木犀草素）、峰１４（黄芩素）、峰１５（千层
纸素Ａ）、峰１６（５，８二羟基６，７二甲氧基黄酮）、峰
１７（汉黄芩素）和峰１８（芒柄花素、白杨素）。在检
测波长３６５ｎｍ下，确认了１１个色谱峰：峰７（黄芩
苷）、峰１１（汉黄芩苷）、峰１２（黄芩素）、峰１３（千层
纸素Ａ）、峰１４（５，８二羟基６，７二甲氧基黄酮）、峰
１５（汉黄芩素）、峰１６（白杨素、７甲氧基黄酮）、峰
１７（２′，４二羟基４′，６′二甲氧基查耳酮）、峰１８（４，
４′二甲氧基查耳酮）、峰２１（黄腐醇）和峰２２（苦参
啶）。上述已指认出的色谱峰均属于黄酮类化合
物，来源于黄芩和苦参。
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ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＫｕｓｈｅｎＴａｎｇａｎｄｉｔｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｔｏ
ＳｃｕｔｅｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓａｎｄＳｏｐｈｏｒａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ
ＬＩＵＢｉｎ，ＳＨＩＲｅｎｂｉｎｇ，ＺＨＵＬｉｊｕｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＫｕｓｈｅｎＴａｎｇ，ａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｉｔｓｃｏｒｅｌａｔｉｏｎｔｏ
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ｕｎｄｅｒｔｗｏｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓ２８０ｎｍａｎｄ３６５ｎｍ．ＴｈｅｃｏｒｅｌａｔｉｏｎｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｏｆＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＫｕｓｈｅｎＴａｎｇ
ａｎｄｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｍｅｔｅｒｉａｍｅｄｉｃｉｎｅｓｗｈｉｃｈｃｏｍｐｏｓｅｄｔｈｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｗａｓｅｘｐｌｏｒｅｄｂｙａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｍ
ｐａｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ．Ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｈｉｃｈｔｈｅｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｓｔｏｏｄｆｏｒｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙａｄｄｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌｓｔｏｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｕｎｄｅｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ２８０ｎｍ，１９ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄ，ｗｈｉｃｈｃａｍｅｆｒｏｍＳ．ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓｅｘｃｅｐｔｔｈａｔｔｗｏｐｅａｋｓ
ｃａｍｅｆｒｏｍＳ．ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ，ａｎｄｅｉｇｈｔｐｅａｋｓｗｅｒｅｂａｉｃａｌｉｎ／ｔｒｉｆｏｌｉｒｈｉｚｉｎ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ，ｌｕｔｅｏｌｉｎ，ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｏｒｏｘｙｌｉｎＡ，５，８ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ６，７
ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ，ｗｏｇｏｎｉｎａｎｄｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ／ｃｈｒｙｓｉｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ３６５ｎｍ，２２ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｗｅｒｅ
ｆｏｕｎｄ，ｗｈｉｃｈｔｈｉｒｔｅｅｎｐｅａｋｓｃａｍｅｆｒｏｍＳ．ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓａｎｄｓｉｘｐｅａｋｓｃａｍｅｆｒｏｍＳ．ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，ｅｌｅｖｅｎｐｅａｋｓｗｅｒｅｂａｉｃａ
ｌｉｎ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｏｒｏｘｙｌｉｎＡ，５，８ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ６，７ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ，ｗｏｇｏｎｉｎ，ｃｈｒｙｓｉｎ／７ｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ，２′，４ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ
４′，６′ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ，４，４′ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ，ｘａｎｔｈｏｈｕｍｏｌａｎｄｋｕｒａｒｉｄｉｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｏｆ
ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＫｕｓｈｅｎＴａｎｇ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｔｗｏｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓ２８０ｎｍａｎｄ３６５ｎｍ，
ｃａｍｅｆｒｏｍＳ．ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓａｎｄＳ．ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ．ＩｔｗａｓｍｏｒｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｔｈａｔｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｔｈｅＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｆｌａ
ｖｏｎｏｉｄｓｏｆＫｕｓｈｅｎＴａｎｇｕｎｄｅｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ３６５ｎｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＫｕｓｈｅｎＴａｎｇ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；Ｓｃｕｔｅｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ；Ｓｏｐｈｏｒａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ ［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００６０７１９
［通讯作者］ 张启伟，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２８４８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｑｗ１９５５＠１６３．ｃｏｍ
ＨＰＬＣ测定胆南星中猪去氧胆酸的含量
赫 炎１，张永欣２，赵惠东２，张启伟２
（１中国中医科学院 中医临床基础研究所，北京 １００７００；
２中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：建立胆南星中猪去氧胆酸含量测定方法，为其质量控制提供方法。方法：用ＨＰＬＣ蒸发光散射
检测测定样品的猪去氧胆酸含量。色谱和检测条件：ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），柱温３５℃；流
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