全 文 ：ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆＩｓｏｄｏｎｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓｖａｒ．ｇｅｒａｒｄｉａｎｕｓｏｎ
ａｃｕｔｅｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅｉｎｒａｔｓ
ＮＡＧＡＯＹｕｋｉｋｏ，ＹＥＭｕｒｏｎｇ，ＬＩＮＣｈａｏｚｈａｎ，ＺＨＵＣｈｅｎｃｈｅｎ，ＬＡＩＸｉａｏｐｉｎｇ
（ＮｅｗＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０４０５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｓｏｆＩｓｏｄｏｎｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓｖａｒ．ｇｅｒａｒｄｉａｎｕｓ（ＩＬＶＧ）ａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｏｎｔｈｅａｃｕｔｅ
ｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４）ｉｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｓｉｘｔｙｒａｔｓｗｅｒｅａｌｏｃａｔｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅ
ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓａｇｅｇｒｏｕｐａｎｄＢｉｆｅｎｄａｔｅｇｒｏｕｐｒａｎｄｏｍｌｙ．Ａｔｔｈｅｔｅｓｔｇｒｏｕｐ，ｒａｔｓｒｅｃｅｉｖｅｄｅｉｔｈｅｒＩＬＶＧａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔ（１５，７５，３７５ｇ·ｋｇ－１）
ｏｒＢｉｆｅｎｄａｔｅ（４５ｍｇ·ｋｇ－１）ｂｙｇａｓｔｒｉｃｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄａｉｌｙｆｏｒ１０ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｄａｙｓ．Ｉｎ１ｓｔ，４ｔｈ，７ｔｈａｎｄ１０ｔｈｄａｙｓ，１０％ＣＣｌ４（２ｍＬ·ｋｇ－１）ｗａｓ
ｇｉｖｅｎｔｏｒａｔｓｂｙｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ（ｉｐ）ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｋｉｌｅｄ２４ｈａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔａｄｍｉｎｉｃｔｉｏｎｗｉｔｈｄｒｕｇ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＡＬＴ，ＡＳＴ，ＡＬＰａｎｄ
ｔｏｔａｌｂｉｌｉｒｕｂｉｎｉｎｓｅｒｕｍｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ，ｔｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ，ｌｉｖｅｒｗｅｉｇｈｔ，ｓｐｌｅｅｎｗｅｉｇｈｔａｎｄｔｈｙｍｕｓｗｅｉｇｈｔｏｆｅａｃｈｒａｔｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅ
ｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＩＬＶＧｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅＡＬＴ，ＡＳＴ，ＡＬＰａｎｄＴＢｉｌｉｎｓｅｒｕｍ，ｒｅｓｔｒａｉｎｔｈｅｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒ
ａｎｄｔｈｅｓｈｒｉｎｋａｇｅｏｆｔｈｙｍｕｓ，ａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＩＬＶＧａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｐｏｓｓｅｓｓｅｓｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆ
ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｏｎｔｈｅａｃｕｔｅｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣＣｌ４ｉｎｒａｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｉｓｏｄｏｎｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓｖａｒ．ｇｅｒａｒｄｉａｎｕｓ；ｃａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ；ａｃｕｔｅｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ
［责任编辑 方文贤］
［收稿日期］ ２００５０９１２
［通讯作者］ 李光武，Ｔｅｌ：（０５５１）３２２０２８６，Ｅｍａｉｌ：ｇｕａｎｇｗｕｌｉ＠
ｓｉｎａ．ｃｏｍ
葛根黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
王培源，王海萍，李光武
（安徽医科大学 神经生物学研究所，安徽 合肥 ２３００３２）
［摘要］ 目的：探讨葛根黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用大鼠大脑中动脉栓塞模型，研究葛
根黄酮对脑缺血再灌注脑组织含水量和脑梗死体积，脑组织中ＳＯＤ，ＭＤＡ的影响。结果：葛根黄酮能明显降低大脑
中动脉大鼠脑含水量，缩小脑梗死体积，提高ＳＯＤ的活性，减少缺血再灌大鼠ＭＤＡ的含量。结论：葛根黄酮具有抗
自由基损伤和保护缺血脑组织的作用。
［关键词］ 葛根黄酮；脑缺血再灌注；自由基
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００６）０７０５７７０３
葛根为豆科植物野葛、甘葛藤的干燥根，性凉，
味甘、辛，归脾、胃经，具有发表解肌、升阳透疹的功
效，现代药理学研究发现其主要成分是黄酮类物质，
总量可达 １２％，由葛根素、黄豆苷及黄豆苷元等组
成。具有扩张冠状动脉和脑血管，改善微循环，抗氧
化、清除自由基和对缺血再灌注损伤保护等［１］作用。
丙二醛（ＭＤＡ）水平可间接反映组织中自由基含量及
脂质过氧化程度［２］，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）则是机
体内重要的氧自由基清除剂。本实验制作缺血再灌
注损伤模型（ＭＡＣＯ），通过脑组织含水量、脑梗死体
积和脑组织中ＳＯＤ，ＭＤＡ的测定来探讨葛根黄酮防
治脑缺血再灌注损伤的机制，从而为脑缺血的防治
提供实验依据。
１ 材料与方法
１１ 材料
葛根黄酮（陕西方舟制药有限公司，总黄酮含量
５０４９％，葛根素４１７０％，批号 ＦＺＰＲ０４０９２２）。ＳＤ大
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第３１卷第７期
２００６年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００６
鼠，雌雄不限，体重 ２５０～３００ｇ，由安徽医科大学实
验动物中心提供。ＭＤＡ，ＳＯＤ，蛋白定量（考马斯亮
蓝法）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
１２ 仪器
电子天平（上海分析仪器厂），ＷＧ－２００３台式
干燥箱（惠阳南方电器实验设备厂），ＢＨＷ－ＩＶ电热
恒温水箱（北京市医疗设备厂），ＬＤ２５－２低速自动
平衡离心机（北京医用离心机厂），７３２０Ｇ可见分光
光度计（上海精密仪器有限公司）。
１３ 方法
１３１ 动物分组 １２０只大鼠随机分为５组，即假
手术组、模型组、葛根黄酮高、中、低剂量组（２００，
１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１），每组 ２４只。除假手术组不插线
外，其余 ４组造模（ＭＣＡＯ）。葛根黄酮各剂量组 ｉｇ
每天１次，连续１３ｄ。术前１ｈｉｇ再给药１次。
１３２ 动物模型 根据 ＺｅａＬｏｎｇａ等［３］的方法，制
备大鼠 ＭＣＡＯ。大鼠称重，６％水合氯醛（３５０ｍｇ·
ｋｇ－１）腹腔麻醉，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉
（ＣＣＡ）、颈外动脉（ＥＣＡ）、颈内动脉（ＩＣＡ）。结扎颈
总动脉近心端、颈外动脉起始端后，在颈总动脉处剪
一“Ｖ”形小口，沿颈总动脉插入线栓（线栓采用直径
为０２３５ｍｍ的鱼线，头端烧成球状，并于距线球
１８５ｍｍ处作标记）经颈内动脉向颅内插至大脑中
动脉分叉处，插入深度为１８～２０ｍｍ，将线与颈内动
脉一起结扎。术中维持体温（３７±０５）℃。再灌注
时外拉线使球端回至 ＥＣＡ，拔除插线，结扎 ＥＣＡ即
可。假手术组除不插线外，其余步骤同上。大脑中
动脉栓塞后２ｈ恢复血供，神经行为学评分参照 Ｚｅａ
Ｌｏｎｇａ５分制标准［３］，术后出现左前肢屈曲，行走时
向左侧转圈即视为造模成功，然后保温常规饲养，至
２４ｈ断头处死取材。实验过程中，因麻醉意外、
ＭＣＡＯ手术失败、造模不成功及 ２４ｈ内死亡的均弃
去不用。
１３３ 脑组织含水量的测定 大鼠造模２４ｈ后断
头取脑，称量两侧半脑湿重。再置于烘箱中，１００℃
烘烤２４ｈ至恒重，精确称量干重，计算含水量。脑
组织含水量＝（湿重－干重）／湿重×１００％。
１３４ 脑梗死体积测定 断头取脑，将大脑作连
续２ｍｍ冠状切片，共５片，然后将脑片放入２％ＴＴＣ
磷酸盐缓冲液中３７℃恒温孵育３０ｍｉｎ，正常脑组织
染为红色，梗死灶呈白色。滤纸吸去表面液体后用
刀片小心刻取未着色部分，将着色部分和未着色部
分分别用电子天平称重（以重量代表体积），计算脑
片中梗死部分的质量百分比，以此反映梗死体积比。
１３５ 脑组织匀浆 ＳＯＤ活力、ＭＤＡ含量的检测
右侧半脑称重后按１∶１０加入冰生理盐水制成匀浆，
参照ＳＯＤ，ＭＤＡ试剂盒说明书，检测脑组织中 ＳＯＤ，
ＭＤＡ含量。
１４ 统计学处理
应用 ＳＰＳＳ１００ｆｏｒｗｉｎｄｏｗｓ软件对数据进行处
理，计量数据以珋ｘ±ｓ表示，各组间比较采用单因素
方差分析。
２ 结果
２１ 脑组织含水量
左脑组织含水量各组间相比无统计学意义，模
型组右脑组织含水量明显高于各组（Ｐ＜００５），高
于假手术组（Ｐ＜００５），而葛根黄酮各剂量组可降
低模型脑组织含水量（Ｐ＜００５）（表１）。
表１ 葛根黄酮对脑组织含水量、梗死体积、ＳＯＤ活力及ＭＤＡ含量的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别
脑组织含水量／％
左脑 右脑
脑梗死体积
／％
ＳＯＤ
／Ｕ·ｍｇ－１
ＭＤＡ
／ｎｍｏｌ·ｍｇ－１
假手术 ７８．３０±０．２９ ７８．９８±０．２４１） ６６．２０±５．８５１） ０．８９４０±０．１３２０１）
模型 ７８．９９±１．０１ ８１．３４±１．２８ ０．４５９４±０．０３９９ ４９．１０±１２．７５ １．４１７４±０．２２８８
葛根黄酮低剂量 ７９．０２±０．７８ ７９．７２±０．９０１） ０．４１４４±０．０４４４１） ７４．５５±１７．９４１） １．１８４５±０．０４５７１）
葛根黄酮中剂量 ７７．２６±１．１２ ７８．７９±０．６３１） ０．３０８９±０．０２５４１） ７５．７６±１８．１２１） １．１６３８±０．２７６４１）
葛根黄酮高剂量 ７８．０２±０．４５ ７８．４０±０．７７１） ０．２９８９±０．０２３９１） ７６．０１±１５．４６１） １．１４９７±０．１９６３１）
注：与模型组相比１）Ｐ＜０．０５
２２ 脑梗死体积
模型组脑组织梗死体积高于各组（Ｐ＜００５）。
而葛根黄酮各剂量组可降低模型脑组织梗死体积
（Ｐ＜００５）（表１）。
２３ 脑组织ＳＯＤ活力及ＭＤＡ含量检测
与假手术组相比，脑缺血再灌注模型组脑组织
ＭＤＡ含量增加（Ｐ＜００５），ＳＯＤ活性减弱（Ｐ＜
００５）；而葛根黄酮治疗组能减少脑组织中 ＭＤＡ的
含量（Ｐ＜００５），提高 ＳＯＤ的活性（Ｐ＜００５）（表
１）。
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３ 讨论
在脑缺血早期，内皮细胞间隙紧密连接疏松开
放，通透性增高，血脑屏障损害，引起脑组织水的潴
留和脑水肿。实验发现，模型组脑含水量明显高于
假手术组（Ｐ＜００５），而葛根黄酮各剂量组脑组织
含水量显著低于模型组（Ｐ＜００５）。表明葛根黄酮
有维护血脑屏障的功能，减轻脑水肿程度，保护脑缺
血损伤。
脑缺血损伤的程度由局部脑血流降低的程度和
缺血持续的时间所决定，局部脑血流下降程度越重、
持续缺血时间越长，则产生的脑损伤程度越严重，脑
组织损伤体积越大。ＴＴＣ染色能清晰地显示缺血组
织的范围和境界。实验用 ＴＴＣ染色确定脑梗塞范
围并得到其梗死体积，结果表明葛根黄酮治疗组其
梗塞区明显小于模型组（Ｐ＜００５）。
自由基损害在缺血缺氧性脑损伤的病情进展中
起着关键作用［４］，对此寻找有效的自由基清除剂，保
护缺血半暗带内神经元免受进一步损害及促进病变
恢复是实施脑保护治疗、改善缺血性脑损伤预后的
重要措施之一［５］。ＭＤＡ的含量可反映组织中自由
基的含量和脂质过氧化程度，ＳＯＤ则是机体内重要
的氧自由基清除剂，对脑缺血再灌注损伤有保护性
作用。因此，通过测定 ＳＯＤ，ＭＤＡ可反映自由基对
脑组织的损伤情况。以核黄素光系统产生超氧阴
离子，Ｆｅｎｔｏｎ反应产生羟自由基，研究发现葛根素对
两者均有清除作用。葛根素能抑制 Ｈ２Ｏ２引起的红
细胞溶血反应，并可抑制 ＬＰＯ产生，提示葛根素能
对抗Ｈ２Ｏ２引起红细胞膜的氧化性损伤，这可能与其
具有清除氧自由基作用有关［６］。在本实验中，与假
手术组相比，脑缺血再灌注模型组脑组织ＭＤＡ含量
增加（Ｐ＜００５），ＳＯＤ活性减弱（Ｐ＜００５），给于葛
根黄酮后可明显提高脑组织 ＳＯＤ活性（Ｐ＜００５），
降低ＭＤＡ含量（Ｐ＜００５），表明葛根黄酮可以减轻
自由基对脑组织的损伤，其结构中含有酚羟基，为一
异黄酮化合物，这可能是它具有清除自由基作用的
结构基础。
本研究结果表明，葛根黄酮可减少脑缺血后脑
组织水肿，缩小梗死体积，提高ＳＯＤ活性，降低 ＭＤＡ
含量，减轻自由基反应对脑组织的损害，对缺血脑组
织具有明显的保护作用。
［参考文献］
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２００３，２５（１０）：１９４１．
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ＯＮＯ１７１４ｏｎＮＭＤＡｍｅｄｉａｔｅｄｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏ．ＪＮｅｕｒｏｌＳｃｉ，
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Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ，２０００，１７（１０）：８７１．
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ｐｅｎｕｍｂｒａｉｎｈｕｍａｎｓｔｒｏｋｅ．Ｓｔｒｏｋｅ，１９９９，３０（１）：９３．
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性损伤作用．解放军药学学报，２００１，１７（１）：１．
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆｐｕｅｒａｒｉａｆｌａｖｏｎｏｉｄｏｎｔｈｅｃｅｒｅｂｒａｌ
ｉｓｃｈｅｍｉｃｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ
ＷＡＮＧＰｅｉｙｕａｎ，ＷＡＮＧＨａｉｐｉｎｇ，ＬＩＧｕａｎｇｗｕ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆｐｕｅｒａｒｉａｆｌａｖｏｎｏｉｄｏｎｔｈｅｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉｃｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：
Ｕｓｉｎｇｔｈｅｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌ（ＭＣＡＯ）ｉｎｒａｔｓ，ｗｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｐｕｅｒａｒｉａｆｌａｖｏｎｏｉｄｏｎｔｈｅｂｒａｉｎｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ，
ｔｈｅｉｎｆａｒｃｔｖｏｌｕｍｅ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＳＯＤ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭＤＡ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＰｕｅｒａｒｉａＦｌａｖｏｎｏｉｄｃｏｕｌｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｒｅｄｕｃｅｔｈｅｂｒａｉｎｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ
ａｎｄｔｈｅｉｎｆｒａｃｔｖｏｌｕｍｅｉｎＭＣＡＯ，ｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＳＯＤ，ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭＤＡｉｎｔｈｅｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｉｎｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌｏｆ
ｒａｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｐｕｅｒａｒｉａｈａｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｎｉｓｃｈｅｍｉｃｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｐｕｅｒａｒｉａｆｌａｖｏｎｏｉｄ；ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉｃｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；ｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ
［责任编辑 方文贤］
·９７５·
第３１卷第７期
２００６年４月
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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