全 文 ：甘草药材的快速 ＨＰＬＣ指纹图谱分析
濮 润１，王卫星１，王京辉２，陈有根２，傅欣彤２，郭洪祝１，２
（１．北京大学 药学院，北京 １００１９１；
２．北京市药品检验所，北京 １０００３５）
［摘要］ 目的：研究不同地区甘草药材的快速ＨＰＬＣ指纹图谱，为甘草商品药材的鉴别及质量控制提供依据。
方法：选择ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅｐｌｕｓＣ１８（４６ｍｍ×５０ｍｍ，１８μｍ）快速高效液相色谱柱，乙腈００５％磷酸水溶液为流
动相梯度洗脱，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，记录１１ｍｉｎ色谱图。结果：用快速液相色谱方法将甘草药材分析时间从３６
ｍｉｎ缩短为１１ｍｉｎ；经过聚类分析将７０个产地甘草药材分为胀果甘草和乌拉尔甘草两类，其中５９个为乌拉尔甘
草，１１个为胀果甘草；发现甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷和甘草酸３个指标成分联合可有效评价甘草品种。结论：
甘草药材快速 ＨＰＬＣ指纹图谱的专属性强，且加快了甘草药材的分析效率，可用于甘草药材的鉴别及质量控制。
我国大多数地区销售的甘草商品药材为乌拉尔甘草，少部分为胀果甘草。
［关键词］ 甘草；快速ＨＰＬＣ；指纹图谱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２２２６５００４
［收稿日期］ ２００８１０１６
［基金项目］ 北京市自然科学基金课题（７０６２０３９）
［通讯作者］ 郭洪祝，Ｅｍａｉｌ：ｇｕｏｈｚ＠ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
甘草为常用中药，２００５年版《中国药典》一部规
定为豆科植物甘草 ＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓＦｉｓｃｈ，胀果
甘草 ＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔｅＢａｔ或光果甘草 Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａ
ｇｌａｂｒａＬ．的干燥根及根茎［１］，在各地都有商品药材
销售，由于商品药材产地不同、种类不同，品质也参
差不齐。现有国家标准中，未收入３个法定品种之
间的鉴别内容，并且以甘草苷和甘草酸作为控制成
分，难以区分３个法定品种和进行全面的质量评价，
因此，需要对甘草药材的质量评价方法进行提高。
针对甘草药材的常规液相色谱指纹图谱的报道较
多，但是普遍分析时间较长［２５］，且普遍对其中主要
色谱峰的结构缺乏指认，没有确定用于全面质量分
析的更多的指标成分。在商品药材的实际分析工作
中需要一种快速有效的方法进行分析，在较短的时
间内，分析药材的真伪优劣。快速液相色谱是近年
来发展的液相色谱新技术，可以在保证分离效率的
前提下，显著缩短分析时间。作者在甘草常规液相
指纹图谱研究的基础上，采用快速ＨＰＬＣ技术，建立
了甘草药材指纹图谱，并利用液相色谱质谱技术结
合对照化合物，分析指认了主要色谱峰的化学结构，
在此基础上，对不同地区甘草商品药材进行指纹图
谱分析和聚类分析，为甘草药材的品种确定和质量
评价提供依据。
１ 仪器与试药
１．１ 实验仪器 快速高效液相色谱仪：Ａｇｉｌｅｎｔ
１２００ＲＲＬＣ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ），配有二
极管阵列检测器。Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ１／１０万电子天平（德国
Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司）。ＯＨＡＵＳ１／１万（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。
１．２ 试剂与药材 液相用水为 ＰＡＬＬ纯净水，其他
为普通纯净水。乙腈为色谱纯（Ｂａｋｅｒ，ＵＳＡ），其他
试剂为分析纯（北京化工厂）；乌拉尔甘草对照药
材，胀果甘草对照药材为中国药品生物制品检定所
提供，其他商品药材为各地中药房购买。具体购买
地点如表１。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 常规液相色谱柱 ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸ
ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，流动相
见表２。流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２６３ｎｍ，柱
温３８℃，进样量１０μＬ。
使用快速ＨＰＬＣ后，确定色谱条件为：快速色谱
柱ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅｐｌｕｓＣ１８（４６ｍｍ×５０ｍｍ，１８
μｍ），流动相见表２，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长
２６３ｎｍ，柱温３８℃，进样量２μＬ。
常规ＨＰＬＣ与快速ＨＰＬＣ分离效果比较见图１，
２，使用快速液相后分离效率提高，分离效果良好，并
与常规液相图基本一致。
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第３３卷第２２期
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表１ ７０份甘草商品药材分布情况
Ｎｏ． 来源 Ｎｏ． 来源 Ｎｏ． 来源 Ｎｏ． 来源 Ｎｏ． 来源
１ 浙江杭州 １５ 江苏徐州 ２９ 呼和浩特 ４３ 山西祁州 ５７ 宁夏银川
２ 辽宁抚顺 １６ 湖北巴东 ３０ 黑龙江密山 ４４ 甘肃定西 ５８ 陕西
３ 浙江温岭 １７ 山东胶州 ３１ 福建三明 ４５ 广西 ５９ 浙江温岭
４ 陕西西安 １８ 安徽 ３２ 重庆 ４６ 河南郑州 ６０ 山西
５ 四川绵阳 １９ 呼伦贝尔 ３３ 香港九龙 ４７ 湖北荆州 ６１ 江西安源
６ 河南郑州 ２０ 辽宁大连 ３４ 香港岛 ４８ 四川东山 ６２ 深圳
７ 河北莝州 ２１ 广西北海 ３５ 广东深圳 ４９ 甘肃 ６３ 宁夏
８ 乌鲁木齐 ２２ 天津 ３６ 广东顺德 ５０ 河北 ６４ 石家庄
９ 陕西渝林 ２３ 甘肃兰州 ３７ 河南平顶山 ５１ 山东德州 ６５ 云南昆明
１０ 北京 ２４ 云南宜良 ３８ 河北漳州 ５２ 四川 ６６ 上海
１１ 山东青岛 ２５ 上海 ３９ 厦门 ５３ 安徽 ６７ 云南六盘水
１２ 上海 ２６ 江苏南京 ４０ 辽宁 ５４ 福建福州 ６８ 吉林延吉
１３ 宁夏银川 ２７ 甘肃兰州 ４１ 安徽亳州 ５５ 新疆 ６９ 江苏南京
１４ 湖北咸宁 ２８ 重庆长寿 ４２ 山东 ５６ 内蒙古 ７０ 北京
表２ 常规和快速液相色谱流动相比例
ｔ／ｍｉｎ
常规
乙腈 ００５％磷酸溶液
ｔ／ｍｉｎ
快速
乙腈 ００５％磷酸溶液
０ ２０ ８０ ０ ２０ ８０
７ ２０ ８０ １４ ２０ ８０
８ ２５ ７５ １６ ２５ ７５
１８ ２７ ７３ ３６ ２７ ７３
１９ ４０ ６０ ３８ ４０ ６０
２９ ４１ ５９ ５８ ４１ ５９
３０ １００ ０ ７２ １００ ０
３１ ２０ ８０ ９ ２０ ８０
３６ ２０ ８０ １１ ２０ ８０
图１ 甘草药材常规液相图
图２ 甘草药材快速液相图
２．２ 供试药品溶液的制备 精密称取药材粉末
（４０目）０２５ｇ，加入７０％甲醇水溶液２０ｍＬ，称重，
回流１ｈ，以７０％甲醇溶液补足失重，取溶液以０４５
μｍ微孔滤膜滤过，即得。
２．３ 精密度考察 精密吸取浙江杭州的甘草商品
药材供试品溶液 ２μＬ，连续进样 ６次，检测指纹图
谱，计算各共有峰相对保留时间和峰面积的ＲＳＤ分
别在０１％～０３％和０２％～２７％，表明仪器精密
度良好。
２．４ 重现性考察 取浙江杭州的甘草商品药材供
试品６份，制备供试品溶液，分别进样２０μＬ，检测
指纹图谱，计算供试品溶液各共有峰相对保留时间
和峰面积的 ＲＳＤ分别在０１％ ～０２％和０７％ ～
３２％，表明方法重现性良好。
２．５ 稳定性考察 取浙江杭州的甘草商品药材供
试品溶液，在制备后每隔１２ｈ检测指纹图谱，计算
各共有峰相对保留时间和峰面积的 ＲＳＤ分别在
０２％～０５％和０９％～１８％，表明供试品溶液在
７２ｈ内稳定。
２．６ 指纹图谱的建立 利用快速 ＨＰＬＣ方法对乌
拉尔甘草和胀果甘草的对照药材以及７０份不同地
区的甘草商品药材进行指纹图谱分析，使用 ＬＣＭＳ
联用技术结合对照化合物指认了其中６个色谱峰，
见图３。
１．甘草素葡萄糖芹糖苷；２．甘草苷；３．甘草素；４．甘草酸；
５．异甘草素；６．甘草次酸
图３ 甘草药材的指纹图谱及化合物标识
２．７ 甘草药材的聚类分析 利用ＳＰＳＳ统计软件对
７０种甘草药材以及２种对照药材进行聚类分析，商
品药材可以分为２类，其中大部分为乌拉尔甘草，少
量为胀果甘草。考察以不同化合物组合作为聚类分
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析指标对结果的影响，发现以甘草素葡萄糖芹糖苷、
甘草苷和甘草酸３个化合物组合进行分析，结果稳
定。提示这３个化合物可以用于甘草的质量分析。
分析结果见表３。
表３ 甘草商品药材聚类结果
聚类组 聚类因素 属胀果甘草的商品药材标号
１ 甘草酸和甘草素葡萄糖芹糖苷 １，３，５，８，１２，４４，４５，４７，４８，５９，６０
２ 甘草苷和甘草酸 １，３，５，８，１２，４４，４５，４７，４８，５９，６６
３ 甘草苷和甘草素葡萄糖芹糖苷 １，３，５，８，１２，４５，４８，５９，６６
４ 甘草苷、甘草酸和甘草素葡萄糖芹糖苷 １，３，５，８，１２，４４，４５，４７，４８，５９，６６
３ 讨论
快速ＨＰＬＣ较常规ＨＰＬＣ在不损失分析效果的
前提下，具有明显的速度优势，并且进样量减少，样
品用量降低。所建立的指纹图谱分析时间短、分析
效率高、有利于指纹图谱的应用。通过与２种对照
药材（乌拉尔甘草和胀果甘草）的指纹图谱对比，发
现乌拉尔甘草中甘草苷含量较高，而胀果甘草中甘
草素葡萄糖芹糖苷含量较高而甘草苷含量较少，２
种药材的甘草酸含量没有明显差异。提示甘草药材
的品质评价应考虑增加甘草素葡萄糖芹糖苷。
从聚类情况来看，以甘草苷和甘草酸２个因素
为指标聚类的结果和以甘草苷、甘草素葡萄糖芹糖
苷和甘草酸３个因素为指标聚类的结果相同，而以
甘草素葡萄糖芹糖苷和甘草酸２个因素为指标和以
甘草苷、甘草素葡萄糖芹糖苷和甘草酸３个因素为
指标聚类的有２个结果不同，而缺少甘草酸因素做
为指标聚类的误差更大，这个结果与对药材进行的
性状和显微鉴别结果一致，提示含有甘草苷、甘草酸
和甘草素葡萄糖芹糖苷成分的分析方法可以区分甘
草药材的品种。虽然，仅含甘草苷和甘草酸的分析
也能达到这样的结果，但是在品种之间的区分上，含
有这３个成分的分析方法更加直观和准确，因此，建
议选用这３个化合物作为甘草药材品种区分的主要
指标。
［参考文献］
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［２］ 邹华彬，袁久荣，杜爱琴，等．甘草氯仿提取物红外指纹图谱双
指标序列分析法［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（１）：１６．
［３］ 樊天宇，王跃飞，过科家，等．内蒙古产甘草药材 ＨＰＬＣ指纹图
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［４］ 禹晓梅，徐红颖，梁逸曾，等．甘草药材 ＨＰＬＣ指纹图谱研究
［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００７，１９：１００９．
［５］ 段天璇，于密密，刘春生，等．ＨＰＬＣ法同时测定甘草指纹图谱
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ＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅｂｙｆａｓｔＨＰＬＣ
ＰＵＲｕｎ１，ＷＡＮＧＷｅｉｘｉｎｇ１，ＷＡＮＧＪｉｎｇｈｕｉ２，ＣＨＥＮＹｏｕｇｅｎ２，ＦＵＸｉｎｔｏｎｇ２，ＧＵＯＨｏｎｇｚｈｕ１，２
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ＴｈｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｉｓｐａｐｅｒｉｓｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｆａｓｔａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｅｆｒｏｍ
ｄｉｆｅｒｅｎｔａｒｅａｓｏｆＣｈｉｎａｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｃａｒｉｅｄｏｕｔｕｎｄｅｒｆｏｌｏｗｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ａｇｉｌｅｎｔ
ＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８（４６ｍｍ×５０ｍｍ，１８μｍ）ｃｏｌｕｍｎ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄ００５％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｗｉｔｈ
ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ，ｆｌｏｗｒａｔｅ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ａｎａｌｙｓｉｓｔｉｍｅ１１ｍｉｎ．Ｔｈｅｒｕｎｔｉｍｅｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ３６ｍｉｎｕｔｅｓ
ｔｏ１１ｍｉｎｕｔｅｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｒｏｕｔｉｎｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｅｓｏｆｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆｔｈｅ７０ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙＳＰＳＳ．
Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏ２ｇｒｏｕｐｓ，５９Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓａｓｗｅｌａｓ１１Ｇ．ｉｎｆｌａｔａＴｈｒｅｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，
ｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎａｐｉｏｓｉｄｅ，ｌｉｑｕｉｒｉｔｉｎａｎｄｇｌｙｃｙｒｈｉｚａａｃｉｄｓｈｏｕｌｄｂｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓｅｆｅｃｔｉｖｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｅ．
ＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｗｉｄｅｌｙｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｈｉｚａｅ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；ｆａｓｔＨＰＬＣ
［责任编辑 李 禾］
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