全 文 ：纯化丹酚酸类化合物的方法是不可靠的，而对于其
他型号的树脂有待进一步研究。由于所选树脂对丹
参素吸附量不高，且水洗即可将丹参素、原儿茶醛全
部解吸下来。故评价此８种型号的树脂纯化工艺，
应采用以迷迭香酸，丹酚酸Ｂ，丹酚酸Ａ等丹酚酸多
指标考察的方法。
ＨＰ－２０型树脂具有吸附快，吸附量大，解吸率
高，再生能力强等特点，适合富集丹酚酸化合物。其
对丹参提取物中迷迭香酸的饱和吸附量为３０５０６ｍｇ
·ｇ－１（干树脂），丹酚酸 Ｂ饱和吸附量为３６９９６ｍｇ
·ｇ－１（干树脂），丹酚酸 Ａ吸附量为４３８５ｍｇ·ｇ－１
（干树脂）。且建议选用４０％乙醇水溶液将３种化合
物同时解吸下来，使产品中各化合物含量均有提高，
进而除去部分杂质，减轻后续分离工作的压力。
［参考文献］
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脂吸附工艺研究［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００５，１６（３）：２０６．
Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｆｏｒｆｉｖｅ
ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄｓｆｒｏｍＳａｌｖｉａｅｍｉｔｉｏｒｒｈｉｚａｅ
ＷＡＮＧＹａｎｙａｎ，ＺＨＵＪｉｎｇｂｏ，ＬＩＬｉｎ，ＪＩＮＹｕｅ
（ＤａｌｉａｎＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＢｉｏ＆ＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄａｌｉａｎ１１６０３４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｆｏｒｔｈｅｆｉｖｅｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄｓ（ｄａｎｓｈｅｎｓｕ，ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ
ａｃｉｄ，ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕａｌｄｅｈｙｄｅ，ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ，ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＡ，ｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＳａｌｖｉａｅｍｉｔｉｏｒｈｉｚａｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｆｉｖｅｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ
ａｃｉｄｓｗｅｒｅｅｍｐｌｏｙｅｄａｓａｎｉｎｄｅｘ，ａｎｄｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｔｈｅｍｉｎｔｈｅｓｔａｔｉｃａｎｄｄｙｎａｍｉｃａｂｓｏｒｂｅｎｔｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＨＰＬＣ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｒｅｓｕｌｔ：ＨＰ２０ｒｅｓｉｎｗａｓａｓｕｉｔａｂｌｅｍａｒｃｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｔｏｐｕｒｉｆｙｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄｓ．ｔｈｅｄｙｎａｍｉｃａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｒｏｓｍａｒｉｎｉｃａｃｉｄ，
ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢａｎｄｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＡｗａｓ３０５０６ｍｇ·ｇ－１（ｄｒｙｒｅｓｉｎ），３６９９６ｍｇ·ｇ－１，（ｄｒｙｒｅｓｉｎ），４３８５ｍｇ·ｇ－１（ｄｒｙｒｅｓ
ｉｎ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｔｉｓｎｏｔｓｕｉｔａｂｌｅｔｈａｔｄａｎｓｈｅｎｓｕａｎｄｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕａｌｄｅｈｙｄｅａｒｅｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘｅｓｆｏｒｕｓｉｎｇ８ｍａｃｒｏ
ｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｓｔｏｐｕｒｉｆｙｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓａｌｖｉａｅｍｉｔｉｏｒｈｉｚａｅ；ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ；ｓｔａｔｉｃａｂｓｏｒｂｅｎｔ；ｄｙｎａｍｉｃａｂｓｏｒｂｅｎｔ
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００７０９２０
［基金项目］ 海南省自然科学基金（８０６０８）；海南大学科研基金（Ｋｙｊ０５３７）
［通讯作者］ 冯玉红，Ｔｅｌ：１３１７８９２７５７９，Ｅｍａｉｌ：ｌｊｃｆｙｈ＠２６３．ｎｅｔ
超临界 ＣＯ２萃取迷迭香中抗氧化活性成分
的优化工艺研究
张 冲，，李嘉诚，张德拉，冯玉红，张亚男，陈四利
（海南大学 热带生物资源教育部重点实验室 材料与化工学院，海南 海口 ５７０２２８）
［摘要］ 目的：研究迷迭香中抗氧化活性成分的萃取工艺。方法：设计４因素３水平正交试验，利用超临界
·７００１·
第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
ＣＯ２流体萃取技术，结合电子顺磁共振（ＥＰＲ）技术和自旋捕集技术检测各萃取物清除羟自由基的性能，以自由基清
除率为指标，通过极差和方差分析，研究萃取迷迭香抗氧化活性成分的优选工艺条件。结果与结论：迷迭香抗氧化
成分的优选萃取工艺为：夹带剂用量０．３ｍＬ·ｇ－１，萃取时间１ｈ，萃取压力３０ＭＰａ，萃取温度７５℃。
［关键词］ 超临界ＣＯ２；迷迭香；抗氧化
［中图分类号］Ｒ２８３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０９１００７０３
迷迭香 ＲｏｓｍａｒｉｎｕｓｏｆｉｃｉｎａｌｉｓＬ．系唇形科迷迭
香属植物，原产地中海地区。目前，我国南方已有大
面积种植。迷迭香含有大量的抗氧化成分，具有很
强的抗氧化性，是一种优良的天然抗氧化剂［１］。对
于迷迭香成分的研究，国外有大量的报道，主要成分
为二萜酚类、黄酮类、三萜类和精油等，广泛应用于
药品、化妆品和食品等多个领域［２］，具有很高的应
用价值。目前迷迭香有效成分提取常用有机溶剂
法，收率虽较高，但通常会有溶剂残留。超临界流体
萃取技术可避免有机溶剂提取法的缺点，具有无溶
剂残留、流程简单、节能、穿透力强、萃取效率高，操
作温度低，不破坏物质活性［３］，且省略了溶剂回收
工序等显著优势。
目前已有文献报道了超临界提取迷迭香的工艺
研究，但超临界提取物清除自由基性能鲜有报道。
电子顺磁共振（ＥＰＲ）主要用于研究具有未成对电子
结构的自由基、原子、分子，灵敏度比 ＮＭＲ高 ２３０
倍［４］，是检测自由基最直接最有效的方法［５］。氧自
由基和抗氧化剂的研究是近年来生物和医学界非常
引人关注的一个研究领域，羟自由基是已知最强的
自由基。本研究利用超临界 ＣＯ２萃取技术，通过设
计正交实验，结合ＥＰＲ技术和自旋捕集技术研究各
萃取物清除羟自由基的能力，以自由基清除率为考
核目标，优选迷迭香萃取工艺。
１ 仪器与试药
Ｓｐｅ－ｅｄ超临界萃取仪（美国 ＡＳＩ），电子顺磁
共振波谱仪 ＢＲＵＫＥＲＡ３２０（德国 ＢＲＵＫＥＲ），超声
波清洗机（上海科导超声仪器有限公司），ｐＨ测定
仪（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ），微量进样器（德国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），电子
天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）。迷迭香（购自福建），ＤＭＰＯ（美国
Ｓｉｇｍａ），液体 ＣＯ２（广东佛山科的气体公司），乙腈
（色谱纯，美国ＴＥＤＩＡ），其他试剂均为分析纯。
２ 方法
２．１ 超临界ＣＯ２萃取
超临界萃取受很多因素的影响。根据实验需
要，选取萃取压力、萃取温度、萃取时间、夹带剂４个
对萃取效率有较大影响的因素，设计４因素３水平
正交试验，优选超临界ＣＯ２萃取迷迭香工艺参数，见
表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ
压力
／ＭＰａ
Ｂ
温度
／℃
Ｃ
时间
／ｈ
Ｄ
夹带剂
／ｍＬ·ｇ－１
１ ２０ ５５ １ ０００
２ ３０ ６５ ２ ０３０
３ ４０ ７５ ３ ０６０
称取１００ｇ迷迭香干叶，装入萃取釜，以乙醇作
为夹带剂，在一定压力和温度下进行超临界 ＣＯ２萃
取，萃取完毕，收集萃取物，备用。
２．２ 清除羟自由基实验
２．２．１ 样品液配制 分别称取各萃取物００２５ｇ，
超声波定溶，配成１ｍｇ·ｍＬ－１的乙腈溶液。
２．２．２ 羟自由基产生体系 ００５ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ
（ｐＨ７４）溶液，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＦｅＳＯ４（ＮＨ４）２ＳＯ４，
０９ｍｏｌ·Ｌ－１ＤＭＰＯ，６％ Ｈ２Ｏ２。将以上４种溶液
和样品液或乙腈（空白对照）各１０μＬ打入 Ｅｐｐｅｎ
ｄｏｒｆ管，记录反应时间，并立即混合均匀，将反应液
注入石英毛细管，外加保护管放入谐振腔测定。
２．２．３ ＥＰＲ测试参数 ＣＦ（中心磁场）３４８０Ｇ，ＳＷ
（扫描宽度）５００Ｇ，ＳＴ（扫描时间）５１２ｓ，ＭＡ（调制
幅度）１Ｇ，ＭＦ（调制频率）１００ｋＨｚ，ＭＰ（微波功率）
２０ｍＷ，Ｔ（测试温度）为室温。
３ 结果与讨论
根据选定的Ｌ９（３
４）正交表安排实验，计算得率
ｙ，自由基清除率 Ｅ＝（ｈ０－ｈｉ）／ｈ０，ｈｉ为含样品体系
中羟自由基的信号强度测量值；ｈ０为空白体系中羟
自由基的信号强度测量值，并对结果进行极差分析，
结果见表２。
从表２中极差分析可以看出，各因素对羟自由
基清除率的影响程度依次为 Ｄ＞Ｃ＞Ａ＞Ｂ，表３方
差分析结果表明，相对于 Ｂ因素，Ｄ因素和 Ｃ因素
均有显著性差异。因此最优的萃取工艺为 Ｄ２Ｃ１Ａ２
Ｂ３，即夹带剂用量０３ｍＬ·ｇ
－１，萃取时间１ｈ，萃取
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第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
表２ Ｌ９（３４）正交试验结果 ％
Ｎｏ． ｙ Ｅ
１ ０６５４４ １５２
２ ０９６６７ ３０８
３ ０５７８０ １３２
４ １５５１３ －１１２
５ １００１８ １４６
６ １４３０５ ８０２
７ １７６６７ １５３
８ １９３８６ ８９
９ １４６８３ －２３９
压力３０ＭＰａ，萃取温度７５℃。
表３ 自由基清除率方差分析
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ Ｆ００５
Ａ １２２２６０７ ２ ０７２６ ４４６
Ｂ ４４１７８７ ２ ０２６２
Ｃ １９７６２４０ ２ １１７４
Ｄ ３０９３１４７ ２ １８３７
误差 ６７３３７８０ ８
由实验结果可以看出，夹带剂对结果影响最大。
乙醇由于无毒等优点，本实验采用乙醇为夹带剂，随
乙醇用量增大，超临界ＣＯ２流体的极性增大，有利于
物质的溶出。萃取时间的影响仅次于夹带剂。
萃取压力对结果影响也较大。压力增大，超临
界ＣＯ２流体的密度增大，有利于成分的溶出。
萃取温度对结果影响最小。温度升高，流体的
传质速率增大，利于传质；温度升高，被萃取物质的
挥发性增大，有利于物质的溶出。
萃取物得率与清除率之间并不存在特定规律。
得率高，羟自由基清除率并不一定高。相同浓度下，
Ｄ２Ｃ１Ａ２Ｂ３条件下萃取物对羟自由基的清除率最高，
达到８０２％，而Ａ３Ｂ３Ｃ２Ｄ１条件下萃取物对羟自由基
的清除率最低，为－２３９％，反而对自由基有增益作
用。说明萃取物中各种成分之间存在复杂的协同作
用或相互抑制作用，从而使体系清除羟自由基的性
能发生变化。
４ 结论
超临界ＣＯ２流体萃取可以实现迷迭香抗氧化成
分的提取，提取物具有较好的清除羟自由基性能，通
过正交试验得出最优的萃取工艺为Ｄ２Ｃ１Ａ２Ｂ３，即夹
带剂用量０３ｍＬ·ｇ－１，萃取时间１ｈ，萃取压力３０
ＭＰａ，萃取温度７５℃。
ＥＰＲ法测定迷迭香超临界提取物清除羟自由
基性能，目前国内尚无报道。与传统的测定方法相
比，通过ＥＰＲ技术和自旋捕集技术检测物质清除羟
自由基能力，灵敏度高，方法简便，可靠性高，具有广
阔的应用前景。
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ＳｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌＣＯ２ｆｌｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＲｏｓｍａｒｉｎｕｓｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
ａｎｄｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｅｌｉｍｉｎａｔｅＯＨｒａｄｉｃａｌ
ＺＨＡＮＧＣｈｏｎｇ，ＬＩＪｉａｃｈｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＤｅｌａ，ＦＥＮＧＹｕｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＹａｎａｎ，ＣＨＥＮＳｉｌｉ
（ＭａｔｅｒｉａｌａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＳｃｈｏｏｌ，ＨａｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＫｅｙＬａｂ．ｏｆＴｒｏｐｉｃＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｏｕｒｃｅｏｆ
ＣｈｉｎｅｓｅＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙ，Ｈａｉｋｏｕ５７０２２８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＳｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌＣＯ２ｆｌｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｆｒｏｍＲｏｓｍａｒｉｎｕｓｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ
ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡｎｅｗｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＲｏｆｉｃｉｎａｌｉｓｂｙｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌＣＯ２ｆｌｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＳＦＥ
ＣＯ２）ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｉｎｄｅｔａｉｌ．Ｔｈｅｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈａｔｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｌｉｍｉｎａｔｅ·ＯＨｒａｄｉｃａｌｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅ
（ＥＰＲ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄｓｐｉｎｃａｔｃｈｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔａｎｄｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｉｔｈｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｃｌｅａｒａｎｃｅａｓｉｎｄｅｘ，ｂｙｒａｎｇｅａｎｄｖａｒｉａｎｃｅａ
ｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ：ｋｅｅｐｉｎｇｐｒｅｓｓｕｒｅａｔ３０ＭＰａａｎｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｔ７５℃ ｆｏｒ１ｈ，ｉｎｔｈｅｓａｍｅ
ｔｉｍｅａｄｄｉｎｇａｌｃｏｈｏｌ０．３０ｍＬ·ｇ－１．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌＣＯ２；Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ
［责任编辑 鲍 雷］
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