全 文 ：五倍子对牙根面脱矿影响的研究
朱 日丙 t o李继遥 u o周学东 u3
kt1首都医科大学 附属北京口腔医院 o北京 tsssxs~
u1四川大学 口腔生物医学工程教育部重点实验室 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要   目的 }评估五倍子的矿化调节作用 o了解五倍子防根龋的药理机制 ∀方法 }在 ³‹循环模型中测试五
倍子的防龋效能 ∀以 w ª# pt五倍子为模型药物 ot ª# pt氟化钠和去离子水为对照 o制备人根部牙体组织块 o暴
露于由药物处理液 !酸性缓冲液 !中性缓冲液组成的 ³‹循环模型中 o循环 tu次 o每天 u次 ∀循环结束后 o采用原子
吸收光谱检测酸性脱矿液钙释出量 o采用激光共聚焦显微镜分析脱矿效果 ∀结果 }五倍子组钙释出率降低 !荧光总
量减少 o表明五倍子具有抑制根面牙体组织脱矿的作用 o作用虽然弱于氟化物 o但是差异无统计学意义 ∀结论 }在
化学条件下五倍子具有抑制根部组织脱矿的作用 o再次显示了五倍子具有阻止龋病发生的作用 ∀
≈关键词   ³‹循环模型 ~五倍子 ~根面龋 }脱矿
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsy2sxu|2sw
≈收稿日期   ussx2tt2ts
≈基金项目   国家自然科学基金资助项目 kvswvs{sso
vsxzuws|l
≈通讯作者   3 周学东 oר¯}ksu{l{xxstw{t
根面龋是指发生在釉牙骨质交界处的颈部釉
质 !牙骨质 o直接或间接累及牙本质的龋病损害 ≈t  o
是以变形链球菌 !乳酸杆菌和放线菌为主的病原菌
代谢产酸和产生蛋白水解酶导致根部牙体硬组织脱
矿 !有机质降解 o是脱矿和再矿化交替进行的化学动
力过程 o脱矿作用大于再矿化作用 o导致病损形成 o
再矿化作用大于脱矿作用 o可使早期龋达到不同程
度的治愈 o阻止龋病的发展 ∀本课题组前期研究发
现 o天然药物五倍子在体外 ³‹循环模型中对釉质
的脱矿具有明显的抑制作用 o并能促进脱矿釉质的
再矿化 o且与氟有协同作用 ≈u  ∀同釉质龋相比 o根
面龋的组织病理学更加复杂 ∀牙本质的破坏不仅涉
及矿物质的丧失 o而且涉及胶原基质蛋白的崩解 o牙
本质的脱矿和再矿化还会受到病变组织剩余矿物
质 !剩余有机基质和牙本质的超微结构的影响 ∀目
前尚无研究涉及化学条件下五倍子对根部牙体组织
脱矿的影响 o本研究拟以五倍子为模型药物 o在 ³‹
循环模型中以脱矿为指标研究其对人牙根部组织生
物矿化影响 ∀
1 试药与仪器
五倍子 Š¤¯ ¤¯ ≤«¬± ±¨¶¬¶o由四川省天然药物重点
实验室王建忠副教授鉴定 ∀五倍子粗提物的提取方
法与李继遥等采用的方法相同 ≈v  o配置五倍子粗提
物 w ª# p溶液 o调 ³‹ z1s~氟化钠 k成都化学试剂
厂 lt ª# p溶液 ~脱矿实验酸性缓冲液 kxs °°²¯ #
pt乙酸溶液 ot1x °°²¯ # pt Ž‹u °’w o³‹ x1sl~脱
矿实验中性缓冲液 kus °°²¯ # pt ‹∞°∞≥缓冲溶
液 ot1 x °°²¯# ptŽ‹u °’w o³‹ z1sl~罗丹明 …k广
东西陇化工厂 ls1t °°²¯ # pt ~以上试剂均为分析
纯 o由  ¬¯¯¬³²µ¨纯化系统提供纯水配制 ∀
计算机辅助图象分析系统 k通用图象分析系
统 o四川大学 l~原子吸收光谱 k° µ¨®¬± p ∞ °¯ µ¨ ²§¨ ¯
vtsso英国 l~激光共聚焦显微镜 k美国 …¬²• „⁄≤²1o
tsuw∞≥l~偏光显微镜 k∞¯¯¬³¶¨  ∞yss‘¬®²±l∀
2 方法
2q1 标本制备
收集新鲜拔除没有根面龋坏的人前牙和双尖牙 o
去除牙冠及根部软组织 o超声洗净 o体视显微镜检查
k ≅ tslo取无裂痕 !缺隙者 ws个 o临近釉牙本质交界
处制备牙根成牙体组织块 o形成 u °° ≅ u °°的开窗
区 o指甲油双层封闭开窗面以外区域 ∀牙块制备完毕
置去离子水中 o pus ε 冰箱保存 o备用 ∀
2q2 分组
五倍子组 kw ª# pt l~氟化钠组 kt ª# pt l~去
离子水组 ∀
2q3 实验流程
2q3q1 获得性膜的形成 将制备好的牙块浸泡在
#|ux#
第 vu卷第 y期
ussz年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ y
 ¤µ¦«o ussz
经离心处理 kts sss µ# °¬±pt ow ε ots °¬±l的人全
唾液中 o每块 u °o室温下振荡 u «o经 Ž≤ 缓¯冲液
洗涤 u次 o形成获得性膜 o静置备用 ∀
2q3q2 循环流程 按照先后顺序将标本放入实验
溶液中浸泡 }测试溶液中浸泡 x °¬±~在 w份去离子
水中分别浸泡 t °¬±~酸性缓冲液中浸泡 ys °¬±~去
离子水中浸泡 ys °¬±~中性缓冲液 x °¬±~去离子水
t °¬±∀如此循环 tu次 o每天 u次 ∀保留酸性缓冲
液待测 o标本置中性缓冲液中过夜 ∀
2q4 检测指标
2q4q1 钙释出率 原子吸收光谱分析测定酸性缓
冲液中的钙浓度 o计算机辅助图象分析系统测定牙
块脱矿面积 o用钙释出率 ≈¦¤¯¦¬∏° §¨ ³¯ ·¨¬²± µ¤·¨o
≤⁄•  表示 ∀
≤⁄• €钙提取量 kΛªl r酸处理时间 k«l ≅脱矿面积
k°°u l
2q4q2 总荧光量 !平均荧光量 !荧光面积 实验结束
时取出样本 o超声清洗根部牙体组织块开窗区外封闭
的指甲油 ∀清洗过程为丙酮溶液 !水 !中性洗涤液 !乙
醇 o时间约 t «∀清洗后将样本用低速锯床制成 uss
Λ° ∗ txs Λ°厚的纵切片 ovz ε 下用新配制的罗丹明
…ks1t °°²¯# pt l染色 t «o用激光共聚焦显微镜观
察牙体组织的荧光激发情况 ∀参数调节为 }°²º2
µ¨tssh oŒµ¬¶x1toŠ¤¬± t xsso…¯¨ √xo… ²¯¦®¶×t n ’³¨ ±o
放大 uss倍 o激发波长 x|{ ±°∀为避免制备切片时对
切片表面的影响 o所测区域均位于切片表面下 ts ∗ tx
Λ°∀通过计算机成图并分析测出荧光总量 k·²·¤¯ ©¯∏2
²µ¨¶¦¨±¦¨o׃lo平均荧光量 k¤√ µ¨¤ª¨ ©¯∏²µ¨¶¦¨±¦¨o„ƒl
和荧光面积 k©¯∏²µ¨¶¦¨±¦¨ ¤µ¨¤oƒ„l∀
2q5 统计分析
采用 ≥°≥≥ ts1s软件包中 ’± 2¨º¤¼ „‘’∂ „进
行统计学分析 ∀
3 结果
3q1 钙释出率
由表 t可见 o去离子水组的钙释出率最高 o五倍
子组的钙释出率比去离子水略低 o两组间具有统计
学差异 kΠ s1sxlo氟化钠组的钙释出率最低 o与去
离子水组具有统计学差异 kΠ  s1sxlo而氟化钠组
和五倍子组之间不具有统计学差异 ∀
3q2 总荧光量 !平均荧光量 !荧光面积
由表 u可见 o五倍子组荧光面积和总荧光量较
去离子水组小 kΠ  s1sxlo而平均荧光量无统计学
表 t 不同处理组根部牙体组织钙释出率 kcξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 rª# pt ≤⁄• rΛª# °° pu # «pt
‘¤ƒ t s1tzs ? s1ssztl
五倍子 w s1uzz ? s1sxstl
去离子水 p s1w|| ? s1s{tul
注 }与去离子水组比较 tl Π  s1sx~与 ‘¤ƒ组比较 ul Π  s1sx
差异 ∀氟化钠组荧光面积 !总荧光量及平均荧光量
较去离子水组均小 o差异具有统计学意义 kΠ 
s1sxl∀而五倍子组荧光面积 !平均荧光量和总荧
光量均较氟化钠组大 o差异不具有统计学意义 ∀
表 u 不同处理组根部牙体组织 ≤≥ 观察 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª1pt
ƒ„
r≅ tsu
„ƒ
׃
r≅ tsx
‘¤ƒ t xv1x ? tt1ttl xy1{ ? tz1st v1u ? s1vtl
五倍子 w xx1{ ? {1stl yv1v ? y1u v1x ? s1ztl
去离子水 p |y1x ? us1tul zv1y ? w1{u z1t ? t1{ul
注 }与去离子水组比较 tl Π  s1sx~与 ‘¤ƒ组比较 ul Π  s1sx
3q3 各处理组 ≤≥图象
结果见图 t∀去离子水组表层具有宽而明亮的
荧光条带 o氟化钠组表层的荧光带宽度最窄 o且不连
续 o五倍子组的荧光带的宽度和亮度界于两组之间 ∀
图 t 各处理组根面牙体组织病变 ≤≥ 观察 k ≅ ussl
„q去离子水组 ~…q‘¤ƒ组 ~≤q五倍子组
4 讨论
体外化学模型能够提供牙体硬组织表层和表层
下脱矿和再矿化动力学变化的信息 ∀ ³‹循环模型
是主要的化学模型之一 o源于 × ±¨ ≤¤·¨≈w 等的研究 o
涉及多次脱矿和再矿化循环 o包括矿物质的吸收和
释出 o目前已用于根面龋的研究 ∀本研究采用 ³‹
循环模型进行了五倍子提取物对根面脱矿作用的研
究 o利用原子吸收光谱法检测酸性缓冲液中的钙离
子含量 o以此推测实验根面组织块矿物质的流失程
度 ∀结果发现五倍子提取物能够有效抑制根面的脱
矿 o且与氟化钠的作用无显著性差异 ∀
激光共聚焦显微镜是 us世纪 {s年代初研制成
功的一种高光敏感 !高分辨率 !可检测出样本中微弱
荧光的新型生物学仪器 o能够用于检测牙体硬组织
脱矿和再矿化的先进方法 ∀ ƒ²±·¤±¤≈x 认为矿物减
少会促使荧光标记进入龋损孔隙内 o因而可以通过
#svx#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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测量脱矿组织中的荧光量来了解脱矿情况 ∀ ƒ„代
表脱矿区域 o„ƒ代表脱矿区域中孔隙大小及数量 o
而 ׃综合前两者所反映的信息 o是最能代表脱矿
区域面积及孔隙率的指标 o即最能反映脱矿程度的
一个指标 o本研究测得五倍子粗提物 ׃值比去离
子水组低 o表明能够抑制根面组织矿物质的丢失 o且
作用与氟化钠组相比无统计学差异 ∀激光共聚焦图
像观察也证实了五倍子组荧光条带较对照组窄 o说
明五倍子粗提物阻止了根面组织的脱矿 ∀
本研究利用 ³‹循环模型 o选择 ˜‘Œ∞∂ ∞• 进
行氟脱矿研究的标准配方 o采用原子吸收光谱和激
光共聚焦技术检测了各种药物对牙根面组织脱矿的
影响 o结果两种方法都证实五倍子能够在化学条件
下有效抑制牙根面组织的脱矿 o并且效果接近氟化
物 ∀在自然条件下 o牙根面的脱矿还受到口腔唾液
或再矿化液中的钙 !磷 !氟离子及其他微量元素和
³‹等的影响 o具体的作用效果及其机制还有待深入
研究 ∀本研究取得的结果和其他研究得到的结果相
一致 ≈yoz  o有学者认为可能是因为五倍子的凝固蛋
白质的作用 o阻止了离子扩散的通道 o或者是在蛋白
存在的条件下五倍子的主要成分鞣酸能够结合钙形
成复合物 o从而抑制了牙齿硬组织的脱矿 ∀另外 o研
究证实五倍子中含有钙 !铁 !铬 !锰 !磷 !锶 !锌等微量
元素 o其中钙的含量较高 o这些元素均具有参与牙齿
再矿化的能力 ≈{  ∀因此 o五倍子究竟如何实现其抑
制牙体硬组织脱矿的作用还需要进一步研究 ∀本实
验结果提示 o五倍子可以有效抑制化学条件下牙根
面硬组织的脱矿 o极有可能被开发成为有效并且副
作用较小的新型防龋药物 ∀
≈参考文献  
≈t  全国牙病防治指导组 q第二次全国口腔流行病学抽样调查
≈  q北京 }人民卫生出版社 ot|||}xyq
≈u  刘昭慧 o刘天佳 o李继遥 o等 q五倍子对釉质脱矿的影响 ≈ q四
川大学学报 k医学版 loussvovwkvl}xszq
≈v  李继遥 o黄正蔚 o周学东 q五倍子在体外生物膜模型中对口腔
常驻菌形成的致龋生物膜的影响 ≈  q华西口腔医学杂志 o
ussvoutkxl}v{|q
≈w  × ±¨ ≤¤·¨  o  ∏±§²µ©©≥«µ¨¶·«¤ ≥ „q • ²µ®¬±ªªµ²∏³ µ¨³²µ·t}
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§¨ °¬± µ¨¤¯¬½¤·¬²± ∏¶¬±ª °¬¦µ²µ¤§¬²ªµ¤³«¼ ¤±§ ¦²±©²¦¤¯ °¬¦µ²¶¦²³¼
≈ q ≤¤µ¬¨¶• ¶¨o t||yovskxl}vtzq
≈y  王 芸 o唐荣银 q五倍子水提取物处理早期人工釉质龋后表面
结构的扫描电镜观察 ≈ q牙体牙髓牙周病学杂志 oussxotx
kvl}tvvq
≈z  王 艳 o唐荣银 o陈 强 o等 q中药五倍子防龋的动物实验研究
≈ q牙体牙髓牙周病学杂志 ousstoxkttl}tzuq
≈{  姚 军 o张永康 o李克刚 1原子吸收光谱测定五倍子矿物微量
元素 ≈ 1吉首大学学报 k自然科学版 lo t||yotzkwl}yuq
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·«¨ ³µ²³²¶¬·¬²± ·«¤·Š¤¯ ¤¯ ≤«¬± ¶¨¬¶°¤¼ ¥¨ ¤³µ²°¬¶¬±ª¤±·¬¦¤µ¬¨¶±¤·∏µ¤¯ ° §¨¬¦¬±¨¬± ·«¨ ©∏·∏µ¨q
[ Κεψ ωορδσ] ³‹ ¦¼¦¯¬±ª°²§¨ ~¯ Š¤¯ ¤¯ ≤«¬± ¶¨¬¶~ µ²²·¦¤µ¬¨¶~ §¨ °¬± µ¨¤¯¬½¤·¬²± ≈责任编辑 古云侠  
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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